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1、如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料 流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？ 首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。 发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm； 氦氖离子气体激光管发射光波长633nm； 488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）； PE（藻红蛋白） PI（碘
2、化丙啶） CY5（化青素） preCP(叶绿素蛋白) ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。 激发光和发射光波长，如下： 激发光波长（nm） 发射光峰值（nm） FITC 488 525（绿） PE 488 575（橙红） PI 488 630（橙红） ECD 488 610（红） CY5 488 675（深红） PreCP 488 675（深红） 流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
3、 名 称 Ex波长(nm) Em波长(nm) 备 注 激光器 Hoechst 33342 355 465 DNA染色 核酸标记 351nm 紫外激光器 Hoechst 33258 365 465 DAPI 372 456 Indo-1 350 405 细胞内钙离子标记 FITC 490 520 标记抗体 488nm 氩 离 子 激 光 器 R_PE 480 578 PE_CY5 480 670 PE_
4、CY5.5 480 695 PerCP 490 675 Alexa Fluor 488 494 517 PE_Texas Red 480 613 Rhodamine 123 500 540 线粒体标记 Fluo-3 506 526 细胞内钙离子标记 DiOC6(3) 480 501 内质网标记 YOYO-1 490 510 DNA染色 核酸标记 Propidium Iodide 530 615 Acridine Ora
5、nge 490 640 APC 650 660 标记抗体 633nm 氦氖激光器 Alexa Fluor 647 650 668 CY5 650 667 流式•细胞仪交流论坛： 荧光染料谱 染料名称 Excitation(nm) Emission(nm) 分子量 备注信息 Reactive and conjugated probes Hydroxycoumarin 325 386 331 Succ
6、inimidyl ester Aminocoumarin 350 445 330 Succinimidyl ester Methoxycoumarin 360 410 317 Succinimidyl ester Cascade Blue (375);401 423 596 Hydrazide Pacific Blue 403 455 406 Maleimide Pacific Orange 403 551 Lucifer yellow 425 528 NBD 466 539 294 NBD-X R-Phy
7、coerythrin (PE) 480;565 578 240 k PE-Cy5 conjugates 480;565;650 670 aka Cychrome, R670, Tri-Color, Quantum Red PE-Cy7 conjugates 480;565;743 767 Red 613 480;565 613 PE-Texas Red PerCP 490 675 Peridinin chlorphyll protein TruRed 490,675 695 PerCP-Cy5.5 conju
8、gate FluorX 494 520 587 GE Healthcare Fluorescein 495 519 389 FITC; pH sensitive BODIPY-FL 503 512 TRITC 547 572 444 TRITC X-Rhodamine 570 576 548 XRITC Lissamine Rhodamine B 570 590 Texas Red 589 615 625 Sulfonyl chloride Allophycocyanin (APC) 650 660
9、104 k APC-Cy7 conjugates 650;755 767 PharRed Alexa Fluor系列荧光染料 Alexa Fluor 350 343 442 410 Alexa Fluor 405 401 421 1028 Alexa Fluor 430 434 540 702 Alexa Fluor 488 499 519 643 QY 0.92 Alexa Fluor 500 503 525 700 Alexa Fluor 514 517 542 714 Alexa Fl
10、uor 532 530 555 724 QY 0.61 Alexa Fluor 546 561 572 1079 QY 0.79 Alexa Fluor 555 553 568 1250 QY 0.1 Alexa Fluor 568 579 603 792 QY 0.69 Alexa Fluor 594 591 618 820 QY 0.66 Alexa Fluor 610 610 629 1285 Alexa Fluor 633 632 648 1200 Alexa Fluor 647 652 668 130
11、0 QY 0.33 Alexa Fluor 660 663 691 1100 Alexa Fluor 680 680 702 1150 Alexa Fluor 700 696 719 1400 Alexa Fluor 750 752 776 1300 Alexa Fluor 790 782 804 1750 Cy系列荧光染料 Cy2 489 506 714 QY 0.12 Cy3 (512);550 570;(615) 767 QY 0.15 Cy3B 558 572;(620) 658 Q
