结直肠癌中NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达及与预后的相关性.pdf

J Clin Pathol Res2023,43(6)http:/ 临床与病理杂志结直肠癌中NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达及与预后的相关性王磊1，薛松1，单长凤1，王亚男21.安徽理工大学第一附属医院(淮南市第一人民医院)病理科，安徽 淮南 232007；2.安徽中医药高等专科学校临床医学系，安徽 芜湖 241000摘要 目的：探讨结直肠癌(colorectal cancer，CRC)中非染色体结构维持蛋白凝缩蛋白复合体I亚单位H(non-SMC condensin I complex subunit H，NCAPH)、G 补缀 FHA 域血管新生因子 1(angiogenic factor with G and FHA domains 1，AGGF1)及跨膜4L六家族成员1(transmembrane-4-L-six-family-1，TM4SF1)蛋白质表达之间的关系及临床意义。方法：收集145例CRC术后标本和30例癌旁正常黏膜组织标本，采用免疫组织化学法检测CRC和癌旁正常黏膜组织中NCAPH、AGGF1及TM4SF1蛋白质的表达情况，分析其表达与各种临床病理因素的关系以及三者之间的相关性。结果：在 CRC 和癌旁组织中，NCAPH、AGGF1 及 TM4SF1 的阳性表达率分别为 55.2%、53.1%、60.7%和3.3%、6.6%、0，差异均有统计学意义(均P0.001)。3种蛋白质的表达均与CRC的组织学分化和TNM分期有关(均P0.001)；NCAPH和TM4SF1的表达均与CRC的淋巴结转移有关(均P0.05)；NCAPH和AGGF1的表达均与 CRC 组织脉管侵犯有关(均 P0.05)；AGGF1 和 TM4SF1 的表达均与 CRC 的肿瘤浸润深度有关(均 P0.01)。TM4SF1的表达分别与NCAPH和AGGF1的表达呈正相关(r值分别为0.311和0.517，均P0.001)；同时，AGGF1与NCAPH的表达亦呈正相关(r=0.291，P=0.001)。Kaplan-Meier生存分析表明：NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达上调均与患者的生存率有关，NCAPH、AGGF1及TM4SF1阳性的患者生存率明显低于三者阴性患者(均P0.05)。多因素分析表明：TNM分期、NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达和肿瘤脉管侵犯均是影响CRC根治术后患者预后的独立因素(均P0.05)。结论：CRC组织中NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达上调与CRC的分化程度、转移和预后等因素相关，这些指标的联合检测可能作为判断CRC进展及患者预后的重要指标。关键词 结直肠癌；非染色体结构维持蛋白凝缩蛋白复合体亚单位H；G补缀FHA域血管新生因子1；跨膜4L六家族成员1；预后Correlation of expressions of NCAPH,AGGF1,and TM4SF1 with prognosis of colorectal cancerWANG Lei1,XUE Song1,SHAN Changfeng1,WANG Yanan21.Department of Pathology,First Affiliated Hospital of Anhui University of Science and Technology(Huainan First People s Hospital),Huainan Anhui 232007;2.Department of Clinical Medicine,Anhui College of Traditional Chinese Medicine,Wuhu Anhui 241000,ChinaDOI：10.11817/j.issn.2095-6959.2023.222237收稿日期(Date of reception)：2022-10-28第一作者(First author)：王磊，Email:,ORCID:0009-0002-3012-7371通信作者(Corresponding author)：王磊，Email:,ORCID:0009-0002-3012-7371基金项目(Foundation item)：安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2019A1094)。