高效液相色谱法测定饲料中5种磺胺类药物.pdf

2023年第4期饲料博览收稿日期：2023-05-10基金项目：宁夏自然科学基金项目“饲料中非法添加兽药多组分联检方法研究及应用”（2022AAC03721）作者简介：陈海燕（1980），女，宁夏中宁人，硕士，研究方向为饲料分析检测。*通信作者：杨奇（1967），男（回族），宁夏同心人，研究员，博士，研究方向为饲料兽药畜产品的分析检测。高效液相色谱法测定饲料中5种磺胺类药物陈海燕，张慧宁，马春芳，陈娟，杨俊华，谢荣国，杨奇（宁夏回族自治区兽药饲料监察所，银川750001）摘要：为了高效测定饲料中磺胺类药物，采用高效液相色谱法对饲料中5种磺胺类药物进行测定，将GB/T195422007方法中称样容器100 mL锥形瓶改为50 mL离心管，提取液乙腈体积50 mL改为25 mL，试验对改进后的方法进行方法学验证，该方法范围为0.15.0 gmL-1，5个浓度的线性R20.999 9，4个不同浓度的阳性添加回收率为85.8%113.0%，变异系数（RSD）为0.2%7.6%，RSD0.999 9 for five concentrations,positive addition recoveries for four differentconcentrations ranged from 85.8%to 113.0%,coefficient of variation(RSD)ranged from 0.2%to 7.6%,RSD15%.The results showed that the method had good linearity,high accuracy,good precision,and met the requirements ofmethodology.The improved method was convenient for whirling,shaking and centrifugation,and the organic reagentpollution was reduced by reducing the amount of the extract.A more reasonable,convenient and efficient method forthe detection of sulfonamides was established,which could be used for the confirmation and detection of illegaladdition of sulfonamides in feed.Key words:feed;sulfonamides;high performance liquid chromatography(HPLC);method verification目前有效的抗生素很多，但磺胺类药具有抗菌谱广、性质稳定、品种多、价格低、使用简便等优点 1，在控制急性泌尿系统感染中有重要价值。所以在畜牧养殖业中常被用作治疗动物肠道感染等疾DOI:10.20041/ki.slbl.2023.04.009Quality Monitoring质量监测51饲料博览2023年第4期病，若以预防为目的在饲料中长期添加，会使致病菌产生耐药性，磺胺类药物也因此会残留在动物的肌肉等组织中，影响人的身体健康 2。磺胺类抗生素还可以通过沉降、吸附等作用蓄积在地表水沉积物中 3，造成水体污染。农业农村部第194号公告颁布后，磺胺类药物禁止作为饲料药物添加剂被使用，其检测对饲料质量安全控制十分必要。高效液相色谱检测法能够对饲料中的磺胺类药物含量进行快速检测，且检测结果准确，误差小，利于相关人员开展饲料中磺胺类药物含量测定 4。本研究采用高效液相色谱法，对饲料中磺胺类药物进行测定，将GB/T 195422007 5 饲料中磺胺类药物的测定高效液项色谱法 中称样容器锥形瓶改为离心管，提取液乙腈体积减半，验证建立更加合理、利于操作的检测方法。1材料与方法1.1仪器高效液相色谱仪（型号为Agilent1260infinity），安捷伦科技有限公司产品；离心机（型号为CR22G），日本日立公司产品；旋涡混匀器（型号为IKA MS3），德国艾卡公司产品，分析天平（型号为AX-205）、电子天平（型号为LD202-L），梅特勒-托利多公司产品；超声清洗器（型号为KQ-400KDB），昆山舒美超声仪器有限公司产品；固相萃取装置（型号为SepLine-S4），莱伯泰科有限公司产品；振荡器（型号为WSZ-100-A），上海一恒科学仪器有限公司产品；纯水仪（型号为Milli-Q Integral 5），默克密理博公司产品。