1、生态系统的结构,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,小飞守角制作,生态系统的结构,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,虾肌肉蛋白的提取,虾肌肉蛋白的提取,第1页,小飞守角制作,主要内容,凡纳滨对虾肌肉蛋白提取方案,1,讨论,2,虾肌肉蛋白的提取,第2页,凡纳滨对虾肌肉蛋白提取方案,对虾前处理,取对虾,肌肉组织,500mg,剪碎、,液氮研磨,至粉末状,添加裂解液,离心,凡纳滨对虾弃头剥壳、去肠、去血，用蒸馏水洗净沥干水分，于,-18,贮藏备用,500L,，,4,孵育,1-2h,分装于离心管中（,50mg/,管）,13000 r/min,低温（,4,
2、离心,2h,抽提，即为蛋白样品，于,-18,保留备用,定量检测蛋白质浓度,考马斯亮蓝法,分组,虾肌肉蛋白的提取,第3页,讨论,从对虾,内部,选取肌肉组织。,对虾全身覆盖着一层,几丁质壳,，去壳时不能确保完全去除这层薄膜，而且肌肉中必定存在着肉眼无法区分结缔组织。,肌肉组织选取,-18,保留。,对虾在,-20,、,-30,、,-40,蛋白变性差异,不显著,（陶欢，,）,。,对虾保留,虾肌肉蛋白的提取,第4页,讨论,液氮研磨,低温,蛋白结构,虾肌肉蛋白的提取,第5页,讨论,浓度,8mol/L,尿素、浓度,2 mol/L,硫脲,、浓度,2%CHAPS,、浓度,10l/mL,PMSF,、浓度,18
3、mmol/L,DTT,、浓度,0.5%IPG,缓冲液。,8 M,尿素,9.6g,，,4%CHAPS 0.8g,，,40 mM,Tris,0.0484g,，用前每,1mL,裂解液中添加,5L Carrier Ampholyte,（载体两性电解质）,200 mM,TBP,（三正丁基磷）,10L,。,裂解液,裂解液,虾肌肉蛋白的提取,第6页,讨论,灵敏度,时间,特点,双缩脲法,120mg,810h,干扰相对少，灵敏度低,紫外吸收法,50100g,510min,快速，灵敏度低，干扰多,Lowry,法,20250g,4060min,干扰多、费时、操作严格、灵敏度高,Bradford,法,15g,515min,灵敏、快速、简便、干扰少、稳定,虾肌肉蛋白的提取,第7页,
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