诱导家猫同期发情的试验报告_张迪.pdf

动物医学进展，（）：诱导家猫同期发情的试验报告收稿日期：基金项目：西北农林科技大学大学生创新创业项目（）作者简介：张迪（），女，陕西咸阳人，本科生；樊心怡（），女，陕西渭南人，本科生。通讯作者张迪，樊心怡，曾浩然，雷安民（西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 ；西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌 ）摘要：利用以烯丙孕素为主诱导家猫同期发情后进行超数排卵的方法，为家猫胚胎移植等繁殖技术在猫繁育与生产中的应用提供参考。通过给母猫口服烯丙孕素（）后再进行超排处理，建立了一种新型调控母猫发情和超数排卵的方法。对卵巢形态状况进行分析，并对口服烯丙孕素后进行超排的母猫发情状况和卵子质量进行测定，结果表明，口服烯丙孕素的母猫超排后的卵巢囊肿率较低，卵巢排卵点数也有明显增多，较传统母猫同期发情调节后进行超排的方法有明显优势，为解决猫人工繁育技术的关键技术难点提供新途径。关键词：猫；烯丙孕素；发情调控；超数排卵中图分类号：；文献标识码：文章编号：（）目前已知的 种野生猫科动物中，除了家猫，其他的 种野生猫科动物都受到不同程度的环境威胁或濒临灭绝。随着现代生物技术的发展，自 年第例体外受精家猫诞生后，关于家猫人工繁殖技术的研究也日益增多。国外对野生猫科动物超数排卵和胚胎培养等研究已经开展了几十年，并且具有有效结果，对现今存在的家猫胚胎体外培养系统进行了系统的比较和分析。不仅如此，有些 研究者 已经实现 了 对 印 度 荒 漠 猫（）、猎豹（）、沙 丘 猫（）和 豹 猫（）的有效超排和胚胎移植研究。年家猫胚胎移植首次成功，我国学者虽然在家猫生殖技术的相关领域研究方面较少 ，但也有学者开展了有关家猫超数排卵和卵母细胞体外培养等工作。目前，现代生物技术已成功运用于野生猫科动物的人工繁育领域，对于家猫人工受精、超数排卵、卵母细胞体外成熟培养、体外胚胎培养和克隆等技术的研究也进一步发展。但现阶段，由于我国地理位置、土壤环境和气候条件的独特性，国外的相关超数排卵和胚胎移植等技术 不一定十分适用于我国的猫科动物，所以我们需要构建一套完整的适用于我国独特条件的家猫胚胎工程生物技术体系和人工繁育技术，完善我国珍稀猫科动物人工繁育工作，以期实现对濒危猫科动物的保护，并在此基础上扩大野生猫科动物种群，增加物种多样性。超数排卵（简称超排）是指用外源性激素诱发卵巢的多个卵泡发育，并且排出多个有受精能力的卵子。这项技术是胚胎移植、克隆等技术的核心与关键环节，也是提高胚胎移植效果的决定因素。现阶段，可以有效诱导家猫卵泡发育和成熟的外源促性腺激素包括孕马血清促性腺激素（，）、卵泡刺激素（，）、人 绒 毛 促 性 腺 激 素（，）等。对猫进行超数排卵的方案主要有 和 。可以促进卵泡的发育和黄体的形成，较早被使用在家猫上调控繁殖，之后也被用于家猫的超数排卵。可以促进卵泡成熟、排卵和黄体形成，通过使用 诱导大熊猫发情排卵目前也已获得成功。有研究报道，口服烯丙孕素（，）可以快速抑制母猫的卵泡发育活动，不影响使用前母猫所处的卵泡期，停药后母猫恢复正常的卵泡发育，且烯丙孕素无长期毒性，半衰期为，可随尿液排出。本试验主要是利用烯丙孕素的药物特性，控制母猫的卵泡活动，停药后母猫恢复正常卵泡发育活动，达到同期发情效果，再使用 进行超数排卵，有效地提高母猫的排卵数和排卵质量，并在一定程度上减少卵巢囊肿现象的发生，解决家猫的人工繁殖技术的难点问题，为以后开展关于猫胚胎移植等技术的研究奠定基础。DOI:10.16437/ki.1007-5038.2023.06.017材料与方法材料试验用动物试验用猫是杨凌当地周边农户正常家养的、性成熟的家猫，月龄，体重 左右，健康，无繁育相关的疾病。集体饲喂，分别笼养，自由采食、饮水。