过氧化物酶体增殖物激活受体.pdf

癌症!#$%&%()*$+,(-.+$/%*#0112#03$4%&5617568!基础研究!海南省人民医院神经外科海南 海口5319:!#$%&(&)*+,%)-,%.%/0)#12-3)-#4&51)*654(5(7%)84(9654:),354(5(;?0A BA CD4(5通讯作者!黄垂学!(*%&;($?AB.)#CD)%E%,#2472627424800:0FCG+#,#,%($H*%$IJ+(K/(GL/$收稿日期!0113C:C15修回日期!0112C1:C19过氧化物酶体增殖物激活受体!在人垂体腺瘤中的表达及其与垂体腺瘤侵袭性的关系黄垂学侯永宏赵建农王宇田李俊驹文立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酮#9:*/;(-*4*&4*(+$或天然配体干预后!肿瘤细胞增殖速度明显减慢!肿瘤体积明显减小&?!(另有研究发现!激活5567!可促进肿瘤的生长&#!使得5567!成为肿瘤治疗领域的一个研究热点)本研究旨在探讨5567!在垂体腺瘤中的表达及其与垂体腺瘤侵袭性之间的关系!以期为难治性垂体腺瘤的治疗寻找新的靶点!材料与方法!标本来源收集海南省人民医院神经外科8AA#年月至8AAB年8月手术切除的垂体腺瘤标本CD例!其中男性?B例!女性8例!年龄AEC岁!中位年龄A岁CD例标本均行免疫组织化学染色*,F(:*+0(2:&,*+0G!HIJ$检测)另外挑选其中侵袭性和非侵袭性相匹配的?例垂体腺瘤*男性例!女性K例!年龄8EB#岁!中位年龄?C岁$和?例来自非神经系统疾病死亡尸检病例*男性8例!女性例!年龄8E?#岁!中位年龄8#岁$的正常垂体组织进行逆转录聚合酶链式反应*&3&+&0/+2*%0*(%(-G,&/+&2:/*&/20*(!7915J7$检测)所有垂体腺瘤均经临床影像学+手术及病理诊断证实!并进行垂体激素免疫组化区分不同的内分泌类型!#垂体腺瘤侵袭性的判断标准垂体腺瘤的侵袭性参照I/4G1L*-+(等&B和M(+%等&C的分级方法进行综合判断 符合以下情况之一者确定为侵袭性垂体腺瘤,*$I/4G1L*-+(分级$级及$级以上和JEN期-*8$M(+%分级?级以上-*?$术中见鞍区骨质破坏!海绵窦内壁穿通!窦内结构被肿瘤包绕-*$病理证实鞍底有肿瘤细胞浸润)在HIJ组中!C例为侵袭性垂体腺瘤!?例为非侵袭性-7915J7组中B例为侵袭性垂体腺瘤!C例为非侵袭性垂体腺瘤)标本构成见表)!$实验材料5567!小鼠抗人单克隆抗体购自美国O/0/JF;公司-HIJ的O5试剂盒购自北京中杉公司-5567!%1/20*P6聚合酶%P/+&%7P/+*P95+购自美国5(,&Q/公司-9*;(-7&/Q&0购自美国英杰公司)于正常垂体组织!在侵袭性垂体腺瘤中的表达明显高于非侵袭性垂体腺瘤!提示它有可能作为垂体腺瘤治疗的一个新靶点)关键词!脑肿瘤-垂体腺瘤-过氧化物酶体增殖物激活受体!-侵袭性中图分类号!7C?B!文献标识码!6文章编号!AAARBCS*8AAD$ABRA#KARA#H3/+*3&P(1*3/+*3&9(0/-HIJD?7915J7?BHIJ8?7915J78?HIJA#7915J7?BHIJC?A7915J7?BHIJA7915J7RRRHIJA87915J7?BHIJACC7915J7?B表!