高分子聚合物-多壁碳纳米管复合物固定漆酶及其在玻碳电极上的直接电子迁移.pdf

书书书高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶及其在玻碳电极上的直接电子转移曾涵 龚兰新（新疆师范大学化学化工学院乌鲁木齐 ）摘要采用不同结构的高分子聚合物与纯化的多壁碳纳米管（）共混的方法，制备得到聚合物非共价功能化多壁碳管复合物，测定了这些载体对漆酶（）的担载量、固定漆酶的比活力及稳定性。以固定漆酶的复合物修饰玻碳（）电极后，采用循环伏安法研究这些电极在无氧磷酸盐缓冲液（）中的直接电化学行为及催化氧还原活力，粗略地测定了固定漆酶与电极间电子转移的速率常数。实验结果表明，当聚合物中含亲漆酶基团或能与漆酶活性中心发生相互作用的官能团时利于直接电子转移，而且复合物固定漆酶保持了游离漆酶的天然构象这些电极中，（：烯丙基 苯甲酰基 苯基 ，甲酰胺基吡唑 异丙基丙烯酰胺）在无氧 中发生直接电子转移的式电位（）更接近漆酶活性中心的式电位（），具有较快的异相电子转移速率（），较高的漆酶担载量（）和固定漆酶比活力（），较高的催化氧还原能力（氧还原起始电位 ，在 时的催化峰电流为 ）以及良好的重复使用性和长期使用性。关键词漆酶，多重壁碳纳米管，高分子聚合物，玻碳电极，直接电子转移中图分类号：文献标识码：文章编号：（）：收稿，修回通讯联系人：曾涵，讲师；：；：；研究方向：天然高分子改性和应用 生物电化学漆酶（）由于具有较强的催化特异性，较正的活性中心式电位以及较高的催化效率成为酶燃料电池阴极催化剂的最佳选择之一 。但与其它氧化还原酶一样，由于酶的活性中心被不导电的蛋白质骨架包覆加上漆酶特有的高度糖基化环境，使酶活性中心难以实现酶 电极间的电子直接转移。实现酶 电极间电子导通的方法有：使用电子媒介体促进酶 电极间电子导通，这种媒介体一般具有亲漆酶基团而且能可逆地在电极上反应，比如单羧基二茂铁 、二羟甲基二茂铁 和 ，偶氮 双（乙基苯并噻唑啉 磺酸）二铵盐（）等，但使用电子媒介体会提高电极过电位，从而降低燃料电池的输出能量 ，；由于目前尚未见到漆酶活性中心被整体从酶分子中取出并在电极表面重构的实例，故无法像葡萄糖氧化酶那样使用去辅基酶在功能化电极表面重构的方法实现酶 电极间电子直接转移 。但目前已有相当多的方法可实现玻碳（）电极上漆酶 电极间的直接电子转移，已报道的固酶载体有：纳米多孔金 、亲水 亲油两性高分子非共价功能化多壁碳纳米管 、导电聚合物偶联树枝型聚合物包覆纳米粒子 、具有多孔疏水结构的碳基气凝胶 以及单壁碳纳米角修饰碳纤维微电极 等，但这些体系大多数看不到漆酶活性中心的特征氧化还原峰，只能通过底物存在时的催化电流间接研究酶 电极间的电子转移过程，不便于测定酶在电极表面发生电子转移时的动力学参数。这些酶 电极间的电子转移过程相当一部分属于扩散控制过程，对催化剂的催化性能和稳定性存在一定负面影响 。作者前期 研究了几种高分子聚合物功能化纳米粒子固定漆酶的直接电化学及固定漆酶的电子转移动力学。本文在已有文献和前期工作的基础上，进一步研究了几种不同高分子聚合物功能化多壁碳纳米管的聚合物固定漆酶的直接电化学行为，试图分析含有不同官能团的聚合物（特别是壳聚糖的一些衍生物）功能化多壁碳管固定漆酶实现电子转移的能力以及电子转移速率与聚合物结构的关系，并结合这些复合物固定漆酶的担载量、固酶比活力及稳定性测定的结果，初步阐述聚合物中的亲漆酶活性中心基团或与活性中心发生相互作用基团对固定漆酶性质及固定漆酶的酶 电极间直接电子转移动力学方面的影响。固第 卷 第 期应 用 化 学 年 月 酶载体结构与固定漆酶 电极间电子转移关联不仅对于设计高效酶电极有着重要意义，也为日后制备人工酶或“类酶”金属有机催化剂提供参考依据，后者的研制成功将使燃料电池的发展出现重大突破：既具有酶的特性，又避免了酶催化剂昂贵、易中毒且使用范围（特别是温度和溶液 值）有限的缺陷。