肠杆菌科鉴定(全).ppt

肠杆菌科鉴定流程主讲人：王曦晖1.9版伯杰鉴定细菌手册分为24个属，108个种现增加到31个属,常见的15个属1.占临床分离菌总数50%2.占G-杆菌总数80%3.占败血症50%4.占尿路感染70一.分布2.二.临床意义l有些菌属有些菌属对人人类有明有明显的致病作用的致病作用n1、鼠疫耶耳森菌-引起烈性传染病n2、埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶耳森菌属可导致腹泻、食物中毒.伤寒l多数菌属是多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌道正常菌群，也是条件致病菌3.n与人与人类感染有关的感染有关的肠杆菌科杆菌科细菌有菌有31个菌属，个菌属，其中其中临床床标本中常本中常见的菌属有的菌属有15种种 克雷伯菌属克雷伯菌属 爱德德华菌属菌属 邻单胞菌属胞菌属 变形杆菌属形杆菌属 普普罗威登斯菌属威登斯菌属 沙沙门菌菌属属 耶耶尔森菌属森菌属 志志贺菌属菌属 沙雷沙雷菌属菌属 肠杆菌属杆菌属 埃希菌属埃希菌属 哈哈夫尼夫尼亚菌属菌属 枸枸橼酸杆菌属酸杆菌属 摩根菌属摩根菌属 多源多源菌属菌属 4.三.微生物特性n1.G-杆菌，多数有鞭毛、菌毛n2.发酵葡萄糖，兼性厌氧n3.氧化酶阴性4.4.还原硝酸原硝酸盐为亚硝酸硝酸盐5.5.触触酶（）（）6.6.营养条件不高，5.涂片：涂片：G-b氧化氧化酶试验非非发酵菌、弧菌酵菌、弧菌+肠杆菌科杆菌科细菌、不菌、不动、嗜麦芽菌、嗜麦芽菌双糖双糖试验FO不不动、嗜麦芽、嗜麦芽肠杆菌科杆菌科细菌菌苯丙，苯丙，葡葡盐,枸枸,硝硝,赖,鸟,氨氨对,山山,肌肌,侧,吲哚 硝酸硝酸盐还原原+嗜麦芽嗜麦芽不不动四、鉴定流程图6.种属鉴定科的特征科的特征硝酸硝酸盐还原原葡萄糖葡萄糖发酵酵氧化氧化酶 触触酶属属间鉴定特征定特征种种间鉴定特征定特征血清学分型血清学分型报告告细菌种名菌种名报告告细菌血清型菌血清型概概述述7.五、肠杆菌科的初步分群 n可用苯丙氨酸和葡萄糖酸盐试验将肠杆菌科分为四大组8.菌菌 属属 名名苯丙氨酸葡萄糖酸盐变形杆菌属+普鲁维登斯菌属 +摩根氏菌属+克雷伯菌属+肠杆菌属+沙雷菌属+哈夫尼亚菌+埃希菌属志贺菌属沙门菌属枸橼酸杆菌属爱德华菌属耶尔森菌属9.六.苯丙氨酸阳性组的各属鉴别n试验变形杆菌属普鲁维登菌属摩根氏菌属塔特姆属nH2S+-n枸橼酸盐+/-+-n靛基质+/-+-10.1.变形杆菌属内各种的鉴别试验普通变形杆菌奇异变形杆菌潘氏变形杆菌产粘液变形杆菌靛基质+-鸟基酸-+-木糖+-11.2.普鲁维登菌属各种的鉴别试 验产碱斯图雷极普鲁维登斯菌普鲁维登斯菌普鲁维登斯菌侧金盏花醇+-+甘露醇+-12.生化反生化反应雷氏雷氏斯氏斯氏产碱碱拉氏拉氏海氏海氏吲哚产生生+-肌醇肌醇 +-V海藻糖海藻糖-+-戊五醇戊五醇+-+-+13.3.摩根菌属种的鉴定试验 摩根摩根菌 摩根菌(生物1群)赖氨酸氨酸 -+动力力 +-14.