CEBPs及其调节的基因与大鼠肝再生相关性分析.pdf

wcjd 世界华人消化杂志 2007年7月18日;15(20):2186-2193ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 基础研究 BASIC RESEARCHCEBPs及其调节的基因与大鼠肝再生相关性分析王 望,陈晓光,徐存拴王望,徐存拴,河南师范大学生命科学学院 河南省新乡市 453007陈晓光,河南省科技部共建细胞分化调控重点实验室 河南省新乡市 453007王望,河南师范大学生命科学学院细胞生物学专业在读硕士研究生,主要从事肝再生分子机制的研究.通讯作者:徐存拴,453007,河南省新乡市建设东路46号,河南师范大学生命科学学院.xucs电话:[phone]收稿日期:2007-04-24 接受日期:2007-05-10Correlation analysis of CCAAT/enhancer-binding proteins and their regulated genes with rat liver regeneration Wang Wang,Xiao-Guang Chen,Cun-Shuang XuWang Wang,Cun-Shuang Xu,Life Science College of Henan Normal University,Xinxiang 453007,Henan Prov-ince,ChinaXiao-Guang Chen,Key Laboratory of Cell Differentiation and Regulation Co-construction from Science and Technol-ogy Department of Henan Province,Xinxiang 453007,Henan Province,ChinaCorrespondence to:Cun-Shuang Xu,Life Science Col-lege of Henan Normal University,46 Jianshe East Road,Xinxiang 453007,Henan Province,China.xucs Received:2007-04-24 Accepted:2007-05-10 AbstractAIM:To explore the effects on transcription levels of CCAAT/enhancer-binding proteins(CEBP)genes and genes regulated in liver regeneration(LR).METHODS:CEBP family transcription factors correlated with LR were input into the websites of NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)and RGD(rgd.mcw.edu).Documents related to the transcrip-tion functions of CEBP family transcription factors were located and the CEBP family down-stream target genes in human,rat and mice ob-tained.The human and mice non-repeated genes in rat genes were screened out;the results were confirmed by comparison by Rat Genome 230 2.0 chip examination.Twice up-regulated and down-regulated genes were regarded as signifi-cantly changed rat homologous genes.The Rat Genome 230 2.0 chips were used to detect the expressions of the above genes in rat RL.Genes correlated with liver regeneration were confirmed by comparison in a true and false operation.RESULTS:Twenty-seven genes correlated with LR,11 of which were up-regulated,6 down-reg-ulated,and 10 that were up-regulated at certain time points but down-regulated at others.The up-regulated range was 2 to 128 fold