实验部分 仪器和试剂壳聚糖（，脱乙酰度 ，）购自国药集团化学试剂有限公司；羧甲基壳聚糖（，脱乙酰度 ，羧甲基化度或接枝率 ，）购自上海升耀生物技术有限公司；硫代四氢咪唑啉酮和壳聚糖 羧甲基 硫代 ，咪唑啉酮（缩写为 ）按前文 报道的方法制备和表征，接枝率 ，可溶于乙醚，；烯丙基 苯甲酰基 苯基，甲酰胺基吡唑及最终产物 烯丙基 苯甲酰基 苯基 ，甲酰胺基吡唑 异丙基丙烯酰胺（缩写为 ）按前文 报道的方法制备和表征，可溶于甲醇，分子量分布指数 ；，二羟基噻吩交联壳聚糖（缩写为 ）按前文 报道的方法制备和表征，接枝率 ，粘度 ，可溶于水，；邻苯二甲酰化壳聚糖（缩写为 ）按照文献 报道的方法制备和纯化，可溶于 ，取代度 ，。以上聚合物的化学结构式参见 。纯化的云芝漆酶（分子量 ）及相应底物，二甲氧基苯酚（）（分析纯）购自美国 化学试剂有限公司，现买现用无需进一步纯化。实验过程中使用 的磷酸二氢钾缓冲液（，），所有溶液均用 超纯水配制。多壁碳纳米管（）（直径 ，长度 ）购自深圳纳米港有限公司，按文献 方法纯化后待用。其余化学试剂如无特殊说明均为分析纯，无需纯化直接使用。型原子吸收光谱仪（美国 公司），主机：双光束火焰 石墨炉原子吸收分光光度计，光谱范围 ，型紫外可见分光光度计（日本岛津公司），比色皿厚度 ，型高速离心机（德国 公司），型电化学分析仪（上海辰华仪器有限公司），作为参比电极的 电极和作为工作电极的玻碳电极（，直径 ）均购自天津艾达恒晟工贸有限公司，高纯 气和高纯 气购自南京特气。高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定云芝漆酶的担载量及固定漆酶的比活力高分子聚合物 多壁碳纳米管复合载体固定漆酶修饰玻碳电极的制备方法如下：将纯化过的 第 期曾涵等：高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶及其在玻碳电极上的直接电子转移 与含 前述高分子的溶液或者悬浊液（除了 的溶剂是质量分数为 醋酸水溶液外，其它高分子聚合物的溶剂或分散剂是 的 ）混合后磁力搅拌 ，得到均匀的黑色粘稠悬浊液，以砂芯漏斗抽滤得黑色滤渣。滤渣干燥除水后称取 与 含有漆酶浓度为 的 （）混合，室温下磁力搅拌 ，在冰箱中 下静置 ，以使漆酶能够有足够的时间被吸附诱陷在复合载体中。随后取出混合物在 、转速下离心分离，移除上清液，以 （）润洗剩余的黑色粘稠物 次，除去固酶基元表面固定不牢的漆酶分子。将润洗液与离心分离后移除的上层清液合并，并与漆酶母液一起进行含铜量测定。由于每个漆酶分子中含有 个铜离子，按照文献 采用石墨炉原子吸收法测定复合载体的固定漆酶担载量，按下式计算复合载体固定漆酶的担载量和漆酶的固定百分率：固定漆酶担载量 漆酶母液漆酶浓度 母液体积 漆酶固定百分率固酶复合物载体质量 漆酶的固定百分率 漆酶母液的总含铜量 滤液和上清液中含铜量漆酶母液的总含铜量 复合载体固定漆酶的比活力测定参照文献 ，方法进行，称取制备的固酶复合物 与 的 和 的 混合液共混 后，室温下测定溶液中 氧化产物 ，二甲氧基苯醌在 处的吸光度，记录吸光度 时间关系曲线。，二甲氧基苯醌的摩尔吸光系数为 （），定义酶活力单位为 内氧化 所需漆酶的量（）。高分子聚合物 多壁碳纳米管复合载体固定漆酶的重复使用性和长期使用性的测试 固定漆酶的重复使用性按 节的方法测试了聚合物复合载体固定漆酶的比活力（以 作为底物）后取出固定漆酶的复合载体以同样的 冲洗 次，随后将润洗过的固酶基元放入新配的 与 混合液中，测定复合载体固定漆酶的比活力（每次平行测定 组取平均值）。