+_+苯丙氨酸+H2S枸橼酸盐靛基质鸟氨酸靛基质侧金盏花醇甘露醇普通变形杆菌奇异变形杆菌潘氏变形杆菌产碱普鲁维登斯菌雷极普鲁维登斯菌斯图普鲁维登斯菌摩 根 菌塔特姆菌.苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图4-15.七.葡萄糖酸盐阳性组各属鉴别16.u原原克克雷雷伯伯菌菌属属（klebsiella）有有5个个种种，2个个亚种种肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌酸克雷伯菌解解鸟氨酸克雷伯菌氨酸克雷伯菌分分 类克克雷雷伯伯菌菌属属臭鼻臭鼻亚种种鼻硬鼻硬结亚种种17.培养特征培养特征 血血琼脂上菌落脂上菌落较大，呈大，呈黏液状，以接种黏液状，以接种环挑取挑取时易拉成易拉成丝在在肠道培养基上呈道培养基上呈发酵酵乳糖小菌落乳糖小菌落在液体培养基内生在液体培养基内生长混混浊、浓厚、可厚、可见菌膜，菌膜，管底有粘性沉淀物管底有粘性沉淀物 K.pneumoniae 菌落（血平板）菌落（血平板）克克雷雷伯伯菌菌属属18.1.克雷伯菌属各种的鉴别19.沙雷菌属沙雷菌属（普通（普通营养平板）养平板）20.2.沙雷菌属各种的鉴别21.分分类：现有有13个种个种2个生物型个生物型u原有原有7个种个种2个生物型个生物型产气气肠杆菌杆菌(E.aerogenes)阴沟阴沟肠杆菌杆菌(E.cloacae)杰高杰高维肠杆菌杆菌坂崎坂崎肠杆菌杆菌泰洛泰洛肠杆菌杆菌中中间肠杆菌杆菌聚聚团肠杆菌杆菌河生河生肠杆菌生物群杆菌生物群1河生河生肠杆菌生物群杆菌生物群2u后增加后增加7个菌个菌阿氏阿氏肠杆菌杆菌何氏何氏肠杆菌杆菌溶解溶解肠杆菌杆菌超超压肠杆菌杆菌克沃尼克沃尼肠杆菌杆菌考伯考伯肠杆菌杆菌帕瑞勒帕瑞勒肠杆菌杆菌 肠杆杆菌菌属属22.3.肠杆菌属各种的鉴别本菌属的本菌属的细菌生化反菌生化反应不典型，常用的商品化不典型，常用的商品化鉴定系定系统很很难达到达到90以上的以上的鉴定正确率定正确率23.4.哈夫尼亚菌属鉴定n葡萄糖酸盐枸橼酸盐棉子糖n+24.5.葡萄糖酸盐阳性菌属鉴别双岐索引图+-+葡萄糖酸盐+侧金盏花醇赖氨酸鸟氨酸赖氨酸鸟氨酸靛基质枸橼酸盐山梨醇丙二酸盐阴沟肠杆菌产酸克雷伯菌山梨醇肺炎克雷伯菌产气肠杆菌红色沙雷菌多源肠杆菌鼻硬结克雷伯菌臭鼻克雷伯菌哈夫尼亚菌山梨醇格高菲肠杆菌阿拉伯糖贩崎肠杆菌阴沟肠杆菌粘质沙雷菌液化沙雷菌25.八.苯丙氨酸葡萄糖酸盐阴性组的各属鉴别26.枸枸橼酸酸杆杆菌菌属属分分 类枸枸橼酸杆菌属（酸杆菌属（Citrobacter）包括）包括11个种个种弗弗劳地枸地枸橼酸杆菌酸杆菌(C.freundii)差异枸差异枸橼酸杆菌（酸杆菌（C.diversus）库斯枸斯枸橼酸杆菌酸杆菌无丙二酸无丙二酸盐枸枸橼酸杆菌酸杆菌(C.amalonaticus)（C.koseri）布拉吉枸布拉吉枸橼酸杆菌酸杆菌 （C.braakii）雷登枸雷登枸橼酸杆菌酸杆菌 （C.rodentium）塞拉克枸塞拉克枸橼酸杆菌酸杆菌 （C.sedlakii）魏克曼枸魏克曼枸橼酸杆菌酸杆菌 （C.werkmanii）扬哥枸哥枸橼酸杆菌酸杆菌 （C.youngae）吉吉乐枸枸橼酸杆菌酸杆菌 （C.gillenii）穆利枸穆利枸橼酸杆菌酸杆菌 （C.murliniae）法法玛丽枸枸橼酸杆菌酸杆菌 （C.farmeri）27.1.