新疆维吾尔族异基因造血干细...儿血浆中伏立康唑的浓度测定_赵婷.pdf

安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）新疆维吾尔族异基因造血干细胞移植病儿血浆中伏立康唑的浓度测定赵婷，张惠兰，沈浩，冯杰，刘思明，王婷婷，李红健，于鲁海作者单位：新疆维吾尔自治区人民医院药学部、临床药学研究所，新疆维吾尔自治区 乌鲁木齐830001通信作者：于鲁海，男，主任药师，硕士生导师，研究方向为临床药学，Email：基金项目：新疆维吾尔自治区人民医院院内科研基金资助项目（20210132）摘要：目的 测定新疆维吾尔族异基因造血干细胞移植（hematopoietic stem cell，HSCT）病儿血浆中伏立康唑浓度。方法 采用高效液相色谱法-质谱联用技术测定接受伏立康唑治疗的204例异基因HSCT病儿的伏立康唑谷浓度。结果 血浆样品中伏立康唑与IS的峰面积比在0.220 mg/L浓度范围内呈线性（Y=1.107 2 X0.051 3，r2 0.999 7）。定量下限（LLOQ）、低浓度质控（LQC）、中浓度质控（MQC）和高浓度质控（HQC）的日内、日间精密度的CV值小于7.39%，准确度在理论浓度的15%内，提取回收率为85.46%95.55%，标准偏差均5.0%，室温、短期、长期和冻融冻存稳定性均较好（CV值均小于10%）。9例病儿的伏立康唑血浆谷浓度 6 mg/L。结论 该方法特异性强、灵敏度高、运行时间短，能满足临床伏立康唑血药浓度测定需求。关键词：伏立康唑；药物监测；高效液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）；异基因造血干细胞移植；血药浓度Determination of voriconazole concentration in plasma of Xinjiang Uygur children at high risk of allogeneic hematopoietic stem cell transplantationZHAO Ting,ZHANG Huilan,SHEN Hao,FEN Jie,LIU Siming,WANG Tingting,LI Hongjian,YU LuhaiAuthor Affiliation:Department of Pharmacy Institute,Clinical Pharmacy,Peoples Hospital of Xinjing Uygur Autonomous Region,Urumqi,Xinjing Uygur Autonomous Region 830001,ChinaAbstract：Objective Determination of voriconazole concentration in plasma of high-risk children with hematopoietic stem cell transplantation(HSCT)of Xinjiang Uygur.Methods High-performance liquid chromatography-mass spectrometry was used to monitor voriconazole trough concentrations in 204 children with allogeneic HSCT in hematology who received voriconazole.Results The peak area ratio of voriconazole to IS in plasma samples was linear over the concentration range of 0.2-20 mg/L(Y=1.107 2 X0.051 3,r2 0.999 7).The CV(%)values of intra-day and inter-day precision for LLOQ,LQC,MQC and HQC were not more than 7.39%,the accuracy was within 15%of the theoretical concentration,and the extraction recovery was 85.46%to 95.55%,the standard deviation were all 5.0%,and the room temperature,short-term,long-term and freeze-thaw storage stability were all good(CV values were all less than 10%).The plasma trough concentration of voriconazole were 6 mg/L.Conclusion The method has high analytical