of the com-parison group,while the down-regulated range was 2 to 16 fold.The number of genes expressed in the LR initiation 0.5-4 hours after partial hepatectomy(PH),G0/G1 transition(4-6 hours after PH),cell proliferation(6-66 hours after PH)and cell differentiation and tissue structure reconstruction(72-168 hours after PH)stages were 18,3,8 and 1,respectively.Total expres-sion times were 18,11,25 and 16,respectively,showing that the correlated genes were primar-ily expressed in the LR initiation stage.Genes were up-regulated 126 fold and down-regulated 76 fold,indicating that more genes were up-regulated than down-regulated in LR.CONCLUSION:CEBPs and their regulated genes are highly correlated with cell prolifera-tion,cell differentiation,cell apoptosis,inflam-mation,stress response,lipids metabolism and changes in the extracellular matrix.Key Words:Partial hepatectomy;Rat genome 230 2.0 chip;CCAAT/enhancer-binding proteins;Liver regeneration correlated genesWang W,Chen XG,Xu CS.Correlation analysis of CCAAT/enhancer-binding proteins and their regulated genes with rat hepatic regeneration.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2007;15(20):2186-2193摘要目的:探讨基因转录水平CCAAT增强子结合蛋白(CEBPs)及其调节基因在肝再生(LR)中的作用.方法:将与肝再生相关的CEBPs家族转录因子输入NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)和RGD(rgd.mcw.edu)等网站查找与其转录功能相关的文献,从中得出大鼠、小鼠和人的背景资料肝脏具有很强的再生能力,大鼠部分肝切除模型被广泛用于研究肝再生.肝再生涉及细胞激活、去分化、增殖及调控、再分化和组织结构功能重建等生理生化过程,受到包括转录因子在内的多种因素调控.王望,等.CEBPs及其调节的基因与大鼠肝再生相关性分析 2187CEBPs家族下游基因.然后将人和小鼠基因与大鼠比对,筛选出与大鼠不重复的人和小鼠基因.再将他们与Rat Genome 230 2.0芯片的检测结果进行比对确认,把其中表达上调或下调2倍以上的基因视为有意义变化的大鼠同源基因.用Rat Genome 230 2.0 芯片检测他们在大鼠再生肝中的表达情况,用真、假手术比较方法确定肝再生相关基因.结果:27个基因与肝再生相关,其中11个基因表达上调,6个基因表达下调,10个基因在有的时点表达上调,有的时点表达下调(简称上/下调表达).他们的上调范围为对照的2-128倍,下调范围为对照的2-16倍.肝再生启动部分肝切除(PH)后0.5-4 h、G0/G1过渡(PH后4-6 h)、细胞增殖(PH后6-66 h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72-168 h)等4个阶段起始表达的基因数分别为18,3,8和1;基因的总表达次数分别为18,11,25和16.表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用.他们共表达上调126次,下调76次.表明肝再生中表达上调基因多于表达下调基因.结论:CEBPs及其调节的基因与肝再生中细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、炎症反应、应激反应、脂类代谢和细胞外基质变化等密切相关.