细胞生物学纲要.doc

第一章 绪论
一、细胞生物学研究的内容与现状
（一）细胞生物学是现代生命科学的重要基础学科
生命体是多层次、非线形、多侧面的复杂结构体系，而细胞是其结构与活动的基本单位。单细胞生物、多细胞生物。
E.B. Wilson指出：“一切生命的关键问题都要到细胞中去寻找。”
Cell Biology：广泛采用现代生物学的实验技术和手段，应用分析和综合的方法，将细胞的整体活动水平，亚细胞水平和分子水平三方面的研究有机地结合起来，以动态的观点观察细胞和细胞器的结构和功能，以期最终阐明生命的基本规律。
（二）细胞生物学的主要研究内容
细胞生命活动的结构基础是细胞内高度有序且为动态的结构体系。这一体系可归纳为遗传信息结构体系、膜结构体系和细胞骨架结构体系。
1970年代以前细胞结构和功能的知识内容所占比例很高；70年代以后，由于分子生物学概念、内容与方法的引用，有关细胞重要生命活动的知识比例越来越大。
1、细胞核、染色体以及基因表达的研究
2、生物膜与细胞器的研究
3、细胞骨架体系的研究
4、细胞增殖及其调控
5、细胞分化及其调控
6、细胞的衰老与凋亡
7、细胞的起源与进化
8、细胞工程
（三）当前细胞生物学研究的总趋势与重点
1、三大基本问题
• 基因表达的调控（时空顺序）
• 大分子的自组装及调控
• 活性因子与信号分子如何调控生命活动过程
2基本生命活动的若干重大问题
• 染色体DNA与蛋白质相互作用关系
• 细胞增殖、分化、凋亡的相互关系及其调控
• 细胞信号转导的研究：网络化、非线性
• 细胞结构体系的装配：蛋白质与核酸，蛋白质与脂质，蛋白质与蛋白质。
• 从形态看，除了要描述在光学显微镜下的一些简单结构外，还要用新的工具和方法观察和分析细胞内各部分的亚显微结构和分子结构，以及结构之间的变化过程。
• 从功能方面看，不仅要叙述细胞内各个部分的化学组成和新陈代谢的动态过程而且还要阐明它们之间的关系和相互作用，从而说明生物体的新陈代谢、生长繁殖、遗传变异、刺激反应以及运动等基本生命活动规律。
二、细胞学与细胞生物学发展简史
从研究内容来看细胞生物学的发展可分为三个层次，即：显微水平、超微水平和分子水平。
从时间纵轴来看细胞生物学的历史大致可以划分为四个主要的阶段：
第一阶段：从16世纪末—19世纪30年代，是细胞发现和细胞知识的积累阶段。
第二阶段：从19世纪30年代—20世纪初期，细胞学说形成后，主要进行细胞显微形态的研究。19世纪最后25年是经典时期。
第三阶段：从20世纪30年代—70年代，以细胞超微结构、核型、带型研究为主要内容。
第四阶段：从20世纪80年代分子克隆技术的成熟到当前，细胞生物学与分子生物学的结合愈来愈紧密，基因调控、信号转导、细胞分化和凋亡、肿瘤生物学等领域成为当前的主流研究内容。
（一）细胞的发现
1590年荷兰眼镜制造商J.Janssen和Z.Janssen父子制作了第一台复式显微镜，尽管其放大倍数不超过10倍，但具有划时代的意义。
英国人胡克（Robert Hooke），1635-1702
1665年发表《显微图谱》
“能非常清楚地看到软木片充满了气孔，是一个多孔的结构，型如蜂房…”
提出细胞“cell”一词因而沿用至今。
荷兰列文虎克（A. V. Leeuwenhoek）1632-1763
池塘水中的原生动物，鱼和蛙的红血球，人的牙垢、唾液、猫、狗和人的精液等
对细胞发现做出过贡献的其他人：
马尔比基（M. Malpighi），1628-1694
医生、大学教师，动植物材料显微技术的创始人。血液循环和毛细血管、肺和肾的细微结构、无脊椎动物生物学，特别是蚕从卵到蛹演化的结构和生活史。
施旺丹麦（J. Swammerdam），1637-1680
尸体解剖，蜗牛受精，昆虫的形态分类。
格鲁（N. Grew），1628-1712
主要是植物解剖，也做些动物的比较解剖。
（二）细胞学说(cell theory)的建立及其意义
1838年德国植物学家施莱登(M.J. Schleiden)
1839年德国动物学家施旺(M.J. Schwann)
一切植物、动物都是由细胞组成的，细胞是一切动植物的基本单位。
All organisms are composed of one or more cells.