#$组%&例#和()*$组+例$垂体腺瘤患者的构成情况(,-./0$12345464/17 48/3,9:./3 17:54654,;$,2=()*$?;16:357T,5(-/20*-UI,U(V0:(,(&-9OI,9:G(*41+0*,F-/0*Q:(,(&-WOI,W(-*2-&1+0*,F-/0*Q:(,(&-TI,TF0&*;*Q:(,(&-PW,P(.F20*(/-XW,XF-0*%-&.F20*(/-6J9I,64&(2(0*2(0(%:*2:(,(&!57T6J9IUIWOIY TI9OIP1WXW!%免疫组织化学染色检测%&法$应用O5法进行5567!的免疫组化检查!工作浓度为Z#AA)结果判断以胞浆或胞核中出现棕黄色为阳性)参照O:*,*;F等方法&D进行半定量积分法)至少观察A个高倍镜视野!根据阳性反应的强度及阳性细胞比例打分)*$阳性反应强度,无黄染为A分!淡黄色为分!棕黄色为8分!棕褐色为?分-*8$阳性细胞比例,#$为A分!#$EA$为分!A$E8#$为8分!8#$为?分)然后根据两项相加所得分数判断其结果,!?分为阳性)以!#C MY K!#代替一抗作阴性对照!#逆转录聚合酶链式反应用$%&()试剂抽提垂体腺瘤组织的总*+,!分光光度计测定*+,纯度进行*+,的定量!用-+./0!除去总*+,中的恒量-+,!用12逆转录酶合成第一链#反应条件为$345反应6 7889变性:;&的逆转录产物作为模板 进行!?*扩增&!,*#引物序列为:A$?$?$?B$,$BB,B,?AC:AB?,$,$B,B,?,$?,?AC 大小为3D3 EF$A.GH&引物序列为:A$B?B$B,?,$,BB,B,BAC:A?$B?,$?$B$?BB?,$BAC 大小为C=I EF&反应条件为$8:5:;&!(835 JK/!:J5 JK/!D45 JK/)LC:个循环!D49 6I;&以$A.GH&作为内对照!?*产物用6M琼脂糖凝胶电泳紫外灯下观察结果并照相&!$统计学处理应用#!#=4NI统计软件进行统计学分析OP?数据采用Q&/70%精确概率检验#%4检验%*$A!?*数据以均数R标准差#!/%表示采用#检验&%结果%!垂体腺瘤中&(!蛋白免疫组化染色结果!,*&蛋白在所有垂体腺瘤组织中的阳性率为:JN3=M#33SDT%&在 侵 袭 性 垂 体 腺 瘤 组 中!,*&蛋白的阳性率为JTNK8M#C4S3D%而非侵袭性组的阳性率仅为CTND=M#=4SC=%两者相比差异有统计学意义#%4UJN:J$VINI:%&#图=%图=!,*&在垂体腺瘤中的表达Q&WX%0=$70 0YF%0/&(Z!,*&F%(H0&H70 7X;.F&HX&H.%.0(;./,$0.F(/&H&_0 0YF%0/&(Z!,*&/)(G.H0&H70 GH(F)./;(Z(A&_./&_0.0(;./?-N#H%(W F(/&H&_0(Z!,*&/)(G.H0&E(H7 H70 XG)0X/.H70 GH(F)./;(Z&_./&_0.0P腺瘤和,?$P腺瘤中!,*&;*+,表达水平较正常垂体组织明显增高而BP和!*腺瘤和+Q腺瘤则差异无统计学意义&结果见图4和表4&%+侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中&(!)(*表达水平的差异分析侵袭性垂体腺瘤组!,*&;*+,的表达水平为CN8:RKN3C 非侵袭性垂体腺瘤组!,*&;*+,黄垂学!等N过氧化物酶体增殖物激活受体&在人垂体腺瘤中的表达及其与垂体腺瘤侵袭性的关系!#C MY K图!正常垂体组织和垂体腺瘤中#$!%$&的表达()*+,-./01,-22)342 35#$!%$&#)4 43,%67 1)8+)86,98)22+-64:)55-,-48 891-2 35;+%64 1)8+)86,9 6:-43%6264-=!43,%67 1)8+)86,9 8)22+-?3%664-A!$3%664-B!&(3%664-C!