药敏试验方法简介.pptx

药敏试验方法介绍药敏试验方法介绍 药敏试验方法简介药敏试验方法简介1/71耐药菌问题日益严重耐药菌问题日益严重“当前药品失去作用速度与科学家发觉当前药品失去作用速度与科学家发觉新药品速度差不多。新药品速度差不多。”摘自摘自WHOWHO汇报汇报药敏试验方法简介药敏试验方法简介2/71抗微生物治疗面临困境抗微生物治疗面临困境抗药性问题一直存在抗药性问题一直存在细菌不停取得新耐药机制细菌不停取得新耐药机制以往对付耐药性策略收效不显以往对付耐药性策略收效不显药敏试验方法简介药敏试验方法简介3/71药敏试验方法简介药敏试验方法简介4/71一、一、抗菌药品敏感试验抗菌药品敏感试验（AST）n预测抗菌治疗效果；预测抗菌治疗效果；n指导抗菌药品临床应用；指导抗菌药品临床应用；n发觉或提醒细菌耐药机制存在，指导合理发觉或提醒细菌耐药机制存在，指导合理用药，防止产生或加重细菌耐药；用药，防止产生或加重细菌耐药；n监测细菌耐药性，分析耐药菌变迁，掌握监测细菌耐药性，分析耐药菌变迁，掌握耐药菌感染流行病学，以控制和预防耐药耐药菌感染流行病学，以控制和预防耐药菌感染发生和流行。菌感染发生和流行。药敏试验方法简介药敏试验方法简介5/71（1）抗菌药品选择）抗菌药品选择n在我国主要遵照临床试验室标准化委员会在我国主要遵照临床试验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI）制订抗菌药品选择标准）制订抗菌药品选择标准nA组：对特定菌群常规测试并汇报药品组：对特定菌群常规测试并汇报药品 nB组：可常规测试、选择性汇报药品组：可常规测试、选择性汇报药品nC组：替换性或补充性药品组：替换性或补充性药品nU组：仅用于泌尿道感染抗菌药品组：仅用于泌尿道感染抗菌药品药敏试验方法简介药敏试验方法简介6/71葡萄球菌属抗菌药品药敏试验推荐分组葡萄球菌属抗菌药品药敏试验推荐分组葡萄球菌属抗菌药品抗菌药品A组苯唑西林（头孢西丁纸片）、克林霉素、青霉素、红霉素、复方新诺明、B组四环素、万古霉素、利奈唑胺C组环丙沙星、庆大霉素、氯霉素、奎奴普汀/达福普汀U组氧氟沙星、呋喃妥因、磺胺异恶唑、甲氧苄啶药敏试验方法简介药敏试验方法简介7/71肠杆菌科抗菌药品敏感试验推荐分组肠杆菌科抗菌药品敏感试验推荐分组肠杆菌属抗菌药品抗菌药品A组氨苄西林、头孢唑林、庆大霉素B组阿米卡星、奥格门丁、哌拉西林+他唑巴坦、头孢呋新、头孢吡肟、头孢西丁、环丙沙星、亚安培南、哌拉西林、复方新诺明C组头孢他啶、氯霉素、氨曲南、四环素U组羧苄西林、氧氟沙星、呋喃妥因药敏试验方法简介药敏试验方法简介8/71假单胞菌属抗菌药品药品敏感推荐分组假单胞菌属抗菌药品药品敏感推荐分组假单胞菌抗菌药品抗菌药品A组头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林B组阿米卡星、氨曲南、头孢吡肟、环丙沙星、亚安培南、哌拉西林+他唑巴坦C组U组氧氟沙星药敏试验方法简介药敏试验方法简介9/71不动杆菌属抗菌药品药敏试验推荐分组不动杆菌属抗菌药品药敏试验推荐分组不动杆菌属抗菌药品抗菌药品A组氨苄西林/舒巴坦、头孢他啶、亚胺培南、环丙沙星、庆大霉素B组阿米卡星、哌拉西林+他唑巴坦、头孢吡肟、头孢噻肟、复方新诺明、哌拉西林、四环素药敏试验方法简介药敏试验方法简介10/71肠球菌属抗菌药品药敏试验推荐分组肠球菌属抗菌药品药敏试验推荐分组 肠球菌属抗菌药品抗菌药品A组氨苄西林、青霉素B组万古霉素、利奈唑胺C组庆大霉素(120g)、链霉素(300g)U组环丙沙星、四环素、呋喃妥因药敏试验方法简介药敏试验方法简介11/71肺炎链球菌抗菌药品药敏试验推荐分组肺炎链球菌抗菌药品药敏试验推荐分组肺炎链球菌抗菌药品抗菌药品A组青霉素、苯唑西林(1g)、红霉素、复方新诺明B组万古霉素、克林霉素、四环素、氧氟沙星C组氯霉素、利奈唑胺药敏试验方法简介药敏试验方法简介12/71n药敏试验折点亦遵照每年最新公布药敏试验折点亦遵照每年最新公布CLSI标标准进行，分为敏感（准进行，分为敏感（S）、耐药（）、耐药（R）和中）和中介（介（I）。）