1、1/8/2020,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,1/8/2020,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,革兰氏染色,1,2,1.1,细菌染色法,单染色法：只用,一种,染料染色，能清楚观察菌体大小、形态与排列，,不能,鉴别细菌。,复染色法（鉴别染色）：采用,两种以上,的不同染料进行先后染色，可将细菌染成不同的颜色，以便鉴别细菌。,抗酸染色,:,用于检查结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等,抗酸性细菌,(,一些一旦用某些方法染色后，能够抵抗酸性酒精脱色的细菌,),，阳性者为红色。,特殊染色：荚膜染色，芽胞染色，鞭毛染色，极体染色（用于白喉杆菌异染
2、颗粒染色）。,1.2,革兰氏染色法,革兰染色法是丹麦内科医生,Christain Gram,于,1884,年创立的一种细菌,复染色,方法，已有,130,多年的历史，仍在广泛使用。,3,1.3,革兰氏染色法的原理,结晶紫,卢戈碘液液,95%,乙醇,复红,G,-,菌：,类脂质,多,肽聚糖,少,G,+,菌：,肽聚糖,多,交联度大,类脂质,少,通透性学说,、,等电学说、化学学说,4,1.3,革兰氏染色的意义,鉴别细菌：把细菌分成,G,+,和,G,-,两大类。,选择抗菌药物：例如,G,+,球菌,对青霉素敏感,G,-,杆菌,耐药。,了解细菌的致病机理：,G,+,菌大多产生外毒素,G,-,菌产生内毒素。,革
3、兰染色的步骤,涂片 干燥 固定 染色,5,实验器材与材料,接种环、细菌分离培养物（上次实验平板）,接种环接种针，酒精灯，生理盐水,2,支，镜油瓶、拭镜纸,1,套，吸水纸,1,本，载玻片,4,张，细菌分离培养物（上次实验平板），革兰氏染色液,6,2,涂片的制备,灭菌接种环,无菌操作,7,2,涂片的制备,细菌合适,细菌较多,接种环取盐水,3ul2,滴,水滴间距小于,2cm,。,取菌苔少许（,1mm,小菌落半个）与盐水混匀，涂成大于,1cm,2,均匀涂膜,。,涂毕环移至涂膜中,央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌。,无菌操作,8,2,涂片的制备,固定,Fixation,涂片,smear,干燥,dr
4、y,手持载玻片一端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层,3,次，时间,2,3,秒钟。,促使菌体蛋白质凝固，固定在载玻片上，以免染色水洗的时候，细菌被水洗掉。,9,初染,：,结晶紫染液染,1min,水洗，甩干,媒染,：,卢戈氏碘液染,1min,水洗，甩干,脱色,：,95%,乙醇脱色约,30s,水洗，甩干,复染,：,复红染液染,30s,水洗，甩干,印干,油镜观检,染色,关键步骤！,3,革兰氏染色的方法和步骤,10,生物安全警告,BIOHAZARD,本次实验操作，可产生几十至几百个微生物,气溶胶颗粒。,气溶胶粒径,100um,沉降很快,50um,在,0.4s,内扩散开,5um,通过呼吸道直接到达肺泡。,实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达,82%,，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。,实验时应坐稳，很专注，不分心，在火焰周围,10,20,厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话，以免感染病原菌。,11,THANKS,12,
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