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1、73 芜湖市第二人民医院检验科标准操作文件 标准操作程序 项 目 甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序 方 法 ELISA方法 编写人 冯岚 日期 2005/01/01 审核人 曹进平 日期 2005/01/01 批准人 陈健康 日期 2005/01/01 文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科 本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次 文件编号 CHDEYY-JYK-MY-001 文件版本号 第1版 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任
2、 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜湖市第二人民医院检验科免疫室 甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序 WHDRYY-JYK-MY-001 共2页 第1页 2005-01-01 [目的] 保证检测结果准确可靠。 [该SOP变动程序] 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经专业主管、科主任 批准签字。 [标本的采取和保存] 采静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。 [测定原理] 采用兔抗-人IgMu链包被反应被，加入待测标
3、本，同时加入HAVAg，抗HAV-HRP，如待测标本中含有抗-HAV-IgM时，就能与包被兔抗-人IgMu链结合，并且与HAVAg,抗-HAV-HRP结合成复合物，加TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。 [操作步骤] 1. 将待测标本用生理盐水作（1：1000）稀释，每孔加入稀释标本100ul，设阴、阳性对照各2空，每孔加入阴性对照（或阳性对照）100ul（或2滴），并设空白对照一孔，封板，置37度孵育20分钟。 2. 洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各空，静置5秒，甩干，重复三次后拍干。 3. 每孔加入HAVAg30ul（或一滴），酶结
4、合物50ul（或一滴），（空白对照孔不加），充分混匀，封板，置37度孵育20分钟。 4. 洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各空，静置5秒，甩干，重复三次后拍干。 5. 每孔加显色剂A液、B液各50ul（或一滴），充分混匀，封板，置37度孵育10分钟。 6. 每孔加入终止液50ul（或一滴），混匀。 7. 用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。 [结果判断] 样品OD值除以阴性对照平均OD值大于或等于2.1判断为阳性，否则为阴性 阴性对照OD值低于0.05作0.
5、05计算，高于0.05按实际OD值计算 [临床意义] 血清中HAV—IgM在亚临床期即已出现，其滴度在感染后3个月维持在1000以上，早被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。 [注意事项] 1． 试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。 2． 从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。 3． 洗板时所用的洗水纸请勿反复。 4． 不同批号试剂请勿通用。 5． 结果判断须在10分钟内完成。 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜湖市第二人民医院检验科免疫室 甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序 WHDEYY-J
6、YK-MY-001 共2页 第2页 2005-01-01 6． 封片不能重复使用。 7． 用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。 标准操作程序 项 目 乙肝表面抗原检测的标准操作程序 方 法 ELISA方法 编写人 冯岚 日期 2005/01/01 审核人 曹进平 日期 2005/01/01 批准人 陈健康 日期 2005/01/01 文件
7、分发部门和/或个人 免疫室，医务科 本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次 文件编号 WHDEYY-JYK-MY-002 文件版本号 第1版 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜湖市第二人民医院检验科免疫室 乙肝表面抗原检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-002 共2页 第1页 2005-01-01 [目的] 保证检测结果准确可靠。 [该SOP变动程序] 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，
8、并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 [标本的采取和保存] 随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。 [测定原理] 双抗体夹心法测HBsAg：抗S包被反应板，加入待测血清后，再加入酶标抗S，加底物显色为阳性，证明样本中含被测物，含量与显色程度成正比。 [操作步骤] 1． 实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。 2． 加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。 3． 加酶结合物：每孔0.05毫升，
9、空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟。 4． 洗板： 1） 手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。 2） 洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。 5． 加显色剂：先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。 6． 终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。 7． 测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。 [结果判断] Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*2.1
10、 标本OD值大于COV为阳性，标本OD值小于COV为阴性 注：阴性对照OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。 [临床意义] HbsAg在感染早期出现于患者血循环中，可持续数月，数年乃至终生，是诊断HBV感染最常用的指标。但所谓HBV感染的“窗口期”，HbsAg可以阴性，而抗HBc等其他HBV血清标志物则可阳性。 [注意事项] 1试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。 2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。 3洗板时所用的洗水纸请勿反复。 实验室名称 项目 编号 制定日期