。药敏试验方法简介药敏试验方法简介13/71n敏感：分离菌株能被测试药品使用敏感：分离菌株能被测试药品使用推荐剂推荐剂量量时在感染部位通常可到达抗菌药品浓度时在感染部位通常可到达抗菌药品浓度所抑制所抑制n耐药：分离菌株不能被测试药品耐药：分离菌株不能被测试药品常规剂量常规剂量可到达药品浓度所抑制；分离菌株可能存可到达药品浓度所抑制；分离菌株可能存在一些特定耐药机制；治疗研究显示药品在一些特定耐药机制；治疗研究显示药品对分离菌株临床疗效不可靠对分离菌株临床疗效不可靠耐药治疗无效；敏感耐药治疗无效；敏感治疗有效治疗有效药敏试验方法简介药敏试验方法简介14/71二、抗菌药品种类及作用机制二、抗菌药品种类及作用机制药敏试验方法简介药敏试验方法简介15/71三、药敏试验方法学三、药敏试验方法学纸片扩散法（纸片扩散法（K-B法）法）稀释法（稀释法（MIC法）法）肉汤稀释法肉汤稀释法常量稀释法常量稀释法微量稀释法微量稀释法琼脂稀释法琼脂稀释法E-test法法1.手工试验手工试验药敏试验方法简介药敏试验方法简介16/712.2.自动仪器药敏系统自动仪器药敏系统 药敏试验方法简介药敏试验方法简介17/71纸片扩散法（纸片扩散法（K-B法）法）n原理：抑菌圈大小反应受试菌对测定药品原理：抑菌圈大小反应受试菌对测定药品敏感程度，并与该药对测试菌敏感程度，并与该药对测试菌MIC呈负相关。呈负相关。药敏试验方法简介药敏试验方法简介18/71耐药耐药 中介中介 敏感敏感RISLog2.MIC d1 d2 抑菌圈直径（抑菌圈直径（mm)MIC与抑菌圈直径线性关系与抑菌圈直径线性关系药敏试验方法简介药敏试验方法简介19/711.准备抗菌药品纸片和水解酪蛋白（准备抗菌药品纸片和水解酪蛋白（M-H）培养基；）培养基；2.挑取孵育挑取孵育16 24小时已分纯菌落，置于生理盐水小时已分纯菌落，置于生理盐水管中，振荡混匀后校正浓度至管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准；麦氏标准；药敏试验方法简介药敏试验方法简介20/713.用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多出用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多出菌液菌液，然，然后在后在MH琼脂表面均匀涂布接种琼脂表面均匀涂布接种3次，每次次，每次旋转平板旋转平板60度度，最终沿平板内缘涂抹最终沿平板内缘涂抹1周周；4.平板在室温下干燥平板在室温下干燥35min，用无菌镊子或商品化，用无菌镊子或商品化纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面；纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面；药敏试验方法简介药敏试验方法简介21/715.35孵育孵育1624小时，量小时，量取抑菌圈直径；取抑菌圈直径；6.依据抑菌环直径，按照依据抑菌环直径，按照CLSI标准判读，汇报敏感、标准判读，汇报敏感、中介、耐药。中介、耐药。