下呼吸道感染疾病患者血清和咽拭子中PCT和miR-124-3p的表达.pdf

压性脑出血患者的疗效分析 J.中华神经外科杂志,2020,36(7):703-705.7 摇 2020 神经内镜下高血压性脑出血手术治疗中国专家共识J.中华医学杂志,2020,100(33):2579-2585.8 摇 高映熙,李凯,郭振峰,等.神经内镜下与开颅手术治疗高血压脑出血的对比研究 J.中国临床实用医学,2021,12(3):25-28.9 摇 王洪波,王奉淼,赵端允,等.立体定向钻孔引流术与小骨窗开颅术治疗老年高血压丘脑出血患者的疗效观察 J.国际医药卫生导报,2018,24(14):2099-2101.10 摇 徐虎,童民锋,刘继红,等.导航辅助神经内镜技术在丘脑出血破入脑室患者中的应用 J.中国全科医学,2018,21(S2):82-84.11 摇 HOSTETTLER I C,SEIFFGE D J,WERRING D J.Intracere鄄bral hemorrhage:an update on diagnosis and treatment J.Expert Review of Neurotherapeutics,2019,19(7):679-694.12 摇 赵朝辉,阳建国,钟兴明,等.神经内镜微创与小骨窗开颅显微手术治疗高血压脑出血及其不同部位血肿的疗效J.临床神经外科杂志,2021,18(5):572-576.13 摇 沈有碧,薛道金,彭子壮,等.神经内镜辅助下手术治疗脑出血并破入脑室的优势研究 J.中华神经医学杂志,2017,16(11):1102-1106.14 摇 王晓毅,黄海林,成刚.内镜下颅内血肿清除术与开颅血肿清除术在高血压脑出血中治疗的比较 J.中华神经创伤外科电子杂志,2020,6(5):283-286.15 摇 王陇德,刘建民,杨弋,等.我国脑卒中防治仍面临巨大挑战 中国脑卒中防治报告 2018 概要 J.中国循环杂志,2019,34(2):105-119.16 摇 赵燕平,杨刚,赵洁,等.高血压脑出血患者术后脑水肿程度危险因素探讨 J.中国现代医生,2021,59(35):95-97.17 摇 杨利辉,刘英彩,张建刚,等.神经内镜与小骨窗开颅治疗老年性丘脑出血的对比 J.中华神经外科疾病研究杂志,2018,17(3):273-274.收稿日期:2023-03-22摇 基金项目:锦州医科大学横向基金项目,项目编号:H2022041。摇 作者简介:张子淇(1991),女,辽宁锦州人,护师,学士学位,主要研究方向为呼吸系统感染性病变。摇 通讯作者:刘丽华(1980),女,辽宁葫芦岛人,副教授,博士学位,主要研究方向为呼吸系统感染性病变。下呼吸道感染疾病患者血清和咽拭子中 PCT 和miR-124-3p 的表达张子淇,刘琳琳,梁冬雪,刘丽华(锦州医科大学附属第一医院呼吸危重症监护病区,辽宁 锦州 121000)摇 摇 摘要:目的摇 检测下呼吸道感染疾病患者血清和咽拭子中降钙素原(procalcitonin,PCT)、微小 RNA-124-3p(mi鄄croRNA-124-3p,miR-124-3p 的表达特征,分析两者在下呼吸道感染疾病中的诊断价值。方法摇 收集 2020 年 1 月至 2022年 12 月在锦州医科大学附属第一医院确诊为下呼吸道感染的成人患者 150 例作为观察组,收集同期经体检证实为无明显器质性疾病的成人 50 例作为对照组,对所有纳入对象均采集空腹静脉血及咽拭子,应用化学发光法检测 PCT 的表达,应用实时荧光定量多聚酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测 miR-124-3p 的表达。结果观察组血清和咽拭子中 PCT 的表达量均明显高于对照组(P0郾 05),观察组血清和咽拭子中 miR-124-3p 的表达量均明显低于对照组(P0郾 05)。血清和咽拭子中 PCT、miR-124-3p 的表达量在细菌感染组、支原体感染组和病毒感染组中的差异有统计学意义(P0郾 05)。PCT、miR-124-3p 在观察组血清和咽拭子中的表达均呈负相关性(P0郾 05)。结论摇 下呼吸道感染疾病患者血清和咽拭子中 PCT 和 miR-124-3p 均异常表达,尤其以细菌感染明显;患者行血清和咽拭子 PCT、miR-124-3p 的联合检测对明确病因有一定价值。