1.2仪器条件色谱条件：紫外检测器，检测波长为270 nm；色谱柱，Agilent C18柱，柱长250 mm，内径4.6 mm；流动相：乙腈4%冰乙酸水=25%75%，流速1.0 mLmin-1，进样量20 L。1.3检出限与定量限该方法的定量限，磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶为5 mgkg-1；磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉为2 mgkg-1。1.4试剂乙腈（色谱级，批号为 178563）、甲醇（色谱级，批号为 175614），Fisher chemical 产品；冰乙酸（优级纯，批号为 180219），天津市科密欧化学试剂有限公司产品；超纯水，德国默克密理博 Milli-Q Integral 5 制得；碱性氧化铝 SPE 小柱（批号为 029639192A），沃特世 Waters Spe-Pak1 000 mg （12 mL）-1。1.5标准品1.5.1标准贮备液配制标准贮备液配制过程见表 1。配制好后在-16 避光保存，有效期6个月。1.5.2混合标准中间液分别量取一定体积的标准贮备液置于同一25 mL棕色容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，使其成为浓度100 gmL-1的混合标准中间液。4 避光保存，有效期1个月。表1标准贮备液配制标准物质名称磺胺嘧啶磺胺二甲基嘧啶磺胺间甲氧磺胺甲恶唑磺胺喹恶啉来源德国Dr.EhrenstorferGmbH公司批号G140186G144301G159641G150000G159519纯度/%99.299.499.599.598.9标准品质量/g0.011 830.012 820.014 810.012 540.011 64定容体积/mL10.010.010.010.010.0溶剂乙腈乙腈乙腈乙腈甲醇贮备液浓度/（gmL-1）1 173.541 274.311 473.601 247.731 151.201.5.3绘制混合标准工作曲线准确量取混合标准中间液10、20、50、150 L和500 L，分别置于10 mL的棕色容量瓶中，用流动相定容至刻度，使浓度分别 0.1、0.2、0.5、1.5 gmL-1和5.0 gmL-1，绘制混合标准工作曲线。1.6样品制备及处理样品制备：选具有代表性的饲料500 g，粉碎过40目筛，混匀备用。提取：准确称取 2 g（精确至 0.001 g）试样于50 mL离心管中，加入25 mL乙腈，涡旋1 min，振质量监测Quality Monitoring522023年第4期饲料博览荡30 min，9 000 rmin-1离心5 min，备用，同时做空白对照。净化过程：碱性氧化铝SPE小柱，取10 mL乙腈淋洗，准确移去10 mL样品试液过滤，流出后吹干。分别用2 mL流动相洗脱2次，收集洗脱液混匀，过0.22 m滤膜后上机测定。1.7阳性添加样品向称取的样品中分别加入20、40、100 L和300 L浓度为100 gmL-1的混合标准贮备液，制成浓度为1、2、5mgkg-1和7.5mgkg-1的阳性添加样品，上机浓度分别为0.2、0.4、1.0gmL-1和1.5gmL-1，每个浓度阳性添加做6个平行，连续3次。2结果与分析2.1色谱图5 种磺胺类药物 0.2 gmL-1的标准图谱，1 mgkg-1阳性添加回收及空白样品图谱见图13。图15种磺胺类药物0.2 gmL-1标准图谱VWD1A,Wavelength=270 nm3.979磺胺嘧啶5.605磺胺二甲基6.995磺胺间甲氧9.959磺胺甲恶唑17.146磺胺喹恶啉3.02.52.01.51.00.50mAUVWD1A,Wavelength=270 nm1234567891011121314151613181920时间/min图25种磺胺类药物1 gmL-1回收图谱VWD1A,Wavelength=270 nm3.955磺胺嘧啶5.584磺胺二甲基6.969磺胺间甲氧9.937磺胺甲恶唑17.121磺胺喹恶啉4.03.53.02.52.01.51.00.50mAUVWD1A,Wavelength=270 