一部分微生物利用.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,一部分微生物利用,一部分微生物利用,第1页,试验目标,1.,进行大肠杆菌,扩增,，利用,液体培养基,进行,细菌培养操作,2.,进行大肠杆菌,分离,，用,固体平面培养基,进行细菌,划线培养,3.,说明大肠杆菌培养,条件,和试验,原理,一部分微生物利用,第2页,一,.,基础知识,（一）,微生物,（二）,微生物培养基,（三）,无菌技术,二,.,微生物试验所需操作技术,三,.,大肠杆菌培养和分离试验,四,.,课题小结,一部分微生物利用,第3页,1.1,微生物,结构,都相当,简单,，个体多数十分,微小,，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有甚至没有细胞结构。且体内普通不含有叶绿素，不能进行光合作用,五类,病 毒,细 菌,放线菌,真 菌,原生动物,病毒界,原核生物界,真菌界,原生生物界,1.1.1,微生物特点,1.1.2,微生物种类,1.1.3,细菌形态、结构和菌落,一部分微生物利用,第4页,1.1.3,细菌形态结构和菌落,图,1-1,常见三种细菌经典形态,A.,球菌,B.,杆菌,C.,弧菌,单细胞不分枝,原核,微生物，细菌细胞微小而透明，通常见,适当染料染色,后显微镜观察,1.1.3.1,细菌形态,1.1.3.2,细菌结构,基础结构：,细胞壁、细胞膜、细胞质，细胞质中有液泡、储存性颗粒、核质等,从属结构：,鞭毛、纤毛、荚膜、,芽孢,（抗逆,休眠体）,等,1.1.3.3,菌落,革兰氏染色：,阳性或阴性，细胞壁成份不一样,一部分微生物利用,第5页,1.1.3.3,菌落,单个或少数细菌,在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见，含有,一定形态结构子细胞群体,，叫做菌落,细菌菌落,特征因种而异,菌落是,判定菌种,主要依据,大肠杆菌,大肠菌群,一部分微生物利用,第6页,1.2,微生物培养基,培养基（培养液）是微生物,生存环境,和,营养物质,1.2.1,培养基分类（按物理形态分）,（,1,）液体培养基（液）,（,2,）半固体培养基,（,3,）固体培养基,添加,琼脂,量决定,1.2.2,培养基所含成份,（,1,）水,（,2,）无机盐,（,3,）碳源,（,4,）氮源,（,5,）生长因子,含碳,无机物或,有机物,，后者通常可作,能源,含氮,无机盐或,有机物,，用于合成氨基酸等,生长,必需,，而,本身不能合成,化合物,不一样微生物所需无机盐、碳源、氮源和生长因子,种类,不一样,培养基需要,调整,pH,、,渗透压,、控制,含氧量,等条件,细菌：,用蛋,白胨,和,酵母提取物,配制,霉菌：,用,无机物,或添加,蔗糖,豆芽汁,配制,细菌：,中性,偏碱,（,7.58.5,）,霉菌：,中性,偏酸,（,5.06.0,）,通常见,NaCl,调整,一部分微生物利用,第7页,1.3,无菌技术,1.3.1,取得纯净微生物培养物关键,预防外来杂菌入侵,1.3.2,无菌技术 四个方面,（,1,）对试验操作,空间,、操作者,衣着,和,手,进行清洁和,消毒,（,2,）将培养,器皿,、接种,用具,和,培养基,等器具进行,灭菌,（,3,）为防止周围微生物污染，试验,操作,应在,酒精灯火焰附近,旁进行,（,4,）,防止,已灭菌处理材料用具与周围物品相,接触,1.3.3,消毒,与,灭菌,一部分微生物利用,第8页,1.3.3.1,消毒,使用较为,温和,物理或化学方法仅杀死,物体表面,或,内部一个别,对人体有害微生物,普通不能杀死芽孢和孢子,常见消毒方法,常见于牛奶消毒,煮沸消毒法,巴氏消毒法,紫外线消毒,化学药剂消毒法,酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等,一部分微生物利用,第9页,在,充分燃烧层,灼烧,1.3.3.2,灭菌,使用,强烈,理化原因,杀死物体内外全部微生物,，包含芽孢和孢子,常见灭菌方法和适用范围,灼烧灭菌,干热灭菌,高压蒸汽灭菌,微生物,接种工具,（接种环、接种针）或其它,金属用具,能,耐高温,需要,保持干燥,物品（玻璃器皿）,160,170,；,1,2h,100kPa 121 1530min,最常见,方式，通常见于,培养基,灭菌及,各种器具,灭菌,一部分微生物利用,第10页,2.,微生物试验所需操作技术,2.1,器具灭菌,2.2,培养液（基）配置、灭菌，放斜面和倒平板技术,2.3,细菌接种和纯化技术,棉花塞口,牛皮纸（或报纸）包口或包扎,6080,烘干,121,（,1Kg/cm,2,）灭菌,15min,不能用脱脂棉：,易吸水后造成污染,2.3.1,平板划线法,2.3.2,稀释涂布平板法,简便，,常见,效果好,一部分微生物利用,第11页,2.2,培养液配置、灭菌，放斜面和倒平板技术,2.2.1,配置,LB,（,Luria-Bertani,，溶菌肉汤）培养基,配方,蛋白胨：,0.5g,酵母提取物：,0.25g,NaCl,：,0.5g,水：,50mL,琼脂：,1g,（固体）,pH,：,7.4,7.6,配制过程,计算,、,称量,混合加热,溶化,NaOHHCl,调pH,（,76,）,分装,三角漏斗分,三角瓶,试管,棉塞或封口膜,加塞,包扎,通气,；,阻止,微生物进入,牛皮纸,灭菌,高压蒸汽,1Kg/cm2,，,121,，,15min,放斜面,倒平板,未凝固时,固体培养基,一部分微生物利用,第12页,分装、放斜面、倒平板,分装,培养基不能沾上,塞子,、,管,口和,管壁,易造成污染,固体分装,试管,，培养液不超出管高,1/5,便于放斜面,液体分装三角瓶，普通培养基高度为瓶高,1/4,左右,本试验中，将,50mL,液体,LB,培养基和,50mL,固体,LB,培养基分别装入,2,个,250mL,三角瓶中，加封口膜（或棉塞）,放斜面,固体培养基置于试管中灭菌后，斜靠在平放铅笔上，冷却,倒平板,培养接种用菌种,超净台和双手消毒,点燃酒精灯创造无菌环境,倒平板操作,一部分微生物利用,第13页,倒平板操作,倒平板操作中问题讨论,一部分微生物利用,第14页,倒平板操作中问题讨论,（,1,）培养基灭菌后，需要冷却到,50,左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？