The cell is the structure unit of life.
1855年德国病理学家魏尔肖（Virchow）指出：细胞只能来自细胞。
早期的其他科学家还包括：
米尔贝尔（C. B. Mirbel），法国植物学家，认为植物每个部分都存在细胞。
奥肯（L. Oken），认为生命起源于“原始海洋胶状物”，纤毛虫是最简单的生命体，动物和植物都是纤毛虫的群体。
普金野（J. E. Purkinje），神经细胞的分类研究；发明了原始的切片刀，可以切骨骼和牙齿；还制成了第一张显微照片。
弥勒（J. P. Muller），胚胎学、生理学、病理学、比较解剖学家。
• 细胞学说（1838-1839）、进化论（1859）和孟德尔（1866）的遗传学是现代生物学的三大基石。细胞学说也是后两者的基石。
（三）细胞学的经典时期
1、原生质概念的提出
1840年普金耶（Pukinje）和1846年冯·莫尔（Van Molh）首次将动植物细胞的内含物称为“原生质”（protoplasm）。
1861年舒尔策（Max Schultze）认为有机体的组织单位是一小团原生质。
1880年Hanstein提出“原生质体”（protoplast）的概念，认为细胞是由细胞膜包围的一团原生质，分化为细胞核与细胞质。
2、细胞受精和细胞分裂的研究
1841年Remark发现鸡胚血细胞的直接分裂。1875年Hertwig发现受精卵中两亲本核的合并；1877年Strasburger发现动物的受精现象 。其后，Flemming(1883)和Strasburger (1886)分别在动植物细胞中发现有丝分裂（mitosis）；Van Benneden(1883)和Strasburger(1886)分别在动植物细胞中发现减数分裂（meiosis）。
3、重要细胞器的发现
1883年Van Benneden和Boveri发现中心体;Benda发现线粒体，1898年Altmann命名。1898年Golgi发现高尔基体。
在这短短的25年里，取得如此多的成果，除了细胞学说本身的贡献外，技术革新起着重要的作用。细胞染色技术、切片技术、显微技术等的不断改进和创新保证了科学研究的进步。更重要的是这一时期人才辈出，他们不断追求和探索的精神才是细胞学得以发展的原动力。
（四）细胞学的分支及发展
• 细胞遗传学：染色体结构功能与基因表达
• 细胞生理学：细胞的各种生理活动
• 细胞化学：用生化手段研究细胞各组分的功能
（五）细胞生物学的形成及发展
1933年，德国科学家鲁斯卡(Ernst Ruska)在西门子公司设计了世界上第一架电子显策镜，最初的分辩力为50nm，此后改进达几个nm，放大倍数达几十万倍。在50年代，学者们利用电镜观察了细胞的各种超微结构，如内质网、核糖体、溶酶体、核孔复合体、细胞骨架和膜单位
1961年布拉舍(J.Brachet)根据电镜下观察到的结构，集40-50年代之大成绘制了一幅细胞模式图。该图比魏尔逊的模式图已大为改观，不仅描出了细胞的超微结构，而且反映出细胞活动的动态观点。
上世纪60年代，由于电镜标本固定技术的改进，显示出基质中还有微管、微丝和中等纤维的存在。
70年代，由于使用了高压电镜，能显示出细胞的立体结构。这些技术和方法的进步为细胞生物学的发展起到极大的推动作用。
重要概念：
细胞中的染色体，线粒体、中心体核仁等大于0.2mm，在光学显微镜中能观察到，这种结构称显微结构(microscopic structure)。
内质网膜、核膜，微管、微丝等因小于0.2mm，在普通光学显微镜下看不到，称亚显微结构(submicroscopic structure)。有不少学者称此水平为“微细结构”(fine structure)，指显微镜观察能力以上，分子结构以下这一水平的结构。
20世纪70年代以来由于超高分辩本领电镜的问世(接近0.1nm)，加上免疫电镜，电镜放射自显影术的不断提高；扫描电镜的深入开展以及冰冻刻蚀技术的应用，特别是电镜技术与生化研究及近代生物物理研究手段(如X射线衍射、中子衍射、波谱子研究等)相结合，使电镜观察进行入到超微结构境界(严格地说ultrastructure指分子结构而言，不过现在书刊中往往将亚微结构也称之为超微结构，二者无严格的界线)。
原生质（Protoplasm）：泛指细胞的全部生命物质，包括细胞膜、质、核三部分。
第二章 细胞基本知识概要

一、细胞的基本概念
（一）细胞是生命活动的基本单位
1、细胞是构成有机体的基本形态单位
（1）一切有机体均由细胞构成(病毒例外)