药敏试验方法简介药敏试验方法简介22/712024/1/23 周二23CLSI对对K-B法标准化要求法标准化要求n纸片药品含量、细菌接种浓度、培养基、纸片药品含量、细菌接种浓度、培养基、平皿厚度、孵育时间、环境、判定标准、平皿厚度、孵育时间、环境、判定标准、质控方法等；常规测试、汇报抗生素。质控方法等；常规测试、汇报抗生素。n不一样药判定标准不一样；不一样菌判定不一样药判定标准不一样；不一样菌判定标准也不一样标准也不一样。2024/1/23 周二药敏试验方法简介药敏试验方法简介23/71扩散法药敏影响原因扩散法药敏影响原因n培养基pH值7.2-7.4营养程度（肠球菌能生长）厚度抗生素拮抗剂含量（用29212监控）钙镁离子含量、锌离子含量（用27853氨基糖苷类和亚胺配能结果监控）n菌悬液浓度高抑菌环缩小（假耐药）浓度低则扩大（假敏感）细菌纯度气体环境普通细菌放CO2时因为碳酸影响，药品活性受到影响，形成假敏感或假耐药苛养菌放普通环境生长不良，造成假敏感培养时间粘液性铜绿需48小时测量方法药敏试验方法简介药敏试验方法简介24/71稀释法稀释法n以一定浓度抗菌药品与含有受试菌培养基以一定浓度抗菌药品与含有受试菌培养基进行一系列不一样倍数稀释（通常为双倍进行一系列不一样倍数稀释（通常为双倍稀释），培养稀释），培养1624h后，经过观察细菌生后，经过观察细菌生长现象来测得药品对受试菌最低抑菌浓度长现象来测得药品对受试菌最低抑菌浓度（MIC）。）。2024/1/23 周二药敏试验方法简介药敏试验方法简介25/71稀释法（稀释法（MIC法）法）nMIC法：分为常量法和微量法n常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法n微量法：微量肉汤稀释法简化双浓度折点法 ATB药敏简化常规浓度分布MIC法 BD、德灵药敏动力学计算MIC法 VITEK32、VITEK2药敏药敏试验方法简介药敏试验方法简介26/71肉汤稀释法肉汤稀释法l不生长不生长=抗生素抑制细菌生长抗生素抑制细菌生长 l生长生长=抗生素无法抑制细菌生长抗生素无法抑制细菌生长MIC(最小抑菌浓度最小抑菌浓度)=抗生素可抑制细菌生长抗生素可抑制细菌生长最小浓度。最小浓度。.250.512481632MIC=8Increasing Antibiotic Conc.药敏试验方法简介药敏试验方法简介27/71常量稀释法常量稀释法n药敏试验参考方法：将标准接种物加入含対倍稀释抗生素MH肉汤管中.过夜培养.MIC 即是能抑制细菌生长含最低抗生素浓度那一管所标示浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后抗生素加入融化后平衡到50MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小斑点，浓度也为104CFU/ml).解释标准(S or R)是建立在体内可到达抗生素浓度水平上104 cfu/ml4210.5 0.25 0.120 g/ml药敏试验方法简介药敏试验方法简介28/71微量肉汤稀释法微量肉汤稀释法药敏试验方法简介药敏试验方法简介29/71药敏试验方法简介药敏试验方法简介30/71药敏试验方法简介药敏试验方法简介31/71n接种后应充分混匀，但不能有气泡产生n静置培养n培养温度；35n气体环境：全部细菌（包含苛养菌）均置大气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌置微需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2n培养时间：18小时药敏试验方法简介药敏试验方法简介32/71n药敏结果汇报可用药敏结果汇报可用MIC（g/ml）或对照）或对照CLSI标准用标准用S、R和和I汇报。