This work was supported by the Key Natural Science Research Projects of Colleges and Universities in Anhui Province,China(KJ2019A1094).1126结直肠癌中NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达及与预后的相关性 王磊，等ABSTRACT Objective:To elucidate the correlation and clinical significance of expressions of protein non-SMC condensin I complex subunit H(NCAPH),angiogenic factor with G and FHA domains 1(AGGF1),and transmembrane-4-L-six-family-1(TM4SF1)in colorectal cancer(CRC).Methods:A total of 145 postoperative specimens of CRC and 30 specimens of adjacent tissues were collected,and the expression of NCAPH,AGGF1,and TM4SF1 proteins were detected by immunohistochemistry.Analyze the relationship between its expressions and the clinical pathological factors,as well as the correlation between the 3 proteins.Results:The positive expression rates of NCAPH,AGGF1,and TM4SF1 protein in CRC were 55.2%,53.1%,and 60.7%,respectively,whereas in adjacent tissues,the positive expression rates were 3.3%,6.6%,and 0,respectively,and there were significant differences between them(all P0.001).The expressions of these proteins were significantly related to differentiation and TNM stage(all P0.05);the expressions of NCAPH and TM4SF1 were significantly related to lymph node metastasis(both P0.05);the expression of NCAPH and AGGF1 were significantly related to vascular invasion(both P0.05);the expression of AGGF1 and TM4SF1 were significantly related to infiltration depth(both P0.01).The expression of TM4SF1 had a positive relationship with NCAPH and AGGF1(r=0.311,r=0.517,respectively,both P0.001);there was also a positive correlation between expression of AGGF1 and NCAPH(r=0.291,P=0.001).The overexpression of NCAPH,AGGF1,and TM4SF1 were related to poor prognosis,with the survival rates were significantly lower in patients of