试验药品和试剂 、陆眠宁、鹿醒 宁、拜 有 利、青 霉 素、链 霉 素、生 理 盐 水、等，公司产品；促卵泡素（）、人绒毛膜促性腺激素（），宁波市三生生物科技有限公司产品；胎牛血清（），北京沃卡威生物技术有限公司产品。仪器和器材无菌手术器械（手术刀、手术剪、镊子、缝针、持针钳、止血钳、可吸收缝线等用基础外科手术器械），无菌手术室，电子分析天平，空气层流实验室，倒置显微镜，恒温水浴锅，离心机、恒温培养箱等。方法超数排卵处理随机选取 只月龄健康性成熟母猫作为试验动物。对 只试验用猫进行独立饲喂，在饲喂过程中，根据性别以及公猫和母猫合笼时产生的应激反应大小，淘汰了只应激反应特别大和特别小，无性冲动的母猫，以及因为环境更换等客观因素产生应激或食欲不佳的母猫。最终选择 只性成熟母猫进行试验，根据随机试验的原则分为组，试验组只和对照组只。试验组，试验开始前，用果汁对母猫进行诱导饲喂。试验开始后，每日早上点对健康母猫饲喂烯丙孕素，每只，持续定时定量饲喂。停药后，肌肉注射 ，后肌肉注射 。对照组，采用传统的母猫超排方法，即对健康母猫肌肉注射 ，后肌肉注射 。开始注射时间与试验组开始注射时间相同。超数排卵效果鉴定因外科手术前需要禁食禁水，而注射 后即将进行外科手术摘取卵巢，所以注射 同时开始禁食禁水处理。脐下腹中线切口，切口长约，术者用中指和食指从开口处伸入腹腔内，找到子宫角后，缓慢将子宫角和卵巢牵引到创口外，摘除卵巢，并将子宫角送回盆腔。记录卵巢的颜色、体积、排卵点数量、大卵泡数等情况。统计分析对试验得到的结果采用检验方法统计分析，为差异显著，为差异极显著。结果用所述的方法对两组猫进行超排处理，其中对照组为随机选择只健康母猫进行超排，试验组也为随机选择只健康母猫进行超排处理，试验猫超数排卵处理后卵巢反应情况如表所示。从表可知，对照组猫的卵巢重量为，子宫角长度 ，获得的平均红体数或黄体数为 个，大卵泡总数为枚；试验组为饲喂烯丙孕素后进 行 超 排，卵 巢 重 量 为 ，子 宫 角 长 度 ，获得的红体数或黄体数为 个，大卵泡总数为枚，两组间的红体或黄体数差异极显著（），卵巢重量、子宫角长度和大卵泡数差异不显著（）。传统方法超排后卵巢上的卵泡发育情况见图，口服烯丙孕素后进行超排后卵巢上的卵泡发育情况见图。表家猫超数排卵处理后卵巢反应情况 组别 卵巢重量 子宫角长度 红体或黄体数 大卵泡数 对照组 试验组 注：差异极显著（）。：（）讨论家猫作为季节性、多次发情动物，在家养条件下一年四季均可发情，且猫为刺激性排卵动物，需要充分的交配刺激才会诱导排卵，一般在交配后 排卵。由于猫对外界的各种刺激特别敏感，超排处理以及手术处理过程会发生较为剧烈的应激反应，严重时可能死亡。作者之前采用手术法活体冲卵，虽然此种方法可以重复超排次以上，无需大量供体猫，猫的利用率大大提高，而且成本较低，但是在冲卵过程中，由于冲卵器材的问题，还有个别猫反复冲卵，采集的卵子较少，质量较差，冲卵结果并不理想，可能是反复对母猫进行超排会引起母猫免疫张迪等：诱导家猫同期发情的试验报告图中箭头所指为卵泡（）呈椭圆形，无色透明 ，图传统激素超排的家猫卵巢上卵泡的发育情况 图中箭头所指为成熟卵泡（）呈圆形，内壁薄而清晰，无色透明 ，图口服烯丙孕素后进行超排的家猫卵巢上卵泡的发育情况 抑制，进而影响超排效果。也可能是由于母猫产生应激反应，影响了卵巢对于超排药物的应答能力，对冲卵结果造成较大影响。因此，作者最终决定手术切除猫卵巢，并对得到的卵巢形态进行评估。该方法等同于对家猫进行了一次绝育手术，减少了家猫之后的不合理交配与繁殖，同时，绝育后的家猫也更温顺，更适合饲养。家猫适合于饲养在一个较大的空间，不适合笼养，饲养环境太小会导致家猫发育不良，抑郁，脾气差等。且猫作为一种怕热、喜暖、敏感的动物，对饲养环境的温度和湿度有一定的要求，如果环境的气温过高，则会影响猫的食欲，还可能诱发疾病。