研究生第一学期免疫考试试题.doc

1、试述T 淋巴细胞的活化机制?
答：T细胞特异性识别APC 所提呈的MHC-抗原肽复合物，并被激活和发生增生，进而分化成效应细胞。在上述过程中，T细胞均需要两个来自胞外的信号刺激,即淋巴细胞活化的双信号作用。
T 细胞的第一激活信号主要来自TCR与MHC 分子-抗原肽复合物的特异性结合,即抗原识别。另外,CD4和CD8分子作为共受体,可分别与MHC-II 及MHC-I 类分子结合,除可增强T细胞与APC 间的黏附作用外,还参与第一激活信号的启动和转导。
T细胞活化的第二信号来自协同刺激分子,故又称协同刺激信号,即由抗原提呈细胞（APC）或靶细胞表面的协同刺激分子（如：B-7、ICOSL、CD40、ICAM-1等）与T细胞表面的协同刺激分子（如：CD28、CTLA-4、ICOS、CD40L、LFA-1等）相互作用产生。其中如B-7与CD28结合对T细胞早期活化起协同刺激作用，B-7与CTLA-4结合为T细胞活化后起抑制性协同刺激作用。缺乏协同刺激信号，T细胞活化不充分，不能表现效应功能，或使抗原特异性T淋巴细胞凋亡，或被诱导呈无能状态。
T细胞活化需要第一，第二信号共同作用，两者缺一不可。
2、试述NK细胞对靶细胞的杀伤途径及分子机制?
答：（1）穿孔素/颗粒酶途径：即抗体依赖的细胞介导的细胞毒性（ADCC）。活化的NK细胞可释放穿孔素与颗粒酶，其中穿孔素可发挥类似补体膜攻击复合物的功能，在有钙离子存在的条件下，可在靶细胞膜上形成“孔道”，使水电解质迅速进入胞内至靶细胞崩解破坏。颗粒酶是一种丝氨酸蛋白酶，可循穿孔素形成的“孔道”进入靶细胞内，通过激活凋亡相关的酶系统导致细胞凋亡。
（2）Fas/FasL途径：活化后NK细胞（FasL）＋靶细胞（Fas） → 形成Fas三聚体 → 胞浆内的死亡结构域相聚成簇 →与Fas相关死亡结构域蛋白结合 → 募集和激活caspase8 → caspase8级联反应导致靶细胞凋亡。
（3）TNF-α/TNFR-1途径：TNF-α ＋ 靶细胞（I型TNF受体）结合→形成TNF-R三聚体 → 胞浆内的死亡结构域相聚成簇 → 激活caspase8 → 导致靶细胞凋亡。
（4）抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）：NK细胞表达的FcγRⅢA (CD16)主要结合人的IgG1和IgG3的Fc端（Cγ2、Cγ3功能区），在针对靶细胞特异性IgG抗体的介导下，可杀伤相应的靶细胞，这一杀伤过程称为抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。IL-2和IFN-γ明显增强NK细胞介导的ADCC作用。NK细胞发挥ADCC后，其本身表达Fas并可通过Fas/FasL机制发生化活诱导的细胞死亡。
3、试述肿瘤免疫治疗的方法有哪些？简述其原理？
答：肿瘤免疫治疗是指通过激发和增强及机体的免疫功能，以达到控制和杀伤肿瘤细胞的目的。根据机体抗肿瘤免疫效应机制，肿瘤免疫治疗可分为:
(1)非特异性免疫治疗:是指应用一些免疫调节剂通过非特异性地增强机体的免疫功能,激活机体的抗肿瘤免疫应答,以达到治疗肿瘤的目的。例如：卡介苗、一些细胞因子如IL-2等均属于此类。
（2）主动免疫治疗：是指给机体输入具有抗原性的瘤苗，刺激机体免疫系统产生抗肿瘤免疫以治疗肿瘤的方法。该法应用的前提是肿瘤抗原能刺激机体产生免疫反应。此种方法对地手术后清除微小的转移瘤灶和隐匿瘤、预防肿瘤转移和复发有较好的应用效果。
（3）被动免疫治疗：是指给机体输注外源的免疫效应物质，由这些外源性效应物质在机体内发挥治疗肿瘤作用。主要有以下两大类：抗肿瘤导向治疗，利用高度特异性的单克隆抗体为载体，将细胞毒性的杀伤分子带到肿瘤病灶处，可特异地杀伤肿瘤细胞；过继免疫疗法，是取对肿瘤有免疫力的供者淋巴细胞转输给肿瘤者，或取患者自身的免疫细胞在体外活化、增殖后，再转输入患者体内，使其在患者体内发挥肿瘤作用。
4、试述肿瘤干细胞的靶向治疗手段有哪些？简述其原理？
答：（1）干扰CSC传导通路：如Wnt通路、Hedgehog传导通路、Norch传导通路、ＮＦ－κＢ通路等，这些通路多与肿瘤干细胞的生长、增殖、自我更新、逃逸凋亡等密切相关。
（2）针对CSC特定基因的治疗：在CSC中特定基因的表达或沉默对CSC的增殖、凋亡具有调控作用，靶向作用于这些基因，改变其表达，可以抑制CSC生长或诱导其凋亡。
（3）针对表面标志的靶向治疗：针对CSC表面存在一些特异性的标志物，以这些标志物为靶向杀灭CSC。
（4）针对CSC微环境的治疗：微环境对维持CSC自我更新及异质性具有重要调节功能,在正常干细胞中,微环境通过提供抑制信号、抑制增殖和分化来保持干细胞的自身稳态、抑制肿瘤的形成，同时提供短暂的信号促进干细胞的增殖、支持受损组织的再生。一旦抑制增殖和分化的信号与短暂促进增殖的信号之间的平衡被打破，干细胞就会转化为CSC促进肿瘤的形成。干扰微环境和破坏其赖以生存的物质基础，可以有效地抑制CSC。
（5）诱导分化：CSC具有无限增殖能力，促进其分化,为肿瘤终末细胞既能防止进一步增殖，同时又增加了放化疗敏感性。全反式维甲酸作为分化诱导剂治疗急性早幼粒细胞白血病是一个成功的范例。
5、举例阐述肿瘤微环境因素对肿瘤发生、发展、诊断及预后的影响?
