不同的因素对家兔血液凝固的影响.doc

血液凝固和影响血液凝固的因素
何贤松，浙江中医药大学2010级中医学七年制（1）班，20101150101
摘要：目的：观察血液中化学因素（PCO2、PO2和[H+]）改变对家兔呼吸运动（呼吸频率、节律、幅度）的影响，初步探讨其作用部位，并分析机制。观察迷走神经在家兔呼吸运动调节中的作用，初步探讨其机理。方法：采用颈动脉放血取血，用不同因素处理各试管血液，记录凝血时间。结果：草酸钾、肝素、低温处理的血液暂时还未凝固，生理盐水、涂石蜡油于管壁处理的血液凝固时间较室温长，放少许棉花、肺组织浸液处理后的血液凝固时间较室温短，用竹签搅动过的血液不再凝固。结论：草酸钾、生理盐水、肝素、低温可抑制血液凝固；增加粗糙面、组织因子可促进血液凝固；纤维蛋白是血液凝固过程中所产生的不可少的物质。
关键词：血液凝固；纤维蛋白；肝素
Abstract：To explore different factors on blood coagulation by means of determining blood coagulation time on certain conditions. Methods: Adopt the carotid artery bloodletting and blood taking, use different factors to handle all the tube blood, record clotting time. Results: The potassium oxalate, heparin, low temperature processing of blood are not yet set, the Physiological saline, coated paraffin oil in the wall processing of blood clotting time longer than the room temperature, put a little cotton, the lung tissue after infusion of blood clotting time shorter than room temperature, stirred with a bamboo stick through the blood does not and then solidified. Conclusions: potassium oxalate, Physiological saline, heparin, low temperature can inhibit blood coagulation; increase the rough surface, tissue factor can promote blood coagulation; fiber protein is produced by the process of blood coagulation in the essential material.
Key words: blood coagulation；fibrin；heparin
血液凝固过程是有许多凝血因子参加的酶促反应。根据血液凝固过程中凝血酶原激活途径不同，可将血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。内源性凝血是指参与血液凝固的凝血因子全部存在于血浆中；外源性凝血因子是指在组织因子参与下的血凝过程。本实验采用动物颈动脉放血取血，血液几乎未与组织因子接触。因此，凝血过程主要是内源性凝血系统的作用。肺组织浸液中含丰富的组织因子，加入试管观察外源性凝血系统的作用。
1. 材料和方法
1.1. 材料
1.1.1. 实验动物 家兔，浙江中医药大学动物实验中心提供。