NCAPH-,AGGF1-,TM4SF1-positive patients than those in NCAPH-,AGGF1-,TM4SF1-negative patients(all P0.05).TNM stage,the expression of NCAPH/AGGF1/TM4SF1,and vascular invasion were independent prognosis factors of CRC(P0.05).Conclusion:The expression of NCAPH,AGGF1,and TM4SF1 in CRC are related to differentiation,metastasis,and prognosis.The combined detection of these indexes has an important role in predicting the progression of CRC and the prognosis of patients.KEY WORDS colorectal cancer;non-SMC condensin I complex subunit H;angiogenic factor with G and FHA domains 1;transmembrane-4-L-six-family-1;prognosis根据世界卫生组织国际癌症研究机构2020年发布的统计数据1，结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是位居世界第3常见的恶性肿瘤，也是导致癌症患者死亡第2大原因。中国人口众多，所以CRC每年的新发以及相关死亡病例均呈现逐年上升趋势，并且大多数患者在就诊时已处于中晚期，癌组织侵袭力强，转移率高，患者预后差2。因此，积极寻找参与CRC进展的分子靶点，并尽可能阐明其诱导转移的机制来预测患者转移风险，从而为临床提供可能的治疗方案，已经迫在眉睫。非染色体结构维持蛋白凝缩蛋白复合体I亚单位H(non-SMC condensin I complex subunit H，NCAPH)是凝聚素I复合体的成员，属于kleisins的蛋白质超家族3。大量研究4-7表明异常的NCAPH表达参与了人类多种发病机制的恶性肿瘤。NCAPH的表达在前列腺癌中显著上调，将其沉默则抑制癌细胞增殖和转移4-5。NCAPH在子宫内膜癌和乳腺癌中具有癌基因的作用，其高表达预示患者预后不良6-7。G 补缀FHA 域血管新生因子 1(angiogenic factor with G and FHA domains 1，AGGF1)位于人类染色体5q13.3，其信使RNA(messenger RNA，mRNA)基因编码的是一种由714个氨基酸组成的蛋白质，该蛋白质随着血管1127临床与病理杂志,2023,43(6)http:/形成开始分泌，在血管中呈现高表达8。大量的研究9-11报道显示：在多种癌组织中，AGGF1明显高于相邻正常组织，并预示患者预后不良。跨膜4L六家族 成 员 1(transmembrane-4-L-six-family-1，TM4SF1)是 跨 膜 4L 六 家 族(transmembrane-4-L-six-family，TM4SF)的创始成员，其特征是4个高度保守的跨膜结构域、2个细胞外环和1个小细胞内环12。TM4SF1最初被定义为一种与肿瘤相关的抗原，它具有某些四跨膜蛋白功能，包括稳定细胞信号复合物以及在细胞增殖、黏附和运动中的作用13。研究14-16证实：TM4SF1在各种上皮癌细胞中高度表达，包括胰腺癌、肝癌、肺癌和膀胱癌。同时，TM4SF1也在肿瘤血管生成的血管内皮细胞中表达上调，并且对血管生成的成熟至关重要17。关于 CRC 组织中 NCAPH、AGGF1 及 TM4SF1 3种蛋白表达之间相关性及可能作用机制的研究报道尚不多见，因此，本研究通过选取145例CRC组织标本，采用免疫组织化学方法从蛋白水平检测NCAPH、AGGF1及TM4SF1蛋白的表达情况，进一步分析其表达之间的相关性，从而探讨3种蛋白表达的变化与CRC侵袭、进展以及患者生存预后的关系。1 资料与方法 1.1 资料收集、筛选并整理淮南市第一人民医院病理科 2017 年 1 月至 2020 年 8 月存档的手术切除 CRC组织标本共计145例(患者术前均未进行放、化疗及其他抗肿瘤治疗)，CRC旁黏膜组织标本共计30例，所有标本均经石蜡包埋处理，所选病例临床、病理以及随访资料均完整，肿瘤病例随访至2022年5月或患者死亡，随访总时间为 865 个月，其中失访16例。