将固定漆酶第一次使用的比活力设定为 ，后来重复使用的比活力都是和初次使用时比活力相比较。固定漆酶的长期使用性将 固定漆酶的复合载体于 冰箱中静置 后，室温下按 节方法测定其比活力（每次平行测定 组取平均值）。将新制备的固定漆酶的复合载体第一次催化 氧化时测定的比活力设定为 ，静置 后测定的活力为与此值相比较。吸收光谱法研究固酶载体与漆酶分子间相互作用采用紫外 可见分光光度法研究漆酶与聚合物 多壁碳纳米管复合物之间相互作用对漆酶构象的影响。将漆酶溶解于 中得到 的溶液（游离漆酶），倒入比色皿中进行游离漆酶的紫外可见吸收光谱测定；而复合物固定漆酶则是按 节方法制备固定漆酶的复合物载体后，将这种固定漆酶的复合物载体均匀地涂覆在 玻璃片上使其干燥，随后插入比色槽中进行紫外可见吸收光谱测定。所有测定的波长均在 范围之内，于室温下进行。高分子聚合物 多壁碳纳米管固定漆酶修饰玻碳电极的直接电子转移采用循环伏安技术（）研究高分子聚合物 多壁碳纳米管复合载体固定漆酶修饰玻碳电极的直接电化学，以常规三电极电解池进行电化学实验。分别吸取 前述各种高分子复合物 多壁碳纳米管复合载体固定的漆酶（黑色粘稠液体，均可稳定存在 周以上而不发生沉降）滴涂在玻碳电极上，在冰箱中干燥 后就得到复合载体固定漆酶修饰玻碳电极，这些高分子聚合物多壁碳纳米管吸附漆酶修饰玻碳电极分别记为：、和 ，并作为工作电极使用。作为基底的玻碳电极使用前先用 砂纸打磨，然后依次用 、和 粒径的氧化铝粉浆抛光，再用乙醇和超纯水超声清洗各 次，每次 ，之后以高纯 气将电极表面吹干待用。对电极为铂片电极，参比电极为 电极（饱和 ），本文中提到的电位如不加特殊说明均为相对于此的电极电位。测试温度（）。测试溶液在每次实验前均要用 气除氧 以得到无氧 ，催化氧还原实验则是向无氧 中鼓泡通入 气 以得到 饱和的 。本文 曲线均为扫描第 圈所得。应 用 化 学第 卷 结果与讨论 不同高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶的担载量和固定漆酶的比活力按 节方法测得各种聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶的百分率和漆酶担载量的结果列于表 。由表 可以看出，随着壳聚糖侧链上含有亲漆酶活性中心 官能团的增加（比如疏水芳环和能与活性中心铜离子配位的氮杂环），不但复合物固定的酶含量增加而且固定漆酶的比活力也越近于游离漆酶（对照试验测得游离漆酶的比活力为 ）。表 各种聚合物 多壁碳纳米管复合物对漆酶的固定百分率、漆酶担载量以及固定漆酶的比活力 ，（）（）不同高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶的重复使用性和长期使用性按 节方法测定了选定的各种高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶于室温条件下重复使用 次后的比活力及其于 冰箱中静置 后的残余比活力，测定的结果列于表 。由表 可以看出，无论采用哪种聚合物非共价功能化多壁碳管都增强了固定漆酶的稳定性（对照实验表明，多重壁碳纳米管吸附的漆酶使用 次后测定的活力为 ，只有游离漆酶初始活力的大约 ，而冰箱中静置 后残余比活力仅有 ），但含有亲漆酶活性中心附近结合物的疏水苯环或能与活性中心配位的官能团的聚合物功能化多壁碳管后固定漆酶的剩余比活力绝对值更高。