nm1234567891011121314151613181920时间/min图3空白图谱VWD1A,Wavelength=270 nm2.55714.3714.54.03.53.02.52.01.51.00.50mAUVWD1A,Wavelength=270 nm1234567891011121314151613181920时间/min因饲料中粗蛋白等含量较高，基质复杂容易对目标物形成干扰，选用乙腈做流动相，可以沉淀蛋白质；流动相的pH会影响磺胺类药物在色谱柱中的分离，水相选用4%的冰乙酸水利于不同磺胺类14.38613.0862.5562.0062.19613.073Quality Monitoring质量监测53饲料博览2023年第4期药物的分离。试验结果表明：5种磺胺类药物标准图谱与添加回收图谱的色谱峰保留时间一致，且峰形良好，分离度好，互不干扰，说明流动相比例合理；由添加回收图谱可以看出，样品基质对添加回收影响小，说明试验条件及方法可行。2.2标准曲线以含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，见图48。化合物：磺胺嘧啶550500450400350300250200150100500面积VWD1A0.511.522.533.544.555.56含量/g磺胺嘧啶信号：残留：预期保留时间：R：R2：公式：0.902 453.9780.999 990.999 98y=ax+ba:87.484 9b:-0.874 3图4磺胺嘧啶的标准曲线化合物：磺胺间甲氧450400350300250200150100500VWD1A0.511.522.533.544.555.56含量/g磺胺间甲氧信号：残留：预期保留时间：R：R2：公式：0.640 206.9970.999 990.999 98y=ax+ba:72.653 2b:-0.765 0图5磺胺间甲氧的标准曲线化合物：磺胺二甲基450400350300250200150100500VWD1A0.511.522.533.544.555.56含量/g磺胺二甲基信号：残留：预期保留时间：R：R2：公式：0.640 206.9970.999 990.999 98y=ax+ba:75.852 7b:-0.717 9图6磺胺二甲基嘧啶的标准曲线由图48可以看出，5种磺胺类药物回归方程分别为：磺胺嘧啶y=87.484 9x-0.874 3，磺胺间甲氧y=72.653 2x-0.765 0，磺胺二甲基嘧啶y=75.852 7x-0.717 9，磺胺甲恶唑y=75.664 7x-0.816 4，磺胺喹恶啉y=66.821 4x-1.231 0，5种药物5个浓度（0.1、0.2、0.5、1.5 gmL-1和5.0 gmL-1）的线性均在0.999 9以上，线性良好。2.3回收率阳性添加浓度为0.2、0.4、1.0mgkg-1和1.5mgkg-1四个浓度时，平均回收率为85.8%113.0%，变异系数（RSD）为 0.2%7.6%，说明该方法精密度良好，符合方法学要求。面积面积质量监测Quality Monitoring542023年第4期饲料博览化合物：磺胺甲恶唑450400350300250200150100500AreaVWD1A0.511.522.533.544.555.56含量/ug磺胺甲恶唑信号：残留：预期保留时间：R：R2：公式：0.722 549.9590.999 990.999 98y=ax+ba:75.664 7b:-0.816 4图7磺胺甲恶唑的标准曲线化合物：磺胺喹恶啉400350300250200150100500AreaVWD1A0.511.522.533.544.555.56含量/g磺胺喹恶啉信号：残留：预期保留时间：R：R2：公式：1.032 8017.1460.999 970.999 95y=ax+ba:66.821 4b:-1.231 0图8磺胺喹恶啉的标准曲线表25种磺胺类药物的回收率及精密度添加浓度0.2 gmL-10.4 gmL-11.0 gmL-11.5 