患者男91例，女54例，年龄3486(中位数66.3)岁，67岁78例，67岁67例。位于直肠50例，位于结肠 95 例。TNM 分期根据第 8 版美国癌症联合委员会分期标准18，其中I+II期48例，III+IV期97 例；根据腺癌组织分化程度，低分化癌 51 例，中分化癌77例，高分化癌17例。肿瘤平均直径为4.35 cm，5.0 cm 48 例，5.0 cm 97 例。肿瘤浸润深度 T1T2 50 例，T3T4 95 例。患者伴有淋巴结转移者73例，有脉管侵犯者86例。对照组选择30例癌旁正常黏膜组织。所有实验过程均已获得淮南市第一人民医院医学伦理委员会批准(审批号：2021-伦审-068)。1.2 主要试剂兔抗人单克隆抗体NCAPH(PA5-30467)购自美国Thermo Fisher Scientific 公司、兔抗人单克隆抗体AGGF1(ab203680)及 兔 抗 人 多 克 隆 抗 体 TM4SF1(ab113504)均购自美国Abcam公司；ElivisionTM plus试剂盒以及 3,3-二氨基联苯胺(3,3-diaminobenzidine，DAB)显色试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。1.3 免疫组织化学染色所有实验组织标本均已经过4%中性甲醛溶液预先固定、梯度乙醇脱水及石蜡包埋，连续切片，厚度为4 m，再经过二甲苯溶液及梯度浓度的乙醇溶液进行脱蜡处理至水洗。所有免疫组织化学染色步骤均严格依照ElivisionTM plus试剂盒的说明书进行。反应结束后使用DAB进行显色、水洗，再使用苏木精溶液对细胞核进行复染、分化、返蓝、脱水、透明等处理，最后树胶进行封片。在实验中，同时采用磷酸盐缓冲液替代相应一抗作为阴性对照，并选用已知的NCAPH、AGGF1及TM4SF1阳性染色组织作为阳性对照。1.4 免疫组织化学染色结果判定NCAPH是以细胞核内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性；AGGF1以细胞质内出现黄色或棕黄色颗粒为阳性；TM4SF1则是以细胞膜或细胞质出现黄色或棕黄色颗粒为阳性。通过评判3种标记免疫组织化学结果的着色范围及强度的综合计分得出最终结果：0分(不着色)，1分(浅黄色)，2分(黄色)，3分(棕黄色)。随机性选取10个高倍视野，计数阳性肿瘤细胞所占的百分比，0分(75%)。将2个计分结果相乘，得出积分结果，积分3为阴性，积分3则为阳性19。3种抗体免疫标记结果的判读由2位高年资病理医师完成，采用独立双盲法判定实验结果。1.5 统计学处理采用 SPSS 21.0 统计学软件进行数据分析。NCAPH、AGGF1及TM4SF1蛋白在CRC组织与癌旁正常黏膜组织的表达差异、与各临床病理因素的关系以及三者表达之间的相关性采用2、Spearman等级相关检验。在CRC组织中，NCAPH、AGGF1及TM4SF1蛋白表达阳性组与阴性组生存分析均采用Kaplan-Meier法，组间比较采用log-rank检验，多因素分析采用Cox回归。检验水准为=0.05，P0.05为差异有统计学意义。1128结直肠癌中NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达及与预后的相关性 王磊，等2 结 果 2.1 NCAPH、AGGF1及TM4SF1蛋白在CRC组织中的表达及其与相关床病理指标的关系在CRC组织中，NCAPH、AGGF1及TM4SF1蛋白呈阳性表达的分别为80例、77例及88例，阳性率分 别 为 55.2%(80/145)、53.1%(77/145)及 60.7%(88/145)，而癌旁正常黏膜组织阳性表达仅分别为1例、2 例及 0 例，阳性率分别为 3.3%(1/30)、6.6%(2/30)及 0，2 组差异均有统计学意义(均 P0.001)。CRC中3种蛋白质的阳性表达率随着癌组织分化程度的降低均显著升高(均P0.05)。同时，患者TNM分期越晚，3种蛋白质的阳性表达率越高，差异均有统计学意义(均P0.001)。此外，当患者伴有淋巴结转移时，其NCAPH的表达阳性率高于没有转移的患者，组间差异有统计学意义(P0.05)；当肿瘤出现脉管侵犯时，AGGF1蛋白的阳性表达率呈上调趋势，高于没有脉管侵犯的患者，差异有统计学意义(P0.05)；肿瘤浸润深度越深以及出现淋巴结转移，癌组织TM4SF1蛋白表达阳性率则显著升高，组间差异有统计学意义(P0.05；图13，表1)。