微生物学基础知识.pptx

Click to edit title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,胡付品,华山医院抗生素研究所,*,*,Click to edit title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,主要内容,微生物介绍,细菌特点和结构,细菌分类与命名,临床常见病原菌介绍,细菌感染与人体防御,抗菌药品敏感性试验,细菌耐药机制,微生物学基础知识,第1页,什么是微生物,?,微生物是指一切肉眼看不到或看不清楚，需要借助显微镜观察微小生物。,微生物包含：,原核微生物：如细菌,真核微生物：如真菌、藻类和原虫,无细胞生物：如病毒,病毒,细菌,真菌,微生物学基础知识,第2页,微生物相对大小,真核细胞型,原核细胞型,电子显微镜,微生物相对大小,肉眼,光学显微镜,可见范围,病毒,0.5-2,m,微生物学基础知识,第3页,微生物和人类关系,维持自然界生态平衡,食品酿造,医疗制药,维持人体正常功效：肠道,特定情况下，一些微生物能够造成疾病,条件致病菌,微生物学基础知识,第4页,主要内容,微生物介绍,细菌特点和结构,细菌分类与命名,临床常见病原菌介绍,细菌感染与人体防御,抗菌药品敏感性试验,细菌耐药机制,微生物学基础知识,第5页,细菌特点,单细胞原核生物（没有真正细胞核）,光学显微镜下可见,含有细胞壁,经过细胞分裂进行繁殖：二分裂,大部分可在生物体外独立生存,适应能力极强,从严寒冰川到酷热温泉，从极高山顶到极深海底。,微生物学基础知识,第6页,鞭毛,菌毛,芽孢,荚膜,特殊结构,细胞壁,细胞膜,核质,普通结构,核糖体,细胞质,细菌结构,微生物学基础知识,第7页,细菌基本结构：细胞壁,细胞壁,细胞壁是位于细菌细胞膜外一层坚韧而有弹性膜状结构,功效：维持形态、保护细菌、物质交换,主要成份,(,革兰阳性菌与革兰阴性菌结构不一样）,肽聚糖,磷壁酸（革兰阳性菌）,外膜（脂多糖，革兰阴性菌）内毒素,微生物学基础知识,第8页,细胞壁结构,革兰阳性菌,革兰阴性菌,肽聚糖层厚,肽聚糖层薄,微生物学基础知识,第9页,细菌基本结构：细胞膜,细胞膜,位于细胞壁内侧，包绕在细菌胞浆外含有弹性半渗透性脂质双层生物膜。主要由磷脂及蛋白质组成。,功效,：,物质交换、生物合成,微生物学基础知识,第10页,细菌基本结构：细胞质,细胞质,细胞膜包裹菌体内部，即细胞浆,内有各种主要结构，如核糖体、质粒,核糖体：细菌蛋白质合成场所,质粒：双股环状,DNA,，为染色体之外遗传物质,微生物学基础知识,第11页,细菌基本结构：核质,核质,细菌遗传物质：染色体,功效：控制细菌各种遗传性状、生长、繁殖、遗传和变异。,微生物学基础知识,第12页,细菌特殊结构,荚膜,鞭毛,菌毛,芽胞,微生物学基础知识,第13页,主要内容,微生物介绍,细菌特点和结构,细菌分类与命名,临床常见致病菌介绍,细菌感染与人体防御,抗菌药品敏感性试验,细菌耐药机制,微生物学基础知识,第14页,细菌分类与命名,生物系统分类：,界,门,纲,目,科,属,种,动物界脊索动物门哺乳纲灵长 目人科人属智人种,命名：拉丁文双名法,大肠,埃希菌：,Escherichia,coli,金黄色,葡萄球菌：,Staphylococcus,aureus,种名,属名,种名,属名,种名,属名,种名,属名,微生物学基础知识,第15页,细菌分类与命名,细菌分类,依据形态,依据染色特征分类,依据形态,+,染色特征分类,依据生长要求分类,其它分类方法,微生物学基础知识,第16页,依据形态分类,大肠埃希菌,葡萄球菌,肺炎链球菌,微生物学基础知识,第17页,依据染色特征分类,革兰染色法是细菌学中应用最广泛染色,可将细菌分成两大类：阴性和阳性,原理,阳性菌细胞壁结构致密且脂类含量低，乙醇不易透入，不易脱色,阳性菌内核糖核酸可与结晶紫、碘结合成大分子复合物，不易脱色。,阳性菌所带阴电荷比较多，与阳电荷结晶紫结合紧密，不易脱色。