1.1.2. 实验仪器 秒表，试管，试管架，家兔固定架，注射器，手术器材。
1.1.3. 实验药品和试剂 生理盐水（NS），肝素（8U），草酸钾，石蜡油，肺组织浸液，少量棉花，冰水。
1.2. 方法
1.2.1. 麻醉固定 用200g/L的氨基甲酸乙酯按5ml/kg体重剂量给家兔耳缘。
1.2.2. 手术操作 切开颈部皮肤，分离出颈外动脉，结扎颈外动脉远心段，用止血夹家族颈外动脉近心段，插管。
1.2.3. 静脉注射麻醉，将家兔仰卧位固定于固定架上。
1.2.4. 试管处理 取8支试管，编号，1号试管作为正常对照组不做任何处理，将2号试管至于冰块中，3号试管试管内表面涂石蜡油，4号试管试管底置少许棉花，5号试管滴加生理盐水0.1ml，5号试管滴加肺组织浸液（含组织因子）0.1ml，7号试管滴加8单位/ml的肝素0.1ml,8号试管滴加2%的草酸钾0.1ml。
1.2.5. 取血和实验观察 1～8试管每管加入血液2ml，立即用秒表计时，每隔15s将试管倾斜一次，观察血液是否凝固，至血液成为凝胶状，记下所经历时间。
1.2.6. 准备10ml的烧杯2个,编号。分别放血5ml左右,同时计时, 1号烧杯作为对照不做任何处理。2号烧杯用竹签朝一方向搅动血液, 待竹签上出现凝血块时, 停止计时, 记录凝血时间, 并观察去纤维蛋白的血液是否凝固。
2. 结果
草酸钾、肝素、低温处理的血液暂时还未凝固，生理盐水、涂石蜡油于管壁处理的血液凝固时间较室温长，放少许棉花、肺组织浸液处理后的血液凝固时间较室温短，用竹签搅动过的血液不再凝固,详见表1。

烧杯1中血液不加任何处理，静止凝血。烧杯2中不断用竹签朝一个方向搅动血液，1h后竹签上缠绕有白色丝状的纤维蛋白，血液不再凝固，详见表2。

3. 讨论
3.1. 血液的凝固过程
血液的凝固是一系列复杂的化学连锁反应的结果，最后阶段是由原来溶解于血浆中的纤维蛋白质转变成为不溶解的纤维蛋白，纤维蛋白像细丝一样，在形成过程中相互交错重叠，并把血细胞网罗在在内，使原来呈溶胶状态的血液逐渐变成凝胶状态的血凝块，血凝形成以后，由于血小板收溶蛋白的收缩作用，使血凝块回缩变硬，同时析出淡黄色透明的液体——血清。凝血过程基本上是一系列蛋白质有限水解的过程，凝血过程一旦开始，各个凝血因子便一个激活另一个，形成一个“瀑布”样的反应链直至血液凝固。
3.2. 血液的凝固机理
血液凝固的化学本质是溶胶状态的纤维蛋白原转变成凝胶状态的纤维蛋白，催化此反应的主要是凝血酶。而正常血液中以无活性的凝血酶原形式存在，在一定条件下被激活而成为凝血酶。凝血酶原激活物是由活化的凝血因子和磷脂胶粒和钙的形式复合物，因此凝血因子的活化是导致血液凝固的触发机制，据触发凝血过程的形式不同，又有内源性和外源性凝血之分。内源性凝血是指因心血管内膜受损或血液抽出机体外接触异物表面而触发的，仅有血管内凝血因子参与的凝血过程；外源性凝血则指有损组织释放的组织凝血活素所参与的凝血过程[1]。
3.2.1. 内源途径
内源途径涉及多种凝血因子活化，可分为二步：1）接触活化 是因子XII的激活作用。此蛋白质在接触到负电荷的表面，如玻璃或在体内接触到胶原蛋白时，发生构象改变，激活的因子XIIa 为一蛋白酶，能将激肽释放酶原转变为激肽释放酶，又可活化因子XII，形成一个正反馈。同时因子XIIa还可激活下一个因子XI，将它转变成XIa。此外，在因子XII活化中还有高分子量激肽原的参与。2）磷脂胶粒反应阶段 活化因子XII即XIIa作用与因子XI，在Ca2+的存在下水解因子XI产生XIa，因子XIa无酶活性，但可使因子X的活化反应速度提高100倍，活化的因子X（即Xa）及凝血酶都有激活因子XIII和V的作用。活化的因子XIIIa、Va和Ca2+结合在磷脂胶粒上形成凝血酶原激活物。磷脂胶粒是由血小板提供的富含丝氨酸磷脂的脂蛋白，对凝血因子和Ca2+有较强的亲和力,从因子XI的活化到凝血酶原激活物的生成一系列反应均在磷脂胶粒上进行,故称为磷脂胶粒反应阶段。