关键词:下呼吸道感染疾病;血清;咽拭子;PCT;miR-124-3p中图分类号:R562摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 文章编号:2096-305X(2023)04-0070-0607锦州医科大学学报摇 2023 年 8 月,44(4)Study on the Expression of PCT and MiR-124-3p in Serum and PharyngealSwabs of Patients with Lower Respiratory Tract Infection DiseaseZhang Ziqi,Liu Linlin,Liang Dongxue,Liu Lihua(Respiratory Critical Care Unit,the First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University,Jinzhou 121000 China)Abstract:Objective摇 To detect the expression characteristics of procalcitonin(PCT)and microRNA-124-3p(miR-124-3p)in serum and pharyngeal swabs of patients with lower respiratory tract infection disease,and analyze the diagnostic value of bothin lower respiratory tract infection disease.Methods摇 A total of 150 adult patients diagnosed with lower respiratory tract infection inthe First Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University from January 2020 to December 2022 were enrolled as the observation group.50 adults without obvious organic diseases confirmed by physical examination during the same period were collected as the controlgroup.Fasting venous blood and throat swabs were collected from all the included subjects.The expression of PCT was detected bychemiluminescence method,and the expression of miR-124-3p was detected by quantitative real-time polymerase chain reaction(qRT-PCR).Results摇 The expression level of PCT in serum and throat swabs of observation group was significantly higher than thatof control group(P0郾 05),and the expression level of miR-124-3p in serum and throat swabs of observation group was significantlylower than that of control group(P0郾 05).The expression levels of PCT and miR-124-3p in serum and throat swabs were signifi鄄cantly different in bacterial infection group,mycoplasma infection group and viral infection group(P0郾 05).The expressions of PCTand miR-124-3p in serum and throat swabs of the observation group were negatively correlated(P0郾 05).Conclusion摇PCT andmiR-124-3p were abnormally expressed in both serum and pharyngeal swabs of patients with lower respiratory tract infections,espe鄄cially in bacterial infections,and the combined detection of PCT and miR-124-3p in serum and pharyngeal swabs is valuable for clari鄄fying the etiology.Key words:lower respiratory tract infection disease;serum;pharyngeal swab;PCT;miR-124-3p摇 摇 下呼吸道感染是内科最常见的疾病之一,最常见的病因为细菌感染、支原体感染和病毒感染,不同原因形成疾病的临床表现和治疗方法不同1。加强病情的早期诊断,对早期进行规范治疗有重要价值。近年学者相继发现了多种血清学标志物在炎性疾病中的诊断价值,如降钙素原(PCT)、微小 RNA-124-3p(miR-124-3p)及白介素等,但是由于其敏感性和特异性较低使临床应用受到限制2-3,寻找新的技术和方法仍是新的课题。