枸橼酸杆菌属各种的鉴别注意：很多注意：很多鉴定系定系统的数据的数据库中不包括枸中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分酸杆菌属新种名称和分类资料料28.2.爱德华菌属各种的鉴别29.3.埃希菌属种的鉴别30.致泻性致泻性E.coli分分为5类：肠毒素型大毒素型大肠埃希菌埃希菌(ETEC)肠致病性大致病性大肠埃希菌埃希菌(EPEC)肠侵侵袭型大型大肠埃希菌埃希菌(EIEC)肠出血型大出血型大肠埃希菌埃希菌(EHEC)肠凝聚型大凝聚型大肠埃希菌埃希菌(EAggEC)埃埃希希菌菌属属临床意床意义(Clinical Significance)E.coli以以肠道外感染多道外感染多见，主要有泌尿系，主要有泌尿系统感染感染 E.coli中的致病菌株能引起各种中的致病菌株能引起各种类型的腹泻，根据型的腹泻，根据其不同的血清型其不同的血清型别、毒力和、毒力和临床症状床症状31.鉴定要点定要点u不活不活跃大大肠埃希菌与志埃希菌与志贺菌易混淆，需相互菌易混淆，需相互鉴别 埃埃希希菌菌属属大大肠埃希菌埃希菌 在中国在中国兰平板上平板上为蓝色菌落色菌落大大肠埃希菌埃希菌 在伊在伊红美美蓝平板上平板上为紫黑色菌落紫黑色菌落大大肠埃希菌埃希菌 在麦康在麦康凯和和SS平板上平板上为红色菌落色菌落32.培养特征培养特征 u兼性兼性厌氧菌氧菌u营养要求不高养要求不高u菌落呈中等大小、无菌落呈中等大小、无色、半透明、光滑色、半透明、光滑u在在SS平板上，因平板上，因产生生H2S可形成黑色中心可形成黑色中心的菌落的菌落伤寒沙寒沙门菌菌落形菌菌落形态（SS平板）平板）四四沙沙门菌菌属属33.u常用血清：常用血清：O多价血清（含多价血清（含AF群）群）O、H、Vi抗原因子血清抗原因子血清 方方法法：从从临床床标本本中中分分离离到到菌菌株株经纯培培养养后后，符符合沙合沙门 菌属生物学特性，菌属生物学特性，则 采用采用A-F多价血清初步确定是否多价血清初步确定是否为Salmonella 1.如如阳阳性性，即即用用O因因子子血血清清分分群群；再再用用第第一一相相H因子血清定型，也可用第二相因子血清定型，也可用第二相辅助定型助定型 2.如阴性：如阴性：应考考虑是否有是否有Vi抗原抗原?血清学分型血清学分型加加热或或传代代去除去除Vi抗原抗原凝集：做凝集：做O多价和多价和单价凝集价凝集不凝集：可能不凝集：可能为AF以外以外沙沙门菌菌属属34.35.如是双相菌，进一步用复合血清1、2、5检查第2相抗原。36.u兼性兼性厌氧菌氧菌u营养要求不高养要求不高u普通平板：中等大小、普通平板：中等大小、半透明、光滑半透明、光滑u鉴别培养基：乳糖不培养基：乳糖不发酵的菌落酵的菌落培养特性培养特性菌落形菌落形态（麦康（麦康凯平板）平板）志志贺菌菌属属37.种属种属鉴定定u菌属特征菌属特征 u发酵葡萄糖酵葡萄糖产酸不酸不产气气u赖氨酸（）氨酸（）uH2S（）（）u尿素（尿素（）u动力（力（）志志贺菌菌属属38.5.