11、 芜湖市第二人民医院检验科免疫室 乙肝表面抗原检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-002 共2页 第2页 2005-01-01 4不同批号试剂请勿通用。 5结果判断须在10分钟内完成。 6封片不能重复使用。 7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。 标准操作程序 项 目 乙肝表面抗体检测的标准操作程序 方 法 ELISA方法 编写人 冯岚 日期
12、2005/01/01 审核人 曹进平 日期 2005/01/01 批准人 陈健康 日期 2005/01/01 文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科 本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次 文件编号 WHDEYY-JYK-MY-003 文件版本号 第1版 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜湖市第二人民医院检验科免疫室 乙肝表面抗体检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-003 共2页 第1页 2005-0
13、1-01 [目的] 保证检测结果准确可靠。 [该SOP变动程序] 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 [标本的采取和保存] 随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。 [测定原理] 双抗原夹心一步法测HbsAb：S抗原反应包被板，加入待测血清后，再加入酶标抗S，加底物显色为阳性，证明样品中含被测物，含量与显色程度成正比。 [操作步骤] 1． 实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。
14、 2． 加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。 3． 加酶结合物：每孔0.05毫升，空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟。 4． 洗板： a) 手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。 b) 洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。 5． 加显色剂：先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。 6． 终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。 7． 测定：用酶标仪读数，可选择波长450
15、nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。 [结果判断] Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*2.1 标本OD值大于COV为阳性，标本OD值小于COV为阴性 注：阴性对照OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。 [临床意义] 抗—HBs为HBV的中和抗体，有清除HBV，防止在感染的作用，抗—HBs一般出现于乙肝患者恢复期，提示感染已终止。此外，注射过乙肝疫苗的人，抗—HBs阳性。 [注意事项] 1试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。 2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应
16、及时封存，置冰箱内储藏备用。 3洗板时所用的洗水纸请勿反复。 4不同批号试剂请勿通用。 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜湖市第二人民医院检验科免疫室 乙肝表面抗体检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-003 共2页 第2页 2005-01-01 5结果判断须在10分钟内完成。 6封片不能重复使用。 7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。 标准操作程序 项 目
17、 乙肝E抗原检测的标准操作程序 方 法 ELISA方法 编写人 冯岚 日期 2005/01/01 审核人 曹进平 日期 2005/01/01 批准人 陈健康 日期 2005/01/01 文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科 本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次 文件编号 WHDEYY-JYK-MY-004 文件版本号 第1版 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜湖市第二人民医院检验科免疫
18、室 乙肝E抗原检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-004 共2页 第1页 2005-01-01 [目的] 保证检测结果准确可靠。 [该SOP变动程序] 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 [标本的采取和保存] 随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。 [测定原理] 双抗体夹心法测HbeAg：抗e包被反应板，加入待测血清后，再加入酶标抗e，加底物显色为阳性，证明样本中含被测物，含量与显色程度成正比。 [操作步骤
19、] 1． 实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。 2． 加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。 3． 加酶结合物：每孔0.05毫升空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟。 4． 洗板： a) 手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。 b) 洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。 5． 加显色剂：先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。
20、 6． 终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。 7． 测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。 [结果判断] Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*2.1 标本OD值大于COV为阳性，标本OD值小于COV为阴性 注：阴性对照OD值低于0.05按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。 [临床意义] HBeAg是HBV的核心部分，故一般认为HBeAg阳性是具有传染性的标志，在乙肝潜伏期乃至整个病程中，HBeAg均可检出。抗HBe是HBeAg的相应抗体。一般认为HbeAg消失和抗HBe出现是病情趋向好转的
