绒毛灯笼花块根化学成分研究.pdf

树萝卜属 Agapetes 为杜鹃花科 Ericaceae 越桔亚科 Vaccinioideae 植物，常为附生常绿灌木，全世界约 80 余种，我国有 51 种 4 变种，主要分布于西藏东南部及南部，云南西北部、西部及西南至南部和东南部1。该属植物花朵秀丽雅致，具有一定的观赏价值，部分种类膨大根茎可作药用，具有散瘀止痛、利尿消肿和抗炎等功效2-3。研究表明，树萝卜属植物主要含有酚类、鞣质、多糖类、皂苷、黄酮类、内酯类、香豆素类、有机酸类和甾体类等成分4。绒毛灯笼花 Agapetes lacei var.tomentellaAiry-Shaw 为该属植物灯笼花的变种，常附生于海拔 2 1003 000 m 的林中乔木上，仅云南西北部和西藏东南部有分布1，目前还未见有关于该植物的化学成分研究。为深入了解该植物的物质基础，本实验对绒毛灯笼花化学成分进行了研究，从其块根75%乙醇提取物乙酸乙酯部位分离了 10 个化合物，分别鉴定为：3琢，23-O-异亚丙基-2琢，19琢-二羟基-12-烯-28-乌苏酸（1）、3茁，23-O-异亚丙基-2琢，3茁，23-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸（2）、2琢，3琢，19琢，23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸（3）、2琢，3茁，23-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸（4）、3茁-乙酰乌苏酸（5）、乌苏酸（6）、茁-谷甾醇（7）、5琢，6茁-二羟基谷甾醇（8）、胡萝卜苷（9）、4-羟基丁酸（10），化学结构见图 1。1仪器与材料Avance 芋-400型核磁共振仪（德国 Bruker 公司）；柱层析用硅胶、薄层层析硅胶板（青岛海洋化工有限公司）；RE-52AA 型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；环己烷（分析纯，西陇科技有限公司）；异丙醇（分析纯，上海强顺化学试剂有限公司）；石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇均为重蒸后工业试剂。植物样品于 2021 年 3 月采自云南怒江，由大绒毛灯笼花块根化学成分研究李靖1，2，凌浩威1，2，史凯旋1，2，刘蓉1，2，肖朝江1，2，姜北1，2*（1.云南省滇西抗病原植物资源筛选研究重点实验室，云南大理 671000；2.大理大学药学院，云南大理671000）摘要目的：研究绒毛灯笼花 Agapetes lacei var.tomentella干燥块根中的化学成分。方法：采用硅胶柱色谱和薄层色谱法对绒毛灯笼花块根 75%乙醇提取物乙酸乙酯部位进行分离纯化，依据理化性质及现代波谱技术对化合物进行结构鉴定。结果：从绒毛灯笼花块根 75%乙醇提取物乙酸乙酯部位中分离得到 10 个化合物，分别鉴定为：3琢，23-O-异亚丙基-2琢，19琢-二羟基-12-烯-28-乌苏酸（1）、3茁，23-O-异亚丙基-2琢，3茁，23-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸（2）、2琢，3琢，19琢，23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸（3）、2琢，3茁，23-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸（4）、3茁-乙酰乌苏酸（5）、乌苏酸（6）、茁-谷甾醇（7）、5琢，6茁-二羟基谷甾醇（8）、胡萝卜苷（9）、4-羟基丁酸（10）。结论：所有化合物均为首次从绒毛灯笼花中分离得到，除化合物 7 和 9 外，其余化合物均为首次从树萝卜属植物中分离得到。关键词绒毛灯笼花；树萝卜属；化学成分；三萜；甾体中图分类号R284.1文献标志码A文章编号2096-2266（2023）08-0001-05基金项目国家自然科学基金项目（81960637）；云南省滇西抗病原植物资源筛选研究重点实验室项目（202105AG070003）；云南省教育厅科学研究基金项目（2022Y822）收稿日期2023-01-09修回日期2023-02-14第一作者简介李靖，硕士研究生，主要从事天然产物研究。*通信作者：姜北，教授，博士，E-mail：。DOI10.3969/j.issn.2096-2266.2023.08.001大理大学学报JOURNAL OF DALI UNIVERSITY第8卷第8期2023年8月Vol.8No.8Aug.2023理大学药学院生药教研室张德全教授鉴定为绒毛灯笼花，植物标本（编号：20210327-1）存放于云南省滇西抗病原植物资源筛选研究重点实验室。