%+78)17-;3,%34-6:-43%664-D!(E?F?3%664-G!HI?3%6J的表达水平为.JKLMLJ.B#两者相比#差异有统计学意义$!NAJ=A#OLJL=%&进一步比较各内分泌类型中侵袭性和非侵袭性腺瘤#结果发现在无功能腺瘤多功能型腺瘤和(E?FW.等是$!的天然配体#而IXY2是它的合成配体#均具有较高的亲和性&被配体激活的$!与维甲酸Z受体结合形成异源二聚体#才能与$!反应元件结合#从而调节相应基因的转录活性(=)&研究发现#$!在脂肪肉瘤 结肠癌和胃癌等多种肿瘤组织中均有高表达#其配体都具有抑制肿瘤细胞增殖 诱导肿瘤细胞分化和介导肿瘤细胞凋亡的效应#且在脂肪肉瘤和前列腺癌患者的初步临床试验中已显示出良好的治疗效果(=.#=)&研究表明$!在垂体腺瘤和垂体组织中均有表达#但其表达情况在不同研究中结论有所不同&?-64-9等(=B)对V例垂体腺瘤患者肿瘤组织中$!的表达水平进行了分析#发现其表达水平明显高于正常垂体&)4P9R等(=C)发现$!在垂体腺瘤中的平均细胞核染色率较非肿瘤性垂体组织高倍#在?腺瘤中的表达最强&而/%-,9等(=D)检测正常垂体和垂体腺瘤组织中$!的表达情况#结果发现$!%$&和蛋白在正常垂体和垂体腺瘤组织中表达没有差异&U3*6)等(=G)经?H检测发现在每一类型垂体分泌细胞中均有表!正常垂体和各类型垂体腺瘤组织中#$!%$&的表达水平()*+,-./01,22345+,6,+2 47$!%$&35 541%)+038938)1:83229,2)5;377,1,58,5;4,3+1&3,%67 1)8+)86,9 8)22+-?3%62$3%62&(3%62S(3%62E?F?3%62HI?3%62H62-2DDDDD$!%$&Q67+-=JCCMLJ.C.JMLJ.D.JGMLJC.JKMLJKLJKMLJK.6JC=MLJ.V_JVGMLJGK6图各内分泌类型侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中$!%$&的表达()*+,-/01,-22)342 35$!%$&)4)4Q62)Q-64:434)4Q62)Q-*,3+12 35:)55-,-48-4:3P,)4-891-2 35;+%64 1)8+)86,9 6:-43%6264-=!)4Q62)Q-%+78)17-;3,%34-6:-43%664-.!434)4Q62)Q-%+78)17-;3,%34-6:-43664-!)4Q62)Q-&(3%664-K!434)4Q62)Q-&(3%664-C!)4Q62)Q-(E?F?3%664-D!434)4Q62)Q-(E?F?3%6?3%6?3%664-V!)4Q62)Q-$3%664-=L!434)4Q62)Q-$356)236,?14902 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b!_7=6,X _II;=6BE7=A6CIBA8D E78B;B;?=F,8J8E=;A=?C;C G=I8D LC;B?;!8;C87BA 7BEECE%O&X,I!876=D!(44S!R(%()%STU%(RXD8A=;8*!.8;A6CJ-BI8A=D=?BA8D GCEGCA7BKCE 8;8GC7BA G=7C;7B8D=F!#J?8II8 8?=;BE7E%O&X*!68I YCE!RSS!(SR3()Z$S$UZ$RXYCGD8;cC YX*CDD G=7CA7B=;76=?6ADC8 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