21、征象。但并不意味着HBV DNA停止复制，或传染性消失。 [注意事项] 1．试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。 2．从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。 3．洗板时所用的洗水纸请勿反复。 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜湖市第二人民医院检验科免疫室 乙肝E抗原检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-004 共2页 第2页 2005-01-01 4．不同批号试剂请勿通用。 5．结果判断须在10分钟内完成。 6．封片不能重复使用。 7．用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传
22、染病实验室检查规程操作。 标准操作程序 项 目 乙肝E抗体检测的标准操作程序 方 法 ELISA方法 编写人 冯岚 日期 2005/01/01 审核人 曹进平 日期 2005/01/01 批准人 陈健康 日期 2005/01/01 文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科 本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次 文件编号 WHDEYY-JYK-MY-005
23、 文件版本号 第1版 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜湖市第一人民医院检验科免疫室 乙肝E抗体检测的标准操作程序 WDYYY-JYK-MY-005 共2页 第1页 2005-01-01 [目的] 保证检测结果准确可靠。 [该SOP变动程序] 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 [标本的采取和保存] 随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避
24、免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。 [测定原理] 竞争抑制一步法测HBeAb：抗e包被反应板，加入待测血清后，加入中和e抗原，再加入酶标抗e，加底物不显色的为阳性，证明样本含被测物，含量与显色程度成反比。 [操作步骤] 1． 验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。 2． 加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。 3． 加中和试剂：每孔0.05毫升，空白对照孔不加。 4． 加酶结合物：每孔0.05毫升空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟。 5． 洗板： a) 手工洗
25、板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。 b) 洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。 6． 加显色剂：先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分钟。 7． 终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。 8． 测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。 [结果判断] Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*0.3 标本OD值大于或等于COV为阴性，标本OD值小于COV为阳性 注：非原倍血
26、清样品（稀释血清、质控血清）COV=阴性对照*0.5 [临床意义] 抗HBe是HBeAg的相应抗体。一般认为HbeAg消失和抗HBe出现是病情趋向好转的征象。但并不意味着HBV DNA停止复制，或传染性消失。 [注意事项] 1试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。 2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。 3洗板时所用的洗水纸请勿反复。 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜湖市第二人民医院检验科免疫室 乙肝E抗体检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-005 共2页 第2页 200
27、5-01-01 4不同批号试剂请勿通用。 5结果判断须在10分钟内完成。 6封片不能重复使用。 7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。 标准操作程序 项 目 乙肝核心抗体检测的标准操作程序 方 法 ELISA方法 编写人 冯岚 日期 2005/01/01 审核人 曹进平 日期 2005/01/01 批准人 陈健康 日期 2005/01/01 文件
28、分发部门和/或个人 免疫室，医务科 本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次 文件编号 WHDEYY-JYK-MY-006 文件版本号 第1版 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜市第二民医院检验科免疫室 乙肝核心抗体检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-006 共2页 第1页 2005-01-01 [目的] 保证检测结果准确可靠。 [该SOP变动程序] 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报
29、经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 [标本的采取和保存] 随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。 [测定原理] 竞争抑制一步法测HBcAb：抗c包被反应板，加入待测血清后，加入中和c抗原，再加入酶标抗抗c，加底物不显色的为阳性，证明样本含被测物，含量与显色程度成反比。 [操作步骤] 1． 实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。 2． 加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升，并设阳性对照2孔，阴性对照2孔，空白对照1孔。1）1：30稀释血清（