表 各种聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶的重复使用性及长期稳定性 （）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）不同高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶修饰玻碳电极的直接电化学 固定漆酶载体与漆酶分子间相互作用对漆酶构象的影响图 为游离漆酶和不同聚合物非共价修饰多壁碳管后得到复合物吸附漆酶的紫外可见吸收光谱图。由于漆酶中 活性位氧化态吸收峰位置（在 附近）的改变可以提供有关蛋白质是否变性的信息，因此可以籍这个吸收峰位置的形状变化和迁移来间接判断漆酶分子活性位 构象的改变。从图 可以看出，游离漆酶的 氧化态吸收峰位于 处，与文献 结果一致；漆酶 聚合物（图中仅给出壳聚糖多壁碳管复合物的结果作为代表，除了 之外，其它聚合物与多壁碳管共混形成复合物吸附漆酶的 结果与之类似）薄膜在 处也显示出明显的吸收峰，证明固定到复合物（与多壁碳管形成的复合物除外）上的漆酶较好地保持了游离漆酶的 活性位氧化态原始构象而没有发生变化；与此相对的是 多壁碳管复合物吸附漆酶薄膜的吸收峰峰形变钝，且吸收峰正移到约 处，这表明固定漆酶载体组分之一的 与漆酶活性中心 位产生了相互作用，使其构象发生了某种改变，对此现象的一种解释是：第 期曾涵等：高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶及其在玻碳电极上的直接电子转移侧链上作为交联结构的噻吩环上杂原子（）可能作为轴向配体与漆酶活性中心 位上铜离子（作为中心离子）发生配位作用，因此改变了 位铜的空间构型 ，。图 游离漆酶和聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶的紫外 可见吸收光谱 ；图 复合物修饰 固定漆酶前后分别在无氧 中的循环伏安曲线 （）：；固定漆酶活性中心与导电基体间的直接电子转移前文 和文献 ，均研究了单个固酶载体中酶和电极间的直接电化学并测定了电子转移速率常数，但均没有对固酶载体组成与固定氧化还原酶 电极间直接电子转移是否可以发生，以及与直接电子转移速率的关联进行过研究。前文 和文献 ，虽然列举了一些高分子聚合物以非共价功能化方式修饰多壁碳管后得到聚合物 多壁碳管复合物，并作为载体固定漆酶，制备了较为稳定的复合物固定漆酶修饰玻碳电极，但这些电极的酶 电极间直接电子转移能力差异非常大，多数无法观察到漆酶活性中心的特征氧化还原峰，只能借助于电子媒介体实现酶活性中心与电极间的电子转移，比如董绍俊研究小组 制备的壳聚糖 多壁碳管复合物固定漆酶修饰玻碳电极，有的只能在底物存在时才可观察到相应的漆酶活性位化学式电位附近处出现的催化电流，毛兰群研究组 制备的羧甲基纤维素非共价功能化多壁碳管复合物固定漆酶修饰玻碳电极。还有少数具有特定结构的壳聚糖接枝物功能化纳米体系（纳米管或者纳米溶胶）不但在底物存在时可以观察到明显的催化电流，而且在无底物存在时也可以观察到漆酶活性中心的特征氧化还原峰 。图 为壳聚糖 羧甲基 硫代 ，咪唑啉酮非共价功能化多壁碳纳米管复合物修饰玻碳电极固定漆酶前后在无氧 （）中的循环伏安曲线。与前文 类似，当复合物固定漆酶后出现两对明显的氧化还原峰，氧化峰和还原峰的峰电位分别是 和 ，阳极峰电流与阴极峰电流的比值为 ，另一对氧化还原峰的峰电位则分别是 和 ，前者的式电位为 ，近于漆酶活性位 的式电位 ，但与前文 制备的聚芳酰胺 多壁碳纳米管复合物固定漆酶修饰玻碳电极相比（），式电位更负但峰电位差更小（前者峰电位差为 ）；后者的式电位约是 ，也比前文 制备的聚芳酰胺 多壁碳纳米管复合物固定漆酶修饰玻碳电极在同样条件下测定得到的第二对氧化还原峰的式电位（约 ）更负，但峰电位差更小（前者峰电位差也为 ）。第二对峰参考相应文献 ，应归属于漆酶活性中心 的氧化还原峰。