gmL-1项目平均值1/（gmL-1）平均值2/（gmL-1）平均值3/（gmL-1）平均值/（gmL-1）回收率/%变异系数/%平均值1/（gmL-1）平均值2/（gmL-1）平均值3/（gmL-1）平均值/（gmL-1）回收率/%变异系数/%平均值1/（gmL-1）平均值2/（gmL-1）平均值3/（gmL-1）平均值/（gmL-1）回收率/%变异系数/%平均值1/（gmL-1）平均值2/（gmL-1）平均值3/（gmL-1）平均值/（gmL-1）回收率/%变异系数/%磺胺嘧啶0.1870.1640.1640.17285.8007.6000.3960.4060.4040.402100.5001.3200.9971.0231.0381.019101.9002.0001.5551.5431.5441.547103.2000.500磺胺二甲基嘧啶0.2230.2240.2300.226113.0001.6000.4170.4200.4120.416104.1000.9701.0210.9971.1231.047104.7006.4001.5661.5861.5881.580105.3000.800磺胺间甲氧嘧啶0.2050.1880.1880.19496.8005.1000.4060.4010.4020.403100.8000.6601.0871.1151.0151.072107.2004.8001.5051.4991.5021.502100.1000.200磺胺甲恶唑0.2200.2020.1970.206103.2005.8000.4130.4240.4150.417104.3001.4001.0231.1471.0261.065106.5006.6001.5821.5171.5151.538102.5002.500磺胺喹恶啉0.1970.1800.1810.18693.1005.2000.4120.3930.4170.407101.8003.1101.0251.1141.0561.065106.5004.2001.5261.4751.4791.49399.6001.900Quality Monitoring质量监测55饲料博览2023年第4期样品编号12345678910111213141516171819202122232425262728293031323334353637样品名称育肥猪前期料犊牛精料补充料-BF100仔猪教槽配合饲料-800乳猪配合饲料-正大乳猪宝产蛋鸡高峰期配合饲料仔猪配合饲料-正大仔猪宝奶牛围产期精料补充料-C4011干奶期精料补充料-C3011犊牛后期精料补充料-C1212产奶期奶牛精料补充料-875218犊牛期奶牛精料补充料-8202生长育肥期肉羊料-S305HQ肉牛自配料肉牛自配料肉牛自配料肉牛自配料肉牛自配料肉牛自配料肉牛自配料肉牛自配料肉牛自配料肉牛自配料乳猪配合饲料2080乳猪配合饲料-正大犊牛精料补充料-硕丰源育肥牛精料补充料-硕丰源奶牛泌乳期精料补充饲料元兴45-伊康元奶牛泌乳期精料补充料-戴瑞特7820犊牛精料补充料犊特90-伊康元胃动力-发酵枸杞果渣乳猪配合饲料-柯恩200ABC保育奶粉肉小鸡配合饲料7501B-新希望六和羔羊精料补充料8671-宁夏隆昌饲料乳猪膨化配合饲料-猪宝宝/舒化宝乳猪配合饲料-正大乳猪宝肉大鸡配合饲料-503育肥猪前期料受检企业隆德县方圆养殖有限公司固原宝发农牧有限责任公司固原市原州区永泰兽药饲料经销部固原市原州区张维西饲料销售中心宁夏凤集生态农业科技有限公司银川市西夏区小韩兽药店宁夏犇牛饲料有限责任公司宁夏犇牛饲料有限责任公司宁夏犇牛饲料有限责任公司宁夏大成永康营养技术有限公司宁夏大成永康营养技术有限公司宁夏大成永康营养技术有限公司吴忠市晨牧兴农牧有限公司吴忠市犇诚养殖专业合作社马占峰牧场宁夏文才牧业有限公司宁夏永腾农牧有限公司宁夏欣牧优源牧业有限公司吴忠市春翔农牧科技有限公司宁夏泽谦农牧科技有限公司吴忠市宁翔农牧有限公司宁夏然晨牧业有限公司吴忠市利通区佳祥养殖专业合作社吴忠市利通区立锋畜禽养殖场宁夏硕丰源饲料有限公司宁夏硕丰源饲料有限公司宁夏伊康元生物科技有限公司宁夏伊康元生物科技有限公司宁夏伊康元生物科技有限公司宁夏绿健源生物科技有限公司吴忠市利通区尚佳兽药经销部吴忠市利通区军强兽药经销部吴忠市利通区小韩兽药店青铜峡市名翔饲料经销部青铜峡市永生兽药饲料经销部宁夏新希望反刍动物营养食品有限公司宁夏新希望反刍动物营养食品有限公司磺胺嘧啶未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺二甲基嘧啶未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺间甲氧嘧啶未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺甲恶唑未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺喹恶啉未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出2.4注意事项磺胺类药物属于酸碱两性物质 6，标准贮备液配制过程中，磺胺喹恶啉超声后若有混浊不溶现象，可适量加0.1%氢氧化钠溶液50100 L，直至溶解后定容。