,（,2,）为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？,（,3,）平板冷凝后，为何要将平板倒置？,（,4,）在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？,能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了,经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基,平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较大，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染,空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物,一部分微生物利用,第15页,2.3.1,平板划线法,平板划线法操作中问题讨论,一部分微生物利用,第16页,平板划线法操作问题讨论,1,平板划线详细方法,连续划线法,交叉划线法,2,1,3,平板划线详细方法,（,1,）为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？,每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束接种环上残留菌种使下一次划线菌种直接起源于上次划线末端，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。,结束后要灼烧接种环以及时杀死残留菌种，防止污染环境和感染操作者,单菌落,1,2,3,4,6070,一部分微生物利用,第17页,平板划线法操作问题讨论,2,（,2,）在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？,（,3,）在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？,以免接种环温度太高，杀死菌种,线条末端细菌数目较少，这么操作能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终得到由单个细菌繁殖而来菌落,（,4,）为何平板划线时不能划破培养基表面？,一是划破后会造成划线不均匀，难以到达分离单菌落目标,二是存留在划破处单个细胞无法形成规矩菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状菌落,一部分微生物利用,第18页,2.3.2,稀释涂布平板法,操作方法,梯度稀释,涂布分离,问题：,涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第,2,步应怎样进行无菌操作？,一部分微生物利用,第19页,3.,大肠杆菌培养和分离试验,3.1,设备及用具,灭菌锅或高压锅、,250ml,三角瓶、封口膜和橡皮圈、直径,90mm,培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有酒精棉球广口瓶、镊子、有棉塞试管（,15mm120mm,）,5,支,3.2,试验材料,（,1,）,50mlLB,液体培养基：蛋白胨,0.5g,、酵母提取物,0.25g,、,NaCl 0.5g,、加水,50ml,（,2,）大肠杆菌菌种斜面,（,3,）空白斜面,3.3,试验过程,3.4,课题结果评价,革兰氏阴性,，,兼性厌氧,菌,一部分微生物利用,第20页,3.3,试验过程,1.,配制,LB,培养基,2.,灭菌,LB,液体,培养基,LB,固体,培养基,各,50mL,，三角瓶,3.,倒平板,固体,冷却成平板培养基,4,个培养皿,液体,4.,接种扩充培养,1.,培养基,冷却,2.,接种环烧灼,3.,接种环在菌种斜面培养基上,冷却,4.,挑取菌种,接种,到液体培养基中,5.37,摇床,震荡培养,12h,培养大肠杆菌菌种,5.,平板划线分离,37,培养,24,h,4,保留,6.,单菌落接种,6.,菌种培养、保留,1.,挑取,单菌落,菌种,2.,斜面,连续划线,酒精灯旁操作,细菌培养分离视频,一部分微生物利用,第21页,3.4,课题结果评价,培养基制作是否合格,接种操作是否符合无菌要求,是否进行了及时细致观察与统计,假如未接种培养基在恒温箱中保温,1,2 d,后无菌落生长，说明培养基制备是成功，不然需要重新制备,如培养基上生长菌落颜色、形状、大小基础一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作是符合要求；假如培养基上出现了其它菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习,培养,12 h,与,24 h,后大肠杆菌菌落大小会有显著不一样，及时观察统计同学会发觉这一点，并能观察到其它一些细微改变。这一步要求主要是培养学生良好科学态度与习惯,一部分微生物利用,第22页,