2提取与分离干燥绒毛灯笼花块根 3.8 kg，常温下 75%乙醇冷浸提取 5 次，每次浸泡 24 h，过滤，收集提取液，经旋转蒸发至无醇味后得总浸膏 1 174 g，用适量蒸馏水溶解后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，得到各萃取部位 4.5、205.0、380.0 g。乙酸乙酯萃取部位（205.0 g）经硅胶柱干法上样，以两相溶剂（三氯甲烷-丙酮 1颐0寅0颐1）梯度洗脱，薄层色谱法检测并合并相同流分，得 8 个组分 Fr.AH。Fr.A 经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮 50颐1寅20颐1）得化合物 7（7mg）；Fr.B 经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮 25颐1寅5颐1）得 5 个组分 Fr.B-1Fr.B-5；Fr.B-1 经硅胶柱色谱（三氯甲烷）得化合物 5（26 mg）；Fr.B-3 经硅胶柱层析（三氯甲烷-乙酸乙酯 30颐1）洗脱、甲醇反复洗涤得化合物 6（20 mg）；Fr.C 经硅胶柱色谱（石油醚-乙酸乙酯 15颐1寅0颐1）得 8 个组分 Fr.C-1Fr.C-8，Fr.C-6 经硅胶柱色谱（三氯甲烷-乙酸乙酯 10颐1寅1颐1）得 5 个亚组分 Fr.C-6-1Fr.C-6-5，Fr.C-6-3 经反复硅胶柱色谱（环己烷-异丙醇 25颐1寅12颐1，石油醚-丙酮 3颐1寅3颐2）得化合物 3（11 mg）；Fr.D 经硅胶柱色谱（三氯甲烷-甲醇 50颐1寅30颐1）得 5 个组分 Fr.D-1Fr.D-5，Fr.D-2 经硅胶柱色谱（石油醚-乙酸乙酯 10颐1寅6颐1）得 5 个亚组分 Fr.D-2-1Fr.D-2-5，Fr.D-2-3 经硅胶柱色谱（三氯甲烷-乙酸乙酯 15颐1）得化合物 2（14 mg）；Fr.D-2-4 经硅胶柱色谱（三氯甲烷-乙酸乙酯 20颐1寅12颐1）得化合物 1（13 mg）；Fr.D-4 经硅胶柱色谱（三氯甲烷-乙酸乙酯 3颐1）得 4个亚组分 Fr.D-4-1Fr.D-4-4，Fr.D-4-1 经硅胶柱色谱（石油醚-乙酸乙酯 5颐1寅3颐1）和制备薄层色谱得化合物 10（7 mg）；Fr.D-4-3 经反复硅胶柱色谱（石油醚-丙酮 3颐1寅2颐1，三氯甲烷-甲醇 40颐1寅25颐1）得化合物 8（10 mg）和化合物 4（16 mg）；Fr.E 放置后出现白色絮状沉淀，经甲醇、丙酮反复洗涤得化合物 9（400 mg）。图 1化合物 110 的化学结构大理大学学报总第 92 期自然科学3结构鉴定化合物 1：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）啄：5.34（1H，t，J=3.8 Hz，H-12），3.87（1H，dt，J=11.8，4.0 Hz，H-2），3.76（1H，d，J=2.7 Hz，H-3），3.65（1H，d，J=12.1 Hz，H-23a），3.29（1H，d，J=12.1Hz，H-23b），2.52（1H，s，H-18），1.41，1.38，1.28，1.19，0.96，0.71，0.70（各 3H，7伊CH3，H-2，3，27，29，25，26，24），0.94（3H，d，J=6.6 Hz，H-30）；13C-NMR（100MHz，CDCl3）啄：42.4（t，C-1），65.4（d，C-2），76.1（d，C-3），36.1（s，C-4），42.1（d，C-5），17.8（t，C-6），32.5（t，C-7），40.3（s，C-8），47.2（d，C-9），38.1（s，C-10），23.8（t，C-11），129.4（d，C-12），138.1（s，C-13），41.2（s，C-14），28.3（t，C-15），25.5（t，C-16），47.9（s，C-17），52.9（d，C-18），73.2（s，C-19），41.3（d，C-20），26.1（t，C-21），37.6（t，C-22），68.2（t，C-23），16.9（q，C-24），17.1（q，C-25），17.3（q，C-26），24.7（q，C-27），184.3（s，C-28），27.5（q，C-29），16.3（q，C-30），98.7（s，C-1），19.3（q，C-2），29.4（q，C-3）。以上波谱数据与文献5报道基本一致，故鉴定该化合物为 3琢，23-O-异亚丙基-2琢，19琢-二羟基-12-烯-28-乌苏酸。