标准品配制过程中，所用的容量瓶均建议采用棕色。3应用2022年对宁夏区内生产企业、经营店、养殖场的猪鸡配合饲料38批次牛、羊精料补充料44批次、自配料38批次，共计120批次饲料样品，应用该方法进行检测，均未检出上述5种磺胺类药物，检测结果见表3。表3检测结果统计质量监测Quality Monitoring562023年第4期饲料博览表3续检测结果统计样品编号3839404142434445464748495051525354555657585960616263646566676869707172737475767778798081样品名称产蛋鸡配合料-315肉羊育肥期配合料-羊羊肥育肥肉牛后期精料补充料-牛运利育肥肉牛前期精料补充料-牛运顺肉羊育肥期精料补充料-羊羊健肉牛育肥期配合料肉牛育肥期精补料奶牛泌乳期精料补充料奶牛泌乳期精料补充料奶牛泌乳期精料补充料奶牛泌乳期精料补充料奶牛泌乳期精料补充料奶牛泌乳期精料补充料奶牛泌乳期精料补充料奶牛泌乳期精料补充料育肥牛自配混合料肉羊育肥期配合饲料-牛博士育肥牛自配混合料育肥羊自配混合料育肥羊自配混合料育肥羊自配混合料泌乳期奶牛自配料育成期奶牛自配料育成奶牛自配料泌乳期奶牛自配料育肥牛自配料育肥牛自配料羔羊配合饲料-900-18肉大鸡配合饲料-513乳猪配合饲料-断奶宝育肥羊配合饲料-868犊牛精料补充料-962犊牛精料补充料-5700仔猪后期配合饲料-103618羔羊精补料饲料育肥肉牛自配料育肥肉牛自配料育肥肉牛自配料育肥肉牛自配料奶牛泌乳期自配料肉羊育肥期自配料肉牛育肥期自配料奶牛泌乳期自配料肉牛育肥期自配料受检企业宁夏新希望反刍动物营养食品有限公司宁夏新希望反刍动物营养食品有限公司宁夏新希望反刍动物营养食品有限公司宁夏新希望反刍动物营养食品有限公司宁夏新希望反刍动物营养食品有限公司宁夏新希望反刍动物营养食品有限公司宁夏景田牧业有限公司青铜峡市康盛牧业有限责任公司宁夏鼎盛翔奶牛养殖合作社宁夏荣昇牧业有限公司青铜峡市鑫牛奶牛养殖专业合作社青铜峡市万花牧业专业合作社宁夏天天奶牛养殖专业合作社青铜峡市伊友奶牛养殖专业合作社宁夏聚牧农牧业发展有限公司兴峰肉牛养殖合作社宁夏鑫茂牧业有限公司王刚牛羊养殖家庭牧场李有春育肥羊养殖场李有杰育肥羊养殖场赫生金育肥羊养殖场银川茂林养殖专业合作社银川茂林养殖专业合作社永宁县荣俊养殖专业合作社永宁县荣俊养殖专业合作社宁夏金光农牧开发有限公司宁夏犇旺生态农业有限公司银川康地反刍动物营养科技有限公司宁夏蜀佳农牧科技有限公司宁夏蜀佳农牧科技有限公司宁夏蜀佳农牧科技有限公司宁夏莱福饲料有限公司银川东方希望动物营养食品有限公司银川东方希望动物营养食品有限公司惠农区培林饲料店尾闸镇聚宝新村杨兵肉牛养殖宝马园区马明强肉牛养殖场宝马园区吴万平肉牛养殖场宝马园区梁福军肉牛养殖场宁夏农垦贺兰山奶业有限公司暖泉牧场宁夏农垦贺兰山牛羊产业集团有限公司贺兰县富祥鑫肉牛养殖专业合作社宁夏万家乳业有限公司贺兰县兴新秦川牛养殖专业合作社磺胺嘧啶未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺二甲基嘧啶未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺间甲氧嘧啶未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺甲恶唑未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺喹恶啉未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出Quality Monitoring质量监测57饲料博览2023年第4期4讨论自饲料中禁止使用抗生素公告颁布后，饲料中抗生素检测成为检验检测机构的主要任务，磺胺类药物为抗菌药品种数量最多的人工合成药物。