30、血浆）检测结果代表临床意义，待检标本可用稀释后的洗涤液加以稀释2）原倍血清（血浆）检测结果代表流行病学意义。 3． 酶结合物：每孔0.05毫升（抗—HBc1：30稀释血清代表临床意义，可用稀释后的洗涤液加以稀释；原倍血清代表流行病学意义），空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟。 4． 洗板： a) 手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。 b) 洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。 5． 加显色剂：先加显色剂A，每孔0.05毫升；再加显色剂B，每孔0.05毫升；充分混匀，放置37℃避光孵育15分
31、钟。 6． 终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。 7． 测定：用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm，读取各孔OD值。 [结果判断] Cutoff值计算：原倍血清COV=阴性对照平均OD值*0.3 1：30稀释血清COV=阴性对照平均OD值*0.5 标本OD值大于或等于COV为阴性，标本OD值小于COV为阳性。 [临床意义] 抗HBc是HBeAg的相应抗体，也是HBV感染后血清中最早出现的HBV的标志性抗体。持续时间长，甚至终生存在。几乎所有个体在感染HBV后都能产生抗HBc，故它是乙肝流行病学调查的良好指标。在HBV感染的“窗口期
32、抗HBc常是唯一可测出的HBV血清标志物。 [注意事项] 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜市第二民医院检验科免疫室 乙肝核心抗体检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-006 共2页 第2页 2005-01-01 1试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。 2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。 3洗板时所用的洗水纸请勿反复。 4不同批号试剂请勿通用。 5结果判断须在10分钟内完成。 6封片不能重复使用。 7用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。
33、 标准操作程序 项 目 乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操作程序 方 法 ELISA方法 编写人 冯岚 日期 2005/01/01 审核人 曹进平 日期 2005/01/01 批准人 陈健康 日期 2005/01/01 文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科 本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次 文件编号 WHDEYY-JYK-MY-007 文件版本号 第1版 医
34、务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜市第二民医院检验科免疫室 乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-007 共1页 第1页 2005-01-01 [目的] 保证检测结果准确可靠。 [该SOP变动程序] 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 [标本的采取和保存] 随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复
35、冻融，不可用NaN3防腐。 [测定原理] 用乙肝病毒Pre S1蛋白抗体和抗HBS分别用作酶标记抗体和包被抗体。采用ELISA双抗体夹心一步法检测标本中的乙肝病毒Pre S1蛋白。 [操作步骤] 1． 将包被条固定于支架并编上序号。 2． 设阳性对照2孔，每孔加入阳性对照50微升，阴性对照2孔，每孔加入阴性对照50微升，空白对照一孔，加入生理盐水100微升。然后，依次在反应孔内加入待测样品50微升，除空白孔外，每孔再加酶结合物50微升，置微型震荡器混匀5秒后，盖好封片放37℃孵育60分钟。 3． 弃去反应孔内液体并拍干，用工作洗涤液（浓缩洗涤液1毫升加19毫升蒸馏水稀释后即为工作洗
36、涤液）注满各孔，静置30秒，再拍干，重复洗涤5次。 4． 每孔加入TMB显色剂A50微升，在加入TMB显色剂B50微升，37℃中显色10~15分钟。 5． 每孔加入终止液50微升。 6． 用酶标仪波长450nm读数，先用空白孔调零，然后读取各测定孔OD值。 [结果判断] 阴性对照A值*2.5=临界值 阴性对照小于0.05时，按0.05计算，高于0.05时按实际OD值计算。待测样本大于临界值即为阳性，待测样本小于临界值即为阴性。 [临床意义] 乙肝病毒Pre—S1抗原（前s1抗原）主要存在于病毒完整颗粒中，表示病毒具有复制功能和传染性。其敏感性好于HBeAg，可弥补由于HBeAg
37、变异等造成的HBeAg阴性的临床“误导”。在早期诊断上早于乙肝两对半和ALT。可与HBv—DNA取得几乎同样的敏感性。 [注意事项] 1． 包被条需密封防潮，从冰箱取出后，在室温中平衡不少于15分钟。 2． 保存在2~8度，在有效期内使用。 3． 终止液终止后，需在30分钟内测定结果。 4． 不同批号试剂请勿通用。。 5．用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。 标准操作程序 项 目 丙型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序 方 法 ELISA方法 编写人 冯岚 日期 2005/01/01 审核人
38、曹进平 日期 2005/01/01 批准人 陈健康 日期 2005/01/01 文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科 本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次 文件编号 WHDEYY-JYK-MY-008 文件版本号 第1版 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜市第二民医院检验科免疫室 丙型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-008 共2页 第1页 2005-01-01 [目的] 保证检测结
39、果准确可靠。 [该SOP变动程序] 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 [标本的采取和保存] 随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。 [测定原理] 采用ELISA间接抗体两步法测抗HCV，用HCV抗原包被反应板加入待测标本后再加入酶标记第二抗体，加底物显色为阳性，证明样本中含丙肝抗体，含量与显色程度成正比。 [操作步骤] 1． 每次试验设阴性、阳性对照各两孔，分别加入阴、阳性对照血清100ul，再设一孔空白对照，加入样品稀释液1
40、00ul。其余孔加100ul样品稀释液，再加待测血清10ul。充分混匀后，置37℃温育30分钟。 2． 洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。 3． 每孔加酶结合物100ul，（空白对照除外），置37℃温育20分钟。 4． 洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。 5． 每孔加显色剂A、B各50ul，轻轻震荡后，37℃避光静置10分钟。 6． 每孔加入终止液50ul终止反应，用酶标仪读数，可选择波长450nm（以空白调零），读取各孔OD值。 [结果判断] 1． 阳性对照平均值大于1.20，实验结果有效。 2． 实验设计要求阳性、阴性对照OD值之差应大于1.20，否
