脱氢姜酮通过调控miR-2...p-2增殖、迁移及血管形成_吴俊.pdf

基金项目:安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2020A0590);蚌埠医学院自然科学重点项目(2021byzd061)作者简介:吴俊，男，1984 02 生，硕士，主治医师，E-mail:cland1229163 com收稿日期:2022 08 28脱氢姜酮通过调控 mi-223-3p 抑制喉癌细胞 Hep-2 增殖、迁移及血管形成吴俊，王文忠，吴娟，于宁静，孙哲，周兰柱*(蚌埠医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科，蚌埠233000;*通讯作者，E-mail:lanzhu 07163 com)摘要:目的探讨脱氢姜酮(DZG)对喉癌细胞 Hep-2 增殖、迁移及血管形成的影响及其相关机制。方法分别以不同浓度的 DZG(0，75，150，300 mol/L)处理 Hep-2 细胞 24 h，MTT 法、Transwell、Western blot 法、实时荧光定量 PC(T-PC)分别检测 Hep-2 细胞的存活率、迁移能力、迁移蛋白波形蛋白(Vimentin)、N 钙黏蛋白(N-cadherin)和血管形成蛋白血管内皮生长因子(VEGF)以及基质金属蛋白酶 2(MMP-2)相对表达水平和 mi-223-3p mNA 相对表达量。将 Hep-2 细胞分别分为:空白对照组(control 组)、模拟物阴性对照组(mi-NC)、mi-223-3p 组(转染 mi-223-3p);空白对照组(si-control 组)、阴性对照组(si-NC)及 mi-223-3p 小干涉 NA 组(si-mi-223-3p)。MTT 法检测细胞增殖抑制能力，Transwell 检测细胞迁移能力，Western blot 检测细胞 VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin 蛋白相对表达量。结果0，75，150，300 mol/L 的 DZG 培养Hep-2 细胞，MTT 结果显示，24 h 细胞存活率随 DZG 浓度增加而下降(P0 05);Transwell 结果显示，细胞迁移能力随 DZG 浓度增加而下降(P0 05);Western blot 结果显示，VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin 蛋白相对表达量随 DZG 浓度增加而降低(P0 05);T-PC 结果显示，mi-223-3p mNA 相对表达量随 DZG 浓度增加而增加(P 0 05)。将 Hep-2 细胞进行转染后，T-PC 结果表明，mi-223-3p 组 Hep-2 细胞 mi-223-3p 相对表达量较 mi-NC 组和 control 组明显升高，si-mi-223-3p 组Hep-2 细胞 mi-223-3p 相对表达量较 si-NC 组和 si-control 组明显降低(P0 05)。MTT 法结果显示，mi-223-3p 组细胞存活率较 mi-NC 组明显降低(P0 05)。不加 DZG 单独使用正常培养基培养验证 mi-223-3p 对 Hep-2 细胞存活率时发现，mi-223-3p 组细胞存活率较 mi-NC 组和 control 组细胞明显下降，si-mi-223-3p 组细胞存活率较 si-NC 组和 si-control 组明显升高(P0 05);Transwell 结果显示，mi-223-3p 组细胞迁移率较 mi-NC 组和 control 组明显降低，si-mi-223-3p 组细胞迁移率较si-NC 组和 si-control 组明显升高(P0 05)。Western blot 结果显示，mi-223-3p 组 VGEF、MMP-2、Vimentin 和 N-cadherin 蛋白相对表达量较 mi-NC 组和 control 组明显降低，si-mi-223-3p 组 VGEF、MMP-2、Vimentin 和 N-cadherin 蛋白相对表达量较 si-NC 组和 si-control 组明显升高(P 0 05)。结论DZG 可通过调控 mi-223-3p 抑制喉癌细胞 Hep-2 增殖、迁移及血管形成，其机制可能与下调迁移及血管形成相关蛋白 VGEF、MMP-2、Vimentin 和 N-cadherin 相关。关键词:喉癌;mi-223-3p;增殖;侵袭;迁移;血管形成中图分类号:739 65文献标志码:A文章编号:1007 6611(2023)04 0446 08DOI:1013753/j issn1007 6611202304006Dehydrogingerone inhibits proliferation，migration and angiogenesis of laryngeal cancer cells Hep-2 by regulating mi-223-3pWU Jun，WANG Wenzhong，WU Juan，YU Ningjing，SUN Zhe，ZHOU Lanzhu*(Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery，First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu 233000，China;*Corresponding author，E-mail:lanzhu 07163 com)Abstract:ObjectiveTo investigate the effects of dehydrogingerone(DZG)on proliferation，migration and angiogenesis of laryngealcancer cells Hep-2 and its related mechanismMethodsHep-2 