化合物 2：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）啄：5.27（1H，t，J=3.7 Hz，H-12），3.78（1H，m，H-2），3.49（1H，d，J=10.8 Hz，H-23a），3.46（1H，d，J=10.8 Hz，H-23b），3.31（1H，d，J=9.6 Hz，H-3），2.82（1H，dd，J=13.6，3.5 Hz，H-18），1.45，1.44，1.13，1.05，1.02，0.92，0.90，0.72（各 3H，8伊CH3，H-2，3，27，24，25，30，29，26）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）啄：46.6（t，C-1），65.4（d，C-2），82.2（d，C-3），37.1（s，C-4），55.6（d，C-5），17.7（t，C-6），32.2（t，C-7），39.5（s，C-8），47.8（d，C-9），38.3（s，C-10），22.9（t，C-11），122.5（d，C-12），143.6（s，C-13），41.7（s，C-14），27.8（t，C-15），23.4（t，C-16），46.4（s，C-17），41.0（d，C-18），45.9（t，C-19），30.8（s，C-20），33.9（t，C-21），37.6（t，C-22），72.8（t，C-23），13.6（q，C-24），17.6（q，C-25），17.1（q，C-26），26.1（q，C-27），183.9（s，C-28），33.2（q，C-29），23.7（q，C-30），99.8（s，C-1），19.6（q，C-2），29.9（q，C-3）。以上波谱数据与文献6报道基本一致，故鉴定该化合物为 3茁，23-O-异亚丙基-2琢，3茁，23-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸。化合物 3：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）啄：5.30（1H，t，J=3.6 Hz，H-12），3.88（1H，m，H-2），3.61（1H，d，J=2.7 Hz，H-3），3.54（1H，d，J=11.0 Hz，H-23a），3.40（1H，d，J=11.0 Hz，H-23b），2.50（1H，s，H-18），1.36，1.20，1.02，0.80，0.79（各3H，5伊CH3，H-27，29，24，25，26），0.93（3H，d，J=6.7Hz，H-30）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）啄：42.2（t，C-1），67.2（d，C-2），78.7（d，C-3），42.7（s，C-4），44.2（d，C-5），19.1（t，C-6），33.7（t，C-7），41.1（s，C-8），48.4（d，C-9），39.1（s，C-10），24.7（t，C-11），129.3（d，C-12），140.1（s，C-13），42.5（s，C-14），29.6（t，C-15），26.6（t，C-16），48.6（s，C-17），55.1（d，C-18），73.6（s，C-19），43.1（d，C-20），27.3（t，C-21），39.0（t，C-22），71.3（t，C-23），17.3（q，C-24），17.6（q，C-25），17.6（q，C-26），24.9（q，C-27），176.7（s，C-28），16.6（q，C-29），27.1（q，C-30）。以上波谱数据与文献7报道基本一致，故鉴定该化合物为 2琢，3琢，19琢，23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸。化合物 4：白色固体。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）啄：5.26（1H，t，J=3.4 Hz，H-12），3.70（1H，m，H-2），3.50（1H，d，J=11.0 Hz，H-23a），3.35（1H，dd，J=9.6，2.0 Hz，H-3），3.27（1H，d，J=11.0 Hz，H-23b），2.82（1H，dd，J=14.0，4.5 Hz，H-18），1.17，1.03，0.94，0.91，0.81，0.70（各 3H，6伊CH3，H-27，25，30，29，26，24）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）啄：47.7（t，C-1），69.5（d，C-2），78.1（d，C-3），44.0（s，C-4），48.1（d，C-5），19.0（t，C-6），33.7（t，C-7），40.0（d，C-8），48.8（d，C-9），38.9（s，C-10），24.5（t，C-11），123.3（d，C-12），145.2（s，C-13），43.2（s，C-14），28.7（t，C-15），23.9（t，C-16），47.5（s，C-17），42.9（d，C-18），47.1（t，C-19），31.6（s，C-20），34.8（t，C-21），33.2（t，C-22），66.2（t，C-23），13.9（q，C-24），17.5（q，C-25），17.7（q，C-26），26.5（q，C-27），181.8（s，C-28），33.6（q，C-29），24.0（q，C-30）。以上波谱数据与文献8报道基本一致，故鉴定该化合物为 2琢，3茁，23-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸。化合物 5：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）啄：5.19（1H，t，J=3.2 Hz，H-12），4.47（1H，dd，J=9.6，6.3 Hz，H-3），2.16（1H，d，J=11.0 Hz，H-18），李靖，凌浩威，史凯旋，等绒毛灯笼花块根化学成分研究总第 92 期第 8 卷2.02（3H，s，3-OAc），1.04，0.93，0.83，0.81，0.72（各3H，5伊CH3，H-27，25，24，23，26），0.92（3H，d，J=6.3Hz，H-30），0.82（3H，d，J=6.0 Hz，H-29）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）啄：38.2（t，C-1），23.6（t，C-2），81.0（d，C-3），37.7（s，C-4），55.3（d，C-5），18.2（t，C-6），32.8（t，C-7），30.6（s，C-8），47.4（d，C-9），36.8（s，C-10），23.3（t，C-11），125.7（d，C-12），138.0（s，C-13），41.8（s，C-14），28.0（t，C-15），24.0（t，C-16），47.9（s，C-17），52.4（d，C-18），38.8（d，C-19），39.0（d，C-20），30.6（t，C-21），36.8（t，C-22），28.1（q，C-23），16.8（q，C-24），15.6（q，C-25），17.1（q，C-26），23.7（q，C-27），184.5（s，C-28），17.1（q，C-29），21.3（q，C-30），171.1（s，C-31），21.4（q，C-32）。以上波谱数据与文献9报道基本一致，故鉴定该化合物为3茁-乙酰乌苏酸。化合物 6：白色粉末。在薄层层析硅胶板上用多种溶剂系统展开后，与课题组已鉴定化合物乌苏酸斑点颜色及 Rf 值均一致，故鉴定为乌苏酸。化合物 7：白色粉末。在薄层层析硅胶板上用多种溶剂系统展开后，与课题组已鉴定化合物 茁-谷甾醇斑点颜色及 Rf 值均一致，故鉴定为 茁-谷甾醇。化合物 8：白色粉末。1H-NMR（400 MHz，CDCl3+CD3OD）啄：4.10（1H，m，H-3琢），3.54（1H，s，H-6琢），1.01（3H，s，H-19），0.93（3H，d，J=6.9 Hz，H-21），0.84（3H，t，J=7.2 Hz，H-29），0.82（3H，d，J=6.5Hz，H-26），0.79（3H，d，J=6.5 Hz，H-27），0.68（3H，s，H-18）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3+CD3OD）啄：30.3（t，C-1），32.2（t，C-2），67.2（d，C-3），40.0（t，C-4），75.8（s，C-5），75.4（d，C-6），34.0（t，C-7），30.2（d，C-8），45.4（d，C-9），38.1（s，C-10），21.1（t，C-11），39.9（t，C-12），42.7（s，C-13），56.1（d，C-14），24.1（t，C-15），28.2（t，C-16），55.9（d，C-17），11.8（q，C-18），18.9（q，C-19），36.1（d，C-20），16.5（q，C-21），33.8（t，C-22），26.0（t，C-23），45.7（d，C-24），29.0（d，C-25），19.7（q，C-26），18.6（q，C-27），23.0（t，C-28），12.0（q，C-29）。以上波谱数据与文献10报道基本一致，故鉴定该化合物为 5琢，6茁-二羟基谷甾醇。化合物 9：白色粉末。在薄层层析硅胶板上用多种溶剂系统展开后，与课题组已鉴定化合物胡萝卜苷斑点颜色及 Rf 值均一致，故鉴定为胡萝卜苷。化合物 10：无色油状。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）啄：3.58（2H，t，J=6.5 Hz，H-4），2.30（2H，t，J=7.4 Hz，H-2），1.81（2H，m，H-3）；13C-NMR（100MHz，CD3OD）啄：180.2（s，C-1），33.7（t，C-2），29.7（t，C-3），62.7（t，C-4）。以上波谱数据与文献11报道基本一致，故鉴定该化合物为 4-羟基丁酸。4讨论本实验从绒毛灯笼花块根 75%乙醇提取物乙酸乙酯部位分离鉴定了 10 个化合物，除化合物 7和 9 外，其余化合物均为首次从树萝卜属植物中分离得到，所有化合物均为首次从绒毛灯笼花中分离得到，包括 6 个三萜、3 个甾体和 1 个脂肪酸类化合物，三萜类化合物在结构类型上主要是齐墩果烷型和乌苏烷型。研究12-13表明，三萜类化合物具有广泛的药理活性，如化合物 1 能够抑制哺乳动物 G0/G1期细胞周期，具有抗肿瘤的作用5；化合物 6 及其衍生物具有抗炎、抗菌、抗病毒、调节血糖、降血压和抗肿瘤等药理活性12-14。