2.2 CRC组织中NCAPH、AGGF1及TM4SF1表达的相互关系Spearman相关分析显示：NCAPH 蛋白的表达与AGGF1蛋白表达之间呈正相关(r=0.291，P=0.001)；NCAPH蛋白的表达与TM4SF1蛋白表达呈正相关(r=0.311，P0.001)；AGGF1 蛋白的表达与 TM4SF1 蛋白的表达亦呈正相关(r=0.517，P0.001；表2)。AB图2 AGGF1在CRC及癌旁组织中的表达(Elivision，200)Figure 2 Expression of AGGF1 in CRC and adjacent tissue(Elivision,200)A:CRC.B:Adjacent tissue.AGGF1:Angiogenic factor with G and FHA domains 1;CRC:Colorectal cancer.AB图1 NCAPH在CRC及癌旁组织中的表达(Elivision，200)Figure 1 Expression of NCAPH in CRC and adjacent tissue(Elivision,200)A:CRC.B:Adjacent tissue.NCAPH:Non-SMC condensin I complex subunit H;CRC:Colorectal cancer.1129临床与病理杂志,2023,43(6)http:/表1 145例结直肠组织中NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达与临床病理因素的关系Table 1 Correlation of NCAPH,AGGF1,and TM4SF1 expression with clinicopathologic indexes of 145 cases of CRC变量年龄67岁67岁性别男女直径5.0 cm5.0 cm位置结肠直肠分化高中低TNM分期IIIIIIIV淋巴结转移有无血管浸润有无浸润深度T1T2T3T4NCAPH阳性/例(%)38(56.7)48(61.5)50(54.9)36(66.7)26(54.2)60(61.9)51(62.2)35(55.6)5(27.4)40(51.9)41(80.4)15(32.6)71(71.7)51(69.9)35(48.6)58(67.4)28(47.5)25(50.0)61(64.2)P0.6130.2210.4730.4960.0010.0010.0110.0250.112AGGF1阳性/例(%)37(55.2)40(51.3)45(49.5)32(59.3)21(43.8)56(57.7)41(50.0)36(57.1)3(17.6)37(48.1)37(72.5)7(15.2)70(70.7)44(45.8)33(55.1)53(61.6)24(40.7)19(38.0)58(61.1)P0.7390.3030.1570.4070.0010.0010.0970.0180.009TM4SF1阳性/例(%)42(62.7)46(58.9)53(58.2)35(64.8)25(52.1)63(64.9)47(57.3)41(65.1)1(5.9)42(54.5)45(88.2)7(15.2)81(81.8)53(72.6)35(48.6)56(65.1)32(54.2)20(40.0)68(71.6)P0.7340.4840.1510.3930.0010.0010.0040.2270.001NCAPH：非染色体结构维持蛋白凝缩蛋白复合体I亚单位H；AGGF1：G补缀FHA域血管新生因子1；TM4SF1：跨膜4L六家族成员1；CRC：结直肠癌。AB图3 TM4SF1在CRC及癌旁组织中的表达(Elivision，200)Figure 3 Expression of TM4SF1 in CRC and adjacent tissue(Elivision,200)A:CRC.B:Adjacent tissue.TM4SF1:Transmembrane-4-L-six-family-1;CRC:Colorectal cancer.1130结直肠癌中NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达及与预后的相关性 王磊，等2.3 Cox回归分析将入选病例中的CRC患者进行分组，具体为：性别(男性组与女性组)、年龄(67岁组与67岁组)、肿瘤位置(结肠组与直肠组)、肿瘤直径(5.0 cm 组与5.0 cm组)、肿瘤分化程度(高分化组、中分化组与低级别癌组)、浸润深度(T1T2 组与 T3T4 组)、TNM分期(+)期组与(+)期组、脉管侵犯(侵犯组与无侵犯组)、淋巴结转移(转移组与无转移组)、NCAPH 蛋白表达(阳性组与阴性组)、AGGF1蛋白表达(阳性组与阴性组)、TM4SF1表达(阳性组与阴性组)等因素引入 Cox 模型进行分析，结果显示：NCAPH、AGGF1、TM4SF1 蛋白表达，TNM分期以及脉管侵犯均是影响CRC患者预后的独立因素(P0.05，表3)。