（2）变形虫、眼虫是单细胞机体®盘藻是多细胞聚合体，细胞未分化®高等动植物细胞分化®组织®器官®系统®机体
2、细胞是有机体的基本功能单位
（1）机体的一切代谢活动都以细胞为基本单位，表现出高度的有序性、独立性和自控性。
（2）机体发生退行性变化（衰老、疾病）也是始于细胞。
3、细胞是有机体生长与发育的基础
机体的发育依靠细胞的分裂、生长、分化和凋亡来实现。
4、细胞是遗传的基本单位，具有遗传的全能性
（1）细胞含全套的遗传信息，具遗传的全能性
（2）单个植物细胞可经人工诱发成完整的植株
（3）人工将体细胞核植入动物受精卵细胞质亦能发育成正常的个体。
5、没有细胞就没有完整的生命
（1）任何细胞组分都不能在体外培养持续生存
（2）病毒须在细胞内才能表现基本生命特征。
二、细胞的基本共性
构成细胞最主要的化学元素为C、H、O、N，占细胞全重90％；其次的八种元素是S、P、Na、Ca、K、Cl、Mg、Fe，这十二种元素占细胞全重的99％以上，此外还有极微量的其它化学元素，如B(硼)、Si(硅)、V(钒)、Mn(锰)、Co(钴)、Cu(铜)、Zn(锌)、Mo(钼)等。
最基础的生物小分子：核苷酸、氨基酸、脂肪酸与单糖。
重要生物大分子：核酸、蛋白质、脂质和多糖。
复合分子：核蛋白、脂蛋白、糖蛋白和糖脂。
平均来说，细胞的组成中水占85%、蛋白质10%、DNA 0.4%、RNA 0.7%、脂类2%、糖和其它有机物2 %、无机物1.5%。
1、所有的细胞表面均有磷脂双分子层与镶嵌蛋白质构成的生物膜─质膜。真核细胞的质膜内陷演化为细胞的内膜体系，构建成以膜为基础的功能专一的细胞器。
2、所有细胞都有两种核酸：即DNA和RNA，作为遗传信息复制与转录的载体。
3、所有细胞都含有蛋白质的合成机器─核糖体。
4、所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。
二、非细胞形态的生命体─病毒与蛋白质感染因子
（一）病毒 Virus
是一类非细胞形态的介于生命与非生命形式之间的物质。有以下主要特征：①个体微小，可通除滤菌器，大多数必须用电镜才能看见；②仅具有一种类型的核酸，或DNA或RNA；③专营细胞内寄生生活；④具有受体连结蛋白（receptor binding protein），与敏感细胞表面的病毒受体连结，进而感染细胞。
1、病毒的形态结构
病毒的大小一般在10-30nm之间。结构简单，由核酸（DNA或RNA）芯和蛋白质衣壳（capsid）所构成，称核壳体或核衣壳（nucleocapsid），核壳体有保护病毒核酸不受酶消化的作用。有些病毒还含有一定量的脂质、糖复合物与聚氨类化合物。各种病毒所含的遗传信息量不同，少的只含有3个基因，多的可达300个不同的基因。
电镜观察有五种形态；①球形（Sphericity）：大多数人类和动物病毒为球形，如脊髓灰质炎病毒、疱疹病毒及腺病毒等；②丝形（Filament）：多见于植物病毒，如烟草花叶病病毒，人类流感病毒有时也是丝形；③弹形（Bulletshape）：形似子弹头，如狂犬病毒、疱疹性口炎病毒等，其他多为植物病毒。④砖形（Brick-shape）：如天花病毒、牛痘苗病毒等；⑤蝌蚪形（Tadpoleshape）：由一卵圆形的头及一条细长的尾组成，如噬菌体。
2、病毒的增殖
病毒只有在侵入细胞以后才表现出生命现象。病毒的生活周期可分为两个阶段：一个是细胞外阶段，以成熟的病毒粒子形式存在；另一个是细胞内阶段，即感染阶段。感染阶段开始时，病毒的遗传物质由衣壳中释放出来，注入宿主细胞中，然后在病毒核酸信息的指导控制下，形成新的病毒粒子。
根据寄生的宿主不同，病毒可分为动物病毒、植物病毒和细菌病毒（即噬菌体）三大类。
（二）类病毒 Viroid
类病毒在结构上比病毒还要简单，没有蛋白质外壳，仅为一裸露的RNA或DNA分子，多数只有300-400个核苷酸。由于它们具有感染作用，类似于病毒，故称为类病毒。不过，它们的复制需要真病毒的协助。例如，马铃薯锤管类病毒仅由一个含359个核苷酸的单链环状RNA分子组成，分子长约40-50nm，不能制造衣壳蛋白。
（三）蛋白质感染因子
1982年S．B．Prusiner以叙利亚仓鼠为实验材料，发现羊瘙痒病（scrapie）的病原体是一种蛋白质，不含核酸，命名为prion，意即Proteinaceous Infection Only，译为蛋白质感染因子或朊病毒，Prusiner因此项发现更新了医学感染的概念，获1997年的诺贝尔生理与医学奖。