关键词:部分肝切除;大鼠基因组230 2.0芯片;CCAAT增强子结合蛋白;肝再生相关基因王望,陈晓光,徐存拴.CEBPs及其调节的基因与大鼠肝再生相关性分析.世界华人消化杂志 2007;15(20):2186-21930 引言部分肝切除(partial hepatectomy,PH)1或肝损伤后,残肝细胞通过细胞增殖(细胞数目增加)和肥大(细胞体积增加)由基本不生长状态转变为快速生长状态以补偿丢失、损伤的肝组织2-3,这个过程称为肝再生(liver regeneration,LR)2.同时,机体可精确感知再生肝的大小,适时停止再生4.通常,根据细胞的生理活动将肝再生分为启动(PH后0.5-4 h)、G0/G1过渡(PH后4-6 h)、细胞增殖(PH后6-66 h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72-168 h)等4个阶段5.根据时间进程分为早期(PH后0.5-4 h)、前期(PH后6-12 h)、中期(PH后16-66 h)、后期(PH后72-168 h)等4个时期6.涉及细胞激活、去分化、增殖及调控、再分化、组织结构和功能重建等生理生化过程7,受到包括转录因子在内的多种因素调 控8.研究表明,CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhancer-binding proteins,CEBPs)家族转录因子CEBP,CEBPb,CEBPg,CEBP和CEBP均含碱性亮氨酸拉链结构域,在C端有DNA结合元件和异源或同源亮氨酸拉链元件.CEBP通过调节scd1,cd36和cds19,CEBPb通过调节afp10,a2m11,gsta212,cat13,il6,col1a2和col2a114,CEBPg通过调节ercc5和xrcc115,CEBP通过调节ccl216CEBP通过调节il6,ccl2,ccl4,csf1r17,itgam,bcl2l1,bcl2,ccna2,ccnd2,ccne1和cdk418,从而在细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、炎症反应、应激反应、脂类代谢和细胞外基质变化等方面发挥重要作用.为在基因转录水平19-20了解CEBPs及其调节基因与肝再生的相关性,我们用含42个CEBPs及其调节基因的Rat Genome 230 2.0芯片21检测了大鼠2/3肝切除后再生肝基因表达情况,并初步分析了他们在肝再生中的表达方式与肝再生的相关性和作用22.1 材料和方法1.1 材料 SD纯系大鼠由河南师范大学实验动物中心提供,体质量200-250 g,将大鼠随机分组,每组6只,雌雄各半.对照组材料为正常成年大鼠肝.按Higgins et al1方法切除大鼠肝左叶和中叶后恢复0.5,1,2,4,6,8,12,16,18,24,30,36,42,48,54,60,66,72,96,120,144和168 h时再生肝.于相应恢复时间颈椎脱臼处死动物,切取再生肝置4 PBS中涮洗3次,从右叶再生肝中部取100-200 mg组织,将每组的6个样品混合后放到一起(总肝量为0.1-0.2 g6=1-2 g),于-80保存备用.假手术(sham-operation,SO)组除不切除肝叶外,其他同部分肝切除组.实验中严格遵循中国动物保护法.总RNA提取按Invitrogen公司的TRIzol试剂盒操作程序进行23.总RNA纯化按Qiagen公司的RNeasy mini试剂盒操作程序进行24.用琼脂糖凝胶电泳(180 V,0.5 h)检测总RNA的28S和18S比例;其亮度约为21;在260/280 nm波长下测定总RNA浓度和纯度25.1.2 方法 cDNA,cRNA合成按Affymetrix公司方法进行26.合成cDNA时,模板量为1-8 g总RNA.合成生物素标记的cRNA时,取12 L上述cDNA溶液作模板.cDNA,cRNA纯化按基因芯片分析样品纯化操作程序进行27.两者的浓度、纯度和质量检测方法同上25.1 g/L的cRNA 15 L,5片段化缓冲液6 L,无RNA酶水9 L研发前沿再生生物学和再生医学已成为当今生物学和医学的研究热点.其中,肝再生的功能基因组学、蛋白质组学、细胞组学等研究正在广泛深入地进行.2188 ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 世界华人消化杂志 2007年7月18日 第15卷 第20期相关报道研究表明,CEBPs家族转录因子对细胞增殖和细胞分化等相关基因有调控作用,肝再生亦涉及CEBPs对细胞增殖和细胞分化等相关基因的调节.混匀,94温浴35 min,得到长度为35-200 bp的cRNA片段.按Affymetrix公司提供的配方配制杂交液,然后将杂交液加至经预杂交处理的Rat Genome 230 2.0芯片中,于45 60 r/min杂交16 h,吸去杂交液,用GeneChip全自动洗涤工作站450(Affymetrix公司,USA)洗涤和染色芯片.用高分辨芯片扫描仪3000(Affymetrix公司,USA)扫描芯片,获得基因表达信号值21.