,革兰阳性,(,紫色,),革兰阴性（红色）,微生物学基础知识,第18页,革兰染色法意义,判别细菌,了解细菌致病特征,不一样细菌含有不一样结构特点,致病机制及表现亦不一样,选择用药,针对革兰阴性菌药品,针对革兰阳性菌药品,微生物学基础知识,第19页,依据生长要求分类（一）,专性需氧菌：,含有完善呼吸酶系统，只在有氧环境下生长；,如结核杆菌、霍乱弧菌和炭疽芽胞杆菌等,专性厌氧菌：,缺乏呼吸酶系统，只能在无氧环境中进行发酵,脆弱拟杆菌、消化链球菌,兼性厌氧菌：,兼有有氧呼吸和无氧发酵两种功效,大多数病原菌属于这类,生长是否需要氧气参加？,微生物学基础知识,第20页,苛养菌,是一类生长需要特殊营养物质细菌，分离培养较困难。,流感嗜血杆菌：需要,X,、,V,因子、二氧化碳,肺炎链球菌：需要羊血、二氧化碳,溶血性链球菌：需要羊血,比较娇嫩、对干燥、对严寒抵抗力均较弱。,培养条件：,5,10,CO,2,、,35,培养、,24,48h,呼吸道其它快生长细菌覆盖使分离率非常低,非苛养菌,对营养要求不高，基础营养成份即可。,依据生长要求分类（二）,生长是否需要特殊营养物质？,微生物学基础知识,第21页,流感嗜血杆菌卫星现象,微生物学基础知识,第22页,其它分类方法,依据一些特殊酶,如是否产凝固酶：凝固酶阳性金葡菌、凝固酶阴性葡萄球菌,依据是否溶血,如溶血性链球菌,依据免疫血清型,如肺炎链球菌有各种血清型,依据代谢特点,如不发酵糖非发酵菌,微生物学基础知识,第23页,主要内容,微生物介绍,细菌特点和结构,细菌分类与命名,临床常见病原菌介绍,细菌感染与人体防御,抗菌药品敏感性试验,细菌耐药机制,微生物学基础知识,第24页,临床常见病原菌,分类,分类,科,/,属,种,需氧或兼性厌氧菌,革兰阳性球菌,葡萄球菌属,金黄色葡萄球菌,链球菌属,化脓链球菌、,肺炎链球菌,肠球菌属,粪肠球菌,、屎肠球菌,革兰阳性杆菌,芽胞杆菌属,炭疽芽胞杆菌,革兰阴性球菌,奈瑟菌属、莫拉菌属,脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、,卡他莫拉菌,革兰阴性杆菌,肠杆菌科,大肠埃希菌,、伤寒沙门菌、,肺炎克雷伯菌,、阴沟肠杆菌、变形杆菌,假单胞菌属,铜绿假单胞菌,不动杆菌属,鲍曼不动杆菌,、洛菲不动杆菌,嗜血杆菌属,流感嗜血杆菌,军团菌属,嗜肺军团菌,厌氧菌,脆弱拟杆菌、,艰难梭菌,支原体,支原体属,肺炎支原体,、解脲脲原体,衣原体,衣原体属,肺炎衣原体,、沙眼衣原体,微生物学基础知识,第25页,金黄色葡萄球菌,革兰阳性球菌：葡萄球菌属,金黄色葡萄球菌,凝固酶阳性,溶血,凝固酶阴性葡萄球菌,凝固酶阴性,一些菌株溶血,表皮葡萄球菌,微生物学基础知识,第26页,革兰阳性球菌：链球菌,-,溶血性链球菌：又称草绿色链球菌,菌落周围有,1-2mm,宽草绿色溶血环，环内红细胞未溶解，血红蛋白变成绿色。,肺炎链球菌,-,溶血性链球菌,菌落周围形成一个,2-4mm,宽、界限分明、完全透明无色溶血环，也称乙型溶血。,化脓链球菌,-,溶血链球菌：,不产生溶血素，菌落周围无溶血环，也称为丙型或不溶血性链球菌。,微生物学基础知识,第27页,革兰阳性杆菌,炭疽芽胞杆菌（炭疽病）,炭疽芽胞杆菌能产生毒力很强外毒素，由三种毒性蛋白即保护性抗原、水肿因子及致病因子所组成复合体。,引发皮肤炭疽、肺炭疽和肠炭疽,微生物学基础知识,第28页,革兰阴性球菌,脑膜炎奈瑟菌：又名脑膜炎球菌,可引发脑膜炎,淋病奈瑟菌：又名淋球菌,可引发淋病、新生儿淋菌性眼结膜炎,流脑患者皮肤出血性瘀斑,微生物学基础知识,第29页,革兰阴性杆菌肠杆菌科,肠杆菌科：,多数是肠道正常菌群，一些情况下可成为致病菌。,可引发腹腔感染、肺炎、尿路感染、菌血症等,肠杆菌科细菌主要包含：,埃希菌属：大肠埃希菌,克雷伯菌属：肺炎克雷伯菌,肠杆菌属：阴沟肠杆菌,变形杆菌属：奇异变形杆菌,沙雷菌属,摩根菌属,志贺菌属：痢疾志贺菌,沙门菌属：伤寒沙门菌,引发医院感染主要病原菌,微生物学基础知识,第30页,革兰阴性杆菌：非发酵菌,一大群不发酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厌氧、无芽胞革兰阴性杆菌。,假单胞菌属：铜绿假单胞菌,不动杆菌属：鲍曼不动杆菌,单胞菌属：嗜麦芽窄食单胞菌,黄杆菌属：产吲哚黄杆菌,引发医院感染主要病原菌,微生物学基础知识,第31页,其它革兰阴性杆菌,嗜血杆菌属,流感嗜血杆菌呼吸道感染,引发急性中耳炎、小区取得性肺炎等疾病,非经典病原体：,军团菌属,嗜肺军团菌引发军团菌肺炎,微生物学基础知识,第32页,非经典病原体：支原体,支原体：肺炎支原体、解脲支原体,支原体介于细菌和病毒之间，,能独立生活最小微生物,。