SOP操作程序-GGT.doc

完整版)SOP标准操作程序-GGT
SOP标准操作程序
GGT γ-谷氨酰转移酶（货号：OSR6119，OSR6219）

实验原理：
γ—谷氨酰转移酶的测量用于诊断和治疗肝脏疾病,如,酒精性肝硬变和初级和次级肝肿瘤.
升高的血清γ-谷氨酰转移酶（GGT），有时称作GGTP（EC2。3。2。2）可出现在所有的肝脏疾病中。在检测阻塞性黄疸,胆管炎和胆囊炎时，它比碱性磷酸酶，转氨酶和亮氨酸氨肽酶（LAP）更灵敏。GGT水平在肝病中升高较快，比LAP或5'—核苷酸酶水平有较高的值1.中等程度的升高在传染性肝炎中可看到。但是，升高的GGT水平也可以在慢性酒精中毒，糖尿病和某些神经系统疾病中注意到.GGT的正常水平可出现在骨骼疾病中，因此,血清GGT可用于确定疾病是骨骼的，还是肝胆的。

方法
奥林巴斯AU640 GGT程序是基于Szasz程序的修改方法2，3。GGT催化水溶性底物，γ-谷氨酰—3—羧基—4-硝基苯胺中的γ-谷氨酰到甘氨酰甘氨酸中，生成5—氨基-2-硝基苯甲酸盐。在410/480nm时吸光度的改变是由于5—氨基—2-硝基苯甲酸盐的形成，它的形成与标本中GGT的活性成正比。
GGT
L-γ—谷氨酰-3-羧基-4—硝基苯胺 + 甘氨酰甘氨酸 —---——-—-—-—-﹥L-γ—谷氨酰-甘氨酰甘氨酸+5—氨基-2-硝基苯甲酸盐

标本：
病人准备:无特殊要求。
类型：标本最好是无溶血的血清.如果必须使用血浆,推荐的抗凝剂是EDTA。肝素化血清可能会在反应混合物中变得浑浊；柠檬酸盐,草酸盐和氟化物可使活性降低10％到15％.
标本稳定性:GGT测定应在标本收集后尽快进行。血清中的GGT在4℃下可稳定一月，在—20℃稳定一年4.

仪器与材料:
仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪
材料:奥林巴斯AU640 γ—谷氨酰转移酶（GGT）
参与反应成份的最终浓度：
Tris缓冲液（pH7.95） 100mmol/L
甘氨酰甘氨酸 100 mmol/L
L—γ-谷氨酰—3—羧基-4—硝基苯胺 4.0 mmol/L
其中含有保护剂。
注意：1。此试剂为体外诊断用。
2。不要入口，吞下有害。
3。 保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。
试验用试管的直径在12～16mm。
试剂准备:奥林巴斯AU640的GGT是即开即用的。无需特殊准备.
执行参数（性能参数):以下数据是根据奥林巴斯AU640 GGT试剂已经建立的程序。
精密度:精密度的评估是根据NCCLS推荐的典型方法9，AU640批内精密度小于5%，总精密度小于10%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则.
N=100
批 内
精 密 度
总 精
密 度
平均值（U/L)
SD
CV%
SD
CV％
13
0。1
1.1
0。1
1.1
33
0。4
1。3
0.5
1。5
158
0。7
0.4
1。2
0。7
方法学比较：奥林巴斯AU640 GGT（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2)，共同做183个病人标本.相关系数达到0。9999,回归方程如下：
GGT方法1=（GGT方法2×0。89)+0.6
病人结果数值分布：0~391U/L
敏感度：在奥林巴斯AU640生化分析仪上每分钟变化0.23毫吸光度为1U/L.
试剂的贮存：1.当保存于2~8℃,不开盖情况下至标签的失效期.
2。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天.
变质指示：试剂浑浊度增加表明已经变质，不能继续使用。

校准：
标准液的准备：这个实验不需要标准液.
校准程序：AST的校准基于5—氨基-2—硝基苯甲酸盐的消光系数，在410/480nm的摩尔消光系数为7453。

质控：在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控血清（DR0061＆62)作为未知标本进行分析。

操作程序（逐步地):
AU640开机
1。确认两瓶清洗剂有足够的量。
2.打开蒸馏水供应系统的阀门。
3。如果没有设定自动开机,请按分析仪器上的[POWER ON]键.
4。确认打印机为开机并处于联机状态.
5。在［Start Condition]屏幕，输入所需信息，并按F2退出。
6.如果要求输入密码，请输入密码。
7。确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂.
8。在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1N HCL的样品针清洗液.

9。 ISE（电极）需要以下步骤定标：
a。在急诊台相应位置放血清/尿高和低值标准液。
b.在系统状态菜单选择ISE状态菜单。
c.选择F5，选定合适的定标条目.
d.定标完成后,确认斜率和因数是否在范围内。
开始分析:
1.把定标、质控、和标本架放在架子传送带上.
2。用鼠标点击屏幕最上方的[START ANALYZER]图标.
3。点击F2退出键，退回到主屏幕.
分析参数
样品体积 6微升 稀释水 0微升
试剂1体积 75微升 稀释水 20微升
试剂2体积 75微升 稀释水 20微升
波长 410/480 方法 Rate
读点 14/23 温度 37℃
完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。
计算：
无需手工计算，在37℃每个标本的结果自动以U/L打印。
报告结果:
参考范围10： 9-64U/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
不正常结果的处理程序:根据仪器参数的正常值会打印异常标志。
报告格式：
自动地打印37℃U/L的报告，如果以SI单位（U/L）报告结果，要乘以0。017.
操作过程注意事项：
操作过程的限制性：OlympusAU640 GGT的线性范围是3～1200 U/L。样品浓度超过线性上限应稀释重做。在AU640中应用自动重做功能，标本稀释重做后会自动乘以稀释倍数。
超范围的标本也可以在四份生理盐水中加一份血清进行手工稀释,轻轻地混匀，在AU640上当常规标本，结果乘以5。
干扰物质：
已经发现某些抗颠痫药(苯妥英,巴比妥酸盐）会引起GGT值的假升高5。标本收集前的过度饮酒会引起血清GGT的假升高6。
研究结果表明GGT受以下物质干扰7:
乳糜 乳糜达到1000mg/dL时影响小于3％
溶血 血红蛋白达到500mg/dL时影响小于3％
胆红素 胆红素达到40mg/dL时影响小于3％
Olympus的研究结果是根据现时发表的文献，Olympus美国公司正在进行准确性的研究，对于其它物质的干扰,请参看Young发表的文献6。

参考文献:
1. Tietz,N.W.(Ed)，Fundamentals of Clinical Chemistry，3rd Edition,W.B。Saunders,1987。
2. Szasz，G。，Clin Chem，15:124，1969
3. Szasz,G.，Z Klin Biochem,12:228,1974
4. Tietz,N.W。（Ed）,Fundamentals of Clinical Chemistry，2rd Edition,1990.
5. Whitfield，J。B.Moss,D.W.，Neale，G.，Orme，M。 and Breckenridge，A。,Brit Med J,1:316，1973。
6. Rosalki,S。B.,Rau,D.，Clin Chem Acta，39：41,1972.
7. NCCLS,Interference Testing in Clincial Chemistry,EP7-P,1986.
8. Young,D.S。，Effects of Drugs on Clincial Laboratory Tests，4th Edition,AACC Press，1995。
9. NCCLS,Evaluation Protocol EP5—T2,1992.
10. 200 blood donors from North Texas.Data on file.