饲料中磺胺类药物分析测定方法有多种，例如高效液相色谱法7-9、液相色谱-串联质谱法10-11、酶联免疫法、放射受体分析法等，液相色谱-串联质谱检测（下转第63页）表3续检测结果统计样品编号828384858687888990919293949596979899100101102103104105106107108109110111112113114115116117118119120样品名称肉牛育肥期自配料奶牛泌乳期自配料肉羊育肥期自配料肉牛育肥期自配料奶牛泌乳期自配料育肥羊自配料肉牛育肥期自配料肉牛育肥期自配料肉牛育肥期自配料肉牛育肥期自配料肉牛育肥期自配料奶牛泌乳期自配料奶牛泌乳期精料补充料-7211肉羊育肥期精料补充料-肥羊1号肉牛育肥期精料补充料-健康伴侣生长育肥猪配合饲料-大屁股2号仔猪配合饲料-大屁股1号产奶期精料补充料8752-18生长育肥期肉牛精料补充料S302肉牛育肥精料补充料802奶牛泌乳期精料补充料702A生长育肥猪前期配合饲料8183仔猪前期配合饲料CT3111育肥羊精料补充料901育肥牛精料补充料951仔猪配合饲料552育肥羊精料补充料851断奶宝乳猪配合饲料肉羊育肥期精料补充料-肥羊1号仔猪配合饲料-大屁股1号奶牛泌乳期精料补充料-7211肉牛育肥期精料补充料-230生长育肥猪配合饲料-大屁股3号生长育肥猪中期配合饲料552产蛋鸡配合饲料324仔猪配合饲料正大仔猪宝肉牛精料补充料382奶牛精料补充料572-18育肥羊精料补充料586受检企业贺兰县四海综贸有限公司宁夏鑫金元乳业有限公司贺兰县祥鑫泰养殖专业合作社贺兰县光杰生态农业科技发展有限公司宁夏合牧农业科技有限公司贺兰县力农羊业有限公司贺兰县玉丰养殖专业合作社贺兰县新胜村嘉俊养殖场贺兰县新胜村优米家庭农场宁夏金百汇农业开发有限公司贺兰县五星村才华养殖场宁夏中地畜牧养殖有限公司宁夏大北农科技实业有限公司宁夏大北农科技实业有限公司宁夏大北农科技实业有限公司宁夏大北农科技实业有限公司宁夏大北农科技实业有限公司宁夏大成永康营养技术有限公司宁夏大成永康营养技术有限公司银川康地反刍动物营养科技有限公司银川康地反刍动物营养科技有限公司康地饲料（银川）有限公司康地饲料（银川）有限公司银川康地反刍动物营养科技有限公司宁夏蜀佳农牧科技有限公司宁夏蜀佳农牧科技有限公司宁夏蜀佳农牧科技有限公司宁夏蜀佳农牧科技有限公司宁夏大北农科技实业有限公司宁夏大北农科技实业有限公司宁夏大北农科技实业有限公司宁夏大北农科技实业有限公司宁夏大北农科技实业有限公司银川正大有限公司银川正大有限公司银川正大有限公司银川正大有限公司银川正大有限公司银川正大有限公司磺胺嘧啶未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺二甲基嘧啶未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺间甲氧嘧啶未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺甲恶唑未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出磺胺喹恶啉未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出质量监测Quality Monitoring582023年第4期饲料博览 6 安济山,刘宽博,王永伟,等.发酵麦麸的营养特性及其在畜禽生产中的应用J.动物营养学报,2020,32(7):3064-3071.7 FENG J,LIU X,XU Z R,et al.Effects of aspergillus oryzae fermented soybean meal on growth performance and plasma biochemical parameters in broilersJ.Animal Feed Science andTechnology,2007,134(3):235-242.8 杨卫兵,章竹岩,祝溢锴,等.发酵豆粕对肉鸭生产性能、肌肉成分、肉品质及血清指标的影响J.中国粮油学报,2012,27(2):71-75.9 黄艺伟,王全溪,陈文忠,等.发酵豆粕对樱桃谷肉鸭生长性能和屠宰性能的影响J.福建农林大学学报:自然科学版,2012,41(5):534-537.10梁远东,覃小荣,黄文盟,等.1535日龄仔鸭日粮粗纤维适宜水平的研究J.