,无细胞壁,可引发呼吸道感染,、,生殖道感染,。,微生物学基础知识,第33页,非经典病原体：衣原体,衣原体：肺炎衣原体、沙眼衣原体,专性胞内寄生,革兰染色阴性杆状菌,含有特殊发育周期,(,原体和网状体,),可引发肺炎、沙眼和生殖道感染,微生物学基础知识,第34页,35,厌氧菌,是一群专性厌氧，必须在无氧环境下才能生长繁殖细菌。,依据能否形成芽胞，可将厌氧菌分成两大类。,厌氧芽胞梭菌属,无芽胞厌氧菌,厌氧芽胞梭菌属：破伤风梭菌、产气荚膜杆菌、肉毒梭菌、艰难梭菌,无芽胞厌氧菌：拟杆菌属、梭杆菌属、丙酸杆菌属、消化链球菌属等,微生物学基础知识,第35页,36,细菌判定,表型分类法,以细菌形态、结构、生理、生化和血清学反应等细菌表型为主要依据,分子生物学技术,基因诊疗依据分析,DNA,碱基组成，基因片段大小，与比较,DNA,同源性关系，从而分析 细菌,DNA,亲缘关系。,微生物学基础知识,第36页,37,菌种判定,判定到种,依据纯分细菌形态、菌落特征，特征性生化反应，选择适当细菌判定系统。,如手工,API,条和半自动,ATB,肠杆菌科细菌：,API 20E,非发酵革兰阴性杆菌：,API 20NE,葡萄球菌属：,Slidex Staph Plus,、,API Staph,链球菌属：,Slidex Strepto Kit,、,API Strep,奈瑟菌属、嗜血杆菌属：,API NH,厌氧菌：,API 20A,微生物学基础知识,第37页,38,菌种判定,判定到种,自动细菌判定,/,药敏仪,VITEK 2 Compact,BD Phoenix System,MicroScan,BIOMIC V3,微生物判定系统,BIOFOSUN,微生物判定系统,判定到种,葡萄球菌？,金黄色葡萄球菌！,微生物学基础知识,第38页,主要内容,微生物介绍,细菌特点和结构,细菌分类与命名,临床常见病原菌介绍,细菌感染与人体防御,抗菌药品敏感性试验,细菌耐药机制,微生物学基础知识,第39页,40,微生物学基础知识,第40页,41,感染和感染性疾病,感染：,外源性病原微生物和内源性条件致病性微生物,侵入宿主后，进行生长繁殖，释放毒性物质或致体内生态环境失调等引发机体病理过程。,如：炭疽病、结核病、脑膜炎、白喉、细菌性痢疾、病毒性肝炎等,感染性疾病：,病原体突破宿主抵抗功效，定植在机体一定部位，增殖并扩散、蔓延、产生临床症状和疾病。,微生物学基础知识,第41页,细菌致病力,粘附,细菌经过粘附与人体上皮细胞结合过程（,细菌入侵第一步,）,荚膜,细菌特殊结构，可保护细菌、抗吞噬。,产酶,与侵袭力相关酶：透明质酸酶、链激酶、链道酶等,破坏机体组织,保护菌体不被吞噬细胞吞噬胞外酶,毒素,内毒素、外毒素,微生物学基础知识,第42页,人体防线,第一道防线,第二道防线,抗菌物质,吞噬细胞吞噬作用,炎症反应,淋巴结过滤作用,第三道防线,体液免疫,细胞免疫,宿主,免疫力,非特异性免疫,特异性免疫,皮肤黏膜,其它屏障,微生物学基础知识,第43页,44,十九世纪德国医生,郭霍,在固体培养基上分离出第一个纯培养细菌,-,碳疽芽胞杆菌,接种健康动物，引发一样疾病，再从被感染动物体内分离出一样细菌，提出了证实微生物致病性“,郭霍定律,”,1882-1894,期间分离出许多主要致病菌，如结核分枝杆菌、霍乱弧菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、白喉棒状杆菌，被称为细菌学发展“黄金时代”,感染和感染性疾病,微生物学基础知识,第44页,主要内容,微生物介绍,细菌特点和结构,细菌分类与命名,临床常见病原菌介绍,细菌感染与人体防御,抗菌药品敏感性试验,细菌耐药机制,微生物学基础知识,第45页,微生物学基础知识,第46页,微生物学基础知识,第47页,微生物学基础知识,第48页,微生物学基础知识,第49页,50,规范化药敏试验方法,-,扩散法,(,纸片法,),原理：,将浸有抗菌药品纸片贴在涂有细菌琼脂平板上，抗菌药品在琼脂内向四面扩散，所以敏感细菌在纸片周围一定距离内生长受到抑制，依据抑菌圈大小即可推知该药品最低抑菌浓度（,MIC,）。