sensitivity,strong specificity and short running time,which can meet the needs of clinical voriconazole concentration monitoring.Key words：Voriconazole;Drug monitoring;Liquid chromatography-tandem mass spectrometry assay(LC-MS/MS);Hematopoietic stem cell;Plasma concentration伏立康唑（voriconazole）可用于预防接受异基因造血干细胞移植（hematopoietic stem cell，HSCT）的高危病人的侵袭性真菌感染1-2。伏立康唑具有非线性动力学特征3，血药浓度治疗窗狭窄（0.55.0 mg/L）4。目前，伏立康唑在维吾尔族异基因HSCT高危病儿中的治疗药物监测数据有限。因此，我们采用高效液相色谱-质谱联用（liquid chromatography-tandem mass spectrometry assay，LC-MS/MS）技术来灵敏、快速检测伏立康唑稳态血浆谷浓度，并探讨伏立康唑血浆谷浓度在异基因HSCT病儿中的分布特征。1方法1.1仪器、试剂和试药高效液相色谱-质谱联用仪（4500型，上海AB SCIEX分析仪器有限公司）；电医院药学引用本文：赵婷，张惠兰，沈浩，等.新疆维吾尔族异基因造血干细胞移植病儿血浆中伏立康唑的浓度测定 J.安徽医药，2023，27（7）：1476-1480.DOI：10.3969/j.issn.1009-6469.2023.07.044.1476安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）子天平（BP221S型，德国赛多利斯公司）。伏立康唑和伏立康唑同位素内标均购自中国食品药品检定研究院（纯度98%）；色谱甲醇、甲酸（美国 Fisher公司）。1.2色谱及质谱条件色谱条件：色谱柱 Waters ACQUITY UPLC BEH C18 柱（3.050 mm，2.5 m），流动相A：0.1%的甲酸水溶液，流动相B：0.1%的甲酸乙腈溶液，梯度洗脱（00.2 min，A 95%B 5%；0.21.2 min，A 70%，B 30%；1.22.4 min，A 30%，B 70%；2.41.3 min，A95%，B 95%）；柱温 40；进样量2 L；流速0.4 mL/min。质谱条件：正离子模式；离子喷射电压：5 500 V；温度：600；GSl：50；GS2：50；Curtain gas：30。伏立 康 唑 离 子 对 350.2/127.1，同 位 素 内 标 离 子 对353.2/130.1，碰撞能量均为20 eV。1.3溶液的配置精密称取伏立康唑内标10 mg和同位素内标1 mg，用甲醇配置成浓度为1 mg/L储备液和5 mg/L内标溶液。再稀释配制伏立康唑标准曲线系列溶液（浓度为2、5、10、20、50、100、200 mg/L）。同时，以甲醇分别配置4种具有代表性伏立康唑浓度水平的质控样品溶液，即定量下限（lower limit of quantification，LLOQ，2.0 mg/L）、低浓度质控（low quality control，LQC，5.0 mg/L）、中浓度质控（middle quality control，MQC，60.0 mg/L）和高浓度质控（high quality control，HQC，150.0 mg/L）。1.4方法学考查1.4.1专属性考察测定并记录空白血浆、空白血浆+伏立康唑标准液、空白血浆+内标、空白血浆+伏立康唑标准液+内标和病儿样品色谱图，具体见图1。1.4.2线性关系考察和定量下限测定在80 L空白血浆中分别加入伏立康唑标准系列浓度溶液10 L 和内标溶液 10 L，得到 0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 mg/L的系列标准血浆样本溶液后进样分析。以伏立康唑与内标的色谱峰面积比值为应变量，浓度为自变量，用加权最小二乘法进行回归分析。以信噪比S/N4考察该药物的检测下限，信噪比S/N12考察该药物的定量下限。1.4.3方法精密度和准确度配制 LLOQ（0.2 mg/L）、LQC（0.5 mg/L）、MQC（6.0 mg/L）和 HQC（15.0 mg/L）4个浓度的质控生物样品各5份，每个浓度进样 3 针，连续测定 3 d，计算日内、日间精密度和准确度。1.4.4提取回收率配制LLOQ、LQC、MQC和HQC 4个浓度的伏立康唑质控标准溶液和生物样品各6份，进样分析，并计算提取回收率。1.4.5稳定性试验分别考察LQC和HQC的质控生物样品室温稳定性（室温放置 4 h）、短期稳定性（4，24 h）、长期稳定性（30，30 d）、冻融稳定性（24 下反复冻融3次，每次至少间隔12 h）。