Prion是一种结构变异的蛋白质，对高温和蛋白酶均具有较强的抵抗力。它能转变细胞内的此类正常的蛋白PrPC（cellular prion protein），使PrPC发生结构变异，变为具有致病作用的PrPSc（scrapie-associated prion protein）。
PrPC存在于神经元、神经胶质细胞和其它一些细胞，属于糖磷脂酰肌醇锚定蛋白，集中在膜上的脂筏中，对蛋白酶和高温敏感，可能和细胞信号转导有关。
目前对蛋白质感染因子的增殖方式有两种解释，一是重折叠模型（refolding model），认为PrPSc分子起分子伴侣（molecular chaperone）的作用，能与PrPc分子相结合，诱使PrPc转变成PrPSc，从而形成了PrPSc二聚体，于是一个PrPSc分子就变成了2个PrPSc分子，如此倍增不已。另一种解释是晶种模型（Seeding model），认为PrPc分子本身有向PrPSc转变的倾向（一种平衡反应），PrPSc能像晶种一样，稳定PrPc的构象，形成淀粉样蛋白沉淀，然后碎裂后又变成新的晶种。
目前已知的人类PRION疾病主要有：
1. 克-雅二氏病（Creutzfeldt–Jakob disease，CJD）：Cruetzfeldt和Jakob 1920年发现于六例患者，大多发生于60岁以上的人，是自身PrP蛋白发生变异引起的。
2. 变异型克-雅氏病（vCJD）：患者都处于以往CJD未曾出现的年龄段，为十几岁至三十岁的年轻人，是由于取食病牛产品而感染。患者首先出现忧郁症的病状，继而不能行走，并呈现精神障碍等痴呆症状，最后死亡。
3. GSS综合征（Gerstmann-Straussler Scheinker disease）：是一种遗传的的慢性脑病，由Prnp基因缺陷引起，PrP蛋白的102位亮氨酸被脯氨酸取代或117位的缬氨酸被丙氨酸取代。
4. 克鲁病（Kuru）：发现于新几内亚一个叫Fore的部落，当地人称作kuru，意即颤抖。病人大多数是妇女及小孩，病症有言语含糊及无意识地狂笑，最后不省人事并死亡。一名美国医生D. C. Gajdusek到了当地，发现那里的妇女及小孩具有吃死者尸体的习惯，结果受到感染。
5. 致死性家族性失眠症（Fatal familial insomnia，FFI）：也是一种遗传性疾病，Prnp基因变异，PrP蛋白178位的天冬酰胺被天冬氨酸取代。患者的主要症状是失眠，并有CJD的症状。
对于蛋白质感染因子引起的疾病，目前尚没有有效的治疗措施。这类蛋白具有很强的抵抗力，对抗生素和消毒剂不敏感，134-138℃持续1h的病牛脑组织匀浆，以及10%福尔马林固定过的病羊脑组织，仍有感染性。
据报道，自1996年以来，共有106人得了疯牛病，其中仅有7人还活着。
三、原核细胞与古核细胞
20世纪60年代，H. Ris提出将细胞分为两大类 ：(1)原核细胞(prokaryocyte or prokaryoticcell)；(2)真核细胞(eukaryoticcell or eukaryocyte)。
原核细胞大约在35亿年前就出现在地球上，它结构简单，种类较少，体积较小，直径0.2-10mm不等；没有典型的细胞核。细菌、兰藻等属这一类。原核细胞基本特点可概括为（1）遗传信息量小，遗传信息载体仅由一个环状DNA构成；（2）细胞内没有分化成以膜为基础的细胞器和核膜。
（一）细菌
细菌是在自然界分布最广、个体数量最多的有机体，是大自然物质循环的主要参与者。细菌主要由细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等部分构成，有的细菌还有夹膜、鞭毛、菌毛等特殊结构。绝大多数细菌的直径大小在0.5-5μm之间。可根据形状分为三类，即：球菌、杆菌和螺旋菌（包括弧形菌）。
1、细胞壁
细胞壁厚度因细菌不同而异，一般为15-30nm。主要成分是肽聚糖，由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸构成双糖单元，以β（1-4）糖苷键连接成大分子。
2、细胞膜
是典型的单位膜结构，厚约8-10nm，外侧紧贴细胞壁 。通常不形成内膜系统，除核糖体外，没有其它类似真核细胞的细胞器，呼吸和光合作用的电子传递链位于细胞膜上
3、细胞质与核质体
细菌和其它原核生物一样，没有核膜，DNA集中在细胞质中的低电子密度区，称核区或核质体（nuclear body）。细菌一般具有1-4个核质体，多的可达20余个。核质体是环状的双链DNA分子，所含的遗传信息量可编码2000～3000种蛋白质，空间构建十分精简，没有内含子。
4、其他结构