,微生物学基础知识,第50页,51,正确接种菌量,扩散法：,0.5,麦氏浊度（,1.510,8,CFU/ml,）,Select colonies,Prepare inoculum,suspension,微生物学基础知识,第51页,52,适当培养基厚度,普通细菌,MH,琼脂培养基（,Mueller,Hinton Agar,）,培养基厚度：,4mm,肺炎链球菌及其它链球菌,5,脱纤维羊血,MH,琼脂培养基,嗜血杆菌属,嗜血杆菌培养基（,HTM,）,SR158,添加剂,微生物学基础知识,第52页,53,4.,适当培养条件,需氧菌：,35 2,，,16-18,小时,嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌：,20-24,小时,葡萄球菌：,33-35,，苯唑西林、万古霉素,24,小时,肠球菌：万古霉素,-24,小时,溶血性链球菌、肺炎链球菌、奈瑟氏菌属等：,20-24,小时,微生物学基础知识,第53页,54,5.,正确阅读结果（纸片法）,工具：游标卡尺，尺子,光源：反射光、透射光,阅读：药敏平皿背衬不反光黑色背景用,肉眼观察,也可用机器阅读抑菌圈直径,抑菌圈边缘微弱生长、仅能在放大镜下才能观察到细小菌落应忽略,微生物学基础知识,第54页,55,阅读结果正确光源,细菌,反射光,透射光,细菌,反射光,透射光,肠杆菌科细菌,肺炎链球菌,(,移盖,),铜绿假单胞菌,-,、草绿色链,(,移盖,),不动杆菌属细菌,嗜血杆菌属,伯克霍尔德菌,淋病奈瑟菌,(,移盖,),葡萄球菌,万古、苯唑、,利奈、,脑膜炎奈瑟菌,(,移盖,),肠球菌,万古,弧菌属,微生物学基础知识,第55页,56,6.,主要质控菌,肠杆菌科细菌：大肠埃希菌,ATCC25922,非发酵菌：铜绿假单胞菌,ATCC27853,葡萄球菌：金黄色葡萄球菌,ATCC25923,肠球菌：粪肠球菌,ATCC29212,肺炎链球菌：肺炎链球菌,ATCC49619,嗜血杆菌：流感嗜血杆菌,ATCC49247,微生物学基础知识,第56页,57,CLSI,文件：我国部颁标准,微生物学基础知识,第57页,58,结果判断和汇报：,1,株细菌,1,个药,1,个标准,用准确度为,1mm,游标卡尺量取抑菌圈直径。,通常采取,CLSI,公布药敏结果判断标准，采取三级划分制。,临床试验室标准化协会,(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI,是我国部颁标准,肠杆菌科细菌判断标准,微生物学基础知识,第58页,肠杆菌科细菌抗菌药品选择,59,抗菌药品,抗菌药品,阿米卡星,亚胺培南,庆大霉素,美罗培南,氨苄西林,厄他培南,哌拉西林,环丙沙星,头孢唑啉,氨苄西林,/,舒巴坦,头孢克罗,头孢哌酮,/,舒巴坦,头孢呋辛,哌拉西林,/,他唑巴坦,头孢噻肟,头孢西丁,头孢他啶,头孢噻肟,/,克拉维酸,头孢吡肟,头孢他啶,/,克拉维酸,第一代,第二代,第三代,第四代,微生物学基础知识,第59页,60,结果判断和汇报,敏感（,Susceptible,）：,当一个细菌引发感染，用某种药品常规量治疗有效，这种细菌即对该药高度敏感。,中度敏感（,Intermediate,）：,当细菌引发感染仅在应用高剂量抗菌药品时有效，或者细菌处于体内抗菌药品浓缩部位或体液（如尿、胆汁、肠腔等）中时才被抑制，这种细菌对该药仅呈中度敏感。,耐药（,Resistance,）：,药品对某一细菌药敏高于药品在血或体液内可能到达浓度时，有时细菌能产生灭活抗菌药品酶，则不论其,MIC,值大小怎样，仍应判定该菌为耐药。比如产青霉素酶金葡菌即应认为该菌对青霉素耐药。,微生物学基础知识,第60页,61,稀释法定义,以一定浓度抗菌药与含有被试菌株培养基进行一系列对倍数稀释，经培养后肉眼观察未见细菌生长管内所含最低药品浓度为该药对该试验菌最低抑菌浓度,(minimal inhibitory concentration,MIC),稀释法最大优点是能够准确测得药品最低抑菌浓度，但需花费较多材料、人力和时间。,微生物学基础知识,第61页,62,稀释法药敏试验分类,因介质不一样分为液体稀释法和琼脂稀释法。