汇报。n对于稀释法批量试验，有时需要汇报对于稀释法批量试验，有时需要汇报MIC50、MIC90。2024/1/23 周二药敏试验方法简介药敏试验方法简介33/71稀释法药敏影响原因稀释法药敏影响原因n培养基pH值 7.2-7.4营养程度抗生素拮抗剂含量钙镁离子含量（钙10-25；镁10-12.5g/ml）n菌悬液（5104CFU/ml）接种效应n浓度高MIC抬高n浓度低MIC压低细菌纯度气体环境全部需氧细菌均放普通大气环境。假如放CO2，因为碳酸影响，药品活性受到影响，形成假敏感或假耐药培养时间真菌需48小时奴卡菌需5天药敏试验方法简介药敏试验方法简介34/71E-test法法n将稀释法和扩散法原理结合起来，直接测将稀释法和扩散法原理结合起来，直接测定药品对受试菌定药品对受试菌MIC。2024/1/23 周二药敏试验方法简介药敏试验方法简介35/71MIC 值标注于试值标注于试条光面条光面Etest 试条试条毛面贴于毛面贴于MHA上上药敏试验方法简介药敏试验方法简介36/71Etest 操作程序操作程序按照扩散法标准操作涂布接种贴上试条并培养15-18小时读取抑菌浓度并按标准解释药敏试验方法简介药敏试验方法简介37/71 细菌生长区细菌生长区E试条试条细菌生长抑制区细菌生长抑制区 256 128 80.16判读判读MIC2024/1/23 周二药敏试验方法简介药敏试验方法简介38/71肺炎链球菌肺炎链球菌青霉素青霉素 MIC=3 g/ml 结果读取结果读取药敏试验方法简介药敏试验方法简介39/71药敏试验方法简介药敏试验方法简介40/71BD PhoenixTM-100 凤凰全自动细菌判定凤凰全自动细菌判定凤凰全自动细菌判定凤凰全自动细菌判定/药敏检药敏检药敏检药敏检测系统测系统测系统测系统最大标本容量：对最大标本容量：对100个标本同时进行个标本同时进行判定与药敏测试！判定与药敏测试！药敏试验方法简介药敏试验方法简介41/71药敏试验方法简介药敏试验方法简介42/71药敏试验方法简介药敏试验方法简介43/71判定部分：判定部分：l51孔判定试验孔判定试验l改良经典试验改良经典试验l显色显色荧光检测荧光检测l无需附加试验与试剂无需附加试验与试剂药敏部分：药敏部分：l85孔药敏试验孔药敏试验l比浊比浊氧化还原氧化还原（专利）（专利）l实测倍比稀释实测倍比稀释MIC值值l药品种类与浓度梯度最多药品种类与浓度梯度最多l耐药机制检测同时进行耐药机制检测同时进行封闭式设计，安全无泄漏封闭式设计，安全无泄漏先进判定先进判定/药敏复合板设计药敏复合板设计药敏试验方法简介药敏试验方法简介44/71PhoenixTM100判定板革兰氏阳性板、革兰氏阴性板生化反应组合革兰氏阳性板、革兰氏阴性板生化反应组合革兰氏阳性菌判定板革兰氏阳性菌判定板革兰氏阴性菌判定板革兰氏阴性菌判定板判定部分：判定部分：l51孔判定试验孔判定试验,改良经典试验改良经典试验l显色显色荧光检测荧光检测,无需附加试验与试剂无需附加试验与试剂药敏试验方法简介药敏试验方法简介45/71药敏试验方法简介药敏试验方法简介46/71药敏试验方法简介药敏试验方法简介47/71判定试验方法判定试验方法n在研究了上百种反应底物基础上，选择了在研究了上百种反应底物基础上，选择了45种反应底物。种反应底物。