cells were treated with DZG at different concentrations(0，75，150，300 mol/L)for 24 h MTT method，Transwell，Western blot and T-PC were used to detect the survival rate of Hep-2 cells，themigration ability，the protein expression of Vimentin，N-cadherin，angioforming protein vascular endothelial growth factor(VEGF)andmatrix metalloproteinase-2(MMP-2)and relative mi-223-3p mNA level，respectively Hep-2 cells were divided into:blank controlgroup(control group)，negative analog control group(mi-NC)，and mi-223-3p group(transfected with mi-223-3p);blank con-trol group(si-control group)，negative control group(si-NC group)and mi-223-3p small interference NA group(si-mi-223-3pgroup)MTT assay，Transwell assay and Western blot were used to detect the cell proliferation，the cell migration，and the relativeexpression levels of VGEF，MMP-2，Vimentin and N-cadherinesultsMTT and Transwell results showed that 24 h cell survivalrate and the cell migration ability were statistically decreased by DZG in a concentration-dependent manner(P 0 05)Western blotresults showed that the relative expression levels of VGEF，MMP-2，Vimentin and N-cadherin were decreased with the increase of DZG644J Shanxi Med Univ，Apr 2023，Vol 54 No 4concentration(P0 05)T-PC results showed that the mNA relative expression level of mi-223-3p was increased in a concen-tration-dependent manner(P0 05)T-PC results showed that the relative expression level of mi-223-3p in Hep-2 cells in mi-223-3p group was significantly higher than that in mi-NC group and control group and the relative expression level of mi-223-3p inHep-2 cells in si-mi-223-3p group was significantly lower than that in si-NC group and si-control group(P 0 05)The results ofMTT assay showed that the cell survival rate in mi-223-3p group was significantly lower than that in mi-NC group(P0 05)Undernormal culture medium without DZG，the survival rate of mi-223-3p cells in mi-223-3p group was significantly decreased comparedwith mi-NC group and control group The cell survival rate in si-mi-223-3p group was significantly higher than that in si-NC groupand si-control group(P 0 05)Transwell results showed that the cell mobility in mi-223-3p group was significantly decreasedcompared with mi-NC group and control group，while the cell mobility in si-mi-223-3p group was significantly increased comparedwith si-NC group and si-control group(P 0 05)Western blot results showed that the relative expression levels of VGEF，MMP-2，Vimentin and N-cadherin in mi-223-3p group were significantly lower than those in mi-NC group and control group，while