本实验丰富了对绒毛灯笼花物质基础的认识，为绒毛灯笼花的深入探究与开发利用提供了基础研究。参考文献1中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：第 57卷 M.北京：科学出版社，1991：165.2 全国中草药汇编 编写组.全国中草药汇编：下册 M.2 版.北京：人民卫生出版社，1996：414.3邓健，陈于澍.树萝卜属植物化学成分的研究（域）：红花树萝卜化学成分的研究 J.高等学校化学学报，1991（6）：757-760.4云南省食品药品监督管理局.云南省中药材标准：第五册 傣族药（域）M.2005 年版.昆明：云南科学技术出版社，2009：282-283.5ZHAO Q C，CUI C B，BING C，et al.3琢，23-O-isopropylidenyl-2琢，19琢-dihydroxy-urs-12-en-28-oicAcid，a New Pentacyclic Triterpene Isolated from Rubusaleaefolius as a New Cell Cycle Inhibitor J.Molbank，2003，3：327-330.6WANG Y S，HUANG R，LI N Z，et al.Triterpenes fromStachyurus himalaicus var.himalaicus Hook.f.et Thoms.大理大学学报总第 92 期自然科学ex Benth J.Molecules，2010，15（4）：2096-2102.7刘普，段宏泉，潘勤，等.委陵菜三萜成分研究 J.中国中药杂志，2006（22）：1875-1879.8周媛媛.抗肿瘤中药青龙衣化学成分的研究 J.中草药，2010，41（1）：11-14.9YEAN M H，KIM J S，HYUN Y J，et al.Terpenoids andPhenolics from Geum japonicum J.Korean J Pharmacogn，2012，43（2）：107-121.10ZHANG X，GEOFFROY P，MIESCH M，et al.Gram-ScaleChromatographic Purification of 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chromatography were used to isolate and purify the ethyl acetate fraction of the 75%ethanolextract of the root of A.lacei var.tomentella，and the chemical structures of the compounds were identified based on physicochemicalproperties and modern spectroscopic techniques.Results：Ten compounds were isolated from the ethyl acetate fraction of the 75%ethanol extract of the root of A.lacei var.tomentella and identified as 3琢，23-O-isopropylidenyl-2琢，19琢-dihydroxyurs-12-en-28-oic acid（1），3茁，23-O-isopropylidenyl-2琢，3茁，23-trihydroxyolean-12-en-28-oic acid（2），2琢，3琢，19琢，23-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid（3），2琢，3茁，23-trihydroxyolean-12-en-28-oic acid（4），3茁-acetoxy ursolic acid（5），ursolicacid（6），茁-sitosterol（7），5琢，6茁-dihydroxysitosterol（8），daucosterol（9），and 4-hydroxybutanoic acid（10）.Conclusion：All thecompounds were isolated from A.lacei var.tomentella for the first time，except for compounds 7 and 9，the other compounds werefirst isolated from genus Agapetes.Key wordsAgapetes lacei var.tomentella；Agapetes；chemical constituents；triterpenoids；steroids（责任编辑于丽）李靖，凌浩威，史凯旋，等绒毛灯笼花块根化学成分研究总第 92 期第 8 卷