近年学者关注到咽拭子采样可能对诊断呼吸系统疾病有帮助,而且咽拭子采样方法因其标本留取操作简单,患者能够配合,逐渐成为局部呼吸道感染检测的一种临床方法。本研究关注下呼吸道感染疾病患者血清和咽拭子中 PCT 和 miR-124-3p 的检测价值,分析其相关性,以期为临床诊断提供帮助。1摇 对象与方法1郾 1摇 研究对象收集 2020 年 1 月至 2022 年 12 月在锦州医科大学附属第一医院确诊的下呼吸道感染成人患者作为研究对象。纳入标准:符合下呼吸道感染诊断标准,患者伴有明显的咳嗽、胸闷、气喘、高热等临床症状;胸部 X 线检查可见于肺部存在浸润性生长性的病变。排除标准:有恶性肿瘤及血液系统疾病病史者。共观察 150 例,其中男性 78 例,女性 72 例,年龄 21 89 岁,中位年龄 62 岁。其中细菌感染者 49 例,支原体感染者 51 例,病毒感染者 50 例。收集同期体检证实为无明显器质性疾病的成人(健康成人)50 例作为对照组,其中男性25 例,女性25 例,年龄20 70 岁,中位年龄 56 岁。两组在常规资料的比较中差异无统计学意义。本研究经医院医学伦理委员会批准通过。1郾 2摇 检测方法观察组在确诊后次日早晨、对照组于早晨饭前均抽取空腹静脉血 3 mL,静置20 min 后以2500 r/min 转速离心15min 进行血清分离,置于-80 益冰箱中冻存待检。咽拭子的采样方法:留取咽拭子标本时严格按照临床操作规范进行操作,让患者张口并发出“啊冶 音,必要时可使用压舌板。取出无菌拭子在患者两侧咽、腭弓和扁桃体上稍用力来回擦拭至少 3 次;避免口腔内食物残渣以及部分杂菌的干扰;将拭子头浸入稀释液中搅拌,并将拭子头部与管壁接触几下,再搅拌,令标本尽可能多的释放至稀释液中,而后静置 5 min。将检测试剂盒、样本平衡至室温。样本均于 1 w内集中检测,均由同一检验科技师操作完成。PCT 的检测应用化学发光法,严格按说明书进行操作。miR-124-3p 的检测应用实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法,TRIZOL 提取总 RNA,逆转录法合成 cDNA 模板。引物序列:上游:5忆-ACACTTTGAAAAGTGAACTAACGG-3忆,下 游:5忆-GACGTGTCGTGAAGGAGTGTGGCAGCT-3忆。以 U6 作为内参,上游:5忆-GGCAGACGCGAAGATTAGACTGGGC-3忆 下游:5忆-TTGGACATGAACGCAATCCG-3忆。扩增程序:95 益预变性 30 s;95 益变性 10 s;60 益退火 20 s,70益延伸 10s,持续 35 个循环。采用 2-吟吟Ct法进行分析,做好质控工作以减少误差。1郾 3摇 统计学方法应用 SAS 6郾 12 软件对数据进行统计学分析,率的资料应用(%)表示,组间比较应用卡方检验;计量资料先行方差齐性检验和正态性检验,以均数依标准差表示,正态分17张子淇,等:下呼吸道感染疾病患者血清和咽拭子中 PCT 和 miR-124-3p 的表达布的资料分别应用 t 检验、方差分析(SNK 法行两两比较),相关分析应用线性相关分析,以 P0郾 05),见表 1。2郾 2摇 两组血清中 PCT 和 miR-124-3p 表达水平的比较观察组和对照组血清中 PCT、miR-124-3p 的表达差异有统计学意义,即观察组中 PCT 的表达明显高于对照组,miR-124-3p 的表达明显低于对照组(均 P0郾 05),见表2、图 1。2郾 3摇 观察组不同临床特征分组患者血清中 PCT、miR-124-3p 表达差异的比较观察组血清中 PCT 和 miR-124-3p 在细菌感染者、支原体感染者和病毒感染者分组中表达的差异有统计学意义(P0郾 05),见表3。表 1摇 两组常规资料的比较n(%)项目观察组(n=150)对照组(n=50)t/字2值P 值年龄(岁)62郾 21依8郾 2358郾 21依7郾 031郾 0210郾 120性别摇 摇 男78(52郾 00)25(50郾 00)0郾 0600郾 806摇 摇 女72(48郾 00)25(50郾 00)文化程度摇 摇 初中及以下60(40郾 00)21(42郾 00)0郾 0620郾 803摇 摇 高中以上90(60郾 00)29(58郾 00)项目观察组(n=150)对照组(n=50)t/字2值P 值吸烟史摇 摇 无89(59郾 33)31(62郾 00)0郾 1110郾 739摇 摇 有61(40郾 67)19(38郾 00)饮酒史摇 摇 无80(53郾 33)28(56郾 00)0郾 1070郾 743摇 摇 有70(46郾 67)22(44郾 00)表 2摇 两组血清中 PCT 和 miR-124-3p 表达水平的比较(軃x依s)组别nPCT(ng/mL)t 值PmiR-124-3pt 值P 值观察组1504郾 70依0郾 79*38郾 9090郾 001*1郾 78依0郾 32*5郾 3100郾 013*对照组500郾 34依0郾 073郾 57依0郾 46摇 注:与对照组比较,*P0郾 05。