the rela-tive expression levels of VGEF，MMP-2，Vimentin and N-cadherin in si-mi-223-3p group were significantly higher than those insi-NC group and si-control group(P0 05)ConclusionDZG can inhibit the proliferation，the migration and the angiogenesis oflaryngeal carcinoma cells Hep-2 by regulating mi-223-3p，which may be related to the down-regulation of migration and angiogenesis-related proteins VGEF，MMP-2，Vimentin and N-cadherinKey words:laryngeal carcinoma;mi-223-3p;proliferation;invasion;migration;angiogenesis喉癌是耳鼻咽喉头颈外科常见的恶性肿瘤之一，其发病率约占全身恶性肿瘤的 1%5%，占头颈部恶性肿瘤的 3 3%8 1%1。与女性相比，喉癌在男性中发病更为普遍2。在世界范围内，喉癌的发病率在逐年增加3，大约 60%的喉癌患者在被确诊时已经为晚期(期或期)，因此喉癌的治疗效果及预后较差。近年来，随着医学的进步，喉癌的方式较有所进步，但是近几十年，喉癌患者的生存率却一直很低，并呈下降趋势4。因此，对于喉癌，寻找新的治疗策略非常重要。脱氢姜酮(dehydrogergenone，DZG)是从生姜中提取的一种类似于姜黄素的常见药物，近年来因其化学结构与姜黄素类似而被注意到5。已有研究表明，DZG 可抑制人结肠癌、前列腺癌等多种癌症的进展6，7。mi-223-3p 是一种微小 NA，其被证明在多种癌症中发挥作用8，9。但是 DZG 对喉癌的作用及其相关机制是何并未有相应研究。本研究拟通过观察不同浓度 DZG 对喉癌细胞 Hep-2 增殖、迁移及血管形成的影响，并进一步验证其是否能通过mi-223-3p 产生抑癌效果，旨在为临床医师对喉癌的治疗提供新思路。1材料与方法1 1细胞和主要试剂喉癌 Hep-2 细胞购自上海细胞库。PMI 1640培养基为上海生工公司产品，胎牛血清(FBS)为浙江天杭生物科技股份有限公司产品，脂质体 Lipo-fectamine2000、Trizol 试剂为美国英杰生命技术有限公司 产 品，噻 唑 蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)、BCA 定量试剂盒购于上海碧云天公司，血管内皮 生 长 因 子(serum vascular endothelial growthfactor，VEGF)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)、波形蛋白(Vimentin)、N 钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白抗体为安诺伦(北京)生物科技有限公司产品。1 2细胞培养及分组喉癌 Hep-2 细胞培养于含 10%胎牛血清的1640 培养液中，并于 37、5%CO2培养箱中培养。首先按照 DZG 浓度将细胞分为 4 组:0，75，150，300mol/L 组。MTT 法、Transwell、Western blot 法、实时荧光定量 PC(T-PC)分别检测 Hep-2 细胞的存活率、迁移能力、迁移蛋白波形蛋白(Vimentin)、N 钙黏蛋白(N-cadherin)和血管形成蛋白血管内皮生长因子(VEGF)以及基质金属蛋白酶 2(MMP-2)相对表达水平和 mi-223-3p mNA 相对表达量。将 Hep-2 细胞分别分为:空白对照组(control 组，不进行转染)、模拟物阴性对照组(mi-NC，转染无关序列)、mi-223-3p 组(转染 mi-223-3p 序列);空白对照组(si-control 组)、阴性对照组(si-NC，转染无关序列)及 mi-223-3p 小干涉 NA组(si-mi-223-3p 组)。MTT 法检测细胞增殖抑制能力，Transwell 检测细胞迁移能力，Western blot 检测细胞 VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin 蛋白相744山西医科大学学报，2023 年 4 月，第 54 卷 第 4 期对表达量。1 3MTT 法检测细胞的存活率取未处理 Hep-2 细胞或转染后的 Hep-2 细胞于96 孔板培养，每孔培养液为 100 l，每孔约 8 000 个细胞。待细胞完全贴壁分别加入不同浓度 DZG(0，75，150，300 mol/L)再加入到各组细胞中。培养24 h 加入 5 g/L 的 MTT 溶液 15 l，4 h 后每孔加入150 l 二甲基亚砜溶液，30 min 检测各组细胞在490 nm 波长处的吸光度值(OD490)，并计算细胞存活率:细胞存活率(%)=实验组 OD490/对照组 OD490100%。1 4Transwell 检测 Hep-2 细胞侵袭、迁移能力取生长状态良好的未处理 Hep-2 细胞或转染后的 Hep-2 细胞使用 DZG 浓度分别为 0，75，150，300mol/L 的无血清培养液溶解为 4 组后加入到上层小室。下层小室配制含 10%胎牛血清的细胞培养基 600 l。控制每个小室细胞数为 2 104个，每组设 3 个复孔。继续 24 h。使用 4%多聚甲醛对细胞进行固定、0 1%结晶紫对细胞染色、PBS 溶液清洗细胞后进行拍照。