,液体稀释法因容器不一样分为试管稀释法和微量稀释法,宏量：前者使用,10mL,试管，体积最少为,1ml,；,微量：后者使用,U,型微量板，体积,0.1ml,。,微量稀释法优点为试剂材料较节约，而且微量板中可预先配制好抗菌药和培养基，冷藏后一定时期内使用，较为方便。,与试管稀释法相比，琼脂稀释法配合多点接种器使用，可同时进行大量菌株药敏试验，试验结果重复性好，缺点是不能进行最低杀菌浓度,MBC,测定。,微生物学基础知识,第62页,微生物学基础知识,第63页,微生物学基础知识,第64页,微生物学基础知识,第65页,微生物学基础知识,第66页,微生物学基础知识,第67页,微生物学基础知识,第68页,药敏试验结果解释,-,药敏试验与临床相关性,药敏试验对于预测临床疗效，选择有效抗生素有指导作用,.,但药敏试验结果与临床疗效并非完全符合,汇报细菌是真正引发感染致病菌吗？,药敏试验结果是否可靠,受各种原因影响,药敏判断标准合理吗？,没有质量控制药敏试验是不可信,影响抗生素作用体内原因,药品组织分布、细菌浓度、机体免疫,微生物学基础知识,第69页,主要内容,微生物介绍,细菌特点和结构,细菌分类与命名,临床常见病原菌介绍,细菌感染与人体防御,抗菌药品敏感性试验,细菌耐药机制,微生物学基础知识,第70页,微生物学基础知识,第71页,微生物学基础知识,第72页,微生物学基础知识,第73页,微生物学基础知识,第74页,微生物学基础知识,第75页,微生物学基础知识,第76页,微生物学基础知识,第77页,微生物学基础知识,第78页,微生物学基础知识,第79页,微生物学基础知识,第80页,微生物学基础知识,第81页,微生物学基础知识,第82页,83,细菌与抗菌药品斗争历程,抗菌药品,细菌,窄谱,内酰胺酶,青霉素,广谱,内酰胺酶,广谱头孢菌素,ESBL,超广谱头孢菌素,AmpC,酶,酶抑制剂复方合剂,ESBL+AmpC,酶,碳青霉烯类药品,碳青霉烯酶,？,微生物学基础知识,第83页,84,DNA,引导,RNA,多聚酶,链霉素,庆大霉素、妥布霉素（氨基糖苷类）,阿米卡星,蛋白合成（,tRNA,）,莫匹罗星,DNA,RNA,50,30,50,30,50,30,核糖体,THFA,DHFA,PABA,DNA,旋转酶（解旋、螺旋）,喹诺酮类,利福平,细胞壁,蛋白合成,（,50S,抑制剂）,红霉素,氯霉素,克林霉素,蛋白合成,（,30S,抑制剂）,细胞膜,多粘菌素,氯霉素,乙酰转移酶,细胞壁合成,环丝氨酸,万古霉素、替考拉宁,杆菌肽,青霉素类,头孢菌素类,拉氧头孢,碳青霉烯类,叶酸代谢,甲氧苄啶,磺胺类药,周质空间,-,内酰胺酶,氨基糖苷类钝化酶,四环素,大观霉素,细菌模式图,微生物学基础知识,第84页,85,肝脏,心脏,脾,肺,攻击,单一器官,即可造成机体死亡,微生物学基础知识,第85页,86,抗菌药品作用机制,干扰细菌细胞壁合成，使细菌不能生长繁殖。,损伤细菌细胞膜，破坏其屏障作用。,影响细菌细胞蛋白质合成，使细菌丧失生长繁殖物质基础。,破坏核酸代谢，妨碍遗传信息复制。,抑制细菌叶酸代谢等。,微生物学基础知识,第86页,87,细菌主要耐药机制,灭活酶与钝化酶产生,抗生素渗透屏障作用,靶位结构改变,细菌代谢状态或营养缺点,细菌菌膜形成,X,外排,灭活,渗透障碍,靶位改变,微生物学基础知识,第87页,88,细菌耐药主要机制,灭活酶产生,抗生素靶位点改变,孔蛋白改变，细胞壁,/,膜通透性改变,微生物学基础知识,第88页,89,喹诺酮类药品耐药基因,-,内酰胺类药品耐药基因,微生物学基础知识,第89页,90,各种,抗菌药品,耐药,主动外排,抗菌药品,D2,孔,蛋白缺失,MexA-MexB-OprM,碳青霉烯酶,Abs,失活,胞,内,周间隙,铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药机制,微生物学基础知识,第90页,91,抗生素渗透屏障作用与外排泵,微生物学基础知识,第91页,92,靶位结构改变,药品,细菌靶位,万古霉素敏感肠球菌,万古霉素耐药肠球菌,微生物学基础知识,第92页,93,细菌利用酶系统，把对,氨基苯甲酸,合成叶酸，维持本身生长需要。,磺胺类药品与,氨基苯甲酸,化学结构相同，当磺胺类药品浓度较高时，可深入细菌体内竞争二氢叶酸合成酶，生成异常核酸拟似物，使细菌不能生成菌体所必需核酸而死亡。