答：肿瘤微环境在肿瘤细胞的生长增殖过程中起着重要作用。一方面它为肿瘤细胞提供充足的营养和调控生长分化的多种因子，另一方面它也为肿瘤细胞抵抗外界损害提供了有利的屏障。
如肿瘤微环境中的抑制性成分——Treg细胞：Treg细胞是指CD4+CD25+ T细胞。其可通过细胞间接触依赖机制发挥作用或分泌IL-10和TGF-β等细胞因子，起负性抑制作用。可抑制CD4+CD25-T细胞、CD8+T细胞以及树突状细胞等其他免疫细胞的活性和功能。从而至机体免疫功能低下，以利于肿瘤细胞的产生与生长。大量的研究报道表明CD4+CD25+Treg细胞是抑制机体抗肿瘤免疫应答的关键成分之一。在非小细胞肺癌和卵巢癌患者的肿瘤浸润淋巴细胞中Treg的含量明显增多。在胃肠道肿瘤患者中CD4+CD25-T细胞明显减少而Treg细胞数量增多，而且Treg细胞数量的增高与较差的预后和较低的生存率高度相关。
6、试述异常表达的共刺激分子在自身免疫病发生机制中可能的作用？如何通过共刺激分子对自身免疫疾病进行辅助诊断和治疗？
答：共刺激分子可大致分为“正性协同刺激分子”和“负性协同刺激分子”，两者的异常表达与自身免疫性疾病的发生发展密切相关。其中“正性协同刺激分子”的异常增高表达可导致机体免疫功能平衡的失调，打破自身耐受，导致自身免疫性疾病。 “负性协同刺激分子”介导的抑制信号在维持免疫耐受中发挥着关键性作用，其缺失导致自身耐受性的改变是也是自身免疫病的致机制之一。另外协同刺激分子表达异常，导致免疫系统紊乱可至T、B细胞的异常活化，也是影响自身免疫病发生的重要因素。
共刺激分子有助于自身免疫性疾病的辅助诊断：如可通过检测共刺激分子的表达情况（如检测CD4+CD28- T细胞比例、CD4+ T细胞上OX40和ICOS表达）来辅助诊断何种自身免疫性疾病。其次通过检测共刺激分子表达水平，还可以用于判断疾病严重程度，从而指导临床用药等。另外检测治疗前后共刺激分子表达率变化可提示治疗效果及复发几率。
共刺激分子还可有助于自身免疫性疾病的治疗，如共刺激分子“OX40”分子只表达在炎症部位的抗原特异性T细胞上，若只针对OX40/OX40L进行的治疗，则治疗效应只会作用于这群T细胞，而不会影响其他外周T细胞的功能，从而大大减少了治疗所引起的副作用。
7、试述维持造血干细胞增殖及分化的方法？
答：维持造血干细胞增殖及分化一般需满足如下条件。（1）基质细胞：造血干细胞的长期维持与造血微环境的基质细胞是分不开的，在培养体系中加入基质细胞可以发挥三个方面的主要作用：①支持HSPC的体外扩增。②增强扩增后细胞的归巢与植入能力。③减少分化、抗凋亡。
（2）培养基：血清是良好的天然培养液，但血清成分复杂、变异大，增加了实验的不确定因素，尤其动物血清存在动物携带病原体传染人类的隐患以及异种蛋白免疫原性，现多主张使用无血清培养基，研究表明无血清、无基质的培养体系配合多种细胞因子也能支持脐血HSPC的体外扩增，扩增后的细胞能成功地植入到亚致死量照射的 NOD/SCID鼠内并维持了长期造血的能力。
（3）造血细胞因子组合：至今最佳的细胞因子组合尚未确定，理想的HSPC移植物应该是由HSC及定向HPC共同组成的混合体，扩增应关注维持HSC质与量的最佳契合点，细胞因子的搭配应该以此为前提。早期作用因子——干细胞因子（SCF）和Flt3配基（FL）是扩增中最重要的协同生长因子，它们能协同其它造血调节因子（IL-3、GM-CSF、G-CSF等）调控干细胞的存活、增殖和抗凋亡，尤其体现在多能干细胞阶段。
（4）染色质修饰：经修饰后的干细胞可能阻止体外HSC活性下降，同时促使表达HSC表型的细胞数量的增加，并保持体内造血功能重建的潜能。
8、举例阐述抗体（多抗、单抗或基因工程抗体）在基础研究或临床疾病诊断或治疗中的应用？
答：基础研究中用到的抗体：ELISA中需要到双抗夹心法，其中的抗体为与所检测的蛋白特异性结合的单克隆抗。
临床疾病诊断中的抗体：临床诊断病毒感染性疾病，可以检测其血清中的病毒抗体，某些自身免疫性疾病如“甲亢”中的抗TSHR抗体、“SLE”中的抗DNA抗体，若在血清中测定可协助该疾病的临床诊断。
临床疾病治疗中的抗体：美罗华（利妥昔单抗）用于治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤；抗体型药物“Enbrel” 、“Humira”可用于治疗RA、牛皮癣；抗体型药物“Avastin”可用于治疗：结肠癌、NSCL等。