用GCOS1.2软件读取、处理信号值数据,获得归一化后的信号值、信号检出(P,A,M)以及实验和对照组的比值21.为减少芯片分析误差,用Rat Genome 230 2.0芯片对每个时点再生肝重复检测3次.把3次检测中总比值最大的那次结果视为最接近真实(Rm),同时,也将3次检测中3个持家基因(b-actin,hexokinase和glyseraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)平均值最接近1的那次结果视作最接近真实(Rh).将前者比后者,得到矫正系数,用矫正系数乘以后者每个时点每个基因对应的比值,得到用于分析基因表达模式和作用的基因相对表达丰度.为克服芯片分析误差导致的基因不合常规和/或不合逻辑的表达变化,又根据肝再生中肝实质细胞的细胞周期进程,用合理化分析软件(RAP)整理部分肝切除后0-4 h,6-12 h,12-24 h的基因表达变化值使之更具科学性.然后用GeneMath,GeneSpring,Microsoft Excel等分析软件对各组数据进行统计和聚类分析21,27-28.将查出的与肝再生相关的CEBPs家族转录因子输入NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)和RGD(rgd.mcw.edu)等网站查找与其转录功能相关的文献,从中得出大鼠、小鼠和人的CEBPs家族下游基因.然后将人和小鼠基因与大鼠比对,筛选出与大鼠不重复的人和小鼠基因.再将他们与Rat Genome 230 2.0芯片的检测结果进行比对确认,把其中表达上调或下调2倍以上的基因视为有意义变化28的大鼠同源基因.用上述芯片对再生肝进行检测,将3次检验结果相同或相似,至少在部分肝切除后一个时点表达上调或下调2倍以上,部分肝切除组与假手术组差异显著(P0.05)或极显著(P001)的基因视为肝再生相关基因.2 结果2.1 肝再生中CEBPs及其调节基因的表达 查NCBI,RGD网站资料表明,46个基因受CEBPs调节;查Rat Genome 230 2.0芯片资料表明,该芯片含上述42个基因,其中27个基因至少在部分肝切除(partial hepatectomy,PH)后一个时点发生了有意义表达变化,部分肝切除组与SO组有显著或极显著差异,3次Rat Genome 230 2.0芯片检测结果具有可重复性.因此,初步确认这些基因与LR相关.其中,11个基因表达上调,6个基因表达下调,10个基因在有的时点表达上调,有的时点表达下调(简称上/下调表达).他们的上调范围为对照的2-128倍,下调范围为对照的2-16倍(表1).分析表明,肝再生各时点起始上调和下调及总表达的基因数为:0.5 h时均为6和3;1 h时3和1,7和2;2 h时2和0,7和1;4 h时1和2,6和3;6 h时0和0,7和4;8 h时0和1,5和5;12 h时0和0,4和5;16 h时1和0,6和5;18 h时0和2,7和7;24 h时1和0,6和6;30 h时1和0,4和2;36 h时0和0,5和5;42 h时1和0,5和1;48 h时0和0,8和5;54 h时0和0,7和4;60 h时0和1,7和5;66 h时0和0,7和2;72 h时1和0,7和4;96 h时0和0,4和3;120 h时0和0,6和1;144 h时0和0,1和2;168 h时0和0,3和1.肝再生中基因起始表达的总体情况是:17个基因起始上调,10个基因起始下调.其中,在启动阶段(PH后0.5-4 h)12个基因起始上调,6个基因起始下调;G0/G1过渡阶段(PH后4-6 h)1个基因起始上调,2个基因起始下调;细胞增殖阶段(PH后6-66 h)4个基因起始上调,4个基因起始下调;细胞再分化和组织结构功能重建阶段(PH后72-168 h)1个基因起始上调.肝再生中基因表达的总体情况是:共表达上调126次,下调76次.其中,肝再生启动阶段(PH后0.5-4 h)基因上调26次,下调9次;G0/G1过渡阶段(PH后4-6 h)基因上调13次,下调7次;细胞增殖阶段(PH后6-66 h)基因上调79次,下调56次;细胞再分化和组织结构功能重建阶段(PH后72-168 h)基因上调21次,下调11次(图1).2.2 CEBPs及其调节的基因与肝再生相关性 根据功能和表达变化将CEBPs及其调节的22个基因分为7组:(1)细胞增殖相关基因.其中,cebp在4-66 h表达下调,其调节的scd1在1-6 h表达上调,48和66 h表达下调.cebpb在0.5-8 h表达上调,他调节的a2m在0.5-24 h表达上调,afp在6-12 h表达下调,54-72 h表达上调.cebp在16-120 h表达下调,其调节的ccna2在18-72 h表达上调,ccnd2在42 h表达上调,ccne1在8-72 h表达上调,cdk4在24和66 h表达上调(图2A);(2)细胞分化相关基因.