,对磺胺类药品产生耐药性细菌，可经过调整代谢步骤，产生大量对氨基苯甲酸,(20-100,倍,),，抵消磺胺药对酶竞争，从而使药品失去抑菌作用。,细菌代谢状态改变营养缺点等,竞争力极强,微生物学基础知识,第93页,94,内酰胺环,Penicillinase,内酰胺酶,灭活酶与钝化酶产生,微生物学基础知识,第94页,95,细菌菌膜形成,微生物学基础知识,第95页,96,细菌特殊状态,芽胞（,Spore,）,一些细菌在一定环境条件下，在菌体内形成一个圆形或卵圆形小体。,是细菌休眠方式。,多数芽胞形成是在营养缺乏时,抵抗力强，对热、干燥、消毒剂等有强大抵抗力。,普通方法不易将其杀死，可耐,100,沸水煮沸数小时。,最可靠方法是高压蒸汽灭菌。以芽胞是否被杀死作为判断灭菌效果指标。,如炭疽芽胞杆菌,破伤风梭菌,微生物学基础知识,第96页,97,临床主要耐药细菌检测,微生物学基础知识,第97页,98,甲氧西林耐药葡萄球菌,MRSA,：甲氧西林耐药金葡菌,Methicillin resistant Staphylococcus aureus,含,mecA,基因，编码,PBP2a,MSSA:,甲氧西林敏感金葡菌,Methicillin susceptible Staphylococcus aureus,不含,mecA,基因，没有,PBP2a,MRCNS:,甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌,Methicillin-resistant coagulase negative Staphylococcus,MSCNS:,甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌,Methicillin-susceptible coagulase negative Staphylococcus,微生物学基础知识,第98页,99,万古霉素不敏感金黄色葡萄球菌,VISA,：万古霉素低度耐药,MRSA,vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus,hVISA,：异质性万古霉素低度耐药,MRSA,heterogeneous Vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus VISA,VRSA,：万古霉素耐药,MRSA,Vancomycin-resistant Staphylococcus aureus,微生物学基础知识,第99页,100,金葡菌对糖肽类抗菌药品敏感性下降,1997,年，日本报道了首例临床分离金黄色葡萄球菌对万古霉素,MIC=8,（,Mu50,）,VISA/GISA,www.cdc.gov/ncidod/hip/Lab/Factsheet/gisa.htm,Hiramatsu,et.al.,J Antimicrob Chemother.1997 Jul;40(1):135-6.,MMWR July 5,:51(26):565-7 and MMWR October 11,:51(40):902.,Multiple colonial morphologies observed from Michigan VISA strain.Both colonies showed VA MIC=8 with same PFGE profiles,来自密西根菌株，用,PFGE,检测是同源性，但菌落形态展现多样性。万古霉素,MIC,8,，确认为,VISA,微生物学基础知识,第100页,101,上海地域甲氧西林耐药葡萄球菌检出率,微生物学基础知识,第101页,102,超级细菌（,Superbugs,）,PDR,MRSA,、,VRE,、,VISA,、,VRSA,碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌,碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌,碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌,（,KPC,、,IMP,、,NDM-1),碳青霉烯耐药其它肠杆菌科细菌,。