1 5Western blot 法检测 VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin 蛋白表达水平取生长状态良好的未处理 Hep-2 细胞或转染后的 Hep-2 细胞使用 DZG 浓度分别为 0，75，150，300mol/L 的细胞培养液培养 48 h。按照说明书使用裂解液裂解后离心提取蛋白。将总量相同的蛋白样本进行凝胶电泳，使用 PVDF 膜进行转膜，5%脱脂奶粉进行封闭 2 h。使用一抗稀释液按照 1 1 000稀释 VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin 抗体，摇床摇晃 1 h，4 孵过夜。次日辣根过氧化物酶偶联的二抗1 5 000 稀释继续孵育2 h，使用 ECL 发光试剂盒进行显影。1 6实时荧光定量 PC(T-PC)检测不同浓度的 DZG 处理 Hep-2 细胞 mi-223-3p 相对表达量取生长状态良好的未处理 Hep-2 细胞或转染后的 Hep-2 细胞使用 DZG 浓度分别为 0，75，150，300mol/L 的细胞培养液培养 24 h 后进行消化。将消化后的细胞使用将 TIzol 试剂提取总 NA，按照cDNA 合成试剂盒说明书反转录合成 cDNA，T-PC 检测 mi-223-3p 相对表达量。实验重复 3 次。mi-223-3p 及 GAPDH 内参引物序列如下。mi-223-3p:正向序列 5 AGCTGGTGTGAATCAGGCCG 3，反向序列 5 TGGTGTCGTGGAGG 3(reverse);GAPDH:正向序列 5 GAACGGGAAGCTCACTGG 3，反向序列 5 GCCTGCTTCACCACCTTCT 3。1 7统计学分析使用 SPSS 22 0 统计学软件分析实验数据，服从正态分布的实验结果以均数 标准差表示。多组间比较采用单因素方差分析。P 0 05 为差异具有统计学意义。2结果2 1不同浓度的 DZG 对 Hep-2 细胞的增殖抑制作用MTT 结果表明，将 DZG 浓度分别为 0，75，150，300 mol/L 的细胞培养24 h，随着 DZG 浓度的升高细胞存活率降低，不同浓度间两两比较，差异具有统计学意义(P 0 05，见图 1)。表明 DZG 可抑制Hep-2 细胞的增殖，并且具有浓度依赖性。与 0 mol/L 比较，*P 0 05;与 75 mol/L 比较，#P 0 05;与 150 mol/L 比较，P0 05图1MTT 法检测不同浓度 DZG 对 Hep-2 细胞存活率的影响Figure 1Effect of DZG on the survival rate of Hep-2 cellsdetermined by MTT assay2 2不同浓度的 DZG 对 Hep-2 细胞迁移能力的影响Transwell 实验结果表明，DZG 浓度分别为 0，75，150，300 mol/L 的细胞培养 24 h 后，随着 DZG浓度的升高细胞迁移率降低，不同浓度间两两比较，差异具有统计学意义(P 0 05，见图2)。表明 DZG可抑制 Hep-2 细胞的迁移。2 3不同浓度的 DZG 对 Hep-2 细胞对蛋白表达水平的影响Western blot 结果表明，细胞血管形成蛋白VGEF、MMP-2，迁移蛋白 Vimentin、N-cadherin 蛋白844J Shanxi Med Univ，Apr 2023，Vol 54 No 4相对表达量随浓 DZG 度降低而降低，不同浓度间两两比较，差异具有统计学意义(P 0 05，见图 3)。这表明，DZG 对 Hep-2 细胞的血管形成和细胞的迁移均具有抑制作用。图 2Transwell 实验检测不同浓度 DZG 对 Hep-2 细胞迁移能力的影响(结晶紫染色，200)Figure 2Effect of DZG on the migration ability of Hep-2 cells by Transwell assay(crystal violet staining，200)与 0 mol/L 比较，*P0 05;与 75 mol/L 比较，#P0 05;与 150 mol/L 比较，P0 05图 3Western blot 法检测不同浓度 DZG 对 VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin 蛋白表达水平的影响Figure 3Effects of DZG on the expression levels of VGEF，MMP-2，Vimentin，N-cadherin and protein by Western blot2 4不同浓度的 DZG 对 Hep-2 细胞 mi-223-3p 相对表达量的影响T-PC 结果表明，在 DZG 浓度分别为 0，75，150，300 mol/L 时 mi-223-3p 相对表达量随浓度逐渐升高，不同浓度间两两比较，差异具有统计学意义(P 0 05，见图 4)。944山西医科大学学报，2023 年 4 月，第 54 卷 第 4 期与 0 mol/L 比较，*P 0 05;与 75 mol/L 比较，#P 0 05;与 150 mol/L 比较，P0 05图 4T-PC 检测不同浓度 DZG 对 Hep-2 细胞 mi-223-3p mNA 相对表达量的影响Figure 4Effect of DZG at different concentrations on therelative mNA expression of mi-223-3p in Hep-2cells detected by T-PC2 5Hep-2 细胞转染效率T-PC 结果表明，mi-223-3p 组 Hep-2 细胞mi-223-3p 相对表达量较 mi-NC 组和 control 组明显升高，si-mi-223-3p 组 Hep-2 细胞 mi-223-3p 相对表达量较 si-NC 组和 si-control 组明显降低(P 0 05，见图 5)。表明细胞转染成功。