许多细菌的最外表还覆盖着一层多糖类物质，边界明显的称为荚膜（capsule），如肺炎球菌，边界不明显的称为粘液层（slime layer），如葡萄球菌。
鞭毛是某些细菌的运动器官，由一种称为鞭毛蛋白（flagellin）的弹性蛋白构成，结构上不同于真核生物的鞭毛。
菌毛是菌体表面极其的蛋白纤维，须用电镜观察。特点是：细、短、直、硬、多，菌毛与细菌吸附和侵染宿主有关 。
5、繁殖
细菌以二分裂的方式繁殖，某些细菌处于不利的环境，或耗尽营养时，形成内生孢子，又称芽孢，是对不良环境有强抵抗力的休眠体，由于芽胞在细菌细胞内形成，故常称为内生孢子。
（二）支原体
支原体（mycoplasma）的大小通常为0.2-0.3mm，可通过滤菌器。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性。
支原体基因组为一环状双链DNA，分子量小（仅有大肠杆菌的五分之一），合成与代谢很有限。
（三）衣原体和立克次氏体
衣原体(Chlamydia)，直径200-500nm，能通过细菌滤膜。立克次氏体（Rickettsia）略大，大多不能通过滤菌膜。它们都有DNA和RNA，有革兰氏阴性细菌特征的含肽聚糖的细胞壁，但酶系统不完全，必须在寄主细胞内生活，有摄能寄生物(energy parasite)之称。
（四）蓝藻
蓝藻又称蓝细菌（cyanobacterium），能进行与高等植物类似的光合作用（以水为电子供体，放出O２），与光合细菌的作用机制不一样，因此被认为是最简单的植物。蓝藻没有叶绿体，仅有十分简单的光合作用结构装置。蓝藻细胞遗传信息载体与其它原核细胞一样，是一个环状DNA分子，但遗传信息量很大，有约3000个编码蛋白的潜在基因。
（五）古细菌（archaebacteria）
是一类很持殊的细菌，多生活在极端的生态环境中。具有原核生物的某些特征，如无核膜及内膜系统；也有真核生物的特征，如以甲硫氨酸起始蛋白质的合成、核糖体对氯霉素不敏感、RNA聚合酶和真核细胞的相似、DNA具有内含子并结合组蛋白。
此外还具有既不同于原核细胞也不同于真核细胞的特征，如：细胞膜中的脂类是不可皂化的；细胞壁不含肽聚糖，有的以蛋白质为主，有的含杂多糖，有的类似于肽聚糖，但都不含胞壁酸、D型氨基酸和二氨基庚二酸。
极端嗜热菌（themophiles）：能生长在90℃以上的高温环境。如德国的斯梯特（K. Stetter）研究组在意大利海底发现的一族古细菌，能生活在110℃以上高温中，最适生长温度为98℃，降至84℃即停止生长。美国的J.A. Baross发现一些从火山口中分离出的细菌可以生活在250℃的环境中。
嗜热菌的营养范围很广，多为异养菌，其中许多能将硫氧化以取得能量。
极端嗜盐菌（extremehalophiles）：生活在高盐度环境中，盐度可达25%，如死海和盐湖中。
极端嗜酸菌（acidophiles）：能生活在pH值1以下的环境中，往往也是嗜高温菌，生活在火山地区的酸性热水中，能氧化硫，硫酸作为代谢产物排出体外。
极端嗜碱菌（alkaliphiles）：多数生活在盐碱湖或碱湖、碱池中，生活环境pH值可达11.5以上，最适pH值8～10
产甲烷菌（metnanogens）：是严格厌氧的生物，能利用CO2使H2氧化，生成甲烷，同时释放能量。
CO2＋4H2→CH4＋2H2O＋能量
由于古细菌所栖息的环境和地球发生的早期有相似之处，如：高温、缺氧，而且由于古细菌在结构和代谢上的特殊性，它们可能代表最古老的细菌。它们保持了古老的形态，很早就和其它细菌分手了。所以人们提出将古细菌从原核生物中分出，成为与原核生物（即真细菌eubacteria）、真核生物并列的一类。
（1）细胞壁的成分不同于细菌。
（2）DNA含重复序列和内含子。
（3）有组蛋白，构成类似核小体的结构。
（4）核糖体大小介于真细菌与真核细胞之间，对抗生素的反应类似于真核。
（5）5S rRNA的分子结构在进化上更相似于真核细胞。
（6）DNA聚合酶、氨酰基tRNA合成酶、肽链延长因子等相似于真核细胞。
四、真核细胞基本知识概要
真核细胞包括大量的单细胞生物和全部的多细胞生物，出现于12-16亿年前，在起源上和古核细胞的关系更密切。真核细胞结构复杂，种类繁多，出现了以膜为边界的真正细胞核。
（一）真核细胞的基本结构体系
1、生物膜系统：磷脂与蛋白质，厚度8-10nm。
2、遗传信息表达结构系统：DNA-蛋白质、RNA-蛋白质，颗粒与纤维直径10-20nm。
3、细胞骨架系统：纤维网状结构，直径5-24nm。
（二）细胞的大小及其分析