志贺菌属的鉴定n先用志贺多价血清与菌种凝集，如多价血清凝集为志贺菌，多价里不包含鲍氏C16-20再进一步用因子血清凝集而定群。39.6、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性组菌属鉴别双歧索引图+苯 丙 氨 酸、葡 萄 糖 酸 盐 -甘露醇ONPG枸橼酸盐动 力H2S侧金盏花醇赖氨酸沙门菌属志贺菌属迟缓爱德华菌甲基红异型枸橼酸杆菌鸟氨酸葡萄糖产气耶尔森菌属丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌费劳地枸橼酸杆菌大肠埃希菌大肠埃希菌（不活泼株）保科爱德华菌鲶鱼爱德华菌40.肠杆菌杆菌鉴定定选用多少生化反用多少生化反应管管为好好苯丙氨酸、葡萄糖酸苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、氨酸、鸟氨酸、氨基酸氨酸、氨基酸对照、枸照、枸橼酸酸盐、硝酸、硝酸盐、侧金金盏花醇、山梨醇、甘露醇、花醇、山梨醇、甘露醇、ONPGONPG、靛基、靛基质、双糖（、双糖（H H2 2S S）41.九.API鉴定系统(20E)n菌液制成0.5麦氏浊度,加入20E板条,421.变形杆菌菌落呈迁延性生长十、肠杆菌科某些菌株的特殊性质43.2.克雷伯菌自身菌落可拉出丝来44.3.多源聚团菌在M-H平板上产生黄色45.4.沙雷菌M-H平板上产生铁锈红色46.47.6.能产生H2S的菌株变形杆菌爱德华菌伤寒沙门菌费劳地枸橼酸杆菌大肠杆菌48.大肠杆菌的特点对多种糖多种糖产酸酸产气气,吲哚、甲基甲基红、VP VP、枸、枸橼酸酸盐(IMVC)+-(IMVC)+-五种致病性大五种致病性大肠杆菌要用特异性血杆菌要用特异性血清凝集加以清凝集加以鉴别49.十一.沙门菌属的特点所有动物可分离到沙门菌,有2000多血清可引起人类胃肠炎、败血症、伤寒50.沙门菌属的特点肥达反应51.十二.志贺菌属的特点急性菌痢-发烧,腹痛,脓血便,痢疾志贺菌引起的菌痢死亡率高达20%慢性菌痢-反复发作二个月52.志贺菌属与大肠埃希菌区别:动力阴性,赖氨酸阴性,分解葡萄糖不分解乳糖志贺菌属与伤寒沙门菌区别:动力阴性H2S阴性,能于志贺菌因子血清凝集志贺菌属的特点53.u常用血清：常用血清：O多价血清（含多价血清（含AF群）群）O、H、Vi抗原因子血清抗原因子血清 方方法法：从从临床床标本本中中分分离离到到菌菌株株经纯培培养养后后，符符合沙合沙门 菌属生物学特性，菌属生物学特性，则 采用采用A-F多价血清初步确定是否多价血清初步确定是否为Salmonella 1.如如阳阳性性，即即用用O因因子子血血清清分分群群；再再用用第第一一相相H因子血清定型，也可用第二相因子血清定型，也可用第二相辅助定型助定型 2.如阴性：如阴性：应考考虑是否有是否有Vi抗原抗原?血清学分型血清学分型加加热或或传代代去除去除Vi抗原抗原凝集：做凝集：做O多价和多价和单价凝集价凝集不凝集：可能不凝集：可能为AF以外以外沙沙门菌菌属属54.55.