2.4 生存分析Kaplan-Meier生存分析显示：NCAPH蛋白表达阳性组与阴性组术后中位生存时间分别为(34.8073.163)和(61.7793.865)个 月(log-rank=26.788，P0.05)，2组生存曲线差异有统计学意义，阳性组生存率低于阴性组(图 4A)；AGGF1 蛋白表达阳性组与阴性组术后中位生存时间分别为(29.3533.084)和(66.6573.185)个月(log-rank=38.590，P0.05)，2组生存曲线差异有统计学意义，阳性组生存率低于阴性组(图4B)；TM4SF1蛋白表达阳性组与阴性组术后中位生存时间分别为(31.2422.806)和(70.3923.328)个月(log-rank=48.789，P0.05)，2 组生存曲线差异有统计学意义，阳性组生存率低于阴性组(图4C)。表3 CRC患者多因素分析Table 3 Multivariate survival analysis of patients with CRC变量性别年龄位置直径浸润深度TNM分期分化程度NCAPHAGGF1TM4SF1淋巴结转移血管浸润B0.2080.1160.0130.0840.3720.8760.1660.6850.6060.7320.0730.647SE0.1950.1940.1970.2160.2030.3420.1710.2070.2300.2080.1640.208RR0.8121.1230.9871.0870.6892.4001.1801.9841.8322.0790.9301.91095%CI0.5551.1900.7681.6420.6711.4520.7121.6610.4631.0261.3394.6900.8451.6491.3222.9771.1682.8741.2013.5980.6741.2821.2702.874P0.2870.5490.9460.6990.0670.0100.3320.0010.0080.0090.6570.002CRC：结直肠癌；NCAPH：非染色体结构维持蛋白凝缩蛋白复合体I亚单位H；AGGF1：G补缀FHA域血管新生因子1；TM4SF1：跨膜4L六家族成员1。表2 CRC中NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达之间的相互关系Table 2 Expression NCAPH,AGGF1,TM4SF1 and their relationship in CRC变量TM4SF1阴性阳性AGGF1阴性阳性NCAPH/例阴性34253821阳性23633056r0.3110.0010.2910.001AGGF1/例阴性4523阳性1265r0.5170.001CRC：结直肠癌；NCAPH：非染色体结构维持蛋白凝缩蛋白复合体I亚单位H；AGGF1：G补缀FHA域血管新生因子1；TM4SF1：跨膜4L六家族成员1。1131临床与病理杂志,2023,43(6)http:/3 讨 论 2020年，中国CRC新发病例为555 477例，其中因CRC病死有286 162例1，预计未来几十年CRC的发病率及病死率将会继续上升20。已有研究21-22证明基于人群的筛查以及各种晚期转移性CRC疗法的出现可有效遏制CRC发病的上升趋势。然而，恶性肿瘤的侵袭和转移这一特有的生物学行为常导致肿瘤患者复发和死亡。目前，在CRC肿瘤治疗领域，因为缺乏针对CRC进行有效预防其侵袭和转移的预测靶点，所以患者的生存预后仍然不理想。因此，积极寻找并发现参与CRC进展的靶点并阐明它们诱导转移的机制似乎显得尤为紧迫。近年来，随着对NCAPH研究的不断深入，越来越多的研究证实凝聚素I复合物(有丝分裂过程中染色体的结构成分)在肿瘤发生中的重要性6。NCAPH是condensin I复合物中非SMC亚基的3个重要成员之一，另外2个是非染色体结构维持蛋白凝缩蛋白复 合 体 I 亚 单 位 G(non-SMC condensin I complex subunit G，NCAPG)和非染色体结构维持蛋白凝缩蛋白复合体 I 亚单位 D2(non-SMC condensin I complex subunit D2，NCAPD2)。