常用缓冲液配制.doc

实验室常用缓冲液及其配制方法

1、1M Tris-HCl    （pH7.4，7.6，8.0）     
□组份浓度 1 M Tris-HCl 
□配制量 1L 
□配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
              2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
              3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
        浓HCl pH值      
                                                        7.4                         约70mL
                                                        7.6                         约60mL
                                                        8.0                         约42mL
             4. 将溶解定容至1L。
             5. 高温高压灭菌后，室温保存。                          

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5 M Tris-HCl   （pH8.8）  
□组份浓度 1.5 M Tris-HCl 
□配制量 1L 
□配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
             2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
             3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
             4 将溶液定容至1L。
             5. 高温高压灭菌后，室温保存。 

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer   （pH 7.4，7.6，8.0）  
□组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA 
□配制量 1L 
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
            1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL
             500 mM EDTA（pH8.0） 20mL
            2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
            3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
            4. 室温保存。

4、3 M 醋酸钠   （pH5.2） 
□组份浓度 3 M 醋酸钠 
□配制量 100mL 
□配置方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
             2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
             3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
             4. 高温高压灭菌后，室温保存。
5、PBS Buffer       
□组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 
 □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl                      8 g

KCl                      0.2g

Na2HPO4          1.42 g

KH2PO4             0.27g
       2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。
      3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
       4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

6、10 M醋酸铵        
□组份浓度 10 M醋酸铵 
□配制量 100mL
□配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
             2.加去离子水将溶液定容至100mL。
             3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
             4.密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、Tris- HCl平衡苯酚   
□配置方法 
1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。  
2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 
3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
          ① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
          ② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
          ③ 加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 
          ④ 重复操作步骤③。
          ⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 
          ⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
          ⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
          ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、20％（W/V）Glucose    

□组份浓度 20％（W/V）Glucose    
□配制量 100mL 
□配置方法 1. 称取20g Glucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。
             2. 加去离子水将溶液定容至100mL。
             3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

9、Solution I   （质粒提取用）         
□组份浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose      
□配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
                 1M Tris-HCl（pH8.0）           25mL
                  0.5 M EDTA（pH8.0）            20mL
                  20％Glucose（1.11M）           45mL
                  dH2O                           910mL
              2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
              3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。

10、Solution II   （质粒提取用）       
□组份浓度 250mM NaOH，1％（W/V）SDS           
□配制量 500mL 
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
10％SDS                        50mL
2N NaOH                       50mL
             2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀。
             3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

11、Solution III   （质粒提取用）          
□组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH      
□配制量 500mL 
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
                  KOAc                            147g
                  CH3COOH                    57.5mL
              2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。
              3. 加去离子水将溶液定容至500mL。
              4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
12、0.5M EDTA   (pH8.0)             
□组份浓度 0.5 M EDTA            
□配制量 1L
□配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。
             2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。
             3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。
             （注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。）
             4. 加去离子水将溶液定容至1L。
             5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
             6. 室温保存。
13、1 M DTT         
□组份浓度 1 M DTT 
□配制量 20mL
□配置方法 1. 称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。 
             2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。 
            3. 适量分成小份后，-20℃保存。
14、10mM ATP           
□组份浓度 10mM ATP 
□配制量 20mL
□配置方法 1. 称取121mg Na2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。 
            2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。
            3. 适量分成小份，-20℃保存。