,（是指对其有效治疗药品几乎均耐药细菌）,主要超级细菌菌种：,微生物学基础知识,第102页,103,耐甲氧西林葡萄球菌检测（,MRSA,）,苯唑西林：,1,g/,片,金葡菌,11-12mm,凝固酶阴性葡萄球菌 ,17mm,4%NaCl-6,g/ml,苯唑西林盐平板,培养条件：,35,，,24-48,小时,结果：,1,个菌落生长，判定为甲氧西林耐药（,MR,）菌株,头孢西丁：,30,g/,片,金葡菌 ,22mm,凝固酶阴性葡萄球菌 ,24mm,分子生物学方法：,PCR,扩增,mecA,基因,微生物学基础知识,第103页,104,耐甲氧西林葡萄球菌检测,苯唑西林和头孢西丁检测,苯唑西林盐平板检测,微生物学基础知识,第104页,105,临床意义,细菌,-lactamases,mecA,抗菌药品,MSSA,(,甲氧西林敏感金葡菌,),/,除青霉素外,大多敏感,MRSA,(,甲氧西林耐药金葡菌,),大多耐药（万古霉素除外）,MRSA及MRCNS感染：,选取万古霉素或替考拉宁。磷霉素、复方磺胺甲噁唑、利福平等可依据情况与糖肽类药联合使用,微生物学基础知识,第105页,106,MSSA(1495,株,),与,MRSA(1916,株,),耐药率（,%,）,(CHINET ),微生物学基础知识,第106页,107,HLARE,肠球菌检测,HLARE,：,high-level aminoglycoside resistane,高水平氨基糖苷类耐药肠球菌,120,g/,片庆大霉素,K-B,法药敏,抑菌圈直径,S,10mm,I=7-9mm(,用稀释法确证,),R=6mm,临床意义,HLARE,菌株采取氨苄西林和氨基糖苷类抗生素联合治疗无效,微生物学基础知识,第107页,108,耐万古霉素肠球菌检测,万古霉素纸片扩散法,含量：,30,g/,片,结果：透射光，抑菌圈内出现薄雾状或任何其它生长或抑菌圈,14mm,均表示耐药,抑菌圈,15-16mm,为中度敏感，,MIC,抑菌圈,17mm,判定为敏感,万古霉素耐药确证试验,含,6,g/ml,万古霉素,MH,平板,1-10,l 0.5MacFarland Standard,菌悬液,35,，,24,小时，,1,个菌落生长即判定为耐药,分子生物学方法：,VanA,、,VanB,、,VanC,等基因,微生物学基础知识,第108页,109,汪复：中国抗感染化疗杂志,：,5,（,1,）：,1,3,耐药肠球菌感染,耐万古霉素肠球菌属感染：,新开发品种如利奈唑胺、奎奴普丁,/,达福普汀等，但后者对粪肠球菌无作用。,依据药敏结果联适用药（磷霉素、利福平、氟喹诺酮类、米诺环素等）。磷霉素联合呋喃妥因可能对尿路感染有效,微生物学基础知识,第109页,110,耐青霉素肺炎链球菌检测,苯唑西林：,1,g/,片,抑菌圈直径,20mm,为青霉素敏感株（,MIC2,g/ml,）,抑菌圈直径,19mm,可能为青霉素耐药、中敏或敏感株，必须进行青霉素,MIC,测定。,2,g/ml S,（,PSSP,）,0.06,g/ml S,（,PSSP,）,4,g/ml I,（,PISP,）,8,g/ml R,（,PRSP,）,0.12,g/ml R,（,PRSP,）,非脑膜炎分离株,脑膜炎分离株,微生物学基础知识,第110页,111,肺炎链球菌耐药性,青霉素敏感肺炎链球菌：,PSSP,Penicillin-susceptible S.pneumoniae,青霉素,MIC 0.06ug/ml,青霉素中介肺炎链球菌：,PISP,Penicillin-intermediate S.pneumoniae,青霉素,MIC 0.125-1ug/ml,青霉素耐药肺炎链球菌：,PRSP,Penicillin-resistant S.pneumoniae,青霉素,MIC 2ug/ml,青霉素不敏感肺炎链球菌：,PNSP,Penicillin-nonsusceptible S.pneumoniae,包含,PISP,和,PRSP,微生物学基础知识,第111页,112,检出率（,%,）,PISP,、,PRSP,在儿童中检出率,(,上海地域,1996-),由上世纪,90,年代末不足,15%,，现已上升至,年,91.6%,（,PISP 