n检测板每检测板每20分钟检测一次分钟检测一次Green,blue and red 检测显色反应检测显色反应UV light检测荧光反应检测荧光反应panelpanel药敏试验方法简介药敏试验方法简介48/71Phoenix工作流程工作流程n 从经过夜纯培养新鲜平板上挑取菌落药敏试验方法简介药敏试验方法简介49/71Phoenix工作流程工作流程n 在ID肉汤中制成标准浊度（0.50.6麦 氏单位）菌悬液药敏试验方法简介药敏试验方法简介50/71n 加一滴AST指示剂到AST肉汤中 Phoenix工作流程工作流程药敏试验方法简介药敏试验方法简介51/71n 从ID肉汤管中准确吸收25 L菌悬液，加入到AST肉汤中Phoenix工作流程工作流程药敏试验方法简介药敏试验方法简介52/71n 将肉汤倒入检测板，盖盖子。检测板 已准备好，能够上机检测。Phoenix工作流程工作流程巧妙重力加样技术巧妙重力加样技术药敏试验方法简介药敏试验方法简介53/71n 扫描板条，输入资料Phoenix工作流程工作流程药敏试验方法简介药敏试验方法简介54/71n 将检测板放入仪器（随意位置）Phoenix工作流程工作流程药敏试验方法简介药敏试验方法简介55/71n仅需区分革兰氏染色即可选板n板条种类齐全：判定板、药敏板、判定药敏复合板n同时提供独立密封包装判定肉汤和药敏肉汤，无需用户配制。n试剂常温保留配套试剂配套试剂药敏试验方法简介药敏试验方法简介56/71n强大软件支持：BDXpert微生物教授系统帮助解释和监测检测结果n检测结果分别可分别传入LIS系统或BD Epicenter数据管理系统或打印机，并能进行各种统计学分析强大软件系统强大软件系统药敏试验方法简介药敏试验方法简介57/71n判定能力判定能力n 革兰氏阳性菌判定180种n 革兰氏阳性球菌n 革兰氏阳性杆菌n 革兰氏阴性菌判定200种n 革兰氏阴性发酵杆菌n 革兰氏阴性非发酵杆菌n无需附加试验无需附加试验n95-96%准确性准确性判定时间判定时间 minimum 1:26 hr maximum 12:25 hr average 3:24 hr median 2:26 hr 95th%6:26 hr优异判定性能优异判定性能药敏试验方法简介药敏试验方法简介58/71检测反应孔内微生物生长情况检测反应孔内微生物生长情况浊度浊度（传统方法）：（传统方法）：微生物生长形成小颗粒和聚集成团块微生物生长形成小颗粒和聚集成团块 氧化还原作用氧化还原作用（BD专利技术）专利技术）：经过药敏试验指示剂颜色改变检测微生物新陈代谢经过药敏试验指示剂颜色改变检测微生物新陈代谢浊度与氧化还原改变经过红、蓝、绿光每浊度与氧化还原改变经过红、蓝、绿光每20分钟检测一次分钟检测一次 药敏试验方法药敏试验方法药敏试验方法简介药敏试验方法简介59/71n药敏种类与时间药敏种类与时间葡萄球菌属链球菌肠球菌属肠杆菌属其它革兰氏阴性杆菌GN-90%in 5 HrsGP-80%in 6 Hrs药敏特点药敏特点对倍稀释药品浓度真正MIC检测延迟耐药检测急诊汇报快速完成功效 耐药检测无需附加板条耐药检测无需附加板条 自动检测自动检测18种耐药机制种耐药机制产超广谱产超广谱Beta内酰胺酶检测内酰胺酶检测(ESBL)耐甲氧西林葡萄球菌检测耐甲氧西林葡萄球菌检测(MRS)链霉素高耐株检测链霉素高耐株检测(HLSR)庆大霉素高耐株检测庆大霉素高耐株检测(HLGR)耐万古霉素肠球菌检测耐万古霉素肠球菌检测(VRE)产产Beta内酰胺酶革兰氏阳性菌检测内酰胺酶革兰氏阳性菌检测优异药敏性能优异药敏性能药敏试验方法简介药敏试验方法简介60/71仪器判读结果仪器判读结果n仪器自动统计每次判读每个反应孔结果。仪器自动统计每次判读每个反应孔结果。n将反应结果与上一次判读结果进行比较。将反应结果与上一次判读结果进行比较。n当两次结果没有差异，则该反应结束。当两次结果没有差异，则该反应结束。