支原体(最小的cell)0.1～0.3mm
细菌1～2mm
动、植物20～30mm
原生动物几百到几千微米，大变形虫200－600mm，眼虫长60mm。
一根棉花纤维由一个cell构成，长4cm。
N cell直径100mm，突起可达1m以上
人卵200mm ； 鸵鸟蛋黄直径5cm
鼠鲨卵径达22cm(最大的cell)
理论上：①细胞体积越大，相对表面积越少，与环境交换物质的能力越小。
②核、质有一定比例,核内所含遗传信息所控制的C体积须有一定限度。
③细胞体积与C内物质交流的速度成反比。
理论上最小的细胞:
一个细胞生存与增殖必须具备细胞膜、遗传信息载体DNA与RNA、进行蛋白质合成的核糖体以及催化主要酶促反应所需要的酶。估计完成细胞功能至少需要100种酶，这些分子进行酶促反应所必须占有的空间直径约为50nm，加上核糖体（每个核糖体直径约10-20nm），细胞膜与核酸等，我们可以推算出来，一个细胞体积的最小极限直径不可能小于100nm。
对同类组织来说，细胞的体积是恒定的，器官的大小与细胞的数量成正比。
（三）细胞的形态结构与功能的关系
游离细胞呈球形或近于球状，例如动物的卵细胞、植物的花粉母细胞。但也有例外(由于表面张力或原生质粘度不均一)，如人的红血球、精子，变形虫和白血球等为不定形细胞。
组织细胞既受相邻细胞的制约也与细胞的生理功能有关。例如肌肉细胞适应于收缩，N cell适应于传导刺激。
七、植物细胞与动物细胞的比较
植物细胞：
细胞壁cell wall，中层或胞间层(middle lamella)，胞间连丝。
质体(plastids)
较大液泡(Vacuole)。
动物细胞：
溶酶体
中心体
第三章 细胞生物学研究方法

一、细胞形态结构的观察方法
（一）光学显微镜技术
1、普通光学显微镜
普通生物显微镜由3部分构成，即：①照明系统，包括光源和聚光器；②光学放大系统，由物镜和目镜组成，是显微镜的主体，为了消除球差和色差，目镜和物镜都由复杂的透镜组构成；③机械装置，用于固定材料和观察方便。
显微镜物象是否清楚决定于显微镜的分辨力（resolution）。分辨力是指显微镜（或人的眼睛距目标25cm处）能分辨物体最小间隔的能力，分辨力的大小决定于光的波长和镜口率以及介质的折射率，用公式表示为：
R=0.61λ /N.A. N.A＝ｎsinα/2
式中：n=介质折射率；α=镜口角（标本对物镜镜口的张角），N.A.=镜口率（numeric aperture）。镜口角总是要小于180˚，所以sina/2的最大值必然小于1。
制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65-1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气（折射率为1），镜口率一般可达0.95；水的折射率为1.33；油镜头用香柏油为介质（折射率为1.52），镜口率可接近1.5。
普通光线的波长为400-700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于0.2mm，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X。
2、荧光显微镜
细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光。
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：
（1）照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上；
（2）光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；
（3）有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，以保护人目。
3、激光共聚焦扫描显微境
激光共聚焦扫描显微镜（laser confocal scanning microscope）用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像，扫描的激光与荧光收集共用一个物镜，物镜的焦点即扫描激光的聚焦点，也是瞬时成像的物点。
激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量。
4、暗视野显微镜
暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。
5、相差显微镜
相差显微镜（phasecontrast microscope）由P．Zernike于1932年发明，并因此获1953年诺贝尔物理奖。这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和活细胞。
基本原理是把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：
1.  环形光阑（annular  diaphragm） 位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。
2. 相位板（annular phaseplate）在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。
6、偏光显微镜
偏光显微镜（polarizing microscope）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。
7、微分干涉差显微镜
1952年，Nomarski在相差显微镜原理的基础上发明了微分干涉差显微镜（differential interference contrast microscope）。DIC显微镜的优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。
8、倒置显微镜
组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。
（二）电子显微镜
1、透射电子显微镜（transmission electron microscope，TEM）
基本原理与光学显微镜的成像原理基本一样，所不同的是前者用电子束作光源，用电磁场作透镜。由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成。
另外，由于电子束的穿透力很弱，因此用于电镜的标本须制成厚度约50nm左右的超薄切片。这种切片需要用超薄切片机（ultramicrotome）制作。电子显微镜的放大倍数最高可达近百万倍。
2、扫描电子显微镜
扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM）
工作原理是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与电子束入射角有关，也就是说与样品的表面结构有关，次级电子由探测体收集，并在那里被闪烁器转变为光信号，再经光电倍增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像 。
目前扫描电镜的分辨力为6-10nm
3、扫描隧道显微镜（scanning tunneling microscope，STM）
根据量子力学原理中的隧道效应而设计。当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电压（2mV~2V），针尖与样品之间有电子逸出，形成隧道电流。电流强度和针尖与样品间的距离有函数关系，使探针与物质表面间的距离不断发生改变，从而引起电流不断发生改变。将电流的这种改变图像化即可显示出原子水平的凹凸形态。
扫描隧道显微镜的分辨率很高，横向为0.1-0.2nm，纵向可达0.001nm。它的优点是三态（固态、液态和气态）物质均可进行观察，而普通电镜只能观察制作好的固体标本。
利用扫描隧道显微镜直接观察生物大分子，如DNA、RNA和蛋白质等分子的原子布阵，和某些生物结构，如生物膜、细胞壁等的原子排列。
（三）显微操作技术
显微操作技术（micromanipulation technique）是指在高倍复式显微镜下，利用显微操作器（micromanipulator）进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置。
显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。细胞核移植技术已有几十年的历史，Gordon等人（1962）对非洲爪蟾进行核移植获得成功。我国著名学者童第周等在鱼类细胞核移植方面进行了许多工作，并取得了丰硕成果。
二、细胞组分的分析方法
（一）离心技术