NCAPH对维持染色体的稳定性起至关重要的作用，并能够确保有丝分裂和减数分裂细胞周期中的全染色体基因调控23。NCAPH已被证明在人类大量癌症中表达水平升高，并与患者较差的生存预后相关。在子宫内膜癌中，与正常组织相比，癌组织NCAPH表达显著上调，这一现象与患者较差的临床病理学特征相关7。研究24表明非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭需要NCAPH的过表达。同时，NCAPH在结肠癌细胞系和组织中表达上调，其功能的丧失可以抑制结肠癌细胞的增殖和迁移25。本研究发现：NCAPH蛋白在CRC组织中高表达，随着CRC患者TNM分期的增加、肿瘤组织分化程度降低、浸润深度增加以及脉管侵犯的发生其表达阳性率逐渐升高，并且与患者较差的总生存率相关。上述结果均表明，NCAPH 的表达上调不限于CRC组织，可能广泛参与了人类恶性肿瘤的进展，是人类恶性肿瘤发生、发展的关键致癌物之一。然而，到目前为止，NCAPH在人类癌症中的具体作用在很大程度上仍处于未知，而潜在分子机制的报道尚少见。Wang等26研究发现：降低NCAPH的表达可以抑制体外宫颈癌细胞的恶性生长和上皮间充质转化过程，阻碍裸鼠肿瘤的形成，并阐明了人乳头状瘤病毒 E7 和 NCAPH 之间存在调控环，揭示了NCAPH对宫颈癌磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，AKT)/血清和糖皮质激素调节激酶(serum and glucocorticoid induced kinase，SGK)通路具有调控作用。AGGF1基因，是一种编码具有FHA结构域和G-patch结构域的血管生成因子27。AGGF1在体外和体内均可以刺激血管生成，并可以通过激活AKT信号途径调节斑马鱼的静脉分化和节间血管的发育28。在血管生成初始时，AGGF1可在血管内皮细胞外释放，促进血管生成，并且通过增加血管生成数量参与各种肿瘤的生长、转移和存活29。AGGF1表达降低则可导致血管内皮细胞凋亡、抑制血管形成和内皮细100806040200100806040200100806040200Survival rate/%Survival rate/%Survival rate/%Survival time/monthSurvival time/monthSurvival time/monthNCAPHAGGF1TM4SF1NegativePositiveNegative-censeredPositive-censeredNegativePositiveNegative-censeredPositive-censeredNegativePositiveNegative-censeredPositive-censeredP0.05P0.05P0.050 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 ACB图4 CRC患者生存曲线Figure 4 Survival curves of CRC patientsA:NCAPH;B:AGGF1;C:TM4SF1.NCAPH:Non-SMC condensin I complex subunit H;AGGF1:Angiogenic factor with G and FHA domains 1;TM4SF1:Transmembrane-4-L-six-family-1;CRC:Colorectal cancer.1132结直肠癌中NCAPH、AGGF1及TM4SF1的表达及与预后的相关性 王磊，等胞迁移30。Zhang等31通过体外实验证实AGGF1可以促进 CRC 细胞伤口愈合、迁移和侵袭，表明AGGF1可能参与了CRC的转移，其结果与在胃癌9和肝细胞癌10中的研究一致。裸鼠体内试验31的结果表明：与对照组相比，AGGF1表达的上调或下调分别导致肺和肝中形成的转移性集落显著增加或减少。这些体内和体外的研究数据揭示AGGF1的表达升高可能与肿瘤侵袭有关。在本研究中，AGGF1的表达阳性率在CRC组织中远高于癌旁正常黏膜组织，且AGGF1的表达上调与CRC患者的组织学分级、肿瘤浸润深度、TNM分期以及脉管侵犯密切相关，肿瘤分化越差、浸润越深、分期越高以及伴有脉管侵犯的患者其AGGF1表达阳性率越高，这与上述研究结果均一致。