2 6mi-223-3p 对 Hep-2 细胞存活率的影响MTT 结果表明，同一 DZG 浓度时，mi-223-3p组细胞存活率较 mi-NC 组明显降低(P 0 05，见图 6)。表明 DZG 可抑制 Hep-2 细胞的增殖，上调mi-223-3p 可进一步抑制 Hep-2 细胞的增殖。不加DZG 单独使用正常培养基培养验证 mi-223-3p 对Hep-2 细胞存活率发现，mi-223-3p 组细胞存活率较 mi-NC 组和 control 组明显降低，si-mi-223-3p组细胞存活率较 si-NC 组和 si-control 组明显升高(P 0 05，见图 7)。表明 mi-223-3p 抑制 Hep-2细胞的增殖。2 7mi-223-3p 对细胞迁移能力的影响Transwell 实验结果表明，mi-223-3p 组细胞迁移率较 mi-NC 组和 control 组明显降低，si-mi-223-3p 组细胞迁移率较 si-NC 组和 si-control 组明显升高(P 0 05，见图 8)。表明 DZG 可通过上调mi-223-3p 抑制 Hep-2 细胞的迁移能力。2 8mi-223-3p 对 VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平的影响与 control 组或 si-control 组比较，*P0 05图 5T-PC 检测 Hep-2 细胞 mi-223-3p 相对表达量Figure 5elative expression of mi-223-3p mNA inHep-2 cells by T-PC与 mi-NC 组比较，*P0 05图 6MTT 法检测不同浓度 DZG 时 mi-223-3p 对细胞存活率的影响Figure 6Effect of mi-223-3p on the cell survival rate atdifferent concentrations of DZG by MTT assayWestern blot 结果表明，与 mi-NC 组和 control组比较，mi-223-3p 组细胞血管形成蛋白 VGEF、MMP-2，迁移蛋白 Vimentin、N-cadherin 蛋白相对表达量明显降低;与 si-NC 组和 si-control 组比较，si-mi-223-3p组细胞血管形成蛋白VGEF、MMP-2，迁054J Shanxi Med Univ，Apr 2023，Vol 54 No 4与相应的 control 组和 NC 组比较，*P0 05图 7MTT 法检测 mi-223-3p 对 Hep-2 细胞存活率的影响Figure 7Effect of mi-223-3p on the survival rate of Hep-2 cells detected by MTT assay与相应的 control 组和 NC 组比较，*P0 05图 8Transwell 法检测 mi-223-3p 对细胞迁移能力的影响(结晶紫染色，200)Figure 8Effect of mi-223-3p on cell migration detected by Transwell method(crystal violet staining，200)移蛋白 Vimentin、N-cadherin 蛋白相对表达量明显升高(P005，见图9)。这表明，DZG 可通过上调mi-223-3p 抑制 Hep-2 细胞血管形成能力和迁移能力。3讨论DZG 具有广泛的生物活性，包括抗氧化、抗炎、伤口愈合和针对各种癌症的抗癌活性，并且在多种癌中表现出抗癌活性。Yogosawa 等6 研究表明，DZG 可引起人结肠癌细胞 HT-29 细胞内 OS 的大量积累，剂量依赖性地抑制细胞 G2/M 期，并且上调P21 蛋白，是治疗结肠癌的潜在药物。Mapoung等7 研究表明，DZG 抑制去势抵抗性前列腺癌细胞PLS10 的细胞增殖、抑制 PLS10 细胞中 cyclin D1 的表达诱导 G1 期细胞周期阻滞，进一步研究表明相比于姜黄素，DZG 对去势抵抗性前列腺癌裸鼠的细胞增殖和血管生成的抑制能力更强。本实验研究结果首先通过 MTT 实验证实了 DZG 对喉癌 Hep-2 细胞具有增殖抑制作用，并且通过 Transwell 实验证明DZG 可抑制 Hep-2 细胞的迁移作用，并且都具有浓度依赖性。进一步研究机制发现，随着 DZG 浓度的增加，血管形成标志性蛋白 VGEF、MMP-2 和迁移蛋白 Vimentin、N-cadherin 蛋白相对表达量下调，这表明 DZG 可浓度依赖性地抑制细胞迁移和血管生成能力。这与前人的研究一致。microNAs(miNAs)是 19 25 个核苷酸的短NA 分子，可调节靶基因的转录后沉默，在细胞的生命活动中发挥重要作用 10 12。mi-223-3p 作为一种miNAs，已被证实在多种癌症中发挥作用8，9，13 15，154山西医科大学学报，2023 年 4 月，第 54 卷 第 4 期与相应的 control 组和 NC 组比较，*P0 05图 9Western blot 法检测 mi-223-3p 对 VGEF、MMP-2、Vimentin、N-cadherin 蛋白表达水平的影响Figure 9Effects of mi-223-3p on the protein expression levels of VGEF，MMP-2，Vimentin and N-cadherin by Western blot并且可以通过靶向 MKNK2 和 MAPK/EK 信号减轻雄性小鼠的三叉神经痛16。有研究表明，mi-223-3p 在口腔癌细胞中表达减少，可通过下调 NL-P3 和 Caspase-1 对细胞增殖凋亡、迁移产生促进作用17。本研究在通过一系列实验确定 DZG 可浓度依赖性地抑制细胞迁移和血管生成能力后，猜想254J Shanxi Med Univ，Apr 2023，Vol 54 No 4DZG 对细胞发挥作用是通过调控 mi-223-3p 实现的。