常用生化试剂作用.doc

常用生化试剂作用：  
1、 蛋白酶K：能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，在尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50—100μg/ml，推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。
2、SDS：十二烷基硫酸钠，溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀。
3、IPTG：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷， 常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等。IPTG和乳糖的结构相似，所以它和乳糖一样，可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白的空间构像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性结合的能力，从而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。与乳糖不同的是，IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定。
4、X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的显色试剂，在IPTG的催化下显蓝色。常跟IPTG一起用与蓝白斑筛选。
5、G418：一种抗生素，对几乎所有的细胞都有毒性，是稳定转染最常用的选择试剂。当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后，则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA，从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。Ｇ418的这一选择特性 ，已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
6、DMSO：二甲基亚砜。实验室常用于作液体层析溶剂，同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物。能溶于所有烷烃和烯烃。
7、曲拉通X-100：TritonX-100，用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用， 能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40。
8、NP-40：很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
9、BSA：牛血清白蛋白， 主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。常用于蛋白定量中的内参和抗体稀释液。
10、甲酰胺： 甲酰胺被用作凝胶电泳中RNA的稳定剂，也用于稳定毛细管电泳中的变性单股DNA。 
11、TEMED：四甲基乙二胺。促凝剂。在中性及碱性pH条件下，加入TEMED可加速凝胶聚合。
12、巯基乙醇：一种强还原剂。可还原蛋白二硫键，从而使蛋白保持溶解状态，有利于与SDS的结合。使蛋白解离成单个亚基。
13、甲叉双丙烯酰胺：N，N'-甲叉双丙烯酰胺，别名MBA，又叫亚甲基双丙烯酰胺，次甲基双丙烯酰胺，N，N'-甲撑双丙烯酰胺。作交联剂与丙烯酰胺聚合而制备聚丙烯酰胺凝胶。
14、过硫酸铵：过硫酸铵（APS）的作用主要是提供自由基，然后在促凝剂TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。
15、B27：一种添加剂，用于神经肝细胞培养，被认为具有抑制胶质细胞生长的作用。
16、DTT：二硫苏糖醇，常用还原剂，既有抗氧化作用。它能保护酶分子上的还原性基团，维持还原性环境，稳定酶的活性。又是一种蛋白质变性剂，破坏二硫键，浓度不同，起到的作用也不同。
17、弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，含结核分枝杆菌的细胞壁成分。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。
18、吐温 20：Tween-20 ，常用的非离子去垢剂。
19、吐温 80：weenum 80 ，除作乳化剂外，也用作某些水中难溶药物的增溶剂。
20.、十二烷基肌氨酸钠 ：脱细胞试剂，制备脱细胞组织工程支架材料。
21. PVPP：PVPP对片剂具有崩解作用，能和各种不溶于水的药物共容，能稳定化各种悬浮剂，又具有形成络合物的能力以及吸附作用等，因而可用作医药助剂。也用于除去啤酒中的多酚。
22、 PIPES：哌嗪-N，N'-二（2-乙磺酸）,实验室做缓冲剂用。全名是哌嗪-N,N-二（2-乙磺酸），pKa是6.80。不参与也不干扰生物化学反应，价格比较贵。常用在免疫和细胞类的实验中，PIPES有时还被用来制备大肠杆菌感受态。
23、 CTAB：十六烷基三乙基溴化铵，一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。CTAB法是现在实验室最常用的一种提取核酸的手段。
24、 HEPES：羟乙基哌秦乙硫磺酸，一种弱酸缓冲剂，主要作用是防止培养基pH迅速变化。在开放式培养条件下，培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。
25、MOPS：一种缓冲液，有抑制RNA酶的作用，一般和甲醛（用于变形RNA）用于RNA变性电泳。
26、 盐酸胍：盐酸胍等可使蛋白质结构中的氢键发生断裂，这增加了非极性分子包括氨基酸侧链的溶解度，减少了疏水相互作用。
27、 PMSF：Phenylmethanesulfonyl fluoride，中文名为苯甲基磺酰氟。用于抑制蛋白酶. PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 
28溴酚蓝：pH指示剂，pH=3.0时呈黄色，pH=4.6时呈蓝紫色。酸碱指示剂；非水滴定用指示剂，蛋白电泳染色；病毒化验等。
29、 台盼兰：台盼蓝（Trypan Blue）或称台盼兰，是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。
30、 二甲苯青FF：用于琼脂糖聚丙烯酰胺凝胶电泳的示踪染料， 易溶于水和醇，可与溴芬蓝按照一定比例配置loading buffer。
31、 吖啶橙：是一种荧光色素，与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂，能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。
32、 EDTA和EGTA：EDTA--乙二胺四乙酸EDTA是螯合剂的代表性物质。能和碱金属、稀土元素和过渡金属等形成稳定的水溶性络合物。此外EDTA也可用来使有害放射性金属从人体中迅速排泄起到解毒作用。也是水的处理剂。EGTA--乙二醇双（2-氨基乙基）四乙酸在Mg2+存在下测定Ca2+时，可用EGTA直接滴定,滴定误差小于0.3% ，比用EDTA滴定提高了选择性。此外它与金属离子形成的配合物的稳定性普遍比相应的EDTA配合物差。
33、 TRICINE：N-[三（羟甲基）甲基]甘氨酸， 常见的电泳系统是Tris－甘氨酸系统；Tris－Tricine电泳则用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的电泳，能够获得较好的分离效果。可以用前者代替。
34、 PVP40：PVP40 中的CO - N = 有很强的结合酚类化合物的能力，与其形成稳定的复合物，常用于提取RNA时除去酚类。
35、 脱氧胆酸钠：离子型去垢剂，作用有：1、裂解细胞；2、溶解蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；3、很适合做WB，但在Co-IP中使用，需要谨慎。
36、6-BA：细胞培养中用到，细胞分裂素。
37、 碘代乙酰胺：也叫作碘乙酰胺，2-碘乙酰胺。用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。
38、 萘乙酸：NAA，为广谱性植物生长调节剂。可促进细胞分裂，诱导形成不定根，改变雌雄花比例，增加坐果率等
39。番红O与藏红T：氧化还原指示剂、生物染色、酸碱指示剂，滴定分析亚硝酸盐。
40。TTC：2，3，5-三苯基氯化四氮唑（红四氮唑），多用于药物分析和琼脂糖添加剂，在计数琼脂中加入适量的TTC（0.5% TTC 1ML加到100ML琼脂中），细菌菌落长成红颜色，对去除食品本底颗粒物干扰非常有意义。