常用染液的配制.doc

附录I 染色液的配制
　　一、吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液 (实验6，53)
　　A液：美蓝(methylene blue) 0．6g
　　95%酒精 30ml
　　B液：KOH 0．01g
　　蒸馏水 100ml
　　分别配制A液和B液，配好后混合即可。
　　二、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液 (实验6)
　　A液：碱性复红(basic fuchsin) 0．3g
　　95%酒精 10ml
　　B液：石炭酸 5．0g
　　蒸馏水 95ml
　　将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解，配成A液。
　　将石炭酸溶解于水中，配成B液。

　　混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释5—10倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配。
　　三、革兰氏(Gram)染色液 (实验7)
　　1．草酸铵结晶紫染液
　　A液：结晶紫(crystal violet) 2g
　　95%酒精 20ml
　　B液：草酸铵(ammonium oxalate) 0．8g
　　蒸馏水 80ml
　　混合A、B二液，静置48小时后使用。
　　2．卢戈氏(Lugol)碘液
　　碘片 1．0g
　　碘化钾 2．0g
　　蒸馏水 300ml
　　先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。
　　3．95%的酒精溶液。
　　4．番红复染液
　　番红(safranine O) 2．5g
　　95%酒精 100ml
　　取上述配好的番红酒精溶液10ml与80ml蒸馏水混匀即成。
　　四、芽孢染色液 (实验8)
　　1．孔雀绿染液
　　孔雀绿(malachite green) 5g
　　蒸馏水 100ml
　　2．番红水溶液
　　番红 0．5g
　　蒸馏水 100ml
　　3．苯酚品红溶液
　　碱性品红 11g
　　无水酒精 100ml
　　制法取上述溶液10ml与100ml5%的苯酚溶液混合，过滤备用。
　　4．黑色素(nigrosin)溶液
　　水溶性黑色素 10g
　　蒸馏水 100ml
　　称取10g黑色素溶于100ml蒸馏水中，置沸水浴中30分钟后，滤纸过滤
　　二次，补加水到100ml，加0．5ml甲醛，备用。
　　五、荚膜染色液 (实验9)
　　1．黑色素水溶液
　　黑色素 5g
　　蒸馏水 100ml
　　福尔马林(40%甲醛) 0．5ml
　　将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟，然后加入福尔马林作防腐剂。
　　2．番红染液
　　与革兰氏染液中番红复染液相同。
　　六、鞭毛染色液 (实验10)
　　A液：单宁酸 5g
　　FeCl3 1．5g
　　蒸馏水 100ml
　　福尔马林(15%) 2．0ml
　　NaOH(1%) 1．0ml
　　配好后，当日使用，次日效果差，第三日则不宜使用。
　　B液：AgNO3 2g
　　蒸馏水 100ml
　　待AgNO3溶解后，取出10ml备用，向其余的90mlAgNO3中滴入浓NH4ON，使之成为很浓厚的悬浮液，再继续滴加NH4OH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。再将备用的10mlAgNO3慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失，再滴入AgNO3，直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。如所呈雾不重，此染剂可使用一周，如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。
　　七、富尔根氏核染色液 (实验11)
　　1．席夫氏(Schiff)试剂
　　将1g碱性复红加入200ml煮沸的蒸馏水中，振荡5分钟，冷至50℃左右过滤，再加入1mol/LHC120ml，摇匀。待冷至25℃时，加Na2S2O5(偏重亚硫酸钠)3g，摇匀后装在棕色瓶中，用黑纸包好，放置暗处过夜，此时试剂应为淡黄色(如为粉红色则不能用)，再加中性活性炭过滤，滤液振荡1分钟后，再过滤，将此滤液置冷暗处备用(注意：过滤需在避光条件下进行)。
　　在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥，以消除还原性物质。
　　2．Schandium固定液
　　A液：饱和升汞水溶液
　　50ml升汞水溶液加95%酒精25ml混合即得。
　　B液：冰醋酸
　　取A液9毫升+B液1毫升，混匀后加热至60℃。
　　3．亚硫酸水溶液
　　10%偏重亚硫酸钠水溶液5ml，1mol/LHCl5ml，加蒸馏水100ml混合即得。
　　八、Bouin氏固定液 (实验12)
　　苦味酸饱和水溶液 75ml
　　福尔马林(40%甲醛) 25ml
　　冰醋酸 5ml
　　1g苦味酸可制成75ml饱和水溶液。
　　先将苦味酸溶解成水溶液，然后再加入福尔马林和冰醋酸摇匀即成。
　　九、乳酸石炭酸棉蓝染色液 (实验16)
　　石炭酸 10g
　　乳酸(比重1．21) 10ml
　　甘油 20ml
　　蒸馏水 10ml
　　棉蓝(cottonblue) 0．02g
　　将石炭酸加在蒸馏水中加热溶解，然后加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，使其溶解即成。
　　十、瑞氏(Wright)染色液 (实验53)
　　瑞氏染料粉末 0．3g
　　甘油 3ml
　　甲醇 97ml
　　将染料粉末置于干燥的乳缽内研磨，先加甘油，后加甲醇，放玻璃瓶中过夜，过滤即可。
　　十一、美蓝(Levowitz-Weber)染液 (实验62)
　　在52ml95%酒精和44ml四氯乙烷的三角烧瓶中，慢慢加入0．6g氯化美蓝(met hylene blue chloride)，旋摇三角烧瓶，使其溶解。放5—10℃下，12—24小时，然后加入4ml冰醋酸。用质量好的滤纸如WhatmanNo．42或与之同质量的滤纸过滤。贮存于清洁的密闭容器内。