由于目前专门用于进行试验的猫很少，所以本试验使用的家猫多是流浪野猫，其性格较差，短时间内很难适应笼具饲养的环境，一些常规的试验操作也较难操作。猫的养殖需要较大的空间，成本较高，另外试验用猫对于环境要求高充足可靠的电力以及优越的饲养环境，卫生条件也都是完成试验的必备条件。由于试验条件的限制，只进行了 只家猫的试验，所得结果有限，但试验的进行严格保证了科学性和真实性，试验结果也对之后的相关研究有一定的参考价值。烯丙孕素 是一种人工合成的口服孕激素，它可以通过抑制垂体促性腺激素（），进一步抑制促卵泡生成素（）和黄体生成素（）的分泌，使卵泡停止发育。动物连续给药后卵泡发育受阻，停止发情，停药后 和分泌增加，卵泡开始发育，达到同期发情的效果。烯丙孕素辅助繁育被应用于在马 、猪 、羊、虎鲸（）、南美小斑虎猫（）等动物同步卵泡发育，现阶段，烯丙孕素则被广泛应用于非洲猪瘟下的母猪的批次化生产 。国外有学者表明，口服烯丙孕素可以可逆性的抑制家猫的卵巢活动，且未观察到副作用，可以使猫科动物的辅助生殖更加有效。本研究所得到的结果也表示，口服烯丙孕素后超排的方法显著提高了排卵点，卵巢的状态在一定程度上也有了明显提高。但是卵巢过度刺激会导致雌激素释放过多，如雌二醇激增有时会引起黄体过早溶解现象。而在对于外源性孕激素的研究中，发现孕激素的使用（如 、）可以治疗雌二醇周期效应，抑制雌激素过度释放。本研究在使用促性腺激素超排之前，用烯丙孕素对家猫进行了预处理，降低了超排后出现卵巢囊肿的几率，取得了较为有效的结果。同时，高剂量的孕激素长期使用，会引起家猫的乳腺病变或者子宫病变，所以要在治疗过程中要避免孕激素过高剂量的长期使用。因此，后续的研究可以针对于孕激素口服剂量的高低对调控家猫发情的不同作用效果。本试验提供了一种新型的使母猫同期发情和超数排卵的方法，可以在预定时间同时发生，大大增加了卵巢的红体数或黄体数，在一定程度上降低了卵巢囊肿现象的出现率，为家猫人工繁育技术提供了一定的技术方法。本试验改良了传统家猫超排的方法，建立了一种新的诱导家猫同期发情和超数排卵的技术。结果表明，试验组的平均红体数或黄体数显著高于对照组，说明该方法确实能够显著的提高家猫排卵数量，促进家猫多卵泡的发育。同时试验组的母猫卵巢发动物医学进展 年第 卷第期（总第 期）生未排卵大卵泡的状况也有明显的改善，反映了该方法在一定程度上可以有效减少现有母猫同期发情和超排方法所导致的卵巢存在未排卵大卵泡现象频发的情况，提高和改善了超排效果。参考文献：，：，：，（）：，（）：，：，：，（）：，（），（）：，：，（），（）：，（），：，（）（），（）：文端成，刘忠华，陈大元家猫的胚胎工程动物学杂志，（）：白喜云，庞全海，慈书峰犬猫繁殖生物技术研究进展中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第五届全体会议第十次学术研讨会，：滑志民，蔡旋，张似青，等实验用猫的繁育上海畜牧兽医通讯，（）：李德生，王鹏彦，张和民，等外源激素诱导大熊猫发情排卵及受孕效果四川动物，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（），（）：张信军，卢雪婷，宁秋红，等 不同激素和重复超排对家猫超排效果的影响 扬州大学学报（农业与生命科学版），（）：，（）：李丹，马白荣 烯丙孕素和黄体酮在同期发情中的应用中国畜禽种业，（）：，：，：陈晓丽，宋真，王玉燕，等 猪繁殖调控激素药物剂型研发与应用进展中国畜牧杂志，（）：，张迪等：诱导家猫同期发情的试验报告 ，：，（）：，（），（）：，（），（）：王京兰，薛瑜，吴鹏威，等 烯丙孕素在母猪批次化生产中的应用中国畜禽种业，（）：韦松江，吴建国，陶胜戈，等烯丙孕素在猪场批次化生产中的应用效果 养猪，（）：，（）：，（）：，（）：，（.，；.，）：（），：；动物医学进展 年第 卷第期（总第 期）