稳定性质控样品按上述条件分别放置一段时间后进行色谱分析，比较其测定值与0 h质控样品测定值的偏差。1.5病儿样品测定及临床资料收集收集 204例就诊于新疆维吾尔自治区人民医院血液科并规律服用伏立康唑的维吾尔族异基因 HSCT 的病儿。所有病儿在测定当日早晨空腹抽取静脉血12 mL（3 500 r/min，4 离心5 min），分离血浆后精密吸取50 L，加入内标10 L，蛋白沉淀剂200 L，混合离心（12 000 r/min，10 min）后过滤测定。收集并随访了所有入组病儿的一般资料（年龄、性别、体质量指数、服药剂量等）和稳态血浆谷浓度。病人或其近亲属知情同意，本研究经新疆维吾尔自治区人民医院伦理委员会审核批准（批号XJS2021111809）。2结果2.1专属性研究结果显示：伏立康唑的离子对跃迁的离子对：350.2/127.1，同位素内标的离子对跃迁的离子对：353.2/130.1。图 1显示了伏立康唑和 IS的离子对跃迁的代表性色谱图。在伏立康唑的洗脱和无药物空白人血浆中的IS中未检测到干扰峰。在LLOQ样品（图1C）和给药后产生的样品（图1D）中，伏立康唑和IS保留时间均约1.84 min。此外，在定量样品上限（20 mg/L）之后注入的空白血浆样品的色谱图中未检测到残留。2.2线性关系考察和定量下限测定伏立康唑血药浓度在 0.220 mg/L 范围内线性关系良好（Y=1.107 2X0.051 3，r20.999 7），检测下限为0.1 mg/L（S/N=4），定量下限为0.2 mg/L（S/N=12）。2.3方法精密度和准确度伏立康唑测定的日内和日间精密度使用四个水平的质控样品进行评估，包括 LLOQ、LQC、MQC 和 HQC（见表 1）。表 1结果表明：日内和日间精密度的变异系数（coefficient of variation，CV）值不超过7.39%，准确度的偏差（deviation from nominal value，Bias）范 围 为 1.11%14.56%。2.4 提 取 回 收 率 伏 立 康 唑 的 4 个 质 控 样 品（LLOQ、LQC、MQC 和 HQC）的提取回收率分别为85.46%、90.78%、95.55%和 94.11%，RSD 值均小于15.0%。IS的平均绝对值为86.41%。见表2。2.5稳定性试验稳定性试验结果表明，伏立康唑的2个质控样品（LQC和HQC）的未前处理和经过前处理血浆样品的短期、长期和冻融冻存稳定性均较1477安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）好（CV5%；Bias为0.28%12.29%；CV10%；Bias为3.56%2.85%）。见表3。2.6伏立康唑血浆药物浓度测定结果分析病儿一般资料见表4。病儿平均年龄为10.13岁；男性病儿比例为67.65%（n=138），伏立康唑平均给药剂量为14.31 mg/d，血浆谷浓度为3.11 mg/L。3讨论本研究首次建立的测定伏立康唑血药谷浓度的LC-MS/MS方法基于临床实践病人样本，提供了临床环境的真实代表。3.1测定方法的优缺点优点：目前测定伏立康唑血药浓度的高效液相色谱法5-9和 LC-MS/MS法9-11在样品量、样品制备方法、色谱柱等方面有所不同。有研究12-15使用了较为复杂的固相萃取、液-液萃取，或更昂贵的色谱设备。我们建立的 LC-MS/MS方法使用了较为简单的蛋白质沉淀方法，可以将实验操作过程减少到四个步骤，检测人员可以快速轻松的完成相关操作，如15个伏立康唑血浆样品可以在20 min内完成所有前处理过程。本研究建立的LC-MS/MS法的分析速度快、灵敏度高，一次样品的运行时间在3 min内就可以完成，可及时为临床个体化用药提供依据。此外，该方法只需要50 L的血浆，这使得该方法可以更好的应用于儿童病人。缺点：由于该LC-MS/MS法的灵敏度较高，故测表2伏立康唑的提取回收率质控LLOQLQCMQCHQC内标质控浓度/（mg/L）0.20.56.015.00.5回收率/%85.4690.7895.5594.1186.41SD/%3.453.823.685.612.07CV/%4.044.213.855.963.97注：CV为变异系数，SD为标准偏差，LLOQ为定量下限，LQC为低浓度质控，MQC为中浓度质控，HQC为高浓度质控。表1精密度和准确度结果（伏立康唑血药浓度）质控日内（n=5）LLOQ LQC MQC HQC日间（n=3）LLQC LQC MQC HQC质控浓度/（mg/L）0.200.506.0015.000.200.506.0015.00实测浓度/（mg/L）0.220.526.0414.960.230.535.9714.83SD/%0.020.020.290.200.010.020.380.13CV/%7.393.724.861.362.943.446.370.86Bias/%9.824.300.640.2814.565.160.541.11注：Bias为偏差，CV为变异系数，SD为标准偏差，LLOQ为定量下限，LQC为低浓度质控，MQC为中浓度质控，HQC为高浓度质控。