其中,cebp及其调节的scd1表达同上.cebp调节的il6在2-8,18,48,60,96 h表达上调,在36王望,等.CEBPs及其调节的基因与大鼠肝再生相关性分析 2189创新盘点用 高 通 量 R a t Genome 230 2.0基因表达谱芯片分析了大鼠2/3肝切除后CEBPs及其调节的基因在肝再生中表达情况,发现上述基因中有27个基因与肝再生相关.表 1 CEBPs及其调节的22个基因在肝再生中表达丰度 名称 Abbr.Fold differenceCEBPs转录因子 CCAAT/enhancer binding protein alpha Cebp 0.06 CCAAT/enhancer binding protein beta Cebpb 3.07 CCAAT/enhancer binding protein gamma Cebpg 0.44 CCAAT/enhancer binding protein delta Cebp 6.27,0.40 CCAAT/enhancer binding protein epsilon Cebp 0.14 细胞增殖 Cebp stearoyl-Coenzyme A desaturase 1 Scd1 3.48,0.29 Cebpb alpha-2-macroglobulin A2m 46.16,0.40 alpha-fetoprotein Afp 3.72,0.14 Cebp cyclin A2 Ccna2 45.07 cyclin E Ccne1 18.47 cyclin-dependent kinase 4 Cdk4 2.47 cyclin D2 Ccnd2 2.23 细胞分化 Cebp stearoyl-Coenzyme A desaturase 1 Scd1 3.48,0.29 Cebp integrin alpha M Itgam 3.41 Cebpb/Cebp interleukin 6 Il6 6.06,0.28凋亡 Cebp stearoyl-Coenzyme A desaturase 1 Scd1 3.48,0.29 Cebpb glutathione-S-transferase Gsta2 6.96,0.22 Cebpg excision repair cross-complementing Ercc5 2.38 rodent repair deficiency complementation group 5 Cebpb/Cebp/Cebp hemokine C-C Ccl2 128.00 motif ligand 2 B-cell leukemia/lymphoma 2 Bcl2 0.32 bcl2-like 1 Bcl2l1 3.00,0.44炎性反应 Cebpb alpha-2-macroglobulin A2m 46.16,0.40 Cebpb/Cebp/Cebp chemokine C-C Ccl2 128.00 motif ligand 2 colony stimulating factor 1 receptor Csf1r 13.00 integrin alpha M Itgam 3.41 chemokine C-C motif ligand 4 Ccl4 4.00,0.22应激反应 Cebpb catalase Cat 5.00 glutathione-S-transferase Gsta2 6.96,0.22 Cebpb/Cebp interleukin 6 Il6 6.06,0.28 Cebpg excision repair cross-complementing Ercc5 2.38 rodent repair deficiency complementation group 5 x-ray repair cross-complementing Xrcc1 5.00,0.31 group 1 protein脂质代谢 Cebp CDP-diacylglycerol synthase 1 Cds1 0.29 CD36 antigen Cd36 0.10 stearoyl-Coenzyme A desaturase 1 Scd1 3.48,0.29细胞外基质 Cebpb rocollagen,type I alpha 2 Col1a2 7.00 procollagen,type II alpha 1 Col2a1 7.00,0.30黑体字:转录因子;非黑体字:转录因子调节的基因.2190 ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 世界华人消化杂志 2007年7月18日 第15卷 第20期应用要点根据结果进一步研究CEBPs及其调控的基因在肝再生中的作用和机制.和72 h表达下调,itgam在72和120 h表达上调(图2B);(3)细胞凋亡相关基因.其中,cebp及其调节的scd1表达同上.cebpb调节的gsta2在8-24 h表达下调,在30,42,96 h表达上调.cebpg在60 h表达下调,其调节的ercc5在30 h表达上调.cebp在1-72 h表达上调,其调节的ccl2在12-120 h表达上调.cebp调节的bcl2在18-72 h表达下调,bcl2l1在0.5 h表达下调,在6 h表达上调(图2C);(4)炎症反应相关基因.