A:PCT 在两组血清中的表达;B:miR-124-3p 在两组血清中的表达;C:血清中 miR-124-3p 的表达(qRT-PCR 法);*P0郾 05;橙色为观察组,蓝色为对照组。图 1摇 两组血清中 PCT 和 miR-124-3p 表达水平27锦州医科大学学报摇 2023 年 8 月,44(4)表 3摇 观察组不同临床特征分组血清中 PCT、miR-124-3p 表达差异比较(軃x依s)项目nPCT(ng/mL)t 值PmiR-124-3pt 值P年龄(岁)摇 摇 摇 逸60904郾 53依0郾 230郾 9800郾 2461郾 84依0郾 121郾 3590郾 135摇 摇 摇 60604郾 95依0郾 451郾 69依0郾 16性别摇 摇 摇 男784郾 52依0郾 420郾 8200郾 3021郾 84依0郾 221郾 5420郾 104摇 摇 摇 女724郾 90依0郾 651郾 72依0郾 25文化程度摇 摇 摇 初中及以下604郾 31依0郾 591郾 3800郾 1071郾 89依0郾 341郾 2930郾 209摇 摇 摇 高中以上904郾 96依0郾 581郾 71依0郾 31吸烟史摇 摇 摇 无894郾 47依0郾 351郾 1200郾 1361郾 90依0郾 160郾 9420郾 269摇 摇 摇 有615郾 04依0郾 361郾 60依0郾 20饮酒史摇 摇 摇 无804郾 46依0郾 271郾 0200郾 1971郾 89依0郾 160郾 8510郾 290摇 摇 摇 有704郾 98依0郾 191郾 65依0郾 24类型摇 摇 摇 病毒感染者502郾 77依0郾 152郾 58依0郾 21摇 摇 摇 支原体感染者514郾 73依0郾 2318郾 6100郾 001*1郾 74依0郾 1915郾 0140郾 001*摇 摇 摇 细菌感染者496郾 64依0郾 321郾 01依0郾 20摇 注:*P0郾 05。2郾 4摇 两组咽拭子中 PCT 和 miR-124-3p 表达水平的比较观察组和对照组咽拭子中 PCT、miR-124-3p 的表达差异有统计学意义,即观察组中 PCT 的表达明显高于对照组,miR-124-3p 的表达明显低于对照组(均 P0郾 05),见表4、图 2。表 4摇 两组咽拭子中 PCT 和 miR-124-3p 表达水平的比较(軃x依s)组别nPCT(ng/mL)t 值PmiR-124-3pt 值P 值观察组1502郾 76依0郾 20*15郾 4320郾 001*2郾 20依0郾 31*4郾 4040郾 021*对照组500郾 15依0郾 044郾 12依0郾 21摇 注:与对照组比较,*P0郾 05。A:PCT 在两组咽拭子中的表达;B:miR-124-3p 在两组咽拭子中的表达;C:咽拭子中 miR-124-3p 的表达(qRT-PCR 法);*P0郾 05;橙色为观察组,蓝色为对照组。图 2摇 两组咽拭子中 PCT 和 miR-124-3p 表达水平2郾 5摇 观察组不同临床特征分组咽拭子中 PCT、miR-124-3p表达差异比较观察组咽拭子中 PCT、miR-124-3p 在细菌感染者、支原体感染者、病毒感染者分组中表达的差异有统计学意义(P0郾 05),见表5。37张子淇,等:下呼吸道感染疾病患者血清和咽拭子中 PCT 和 miR-124-3p 的表达表 5摇 观察组不同临床特征分组咽拭子中 PCT、miR-124-3p 表达差异比较(軃x依s)项目nPCT(ng/mL)t 值PmiR-124-3pt 值P年龄(岁)330摇 摇 摇 逸60902郾 78依0郾 200郾 4580郾 6982郾 25依0郾 120郾 5190郾 532摇 摇 摇 60602郾 72依0郾 132郾 12依0郾 18性别摇 摇 摇 男782郾 81依0郾 230郾 6220郾 5632郾 26依0郾 220郾 5040郾 546摇 摇 摇 女722郾 71依0郾 132郾 14依0郾 23文化程度摇 摇 摇 初中及以下602郾 88依0郾 200郾 7540郾 4612郾 35依0郾 310郾 8040郾 413摇 摇 摇 高中以上902郾 68依0郾 252郾 10依0郾 24吸烟史摇 摇 摇 无892郾 84依0郾 350郾 7900郾 4632郾 28依0郾 250郾 6230郾 493摇 摇 摇 有612郾 64依0郾 162郾 09依0郾 21饮酒史摇 摇 摇 无802郾 83依0郾 270郾 7020郾 5032郾 28依0郾 210郾 5910郾 513摇 摇 摇 有702郾 68依0郾 192郾 11依0郾 28类型摇 摇 摇 病毒感染者501郾 92依0郾 182郾 71依0郾 29摇 摇 摇 支原体感染者512郾 73依0郾 2120郾 6090郾 001*2郾 18依0郾 1722郾 5410郾 001*摇 摇 摇 细菌感染者493郾 65依0郾 131郾 70依0郾 19摇 注:*P0郾 05。