02004006008001 0001 2001 4001 6001 8000.010 00.211 00.421 90.632 80.843 71.054 61.265 51.476 41.687 31.898 32.010 922.212 012.413 102.614 192.815 28响应值时间/min51.11051.01049.01048.01051.21051.31047.01046.01045.01044.01043.01042.01041.010响应值时间/min00.010 00.211 00.421 90.632 80.843 71.054 61.265 51.476 41.687 31.898 32.010 922.212 012.413 102.614 192.815 2851.010响应值时间/min00.010 00.211 00.421 90.632 80.843 71.054 61.265 51.476 41.687 31.898 32.010 922.212 012.413 102.614 192.815 2852.01053.01054.01055.01056.01057.01058.01051.010响应值时间/min00.010 00.211 00.421 90.632 80.843 71.054 61.265 51.476 41.687 31.898 32.010 922.212 012.413 102.614 192.815 2852.01053.01054.01055.01056.01057.01058.01059.01061.01061.110ABCD图1伏立康唑和内标色谱图：A为空白血浆；B为空白血浆+内标；C为空白血浆+伏立康唑；D为病儿血浆样品1478安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）定的各个环节对测定的干扰均较大，尤其是样本前处理过程。其次，该仪器比较昂贵，不能广泛应用于新疆的边远地区。3.2操作过程中的注意事项（1）本方法的流动相为0.1%甲酸水溶液0.1%甲酸乙腈溶液，因此，采用有机相和水相相结合的混合膜。（2）流动相必须脱气处理，否则会造成基线不稳。（3）由于本研究测定的是生物样本，样本的前处理中的除蛋白过程对色谱系统的干扰较大，因此，样本经0.22 m过滤器过滤后再进样测定。3.3研究意义目前，我院的伏立康唑样品被送到其他实验室进行血药浓度测定，其存在的主要问题是36 d的周转时间，使临床调整其给药剂量不及时。为了解决这个问题，我们开发并验证了一种适用于儿科病人的快速、灵敏的LC-MS/MS 定量伏立康唑方法血浆谷浓度。此外，伏立康唑血浆谷浓度5 mg/L时易引发药物的毒性反应19-20。本研究结果显示有9例病儿伏立康唑血浆谷浓度6 mg/L的病儿引发了谷丙和谷草转氨酶升高。因此临床及时进行伏立康唑治疗药物监测是非常有必要的。参考文献1 ZENG GT，SHI LH，LI HL，et al.Effect of cyclosporine A and polymorphisms in CYP2C19 and ABCC2 on the concentration of voriconazole in patients undergoing allogeneic hematopoietic stem cell transplantation J.Xenobiotica，2020，50（5）：614-619.2 陈丽娟，李进东，吴晓丽，等.两性霉素B脂质体联合伏立康唑治疗急性髓系白血病合并曲霉菌感染21例疗效观察 J.安徽医药，2021，25（1）：169-172.3 PURKINS L，WOOD N，GREENHALGH K，et al.The pharmacokinetics and safety of intravenous voriconazole a novel wide-spectrum antifungal agentJ.Br J Clin Pharmacol，2015，56（S1）：2-9.4 陈恳，张相林，克晓燕，等.伏立康唑个体化用药指南 解读J.临床药物治疗杂志，2019，17（3）：47-52，78.5 VERWEIJ-VAN WISSEN CP WGM，BURGER DM，VERWEIJ PE，et al.Simultaneous determination of the azoles voriconazole，posaconazole，isavuconazole，itraconazole and its metabolite hydroxy-itraconazole in human plasma by reversed phase ultra-performance liquid chromatography with ultraviolet detectionJ.