3.2.2. 外源途径
外源途径由因子VII与因子II组成复合物，在有Ca2+存在的情况下激活因子X 生成Xa。因子III为磷脂蛋白质。Ca2+的作用就是将因子VII与因子X都结合于因子III所提供的磷脂上，以便因子VII催化因子X的有限水解形成Xa。一般来说，通过外源性途径凝血较快，内源性途径较慢，但在实际情况中，单纯由一种途径引起凝血的情况不多。
3.3. 低温对凝血的影响
血液凝固时间2号试管>1号试管，酶的活性随着温度的不同而不同，冰水降低了血液中凝血酶的活性，使凝血过程减慢。
3.4. 涂石蜡油于管壁对血液凝固的影响
血液凝固时间3号试管>1号试管，由于石蜡油表面光滑，不易引起血小板黏着，即不易使血小板发挥促进凝血的作用。另外石蜡油为绝缘体，其把试管表面所带的负电荷覆盖，不利于凝血因子XⅡ的激活，因此血液凝固比放有棉花的试管慢，也比正常对照组慢。
3.5. 棉花对血液凝固的影响
血液凝固时间4号试管<1号试管，棉花给血液凝固提供了一个粗糙的表面，容易使血小板发生黏着、聚集，然后发生解体，释放许多凝血因子和血小板因子；另外棉花含许多带负电荷的植物纤维，也能激活凝血因子XⅡ，启动内源性凝血途径。因此放有棉花的试管血液凝固加快。
3.6. 生理盐水对血液凝固的影响
血液凝固时间5号管>1号试管加入生理盐水稀释了血液，使凝血酶的浓度降低，延长了血液凝固的时间。
3.7. 肺组织浸液对凝血的影响
血液凝固时间6号试管<1号试管，且最快。TF与Ⅶ因子（FⅦ）结合成复合物，并促使无活性的FⅦ变成有性的FⅦa，除此之外，TF还可增加FⅦa和TF/FⅦa的蛋白水解酶和淀粉酶活性，使X因子FX转变为FXa ，进而使纤维蛋白原变为纤维蛋白，完成外源性途径的凝血程.TF/FⅦ复合物还可以使Ⅸ因子Ⅸ变成FⅨa，并进而作为Ⅷa因子(FⅧa)的辅助因子激活FX，从而参与内源性凝血途径.所以本次实验中加入肺组织浸液0.1ml后血液凝固时间明显缩短[2]。
3.8. 肝素对血液凝固的影响
血液凝固时间7号试管>1号试管，且实验结束时，尚未凝固。肝素能与血中抗凝血酶Ⅲ( AT-Ⅲ) 结合,形成肝素AT-Ⅲ复合物, 作用于凝血活酶,并阻止因子Ⅷ、Ⅺ、Ⅸ、Ⅻ的活化,阻止血小板释放ADP、PE-3而影响血小板聚集, 从而产生强大的抗凝血作用[3]。
3.9. 草酸钾对凝血的影响
血液凝固时间8号试管>1号试管，且实验结束时，尚未凝固。在试管中加入草酸钾，它可与[Ca2﹢]发生反应生成草酸钙沉淀而使血液中无[Ca2﹢]。由于凝血过程中[Ca2﹢]是重要的凝血因子，其参与了血液凝固的许多环节，当血液中没有[Ca2﹢]时血液就不会发生凝固。因此血液未发生凝固。
3.10. 竹签搅动对血液凝固的影响
实验中用竹签不断搅拌血液1 h后，即使停止搅拌，血液也不再凝固。而在竹签上可见白色丝状物，该物质即为不溶性的纤维蛋白。血液凝固的实质就是血浆中的可溶性纤维蛋白原转变成不溶性的纤维蛋白的过程[4]。纤维蛋白交织成网，把血细胞和血液的其他成分网罗在内，从而形成血凝块。用竹签搅动后不容性的纤维蛋白被粘附在竹签上，血液中可溶性纤维蛋白原被完全消耗后，不再产生不溶性的纤维蛋白，血液自然无法凝固。
4. 结论
草酸钾、生理盐水、肝素、低温可抑制血液凝固；增加粗糙面、组织因子可促进血液凝固；纤维蛋白是血液凝固过程中所产生的不可少的物质。
5. 参考文献
[1] 汪学荣，周成兰．血液凝固机理的研究［J］．肉类研究，2005（11）：45-47．
[2] 刘育成.组织因子及其在凝血、非凝血功能中的研究进展[J].医学信息（上旬刊）,2011,24(4)
[3] 吴家明. 不同抗凝剂对凝血检查的影响[J]. 淮海医药,2005,(2).
[4] 张志雄．生理学[M]．第2版．上海：上海科学技术出版社，2011