59.5%,、,PRSP,达,32.1%,）按,年前,CLSI,标准,S0.06,、,I=0.125,1,、,R2mg/L,微生物学基础知识,第112页,113,临床意义,PSSP,青霉素、阿莫西林等,-,内酰胺类高度敏感,对红霉素、克林霉素、氯霉素耐药率较高,PISP+,PRSP,青霉素耐药，部分菌株对头孢曲松等第三代,头孢菌素耐药；但对万古霉素、和碳青霉烯,类等均呈敏感；对红霉素、克林霉素、氯霉,素耐药率更高,微生物学基础知识,第113页,114,产超广谱,内酰胺酶菌株,检测,ESBL,：,Extended-spectrum-lactamases,筛选试验：,ESBL,头孢泊肟：,10,g/,片 ,22mm,头孢他啶：,30,g/,片 ,22mm,头孢噻肟：,30,g/,片 ,27mm,头孢曲松：,30,g/,片 ,25mm,氨曲南：,30,g/,片 ,27mm,任一以上药品进行筛选，出现上述结果疑为,ESBL,产生株。,微生物学基础知识,第114页,115,超广谱,-,内酰胺酶阳性确证试验,头孢他定/克拉维酸,头孢噻肟,头孢他定,头孢噻肟/克拉维酸,10,mm,26,mm,阳性表型确证试验最小抑菌浓度=5,mm,或者头孢噻肟（或头孢他定）/克拉维酸比单独头孢噻肟（或头孢他定）抑菌圈直径要更大些（仅一对需要被证实是阳性）,微生物学基础知识,第115页,116,临床意义,ESBLs,菌株主要为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，其它肠杆菌科细菌和非法酵菌中亦可存在,可水解各种广谱,-,内酰胺类抗生素包含第三代头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松以及头孢吡肟和氨曲南等含氧亚氨基侧链头孢菌素,多数可被酶抑制剂如克拉维酸、舒巴坦、三唑巴坦所抑制,对亚胺培南、美罗培南等碳青霉烯类高度敏感，对头霉素类、头孢哌酮,/,舒巴坦、哌拉西林,/,三唑巴坦等酶抑制剂复方制剂多数仍呈敏感,对具非,-,内酰胺结构抗菌药品如氨基糖苷类、氟喹酮类等耐药率亦较非产酶株高,微生物学基础知识,第116页,117,碳青霉烯酶,分类,代表酶,常见细菌,Class A,KPC,SME,IMI,NMC,GES,肠杆菌科细菌,(,铜绿假单胞菌中少见,),Class B,(metallo-b-lactamse),NDM-1,IMP,VIM,GIM,SPM,铜绿假单胞菌,肠杆菌科细菌,不动杆菌属,Class D,OXA,不动杆菌属,微生物学基础知识,第117页,118,产,KPC,型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌药品敏感性,抗菌药品,解释,抗菌药品,解释,阿米卡星,R,头孢吡肟,R,庆大霉素,R,头孢哌酮,/,舒巴坦,R,氨苄西林,R,头孢西丁,R,氨苄西林,/,舒巴坦,R,亚胺培南,R,哌拉西林,R,美罗培南,R,哌拉西林,/,他唑巴坦,R,厄他培南,R,头孢唑啉,R,环丙沙星,R,头孢呋辛,R,复方磺胺甲噁唑,R,头孢噻肟,R,亚胺培南,(Etest),32mg/ml,头孢他啶,R,美罗培南,(Etest),32mg/ml,微生物学基础知识,第118页,119,Carbapenemases:the Versatile,b,-Lactamases,微生物学基础知识,第119页,120,-,年,CHINET,耐药监测肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药率（,%,）,肺杆,株数,2136,2834,3037,3435,4556,2093,微生物学基础知识,第120页,121,微生物学基础知识,第121页,122,耐药性防治办法,合理使用抗菌药品,严格执行消毒隔离制度,加强药政管理,新抗菌药品寻找和研制，针对耐药发生机制，抗菌药品结构开发新药。,微生物学基础知识,第122页,123,中山医院,年对中央空调出风口采样,微生物学基础知识,第123页,124,手上细菌,微生物学基础知识,第124页,12,株产气肠杆菌分为,5,种不一样,DNA,谱型,其中,7,株产,KPC-2,型酶菌株为同一谱型,结果：,PFGE,同源性分析,微生物学基础知识,第125页,126,微生物学基础知识,第126页,