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2012，887/888：79-84.6 YAMADA T，MINO Y，YAGI T，et al.Rapid simultaneous determination of voriconazole and its N-oxide in human plasma using an isocratic high-performance liquid chromatography method and its clinical applicationJ.Clin Biochem，2012，45（1/2）：134-138.7 王志君，杨云云，张文静，等.HPLC法测定人血浆中伏立康唑及其代谢物的浓度J.药学实践杂志，2019，37（2）：表3伏立康唑的稳定性试验结果稳定性试验LQC（0.5 mg/L）测定浓度/x s CV/%Bias/%HQC（15.0 mg/L）测定浓度/x s CV/%Bias/%重复次数33未前处理的血浆样本室温4 h0.5200.0254.774.3515.350.271.792.324、24 h0.5200.0050.984.1115.550.241.523.6424、30 d0.5400.0050.957.8014.960.201.360.28反复冻融3次（24）0.5600.0264.6212.2915.930.171.096.19前处理后的血浆样本室温2 h0.5100.0122.362.8514.850.221.471.004/24 h0.4800.0244.933.2914.470.896.183.56注：LQC为低浓度质控，HQC为高浓度质控，Bias为偏差，CV为变异系数。表4规律服用伏立康唑的维吾尔族异基因造血干细胞移植（HSCT）病儿204例一般临床资料临床资料年龄/（岁，x s）男性/女性/例（%）身体质量指数/（kg/m2，x s）诊断/例（%）白血病 再生障碍性贫血 骨髓异常 淋巴瘤 其他给药途径/例（%）口服伏立康唑片剂 注射用伏立康唑给药剂量/（mg kg-1 d-1，x s）血浆谷浓度 5.0 mg/L浓度剂量比/（mg2 L-1 kg-1，x s）用药目的/例（%）预防用药 经验治疗 目标治疗结果（n=204）10.132.45138（67.65）/66（32.35）14.802.4997（47.55）80（39.22）18（8.82）6（2.94）3（1.47）166（81.37）38（18.63）14.314.669（4.41）159（77.94）36（17.65）0.230.16126（61.77）15（7.35）63（30.88）1479安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Jul，27（7）162-165.8 李敏，陈超阳，许俊羽，等.高效液相色谱法测定人血浆中伏立康唑的含量J.中国临床药理学杂志，2018，34（3）：316-318.9 李天萍，于勇，应玉雯，等.HPLC-MS/MS法同时测定人血浆中伏立康唑及其氮氧化代谢物浓度 J.药学与临床研究，2020，28（6）：425-429.10史长城，叶健，卓广超，等.HPLC法测定人血浆中伏立康唑的浓度 J.中国药房，2021，32（20）：2525-2529.11MAK J，SUJISHI KK，FRENCH D.Development and validation of a liquid chromatography-tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）assay to quantify serum voriconazole J.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2015，986/987：94-99.12RESZTAK M，KOSICKA K，ZALEWSKA P，et al.Determination of total and free voriconazole in human plasma：Application to pharmacokinetic study and therapeutic monitoring J.J Pharm Biomed Anal，2020，178：112952.DOI：10.1016/j.jpba.2019.112952.13MEI HK，HU X，WANG J，et al.Determination of voriconazole in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application in therapeutic drug monitoring in Chinese patientsJ.Journal of International Medical