本研究还显示CRC组织中AGGF1表达上调与患者总体预后不良相关，提示AGGF1可能作为CRC的潜在治疗靶点。因此，未来的研究重点可集中于探寻AGGF1在CRC进展中的潜在作用机制上。Liu等32研究表明：在发生了缺血再灌注损伤后的大鼠心肌组织中，AGGF1的过表达可通过激活PI3K/AKT和细胞外信号调控的蛋白激酶信号通路促进心肌细胞和小鼠内皮细胞血管生成。AGGF1也可能通过 抑 制 PI3K/AKT/哺 乳 动 物 雷 帕 霉 素 靶 蛋 白(mammalian target of rapamycin，mTOR)通路激活自噬而促进缺血性视网膜病变血管生成33。由此可见，AGGF1促进血管生成很可能是通过调节PI3K/AKT途径来实现的。TM4SF1 是跨膜 4L 六家族的成员，其中包括TM4SF1/L6、TM4SF4/ILTMP和TM4SF5/L6H。在这些家族中，TM4SF1最初被鉴定为肿瘤相关抗原L6，该基因定位于染色体3q21-3q25区域34。TM4SF广泛分布于人体细胞和组织中，具有同源序列，由4个高度保守的疏水跨膜结构域组成。这4个结构域导致TM4SF细胞膜糖蛋白家族参与多种恶性肿瘤(如结肠癌、肝细胞癌和卵巢癌)中的细胞生长、增殖、黏附、迁移和侵袭15,35-36。越来越多的证据14-16表明TM4SF1的表达升高与各种上皮恶性肿瘤的侵袭性进展和发生呈正相关。本研究发现：CRC组织中TM4SF1蛋白的表达明显高于非肿瘤组织；随着 TM4SF1 在CRC组织中表达的上调，患者呈现TNM高分期、肿瘤组织学低分化、肿瘤浸润深度增加以及淋巴结转移发生的特点，患者总体生存预后较差。结果与上述研究14-16报道一致。然而，TM4SF1在CRC乃至各种恶性肿瘤进展和转移中的作用和机制很大程度上仍处于未知状态。Kleivi等37通过对基因表达谱的研究表明：TM4SF1在原发性CRC、肝转移和癌变中表达上调，并且通过PI3K/AKT/mTOR通路促进乳腺癌细胞迁移和侵袭以及凋亡。Sun 等38研究表明TM4SF1通过PI3K/AKT/mTOR相关信号通路对细胞增殖和存活发挥促进作用。以上结果显示TM4SF1对恶性肿瘤侵袭进展的作用很可能也是通过调控PI3K/AKT途径实现的。目前，国内外文献关于 CRC 组织中 NCAPH、AGGF1及TM4SF1蛋白表达之间相关性及可能作用机制的研究报道尚不多见。本实验的Spearman分析结果显示：CRC组织NCAPH和AGGF1蛋白的表达上调时，TM4SF1蛋白表达同样呈现上调，且均呈正相关。不仅如此，TM4SF1和AGGF1蛋白表达的上调同样呈正相关。这一结果使我们想到很可能是某种内在的联系将NCAPH、AGGF1和TM4SF1的表达关联在一起，从而使其在CRC侵袭和进展中发挥了协同作用，但具体机制仍不十分清楚。众所周知，PI3K/AKT信号通路能够驱动肿瘤的发生，在多种恶性肿瘤中，该通路的激活与肿瘤的迁移、侵袭、血管生成和EMT过程密切相关26,32,39-40。已有研究26证实：在宫颈癌中，NCAPH的阳性表达与PI3K/AKT信号通路的激活有关。同时，AGGF1的过表达可以通过激活PI3K/AKT信号通路促进小鼠内皮细胞血管生成32。甚至，TM4SF1对恶性肿瘤细胞增殖和迁移的促进作用也可以通过PI3K/AKT相关信号通路产生37-38。因此我们推测，PI3K/AKT信号通路可能会对 NCAPH、ACCF1 和 TM4SF1 蛋白的表达以及对CRC侵袭和转移的促进发挥至关重要的作用，然而其具体的分子机制需要进一步阐明。多因素分析的结果显示：NCAPH、AGGF1 和TM4SF1蛋白的表达、TNM分期以及癌组织的浸润深度是CRC患者进行根治性手术后影响其生存预后的独立因素。因此，NCAPH、AGGF1和TM4SF1蛋白很可能成为临床预测CRC患者预后的新的分子标志物。进一步的生存分析表明：NCAPH、AGGF1和TM4SF14呈现阳性表达患者的5年生存率均显著低于阴性表达组患者。结果提示：NCAPH、AGGF1和TM4SF1蛋白表达上调的CRC患者，其术后的生存时间更短、病死率更高、预后更差。近年来关于恶性肿瘤的发生、发展与其分子遗传学以及基因改变的研究层出不穷，成为各界关注的焦点，而 CRC 作为一种具有异质性的肿瘤，Kirsten 大 鼠 肉 瘤 病 毒 癌 基 因 同 源 物(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog，KRAS)、神经母细1133临床与病理杂志,2023,43(6)http:/胞瘤 RAS 病毒致癌基因同系