2郾 6摇 PCT 和 miR-124-3p 在血清和咽拭子中的相关性分析对 150 例患者血清和咽拭子中 PCT 和 miR-124-3p 的表达进行线性相关分析,结果显示血清中 PCT 和 miR-124-3p 的表达(r=-0郾 621,P=0郾 021)、咽拭子中 PCT 和 miR-124-3p 的表达(r=-0郾 594,P=0郾 041)均具有负相关性。3摇 讨摇 摇 论呼吸道大部分粘膜具有纤毛,可分泌液体,起到湿润、温暖、净化吸入空气的作用。下呼吸道感染病变较上呼吸道严重,并多见于机体抵抗力低、且具有并发症的老年患者4-5,如果下呼吸道症状未有效控制,常引发严重后果,甚至威胁生命6。加强老年患者下呼吸道感染的早期诊断和治疗具有重要意义7。近年临床应用的 PCT 为观察感染的重要指标之一,是 1993 年由 ASSICOT 发现的一种降钙素无激素活性的糖蛋白,半衰期为 15 23 h,具有良好的体内稳定性8。生理状态下,PCT 由甲状腺 C 细胞产生,病理状态下,肝、肺等多种组织也会产生 PCT9。健康人血浆中 PCT 含量极低,多由细菌释放的内毒素和炎性因子诱导产生。细菌感染时 PCT 含量升高明显,而病毒感染时PCT 含量正常或轻度升高。有学者研究显示细菌感染 4 h 时即能检测到 PCT 升高,在 6 h 后达高峰,而感染控制 72 h明显下降,并随着感染的恢复,PCT 含量趋于正常,因此,PCT 可作为呼吸道细菌感染的一个敏感性的检测指标10。常规 PCT 检测主要是血清检测,但近年来的研究发现,血清 PCT 在细菌感染早期敏感性不足。有研究发现痰液 PCT的检测也有一定诊断意义,但由于部分儿童及成人有效咳痰困难,气管吸痰又不被患者及家属接受,因此限制了其临床应用11。而咽拭子的方法因其标本留取操作简单,多数患者能够配合,已逐渐成为局部呼吸道感染检测的方法。miRNAs 是近年关注的细胞因子调控因子,为一种内源性非编码 RNA,在体内多种组织和细胞中存在,miRNAs 由 17-25 个碱基组成,主要通过调控靶基因的 3爷 UTR 发挥生物学作用12-13,其下游因子包括真核翻译起始因子家族14、SIRT115、增殖及凋亡相关因子16等多种基因。miR-124-3p 是近年学者认为与炎性反应、免疫性疾病及肿瘤相关的因子,对炎症的级联反应调控有重要作用,其表达下降参与多种急性炎症过程17。本研究结果显示下呼吸道感染患者血清和咽拭子中PCT 均高表达,而 miR-124-3p 均低表达,提示二者异常表达是疾病形成过程中重要的变化因子,可能参与炎症反应过程中细胞因子的瀑布效应。结果显示细菌感染组患者血清和咽拭子中 PCT 的表达明显高于支原体感染组和病毒感染组,而 miR-124-3p 的表达明显低于支原体感染组和病感毒感染组,提示联合检测血清和咽拭子中 PCT 和 miR-124-3p 的表达对判断细菌和非细菌感染的意义可能更大。实验结果显示 PCT 和 miR-124-3p 具有负相关性,提示二者具有负向协同作用,即咽拭子中的表达效果与血清中的效果相仿,可以作为血清检测的补充。PCT 作为细菌感染的重要指标之一,具有早期、快速、便捷、特异性和敏感性高的特点18-19。与 miR-124-3p 联合检测,对提高早期诊断率有一定作用20-21。咽拭子 PCT 和 miR-124-3p 结合可直接应于临床。也有研究显示咽拭子检测 PCT 对呼吸道47锦州医科大学学报摇 2023 年 8 月,44(4)感染早期的细菌感染诊断敏感性要优于血清 PCT22,其原因主要在于咽喉中的分泌物可能同时混有咽部分泌物和鼻部分泌物,当 PCT 阳性,不除外咽部分泌物参与所致。而且咽拭子临床采集方便,操作简单,患者配合度高,具有较好的临床应用前景。综上所述,下呼吸道感染疾病患者血清和咽拭子中PCT 和 miR-124-3p 均异常表达,尤其以细菌感染明显,血清和咽拭子中联合检测 PCT 和 miR-124-3p 对明确病因有一定价值。但是本实验也发现 PCT 是较为常规项目,而基于 miRNAs 不同成员作为下呼吸道感染疾病的标记物和诊断相关因子的开发对于临床寻找客观指标可能有重要价值。参考文献:1 摇 赖晓蓉,江川,朱鹏飞,等.下呼吸道感染肺炎支原体患者血清 CRP、PCT、IL-6 水平变化及临床意义 J.热带医学杂志,2021,21(5):632-636.2 摇 ZHANG Y,ZHU C,ZHAO H,et al.Anti-inflammatory effectof chlorogenic acid in Klebsiella pneumoniae-induced pneumoniaby inactivating the p38MAPK pathway J.Int J Med Microbiol,2023,313(2):151576.3 摇 LI J,YAN X,LI B,et al.Identification and validation of fer鄄roptosis-related genes in patients infected with 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