1、紫外-可见吸收光谱法定性定量测定食用合成色素
1实验部分
1.1主要试剂及仪器
紫外-可见分光光度计
色素标准：胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄和亮兰均为国家标准物质(GBW)，由国家标准物质研究中心生产、提供。
标准溶液：精密称取各色素标准50mg，用pH=6的水溶解并定容至50ml。此溶液每毫升含色素1mg，作储备液。用时取储备液以水稀释至每毫升含色素0.1mg，作标准工作液，亮兰进一步稀释至每毫升含色素0.01mg。其它试剂同国标法。
1.2实验方法
取标准溶液置于lcm石英比色皿中，以水为参比，于波长700nm～190mn之间连续进行吸收扫描。测量工作条件如下：
测量方式
2、ABSI吸收度(峰高)。
扫描范围：700nm～190mm。
(峰高)记录范围：0-3.99A。
扫描速度：Veryfast/很快
扫描次数：1。
显示方式：Overlay/重叠
2结果与讨论
2.1定性
取标准溶液，在测量条件下进行连续吸收扫描。即得标准谱图。见图1-5。从标准谱图看，不同的色素具有不同的吸收波长及其谱图，谱图直观易于区别。
胭脂红与苋菜红的鉴别。由于胭脂红与苋菜红在332nm，及220nm处附近都有吸收，且峰强弱相似，两者鉴别的要点如下：
(1)主色峰在508nm为胭脂红，在522nm为苋菜红。
(2)苋菜红在370nm、
3、332nm及280nm有明显的逐级抬高的阶梯峰；而胭脂红在280nm处较332nm处的吸收为弱，故不形成阶梯峰。
(3)苋菜红在350nm-410hm之间有一较宽(约有60nm)的平台，而胭脂红的平台较窄，在360nm．390nm之间(仅有30nm左右)。
2.2定量
不同的色素具有不同的吸收波长，且在一定浓度下，峰高与含量成正比，故可定量测定。
2.3标准曲线的配制
胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄分别吸取标准工作液0．05、0．10、0．50、1．00、2．00、4．00、5．00、6．00、7．00、8．00ml；亮兰吸取(0.01mg/m1)标准工作液0.20、0.50、1.0
4、0及(0.1mg/m1)标准工作液0．20、0．50、1．00、2．00、4．00、6．00和8．00ml，分别置于10ml比色管中，用水稀释至刻度，混匀后按方法进行测量。
标准系列一次配制，在不同波长下，每种色素都可绘制出两条标准曲线，线性范围宽，高、低浓度差最大达100倍，在线性范围内。浓度与峰高呈非常显著相关，r>0．9999。见表1。
2.4方法检出限、灵敏度及精密度
按实验方法重复测定标准曲线6次，合并线性方程，见表1。从标准曲线上查出峰高值0.02处的浓度值为方法检出限，则各色素的方法检出限为(ug/ml)：胭脂红0.51；苋菜红0.58；柠檬黄0.46；日落黄0.40；亮兰
5、0.086。
从标准曲线的斜率计算得各色素表观摩尔吸光系数为(L·mol-1·cm-1)：胭脂红2.27 × 104；苋菜红2.22 × 104；柠檬黄2.33 × 104；日落黄2.18 × 104；亮兰1.23 × 104。
重复测定各标准曲线6次，变异系数平均为2.84％，范围在1.76％～4.01％之间，各标准曲线变异系数见表1。
2.5标准加标回收实险
据标准曲线的线性范围，取低、中、高浓度值的1/2作原含量，分别为C1、C2、C3；每个原含量再分别加入C1、C2、C3的量作加标量，然后按方法进行测定。结果五种合成色素的标准加标回收率在96.2％-102.5％之间说明本方法准
6、确度高。
2.6样品测定及样品加标回收实验
测定样品时，样品的处理及提取按国标法进行，提取液用本法及HPLC法测定，结果见表2。
取1’、2’、4。、6’样作样品加标回收实验，结果见表3。
两种方法的测定结果作配对t检验，P>0．05。说明两种方法测定结果无显著性差异。
从表3知，样品加标回收呈现系统负偏差。平均回收率仅为92.0％，主要原因是在样品处理、提取过程中，因吸附、提纯、洗脱、转容等多种步骤引起损失所致。
3小结
本文应用紫外-可见吸收光谱法测定食用合成色素，结果表明，本法能直观、快速地定性，方法灵敏，线性范围宽，定量准确，经样品测定，结果满意。对经济条件一般的基层单位尤为适用。
参考
浙ICP备2021020529号-1 | 浙B2-20240490 