但这个体系与前文 制备的聚芳酰胺 多壁碳纳米管复合物也有不同之处：后者固酶之前在扫描电位范围内没有明显可见的氧化还原峰，而前者固定漆酶之前在扫描电位范围内约 处有 个不可逆的还原峰，这可以归因于复合物中壳聚糖侧链上接枝的咪唑啉酮环 位上 基团的还原。其它高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物在固定漆酶前于同样条件下所得结果各不相同：有的未固酶复合物在扫描范围内看不到任何氧化还原峰（例如壳聚糖 多壁碳管、羧甲基壳聚糖 多壁碳管和邻苯二甲酰化壳聚糖 多壁碳纳米管复合物体系），有的只出现较弱的氧化峰或者还原峰（如 ，二羟基噻吩交联壳聚糖 多壁碳纳米管复合物只在应 用 化 学第 卷约 出现个峰，对应于噻吩环上 个羟基氧化的较宽不可逆氧化峰；则在 附近有 个宽而散的弱还原峰，对应于吡唑环上 或者侧链 的还原）。但这些复合物固定漆酶后在同样条件下的循环伏安曲线与固定漆酶前比较，随复合物结构呈现出复杂的情况。表 列出了不同结构的高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶修饰玻碳电极在无氧磷酸盐缓冲液中以 扫速扫描所得 分析结果。从表 可看出，壳聚糖 多壁碳管、羧甲基壳聚糖 多壁碳管以及 固定漆酶修饰玻碳电极在各自扫描电位范围内均未见特征氧化还原峰，这与文献 ，报道结果一致，虽然壳聚糖母体对漆酶具有亲和力（漆酶分子外围及骨架侧链带有大量的糖基），羧甲基壳聚糖还有可能通过壳聚糖侧链上羧基与漆酶分子表面氨基偶联，但这 种分子均缺乏与漆酶活性中心具有亲和力或者是能发生相互作用的基团，因此不利于漆酶活性中心在电极表面的定向排列，电子较难隧穿蛋白质骨架和导电介质之间的势垒。与此不同的是，其它 种电极均可以观察到表征漆酶活性中心发生直接电子转移（）的氧化还原峰，但不同结构的聚合物电极上发生 对应的活性中心是不同的。与前文 结果一致的是：当作为载体组分的聚合物中含有疏水结构（芳环）时，表 不同结构的聚合物非共价修饰碳纳米管固定漆酶与电极之间的直接电子转移行为 ，（）（）；（）；（）（）；（）；图 在 无氧 中不同扫速下的循环伏安曲线 （），：，固酶载体对漆酶活性中心 的亲和力较高（此活性中心周围存在一个疏水的结合位，因此易于结合芳香化合物并催化其氧化），因此可以实现活性中心在电极表面定向排列，电子直接转移的概率较高。当作为载体组分的聚合物侧链含有能与漆酶活性中心 位铜原子轴向配位的含 杂环结构时，这种配位作用有可能使漆酶活性中心近于导电基体，因此缩短了二者距离，利于电子隧穿，这与前文 报道的 复合物固定漆酶修饰玻碳电极在同样无氧缓冲液中结果相近。但文献 也指出这种轴向配位作用有可能降低漆酶活性中心的式电位，改变电子在漆酶分子内转移的机制，从而影响催化性能。表 给出的结果也暗示漆酶的不同活性中心对轴向配体具有选择性，这种轴向配体与中心离子间配位作用影响漆酶活性中心的式电位进而影响催化性能，但这种影响关系尚需进一步研究。固定漆酶 电极间电子转移动力学与固定漆酶对氧还原的催化活力图 给出了 在 的无氧 中不同扫速下的循环伏安曲线。从图 可以看出，式电位较正的对氧化还原峰电位差在 的范围内，且阳极电流与阴极电流比值均在附近波动，这表明漆酶在此电极上的电子转移为一可逆过程；图 插图则表明，无论是阴极峰电流还是阳极峰电流在研究的扫速范围内均与扫速呈线性关系，这进一步表明此电化学过程为一表面控制过程而非扩散第 期曾涵等：高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶及其在玻碳电极上的直接电子转移控制过程 ，。、和 也存在类似的阴阳极峰电流 扫描速率线性关系。根据 方程 ，可以粗略地估算漆酶 电极间异相电子转移的速率常数。