1、实验一 高效液相色谱法-紫外法测定水中的苯酚含量
一、实验目的
1、熟悉高效液相色谱仪的结构
2、掌握苯酚的高效液相色谱-紫外测定法
3、熟练掌握高效液相色谱仪的操作
二、实验原理
苯酚是最简单的酚，为无色固体，有特殊气味，显酸性。苯酚是有机化工工业的基本原料，可通过多种途径对环境水体造成污染，对人类、鱼类以及农作物带来严重危害。根据国家环保部门有关规定，工作场所苯酚的最高允许质量浓度为5 ×10 - 6 μg/ L，饮用水中为2μg/ L，地面水中为0.1 mg/ L。苯酚的测量方法有多种，如溴化容量法、比色法、高效液相色谱法等。但前两种方法分析速度较慢、
2、精度较低，高效液相色谱法是近年来发展起来的一种新技术，具有分析速度快、检测灵敏度高、操作简便、样品用量少等特点。
三、仪器和试剂
1、设备及试剂
安捷伦高效液相色谱仪1100，紫外检测器，C18色谱柱。
苯酚(分析纯) ，甲醇(色谱纯)，二次蒸馏水。
2、操作条件
色谱柱为C18柱；流动相为甲醇/ 二次蒸馏水= 80∶20 (体积比)；检测波长为270nm；流速为1.0 ml/ min；进样量为20μL。
四、实验步骤
1、标准曲线的制备
称取纯苯酚600 mg 于100.0 ml 容量瓶中，用适量甲醇溶解，用甲醇稀释至刻度。分别吸取该溶液(单位:ml) 0.0、1.0、2.
3、0、3.0、4.0、5.0 于50 ml 的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。得到标准系列溶液。分别采用高效液相色谱-紫外法测定标准溶液，记录色谱峰面积，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
2、样品分析
将水样经过滤(0.45 um 滤膜) 处理后，测定其峰面积值，根据标准曲线进行定量。
五、实验数据
1 标准曲线的绘制
苯酚体积，V（mL）
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
苯酚浓度，C（mg/mL）
峰面积，A(AU)
2 样品分析数据
样品
水样1
水样2
1
2
3
4、1
2
3
峰面积，A(AU)
浓度，C（mg/mL）
六、数据处理
仪器和试剂 1、仪器： ⑴岛津（SHIMADZU）LC-20A液相色谱仪： ①流动相：乙腈、MQ水（由铝箔纸包裹，防止其中产生藻类，堵塞进口） ②高压输液泵：并联式微体积柱塞往复泵 （Prominence LIQUID CHROMATOGRAPH） 型号：LC-20AD 厂家：UFLC SHIMADZU ③色谱柱：固定相填充物：十八碳（C18）
型号：Intertsil ODS-SP 参数： 填充物粒径：5 μm 内径
5、×长度：4.6×250 mm ④检测器：二极管阵列检测器（PDA） 型号：SPD-M20A 电压：230V 厂家：SHIMADZU ⑤脱气装置： 型号：DQO-20A5 ⑥进样装置：高压六通进样阀 两个状态： Load：样品进入六通阀，未入色谱柱 Inject：位于六通阀的样品进入色谱柱 种类：SIL-10A 、SIL-10Ai 、SIL-10ADVP
⑦淋洗液（洗针、洗阀）：甲醇 ⑵移液管 2 mL、5 mL各一支 ⑶具塞离心管10 mL三支、1.5 mL一次性离心管一支 2. 试剂：甲醇（色谱纯）； 苯酚标准使用溶液（10 mg/L） 待测水样
四、实验步骤
6、 1 标准系列配制 取苯酚标准使用液0.50、1.00、2.00 mL于10 mL的具塞离心管中，用甲醇定容至5 mL，混匀。待测。 2 样品的制备 取水样约1 mL于1.5 mL一次性离心管中。待测。 3 色谱参数 色谱柱：C18 柱； 流动相：乙腈、水； 梯度洗脱程序：
洗脱时间 0:00 4:00 4:01 5:00 5:01 8:00 乙腈（%） 65 65 75 75 65 65 流速：1.0 mL/min； 柱温：室温； 进样量：20 μL； 检测器：二极管阵列检测器，检测波长280 nm
测定 测定标准系列，再测定样品。根据标准系列中苯酚的保留时间，定性确定样品中的目标物。 记录标准系列和样品中目标物的峰面积。
五、数据记录与计算 （1）标准系列c=4mg/mL的谱图及样品的谱图： 样品谱图（图2）中，三个明显高的峰的记录数据如下表
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