n内置运算法则：颜色比率改变内置运算法则：颜色比率改变n依时间而变数据库：依时间而变数据库：2 2、3 3、4 4、6 6、1212小时，依据每个小时，依据每个测试周期判读结果产生测试周期判读结果产生“百分比图百分比图”，如取得足够信，如取得足够信息，则给出判定结果。息，则给出判定结果。n标准菌量标准菌量,可信度可信度9090，给出结果。，给出结果。药敏试验方法简介药敏试验方法简介61/71BDXpert微生物教授系统微生物教授系统判定试验判定试验BDXpert教授教授系统系统 -NCCLS -DIN -SFM -BD Rules汇报汇报 -ID -MI -Rule set SIR -BDXpert SIR -特殊信息特殊信息 药敏试验药敏试验药敏试验方法简介药敏试验方法简介62/71BDXpert微生物教授系统微生物教授系统目标目标n对药敏结果进行解释与修正，确保药敏试验结果准确可靠，从而指导临床正确进行抗感染治疗 教授规则来自于已确定标准（NCCLS,DIN,SFM)药品研发单位文件资料已广为接收文件资料和经验连续更新药敏试验方法简介药敏试验方法简介63/71BDXpert微生物教授系统规则微生物教授系统规则应用应用nSIR结果解释来自于教授系统规则设置NCCLS,DIN,SFM,Customn药品分级规则n天然耐药和天然敏感规则n耐药标识规则肠杆菌科：ESBL葡萄球菌：MRS,beta-内酰胺酶(GP BL)肠球菌：VRE,HLGR,HLSR药敏试验方法简介药敏试验方法简介64/71举例：举例：SIR解释解释 规则要求 肠杆菌科细菌Ampicillin breakpoints:S8 (I=16)R32Ref:Table 2A(NCCLS M100-S12,)Phoenix 显示假如 待检菌是肠杆菌科细菌，且药品为 ampicillin，MIC=2 那么 结果显示为“S”BDXpert微生物专家系统规则的微生物专家系统规则的应用应用药敏试验方法简介药敏试验方法简介65/71举例：天然耐药举例：天然耐药规则要求规则：C.freundii 在体内对ampicillin和 amoxicillin天然耐药Ref:Brown.et,al.1989J.Antimicrob.Chemother.Phoenix显示假如 待检菌是C.freundii且 AM is“S”or“I”或 AMX is“S”or“I”那么 将AM or AMX 结果改为“R”，且汇报显示该待检菌是对该抗生素天然耐药；检验判定结果和待检菌是否纯BDXpert微生物专家系统规则的微生物专家系统规则的应用应用药敏试验方法简介药敏试验方法简介66/71结果显示结果显示 判定结果(用户可修改)MIC值来自标准解释BDXpert 教授系统SIR结果最终止果 (用户可修改)判定及药敏结果显示判定及药敏结果显示药敏试验方法简介药敏试验方法简介67/71汉字汇报系统汉字汇报系统药敏试验方法简介药敏试验方法简介68/71TCP/IP 以太网以太网EpiCenter 工作站工作站PhoenixID/ASTBACTEC 9000Blood CulturingBACTECMGIT 960LIS I/FBDProbeTec ET高级中央数据管理系统高级中央数据管理系统药敏试验方法简介药敏试验方法简介69/71仪器特点仪器特点n同时进行100个样本判定/药敏测试n独特加样方式，准确均匀n图形界面，仪器操作简单n完备细菌菌种库n药敏试验准确，真正MIC检测n各种细菌耐药机制检测，延迟耐药检测，无须附加试验n完善教授系统，保障药敏结果准确性，内置各种标准规则（NCCLS，DIN，SFM）nLIS 接口，适应试验室联网需求n系统无需尤其维护n有汉字统计汇报软件药敏试验方法简介药敏试验方法简介70/71药敏试验方法简介药敏试验方法简介71/71