参考文献 ，假定电子传递系数 ，而活性中心（无论是 或是）得失电子数为 ，则根据 时峰电位差便可以估算出 、以及 的酶 电极间异相电子转移速率常数分别为 、和 。综上所述，当漆酶活性中心 与既含有疏水芳环又含有能与中心铜离子轴向配位的吡唑环的聚合物 多壁碳管接触时，电子转移速率较只含有疏水芳环的聚合物 多壁碳管与漆酶活性中心接触的电子转移速率要高，这与前文 采用的聚芳酰胺 多壁碳管固定漆酶所得结果相一致。表 给出了不同结构的聚合物非共价修饰碳纳米管固定漆酶修饰玻碳电极催化氧还原的实验结果。从表 可以看出，当作为复合物组分的聚合物含有疏水芳环或是能与漆酶活性中心铜离子发生相互作用的含氮杂环时，无论是氧还原起始电位还是恒电位下的催化电流密度都较高值得注意的是，当聚合物中同时具有上述 种结构时催化氧还原性能更好，这与前面得到的结论一致。表 不同结构的聚合物非共价修饰碳纳米管固定漆酶修饰玻碳电极的催化氧还原活力 （）（）（）（）（）结论将不同结构的高分子聚合物与多壁碳管共混得到的复合物作为载体，固定漆酶后修饰玻碳电极得到漆酶基电极，循环伏安法研究结果初步表明，当非共价功能化多壁碳管的高分子聚合物不含有亲漆酶活性中心的基团或者能与漆酶活性中心轴向配位的杂环化合物时，观察不到漆酶活性中心的特征电信号，也无催化氧还原能力；而高分子聚合物中含有能与漆酶活性中心配位的杂环或者是疏水芳环等官能团时，利于电子在酶活性中心与电极间的直接转移，可以观察到接近活性中心式电位的氧化还原峰。这些氧化还原峰的式电位与活性中心式电位的接近程度与具体的官能团有关：对于 活性中心而言含氮杂环易于与中心铜离子配位，因此电位接近程度更高一些，此外疏水芳环易于接近 附近的疏水结合位，因此电子转移的式电位也相对接近于此活性位的式电位。这些亲漆酶活性中心的官能团不但增大了载体的漆酶担载量，固定漆酶的比活力，提高了固定漆酶的稳定性，而且利于酶 电极间直接电子转移，改善了固定漆酶的催化氧还原性能。但是漆酶活性中心铜离子对配体的选择性配位及其对活性中心电化学过程的影响还需结合其它实验手段做进一步研究和确认。参考文献 ，：，：，：，：，：应 用 化 学第 卷 ，：，（），（）：，：，：，“”：，：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，：，：，：，：，（）（），（）：（）曾涵，赵淑贤，龚兰新，等云芝漆酶在 ，亚甲基双丙烯酰胺（）交联聚甲基丙烯酸基元上的固定及其修饰玻碳电极电化学行为 应用化学，（）：，（）：（）曾涵，廖铃文，李明芳，等聚芳酰胺 多壁碳纳米管混合物固定漆酶电极的电化学行为 物理化学学报，（）：，（），（）：（）曾涵，赵淑贤，龚兰新，等壳聚糖 羧甲基 二（苯并咪唑），乙二醇和纳米金溶胶复合物固定漆酶修饰玻碳电极的直接电化学 应用化学，（）：，（）：（）曾涵，赵淑贤，徐江玲，等壳聚糖 羧甲基 硫代 ，咪唑啉酮的制备及其抑菌性能 应用化学，（）：，（）：（）曾涵，赵淑贤，李亚薇 异丙基丙烯酰胺与 烯丙基 苯甲酰基 苯基 ，甲酰胺基吡唑共聚物对 钢片的化学和细菌腐蚀的抑制作用 应用化学，（）：，（）：（）曾涵，赵淑贤，王永疆，等 ，二羟基噻吩交联壳聚糖的合成及其对白桃的抑菌保鲜性能 应用化学，（）：，（）刘黎壳聚糖的邻苯二甲酰化及其接枝改性的研究 合肥：中国科学技术大学，第 期曾涵等：高分子聚合物 多壁碳纳米管复合物固定漆酶及其在玻碳电极上的直接电子转移 ，：，（）：（）黄俊，周菊英，肖海燕，等 纳米复合粒子及其漆酶固定化研究 化学学报，（）：，（）：（）曾涵，尹筱莉，杨忠丽，等漆酶在纳米金溶胶 多重壁碳纳米管复合载体上固定方法的比较及粒子尺寸效应 应用化学，（）：，（）：，（，）（）（），（），（：，）（）（）（），（），（），（：，：），应 用 化 学第 卷