Research，2019，48（3）：1-10.14SMITH A，DOWIS J，FRENCH D.Quantification of serum voriconazole，isavuconazole，and posaconazole by liquid chromatography tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）J/OL.Current Protocols in Toxicology，2018，76（1）：e47.DOI：10.1002/cptx.47.15PAUWELS S，VERMEERSCH P，VAN EJ，et al.Fast and simple LC-MS/MS method for quantifying plasma voriconazoleJ.Clin Chim Acta，2012，413（7/8）：740-743.16梁培，郭晓芳.重症患者伏立康唑血药谷浓度监测分析 J.药物评价研究，2017，40（11）：1587-1592.17冯飞飞，张晓云，任秋霞，等.伏立康唑致精神、视觉障碍和肝功能异常 1 例 J.中国药物应用与监测，2017，14（2）：128-129.18THOMSEN KL，MACNAUGHTAN J，TRITTO G，et al.Clinical and pathophysiological characteristics of cirrhotic patients with grade 1 and minimal hepatic encephalopathy J/OL.PLoS One，2016，11（1）：e0146076.DOI：10.1371/journal.pone.0146076.19KATO K，NAGAO M，YAMAMOTO M，et al.Oral administration and younger age decrease plasma concentrations of voriconazole in pediatric patients J.J Infect Chemother，2016，22（1）：27-31.20赵庆国，任秋霞，杜春辉，等.Child-Pugh C级患者伏立康唑血药浓度监测结果分析 J.中国药物应用与监测，2019，16（1）：11-13.（收稿日期：2022-05-05，修回日期：2023-04-04）引用本文：任丛丛，贾光伟，梁良，等.基于中国医院药物警戒系统的药源性帕金森综合征真实世界研究 J.安徽医药，2023，27（7）：1480-1484.DOI：10.3969/j.issn.1009-6469.2023.07.045.药物警戒基于中国医院药物警戒系统的药源性帕金森综合征真实世界研究任丛丛a，贾光伟ab，梁良a，郭菲a，张帆a作者单位：聊城市人民医院，a药学部，b临床药理学重点实验室，山东 聊城252000通信作者：张帆，男，副主任药师，研究方向为临床药学，Email：基金项目：中国卒中学会脑血管病全程管理启航基金（2020017）；山东省医学会临床科研专项基金（YXH2020ZX048）摘要：目的 探索利用中国医院药物警戒系统（CHPS）开发主动监测药源性帕金森综合征（DIP）的方法，并分析DIP的人群特征。方法 利用CHPS制订主动监测方案，对2019年1月至2020年12月的聊城市人民医院入院病人从病历、医嘱、体征、影像学检查中通过关键词检索出报警病例，对其临床症状、治疗药物、体征检查、既往用药等方面的资料进行分析判断后，生成最终监测结果。结果 在纳入研究的36 369病例中，实际使用研究药物的为12 021例，CHPS报警病例2 488例，经人工复核后确定阳性病例52例，CHPS阳性预警率为2.1%（52/2 488），DIP实际发生率为0.43%（52/12 021）。可疑药物有曲美他嗪、利血平、氟桂利嗪、丙戊酸盐、氟哌啶醇、奥氮平、氯氮平、阿普唑仑、多奈哌齐、利培酮。52例阳性病例的年龄为（68.3612.98）岁，年龄65岁者共 38例（73.08%），女性病人 34例（65.38%），既往有缺血性脑病病史者 18例（34.62%），双侧肢体阳性症状者 40例（76.92%），颅脑CT或MRI检查显示异常者37例（71.15%），11例（21.15%）未停用可疑药物，32例（61.54%）症状未缓解或缓解但遗留后遗症，20例（38.46%）症状消失。9例（17.31%）发生在用药1年之内，24例（46.15%）发生在用药15年，13例（25%）发生在用药510年，6例（9.62%）发生在用药10年以上。结论 利用CHPS可及时发现DIP，较传统监测模式优势明显。DIP以女性多见，发生时间大多在用药5年之内，年龄65岁、既往缺血性脑病史是发生DIP的危险因素。双侧肢体阳性症状、颅脑CT、MRI检查显示异常有助于DIP的早期诊断和鉴别。关键词：帕金森病，继发性；药物相关性副作用和不良反应；中国医院药物警戒系统；药物监测；真实世界研究1480