41、则本次实验无效。 3． 若阴性对照值小于0.050时，按0.050计算。 4． 临界值=阴性对照平均值+0.1 5． 测试标本的计算值小于临界值则为HCV抗体阴性。 6． 测试标本的计算值等于或大于临界值则为HCV抗体阳性。 [临床意义] 抗—HCV阳性仅提示已被HCV感染，不是获得免疫力的标志。急性期多为IgM型，慢性期多为IgG型，两者均为非保护性抗体，是具有传染性的标志。 [注意事项] 1． 试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。 2． 从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。 3． 洗板时所用的洗
42、水纸请勿反复。 4． 不同批号试剂请勿通用。 5． 结果判断须在10分钟内完成。 6． 封片不能重复使用。 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜市第二民医院检验科免疫室 丙型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序 WHDEYY-JYK-MY-008 共2页 第1页 2005-01-01 7．用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。 标准操作程序 项 目 丁型肝炎病毒抗体检测的
43、标准操作程序（IgG） 方 法 ELISA方法 编写人 冯岚 日期 2005/01/01 审核人 曹进平 日期 2005/01/01 批准人 陈健康 日期 2005/01/01 文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科 本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一次 文件编号 WHDEYY-JYK-MY-009 文件版本号 第1版 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜市第二民医院检验科免疫室 丁型肝炎
44、病毒抗体检测的标准操作程序（IgG） WHDEYY-JYK-MY-009 共2页 第1页 2005-01-01 [目的] 保证检测结果准确可靠。 [该SOP变动程序] 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 [标本的采取和保存] 随机静脉血2ml，分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。 [测定原理] 采用丁型肝炎病毒特异性抗原成分作为包被抗原，采用ELISA法检测丁型肝炎病毒抗体。样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样
45、品中含特异性抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原—抗体复合物被吸附到固相上，再加上酶标记的第二抗体，最终形成抗原—抗体—酶标二抗复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色，反之若样品中不含特异性抗体，则加入显色剂后不显色。 [操作步骤] 1． 配洗液：将洗涤液（20倍）与蒸馏水按1：19的比例稀释，充分摇匀后备用。 2． 加样品稀释液：用加样器在微孔反应条孔中加入样品稀释液每孔100ul，空下四孔准备加对照。 3． 加标本和留空白：将每份待检标本10ul分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本做空白对照，标好位置。 4． 加对照：在预先空下的4孔分别加入阴性对照两孔，阳性对
46、照两孔每孔100ul，标好位置，阴、阳对照应在所有待测标本加完后再加，以保证阈值计算的准确性。 5． 温育（一）：充分混匀，37℃温育20分钟。 6． 洗板（一）：洗板机洗板：洗板次数为5次，每次洗液在孔中滞留时间为15~30秒，洗液应注满反应孔，确保每次吸净无残留，全部洗完后在毛巾或洗水纸上用力拍干。 7． 加酶标二抗：各孔中加入酶标二抗100ul。 8． 温育（二）：37℃温育20分钟。 9． 洗板（二）：方法同洗板（一）。 10． 加显色剂：每孔加入显色剂A50ul,全部加完后，再次每孔加入显色剂B50ul，混匀。 11． 温育（三）：37℃显色10分钟。 12． 终止：
47、显色完毕后立即于每孔加50ul终止液，混匀。 13． 判断：终止后应在10分钟内完成判读，用空白对照调零，用酶标仪在450nm波长处测定吸光值。 [结果判断] 1． 对空白对照调零后，两孔阳性对照OD平均值大于两孔阴性对照OD平均值0.5以上，阴性对照OD平均值小于0.10时，方可认为试剂盒有效并且用户操作无误。 2． 阈值的计算：1）两孔阴性对照平均值小于0.06按0.06计算 2）阈值=2.1乘以阴性对照OD平均值 [临床意义] 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜市第二民医院检验科免疫室 丁型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序（IgG）
48、 WHDEYY-JYK-MY-009 共2页 第1页 2005-01-01 HDV是一种有缺陷的病毒，表面被HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依赖于HBV，可与HBV重叠感染或共同感染，HDV感染与暴发型肝炎重症肝炎及肝硬变密切相关。HDV感染的血清学检测测定抗HDV—IgG，一般认为是即往感染。 [注意事项] 1． 试剂使用前应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加，注意均匀用力。 2． 从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内储藏备用。 3． 洗板时所用的洗水纸请勿反复。 4． 不同批号试剂请勿通用。 5． 结果判断须在10分钟内完成。
49、6． 封片不能重复使用。 7． 用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。 标准操作程序 项 目 丁型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序（IgM） 方 法 ELISA方法 编写人 冯岚 日期 2005/01/01 审核人 曹进平 日期 2005/01/01 批准人 陈健康 日期 2005/01/01 文件分发部门和/或个人 免疫室，医务科 本规程自2005年01月01日起实施，每2年复审一
50、次 文件编号 WHDEYY-JYK-MY-010 文件版本号 第1版 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 实验室名称 项目 编号 制定日期 芜市第二民医院检验科免疫室 丁型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序（IgM） WHDEYY-JYK-MY-010 共2页 第1页 2005-01-01 [目的] 保证检测结果准确可靠。 [该SOP变动程序] 本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 [标本的采取和保存] 随机静脉血
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