T-PC 结果证实，DZG 浓度分别为 0，75，150，300 mol/L 时 mi-223-3p mNA 相对表达量随浓度逐渐升高，相邻浓度组比较差异具有统计学意义，这表明 DZG 可上调 mi-223-3p 的表达。紧接着，MTT 实验表明同一 DZG 浓度时，mi-223-3p 组细胞存活率较 mi-NC 组明显降低。以上实验表明 DZG可通过上调 mi-223-3p 抑制 Hep-2 细胞的增殖。而且，mi-223-3p 组细胞存活率较 mi-NC 组和control 组明显降低，表明 DZG 可通过上调 mi-223-3p 抑制 Hep-2 细胞的增殖;而 Transwell 实验结果发现，与 mi-NC 组和 control 组比较，mi-223-3p 组细细胞迁移率明显降低，表明 DZG 可通过上调 mi-223-3p 抑制 Hep-2 细胞的迁移能力，通过 Westernblot 初步探索机制，发现 mi-223-3p 组细胞血管形成蛋白 VGEF、MMP-2，迁移蛋白 Vimentin、N-cadherin蛋白相对表达量明显下调，表明 DZG 可通过上调mi-223-3p 抑制 Hep-2 细胞血管形成能力和迁移能力。综上所述，DZG 可通过调控 mi-223-3p 抑制喉癌细胞 Hep-2 增殖、迁移及血管形成，其相关机制可能与下调迁移及血管形成相关蛋白 VGEF、MMP-2、Vimentin 和 N-cadherin 有关。这为喉癌的临床治疗提供了新的思路。参考文献:1Sanderson J，Ironside JA Squamous cell carcinomas of thehead and neck J BMJ，2002，325(7368):822 827 2Sung H，Ferlay J，Siegel L，et al Global cancer statistics2020:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality world-wide for 36 cancers in 185 countriesJ CA Cancer J Clin，2021，71(3):209 249 3Bray F，Ferlay J，Soerjomataram I，et al Global cancer statistics2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality world-wide for 36 cancers in 185 countriesJ CA Cancer J Clin，2018，68(6):394 424 4Marur S，Forastiere AA Head and neck squamous cell carcinoma:update on epidemiology，diagnosis，and treatmentJ MayoClin Proc，2016，91(3):386 396 5Gao C，Feng F，Jiang J，et al The latest research progress of theCorona Virus Disease 2019 mutant strain OmicronJJHainan Med Univ，2022，28(7):1 5 6Yogosawa S，Yamada Y，Yasuda S，et al Dehydrozingerone，astructural analogue of curcumin，induces cell-cycle arrest at theG2/M phase and accumulates intracellular OS in HT-29 humancolon cancer cells J J Nat Prod，2012，75(12):2088 2093 7Mapoung S，Suzuki S，Fuji S，et al Dehydrozingerone，a curcuminanalog，as a potential anti-prostate cancer inhibitor in vitro and invivo J Molecules，2020，25(12):2737 8Choi JG，Kim SY，Jeong M，et al Pharmacotherapeutic potential ofginger and its compounds in age-related neurological disordersJ Pharmacol Ther，2018，182:56 69 9Hu X，Xia W Circ_0005714/mi-223-3p/ADAM9 regulatoryaxis affects proliferation，migration，invasion，and angiopoiesis introphoblast cells J Autoimmunity，2022，55(8):640 649 10Li Y，Wang D，Li X，et al Mi-199a-5p suppresses non-smallcell lung cancer via targeting MAP3K11J J Cancer，2019，10(11):2472 2479 11Pinho JD，Silva G，Teixeira Jnior A，et al Mi-107，mi-223-3p and mi-21-5p reveals potential biomarkers in penilecancer J Asian Pac J Cancer Prev，2020，21(2):391 397 12Le T，Lao TD Circulating microNAs as the potential diagnosticand prognostic biomarkers for nasopharyngeal carcinomaJ Genes(Basel)，2022，13(7):1