其中,cebpb及其调节的a2m,cebp及其调节的ccl2,cebp及其调节的ccl2和itgam表达同上.cebp调节的ccl4在18,54,96 h表达下调,csf1r在16,30,42,96 h表达上调(图2D);(5)应激反应相关基因.cebpb及其调节的gsta2和il6表达同上,cat在0.5 h表达上调.cebpg及其调节的ercc5表达同上,xrcc1在36,48,60 h表达上调,在1和144-168 h表达下调(图2E);(6)脂类代谢相关基因.cebp及其调节的scd1表达同上,cd36在0.5-72 h表达下调,cds1在4-18 h表达下调(图2F);(7)细胞外基质变化相关基因.cebpb调节的col1a2在16-24 h和66-168 h表达上调col2a1在2和54 h表达上调,在24 h表达下调(图2G).3 讨论我们研究了CEBP家族转录因子CEBP,CEBPb,CEBPg,CEBP和CEBP及其调节的基因与肝再生相关性.其中,cebp通过促进cds1,cd36和scd1转录促进脂类合成9,29.cds1在肝再生的4-18 h,cd36在0.5-72 h、scd1在48和66 h表达下调,可能受cebp在4-66 h表达下调影响,并推测肝再生早期、前期和中期的脂类合成受抑制.此外,scd1还能通过改变细胞膜流动性和影响信号转导抑制细胞凋亡、促进细胞增殖和促进细胞分化30.cebp在4-66 h及scd1在48和66 h表达下调可能与肝再生中期的细胞增殖和分化减弱、细胞凋亡起始有关.一般认为,cebpb通过抑制cat转录促进氧化应激反应13.cebpb在0.5-8 h表达上调,cat在0.5 h表达上调,cat表达可能还受其他因素促进,并在抑制肝再生早期的氧化应激反应中起重要作用.cebpb能促进col1a2转录和抑制col2a1转录14.后两者均促进胶原蛋白基因表达.推测3者的转录平衡与再生肝的胞外基质构建调控密切相关.cebpb还是促细胞增殖基因afp的主要促进因子10,31.afp在54-72 h表达上调,与cebpb共同促进肝再生中期和后期的细胞增殖.cebpb通过促进a2m转录抑制蛋白酶活性促进细胞增殖1132.a2m在0.5-24 h表达上调,在8 h达到高峰,是对照的46倍.可能他在肝再生的细胞激活、细胞周期进程和缓解炎症反应中起重要作用.cebpb通过促进gsta2转录抑制细胞凋亡,参与药物反应来防止化学物诱导的细胞癌变12,33-34.gsta2在8-24 h表达下调,在30,42和96 h表达上调.推测前期和中期再生肝细胞的抗癌变能力降低,中期和后期细胞生存能力提高.研究表明,cebpg促进DNA损伤修复基因xrcc1表达15,35.前者在PH后60 h表达下调,后者在144-168 h表达下调.推测肝再生后期的DNA损伤修复活动减少.此外,cebpg通过促进ercc5转录促进DNA氧损伤修复和抑制细胞凋亡15,36.ercc5在30 h表达上调,可能与肝再生中期的DNA修复活动加强有关.研究表明,cebp通过抑制ccnd2,ccne1和cdk4抑制细胞增殖18,37-39,前者在肝再生的16-120 h表达下调,后3者在8-72 h表达上调,推测促进相应时期的细胞增殖.cebp通过抑制bcl2l1促进细胞凋亡18.后者在6 h表达上调,可能与肝再生前期的细胞抗凋亡能力提高有关.cebp还能通过促进csf1r和ccl4转录促进炎图 1 CEBPs及其调节的22个基因在肝再生各时点起始表达及总表达情况.1614121086420Expressing gene numbers0.5 1 2 4 6 8 12 16 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 96 120 144 168起始上调表达基因总上调表达基因起始下调表达基因总下调表达基因t/h王望,等.CEBPs及其调节的基因与大鼠肝再生相关性分析 2191名词解释部分肝切除(PH):是 H i g g i n s 和Anderson于1931年建立的通过外科手术切除大鼠2/3肝脏的方法.部分肝切除诱导的肝再生(LR)是指用外科手术切除大鼠2/3肝脏后,残肝细胞通过细胞增殖(细胞数目增加)和肥大(细胞体积增加)由基本不生长状态转变为快速生长状态以补偿丢失的肝组织.图 2 CEBPs及其调节的22个基因在肝再生中表达变化.A:细胞增殖相关基因;B:细胞分化相关基因;C:细胞凋亡相关基因;D:炎症反应相关基因;E:应激反应相关基因;F:脂类 代 谢 相 关 基因;G:细胞外基质变化相关基因.