离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。一般认为，转速为10-25kr/min的离心机称为高速离心机；转速超过25kr/min，离心力大于89kg者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达100kr/min，离心力超过500kg。
1、差速离心（differential centrifugation）
在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。
在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。
差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。
2、密度梯度离心(density gradient centrifugation)
用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。
（二）生物大分子显示方法
1、细胞化学技术
组织化学或细胞化学染色（histochemical or cytochemical staining）是利用染色剂可同细胞的某种成分发生反应而着色的原理，对某种成分进行定性或定位研究的技术。利用这种方法对细胞的各种成分几乎都能显示，包括有无机物醛、蛋白质、糖类、脂类、核酸、酶等。
（1）脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。
（2）茚三酮反应：显示蛋白质。
（3）Schiff反应：细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品红变为红色。这种反应通常用于显示糖和脱氧核糖核酸（Feulgen 反应）。
2、显微光谱分析技术
细胞中有一些成分具有特定的吸收光谱，核酸、蛋白质、细胞色素、维生素等都有自己特征性的吸收曲线。例如，核酸的吸收波长为260nm，而蛋白质的则为280nm。有的成分经组织化学染色后，对可见光有特定的吸收光谱。根据细胞成分所具有的这种特性，可利用显微分光光度计对某些成分进行定位、定性，甚至定量测定。

（三）特异蛋白抗原的定位与定性
根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术。常用的标记物有荧光素和酶。
免疫荧光法（immunofluorescent technique）：常用的萤光素有异硫氰酸荧光素、罗丹明等。
酶标免疫法（enzyme-labeled antibody method）：用酶代替荧光素代替荧光素与抗体耦联。常用的酶有辣根过氧化物酶，酶与底物发生反应后形成不透明的沉积物，从而显示出抗原存在的部位。
（四）流式细胞术
流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。在分析或分选过程中，包在鞘液中的细胞通过高频振荡控制的喷嘴，形成包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算机处理，输出统计结果，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群，分离纯度可达99%。包被细胞的液流称为鞘液，所用仪器称为流式细胞计（flow cytometer）。
（五）细胞电泳
在一定PH值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动，这种现象称为细胞电泳（cell electrophoresis）。引起细胞电泳的电位值称为ξ电位。ξ电位常因细胞生理状态和病理状态而异，因此在诊断疾病上有一定价值。
此外由于不同类型的细胞在电场中的泳动速度不同，细胞电泳尚可用来分离不同种类的细胞例如可把淋巴样细胞与造血细胞分开。
（六）放射自显影术
放射自显影术（autoradiography）用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。
原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间组织中的放射性即可使乳胶感光。然后经过显影、定影处理显示还原的黑色银颗粒，即可得知标本中标记物的准确位置和数量，放射自显影的切片还可再用染料染色，这样便可在显微镜下对标记上放射性的化合物进行定位或相对定量测定。
（七）分子杂交技术
分子杂交技术（molecu