广西畜牧兽医,2005,21(4):149-151.11张艾珈,严敏,张延延,等.日粮添加混合发酵饲料对樱桃谷肉鸭生长性能、胴体品质和肌内脂肪代谢的影响J.畜牧与兽医,2022,54(4):17-24.12陶志云,徐文娟,施祖灏,等.感染鸭疫里默氏菌对鸭小肠粘膜形态结构的影响J.江苏农业科学,2022,50(8):166-169.13万雨,杨海明,韩厚明,等.江南白鹅消化器官的早期生长发育特点及其相关性研究J.中国农业科技导报,2021,23(9):69-77.14王誉颖,刘雪连,卢斯婷,等.干酪乳杆菌对雏鸡十二指肠发育的组织学影响J.中国农业大学学报,2020,25(2):61-66.15伍金娥,常超,王学东,等.益生菌对肉仔鸭肠道结构的影响J.湖北农业科学,2011,50(22):4670-4673.16白长胜,尹珺伊,王欢,等.饲粮中添加不同乳酸菌对籽鹅肠道菌群、肠道形态结构、肠道pH及免疫器官指数的影响J.饲料工业:1-8 2023-06-27.2023,https:/ W C,LEE T T.Laetiporus sulphureus-fermented wheat branenhanced the broiler growth performance by improving the intestinal microflora and inflammation statusJ.Poultry Science,2020,7:3606-3616.（上接第58页）法成本较高，酶联免疫法易出现假阳性、假阴性反应，需用高效液相色谱法或液相色谱-串联质谱法进行确证，放射受体分析法有时会出现交叉反应及假阳性反应，样品处理复杂，其中高校液相色谱法较成熟并被广泛应用。本研究针对 饲料中磺胺类药物的测定 高效液相色谱法 中的前处理方法进行了改进，改进后的方法更加便捷、高效，更有利于进行大批量饲料样品中常见磺胺类药物的风险监测。5结论利用高效液相色谱法测定饲料中5种磺胺类药物，将GB/T 195422007方法中称样容器锥形瓶改为离心管，利于样品旋涡、振摇、离心等操作。提取液体积由50 mL乙腈改为25 mL，降低有机试剂的使用量，减少环境污染及对操作人员的毒性作用。改进后的方法更为简单，利于操作和样品的批量处理。经验证，改进的方法各项参数均符合方法学要求，可用于饲料中非法添加磺胺类药物的检测，对饲料禁止使用磺胺类药物的筛查具有重要意义。参考文献 1 万春花,龙洲雄.磺胺类药物残留的色谱分析进展J.现代科学仪器,2008,18(2):99-104.2 贾涛.高效液相色谱法检测饲料中磺胺类药物的方法研究J.饲料与畜牧,2014(8):51-56.3 SILVA B F D,JELIC A,LOPEZSERNA R,et al.Occurrence anddistribution of pharmaceuticals in surface water,suspended solidsand sediments of the Ebro river basin,SpainJ.Chemosphere,2011,85(8):1331-1339.4 张梦雪,赵义良,苏青,等.水产品中磺胺类药物残留危害及常用检测方法J.今日畜牧兽医,2019,35(7):79-80.5 全国饲料工业标准化技术委员会.饲料中磺胺类药物的测定:GB/T 195422007S.北京:中国标准出版社,2007.6 周殿芳,陈建武,彭婕,等.UPLC法检测渔用饲料中八种磺胺类药物残留的研究J.化学通报,2015,78(5):467-470.7 尚红,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程M.4版.北京:人民卫生出版社,2014:304 8 李长健,玉韦勇,黎宇.全血标本放置时间对血氨检测的影响J.吉林医学,2014,35(5):1010-1011 9 齐宁霞,刘静,安良.对不同血氨测定标本处理方法的评价J.中国现代医药杂志,2011,13(2):70-7110董金金,乔海珍,王鹏飞.干化学法测血氨的质量控制及其影响因素分析J.实用医技杂志,2013,20(12):1320-132111叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程M.2版.南京:东南大学出版社,1997:257Feed and Feeding饲料与饲养63