人类淋巴细胞培养和染色体标本制备.pptx

单击此处编辑母版标题样式,#,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,第1页,原 理,在细胞生长周期中，中期染色体长短、大小、恒定性正适合咱们对其进行分析、研究。,所以利用人工方法，使大个别分裂细胞处于中期而不向后期转化，并取得之，经处理，制片后观察分析。,人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,第2页,器材与试剂,器材,：,人外周血,5ml,。,培养箱、普通光学显微镜、离心机、水浴箱、天平等。,试管架、刻度离心管、滴管和滴头、酒精灯、冰载玻片等。,人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,第3页,器材与试剂,试剂：,肝素,含,10%,小牛血清,RPMI1640,植物血凝素（,PHA）,秋水仙素（,5,微克,/,毫升）,0.075MKCl，,固定液（甲醇,/,冰乙酸,3:1,）,Giemsa,染液,。,人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,第4页,操 作,1,、,采血,：,取血,3-5ml,肝素抗凝。,2,、,接种,：5,ml,培养液中加入,0.3-0.5,ml,全血并摇匀，每份血样接种,2,瓶，置,37,培养72,h,。,3,、,秋水仙素处理,：,终止培养前1.5,-2h,加秋水仙素（终浓度为0.07,ug,/,ml,），混匀，,37,继续培养。,4,、,搜集细胞,：,将培养细胞混匀吸入刻度离心管（,2,瓶培养物吸入,1,支刻度离心管内），1500,r/min,离心，10,min,。,5,、,低渗处理,：,弃上清，加8,ml,0.075M KCl,溶液，混匀，置,37,水浴,20min,。,人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,第5页,操 作,6,、,预固定,：,低渗处理后，加1,ml,固定液混匀，,5min,后1500,r/min,离心，10,min,。,7,、,固定,：,弃上清，加8,ml,固定液，混匀，室温静置,30min,，1500,r/min,离心，,10min,。,8,、,再固定,：,同上（省略）。,9,、,制备细胞悬液,：,弃上清，视细胞数量多少加适量固定液制成细胞悬液。,10,、,制片,取细胞悬液2-3滴，滴于冰玻上，并快速吹片，酒精灯火焰烤干。,11,、,观察,：,Giemsa,染色，,5min,，自来水冲洗，镜检。,人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,第6页,结 果,光镜,100,倍下人染色体,G,带照片,人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,第7页,注意事项,培养温度,应严格控制在,37,0.5。,培养液,pH,值,7.40.1，偏酸细胞发育不良，偏碱则细胞出现轻度固缩。,PHA,质量和浓度很关键，它对淋巴细胞刺激效应有个体差异较大。（肝素）,秋水仙素,普通最终浓度以0.04-0.08,ug,为宜，处理时间为1-4,h,。,低渗,浓度与时间应掌握好。,固定液,应临用时新鲜配制，固定时一定要彻底打匀。,人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,第8页,