实线示基因表达上调,虚线示基因表达下调;实-虚线示上/下调表达基因.X轴为部分肝切除后恢复时间(h),Y轴为各时点基因表达产物信号值与对照比值的对数.21.510.50-0.5-1-1.51 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168A1CebpScd1CebpbAfpA2m21.510.50-0.5-1-1.5A21 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168CebpCcna2Ccnd2Ccne1Cdk410.50-0.5-1-1.5B1 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168CebpScd1CebpIl6Itgam10.50-0.5-1-1.5C11 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168CebpScd1CebpbGsta2CebpgErcc52.521.510.50-0.5-1C21 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168CebpCebpbCebpCcna2Ccl2Bcl2l12.521.510.50-0.5-1D11 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168CebpbA2mCebpCcl22.521.510.50-0.5-1D21 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168CebpCcl2Ccl4Csf1rItgam10.50-0.5-1E11 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168CebpbCatGsta2Il60.60.40.20-0.2-0.4-0.6E21 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168CebpgErcc5Xrcc110.50-0.5-1-1.5F1 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168CebpCd36Cds1Scd10.80.60.40.20-0.2-0.4-0.6G1 4 8 16 24 36 48 60 72 120 168CebpbCol1a2Col2a12192 ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 世界华人消化杂志 2007年7月18日 第15卷 第20期 症反应18,40-41.ccl4在肝再生中表达下调,csf1r表达上调.推测炎症反应受3者的平衡调控.cebp通过抑制bcl2转录促进细胞凋亡18,42.后者在18-72 h表达下调,可能还受其他因素抑制.cebp还能通过抑制ccna2转录抑制细胞增殖18,43.后者几乎在整个肝再生中表达上调,在66 h达到高峰,是对照的45倍.可能在肝再生的细胞增殖中起重要作用.cebp通过促进itgam表达促进细胞分化和炎症反应18,44-45.后者在72和120 h表达上调,推测尚存在促进itgam表达的其他因素.研究表明,ccl2有抑制细胞凋亡和促进炎症反应的功能46-47.其表达除受cebpb和cebp促进外,还受cebp促进16.cebp在1-72 h表达上调,ccl2在12-120 h表达上调,并在48 h达到高峰,是对照的128倍.根据其表达趋势与cebpb和cebp更为一致推测,肝再生中ccl2表达主要受cebpb和cebp促进,并在抑制再生肝细胞凋亡中起重要作用.cebpb和cebp促进il6的转录17.il6是体温调节因子,能促进细胞分化,还与出血导致的肝脏功能紊乱有关48-50.他在2-8 h表达上调,在16 h后的有些时点上调,有些时点下调.3者在肝再生中的作用和相互关系有待进一步研究.总之,我们用高通量基因表达谱芯片分析了大鼠部分肝切除后CEBPs及其调节的基因在肝再生中表达情况,初步证实他们与再生肝的细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化、炎症反应、应激反应、脂类代谢、细胞外基质建成等有关.然而,从基因mRNA蛋白质功能等受包括蛋白互作在内的多种因素影响,以及同一基因受多个转录因子调控等情况今后我们将进一步用Northern印迹、蛋白质芯片、RNA干扰、蛋白互作等技术验证上述结果.4 参考文献1 Higgins GM,Anderson RM.Experimental pathology of the liver:restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.J Arch Pathol 1931;12:186222 2 Fausto N,Campbell JS,Riehle KJ.Liver regeneration.Hepatology 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