12、Y 0.67 Cy3.5 581 594;(640) 1102 QY 0.15 Cy5 (625);650 670 792 QY 0.28 Cy5.5 675 694 1128 QY 0.23 Cy7 743 767 818 QY 0.28 核酸相关探针染料 Hoechst 33342 343 483 616 AT-selective DAPI 345 455 AT-selective Hoechst 33258 345 478 624 AT-selective SYTOX Blue 431 480 ~
13、400 DNA Chromomycin A3 445 575 CG-selective Mithramycin 445 575 YOYO-1 491 509 1271 Ethidium Bromide 493 620 394 Acridine Orange 503 530/640 DNA/RNA SYTOX Green 504 523 ~600 DNA TOTO-1, TO-PRO-1 509 533 Vital stain, TOTO: Cyanine Dimer TO-PRO:
14、 Cyanine Monomer Thiazole Orange 510 530 Propidium Iodide (PI) 536 617 668.4 LDS 751 543;590 712;607 472 DNA (543ex/712em), RNA (590ex/607em) 7-AAD 546 647 7-aminoactinomycin D, CG-selective SYTOX Orange 547 570 ~500 DNA TOTO-3, TO-PRO-3 642 661 DRAQ5
15、647 681,697 413 usable excitation down to 488 细胞功能探针 Indo-1 361/330 490/405 1010 AM ester. Low/High Ca++, Fluo-3 506 526 855 AM ester. pH > 6 DCFH 505 535 529 2'7'Dichorodihydrofluorescein, oxidized form DHR 505 534 346 Dihydrorhodamine 123, oxidized form, light catalyzes o
16、xidation SNARF 548/579 587/635 pH 6/9 荧光蛋白 QY BR PS Y66H 360 442 Y66F 360 508 EBFP 380 440 0.18 0.27 monomer EBFP2 383 448 20 monomer Azurite 383 447 15 monomer GFPuv 385 508 T-Sa
17、pphire 399 511 0.60 26 25 weak dimer Cerulean 433 475 0.62 27 36 weak dimer mCFP 433 475 0.40 13 64 monomer ECFP 434 477 0.15 3 CyPet 435 477 0.51 18 59 weak dimer Y66W 436 485 mKeima-Red 440 620 0.24 3 monomer TagCF
18、P 458 480 29 dimer AmCyan1 458 489 0.75 29 tetramer mTFP1 462 492 54 dimer S65A 471 504 Midoriishi Cyan 472 495 0.9 25 dimer Wild Type GFP 396,475 508 26k 0.77 S65C 479 507 TurboGFP 482 502 26 k
19、 0.53 37 dimer TagGFP 482 505 34 monomer S65L 484 510 Emerald 487 509 0.68 39 0.69 weak dimer; (Invitrogen) S65T 488 511 EGFP 488 507 26k 0.60 34 174 weak dimer Azami Green 492 505 0.74 41 monomer ZsGreen1 493 5
20、05 105k 0.91 40 tetramer TagYFP 508 524 47 monomer EYFP 514 527 26k 0.61 51 60 weak dimer Topaz 514 527 57 monomer Venus 515 528 0.57 53 15 weak dimer mCitrine 516 529 0.76 59 49 monomer YPet 517 530 0.77 80 49 weak dimer Turb
21、oYFP 525 538 26 k 0.53 1.65 dimer ZsYellow1 529 539 0.65 13 tetramer Kusabira Orange 548 559 0.60 31 monomer mOrange 548 562 0.69 49 9 monomer mKO 548 559 0.60 31 122 monomer TurboRFP 553 574 26 k 0.67 62 dimer tdTomato 554 581 0.
22、69 95 98 tandem dimer TagRFP 555 584 50 monomer DsRed monomer 556 586 ~28k 0.1 3.5 16 monomer DsRed2 ("RFP") 563 582 ~110k 0.55 24 mStrawberry 574 596 0.29 26 15 monomer TurboFP602 574 602 26 k 0.35 26 dimer AsRed2 576 592 ~110k 0.21 13
23、 tetramer mRFP1 584 607 ~30k 0.25 monomer J-Red 584 610 0.20 8.8 13 dimer mCherry 587 610 0.22 16 96 monomer HcRed1 588 618 ~52k 0.03 0.6 dimer Katusha 588 635 23 dimer mKate (TagFP635) 588 635 15 monomer TurboFP635 588 635 26 k 0.34 22 dimer mPlum 590 649 0.10 4.1 53 mRaspberry 598 625 0.15 13 monomer; faster photobleach than mPlum 其他探针 Monochlorobimane 380 461 226 Glutathione probe Calcein 496 517 623 pH > 5
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