a固相萃取-高效液相色谱法同时检测畜禽粪便中14种兽药抗生素.pdf

第4 0 卷2 0 1 2 年2 月分析化学(F E N X IH U A X U E)研究报告C h i n e s eJ o u r n a lo fA n a l y t i c a lC h e m i s t r y第2 期2 1 3 2 1 7D O iI1 0 3 7 2 4 S P J 1 0 9 6 2 0 1 2 0 1 0 6 1 9固相萃取一高效液相色谱法同时检测畜禽粪便中1 4 种兽药抗生素李艳霞+李帷2张雪莲1杨明1(北京师范大学环境学院水环境模拟国家重点实验室，北京1 0 0 8 7 5)z(环境保护部核与辐射安全中心，北京1 0 0 0 8 2)摘要研究并优化了同时分析畜禽粪便中1 4 种抗生素(四环素，磺胺，氟喹诺酮和大环内酯类)的加速溶剂萃取参数、困相富集净化程序、以及高效液相色谱分离和检测条件。结果表明。以l 乙酸(p H2 6)作为流动相。在2 7 0 姗的检测波长下，1 4 种抗生素能达到基线分离。3 倍信噪比下。四环素、磺胺、氟喹诺酮和大环内酯类抗生素的检出限分别为3 5 9 0 肛g k g,1 2 2 8I t g k g,9 1 7 g k g 及1 9p g k g。加标浓度在l 和1 0 g g时，畜禽粪便样品经过5 0 0,6 甲醇的柠檬酸盐缓冲溶液提取，H L B 固相萃取柱富集净化后，四环素、磺胺、氟喹诺酮和大环内酯类抗生素的回收率分别达到了5 8 7 5 和6 6 8 3，7 4 9 3 和9 1 1 0 1，7 4 8 0 0 和8 0 8 8，8 5 和6 8，相对标准偏差分别为6 2 l O 7 和7 8 1 3 6，2 6 l O 2 和4 4 1 3 2 6 1 1 2 5 和8 3 1 4 6，I O 6 和1 2 3。采用此方法对辽宁省部分规模化养殖场的猪粪、牛粪和鸡粪样品进行了检测。4 类抗生紊都有检出，浓度范围分别为0 7 5 2 2 3 4m g k g,0 1 0 1 7 1m g k g,O 3 8 4 4 6m g k g 和0 2 3 0 3 5m g k g。关键词畜禽粪便；抗生素；固相萃取；高效液相色谱1引言从2 0 世纪5 0 年代起，抗生素在畜禽养殖业中开始被普遍使用1 1 I，其主要用途包括动物疾病治疗、动物生长调节剂以及提高饲料利用效率等旺1。抗生素作为药物和非药物对畜禽养殖业的发展起到重要作用，在很多国家的使用量也在不断增加，以美国为例，集约化养殖场抗生素的使用量约占其抗生素年生产量的8 0 P l。大多数抗生素在动物体内吸收性差，3 0 9 0 会以原形药物形式排出体外【4 一。因此，大量抗生素将随畜禽粪便进入环境，对地表水、农田土壤，甚至地下水造成污染1 7 8 1。不同类型的养殖场在动物生长的不同周期使用的抗生素种类不同，因此，对粪便中可能残留的多种抗生素同时分析尤为重要。目前，用于分析抗生素的方法主要有液相串联质谱法及高效液相色谱法。前者虽然具有更低的灵敏度，对样品的分离度要求不高，但是存在较强的基质效应，尤其是对复杂的粪便样品，并且仪器的使用及维护成本很高。比较而言，在满足检出限要求的前提下，高效液相色谱法不仅能实现很好地分离，准确进行定性和定量分析，还大大降低了分析成本。目前对粪便中抗生素的检测分析研究中，普遍按抗生素种类建立检测方法，不同类别抗生素则需要调整流动相和检测器，不但加大了工作量，并且延长了分析时间。为实现多种抗生素同时分析，本研究优化了固相萃取前处理以及高效液相色谱检测方法，建立了相对简便、低成本、准确的多种抗生素同时分析的方法，对开展畜禽粪污多种抗生素残留等相关研究具有重要意义。2实验部分2 1 仪器与试剂A g i l e n t-1 2 0 0 高效液相色谱仪(美国A g i l e n t 公司)；A S E 3 0 0 加速溶剂萃取装置(美国D i o n e x 公司)；V i s i p r e pT M D L 固相萃取装置(美国S u p e l e o 公司)；W D-1 2 氮吹仪(杭州奥盛仪器有限公司)；H L B 固相萃取柱(美国W a t e r s 公司)。2 0 1 卜0 6-1 3 收稿2 0 1 1 1 0-0 9 接受本文系阿家r I 然科学基金项目(N o 2 0 9 7 7 0 1 0)环保公益性行业科研专项项目(N o 2 0 0 9 0 9 0 4 2)和水体污染控制与治理技术重大专项项目(N o 2 0 0 8 Z X 0 7 2 0 9-0 0 7)资助E-m a i l：l i y x b n u b n u e d u 万方数据2 1 4分析化学第4 0 卷金霉素(C T C)、磺胺胍(S G)、磺胺(S A)、磺胺甲基嘧啶(S M R)、磺胺二甲嘧啶(S M Z)、磺胺问甲氧嘧啶(S M M)、磺胺氯哒嗪(S C P)、恩诺沙星(E N R)、双氟沙星(D I F)和泰乐菌素(T Y L)，购于S i g m a-A l d r i c h公司；四环素(T C)、土霉素(O T C)、诺氟沙星(N O R)、环丙沙星(C I P)和洛美沙星(L O M)购于中国药品生物制品检定所；甲醇、乙腈(色谱纯，F i s h e r 公司)；柠檬酸、E D T A 钠盐、N a O H 等试剂均为分析纯；实验用水为超纯水。2 2 标准溶液的配制准确称取各种抗生素标准品1 0m g，溶解于1 0m L 棕色容量瓶中。四环素类、磺胺类和大环内酯类抗生素用甲醇溶解，氟喹诺酮类抗生素用0 0 3m o l LN a O H 溶解，储存于4 冰箱中。准确移取各种单标储备液，用棕色容量瓶配制各种浓度的混合标准液，待用。2 3 样品采集及前处理在辽宁省选取规模化养猪场、养牛场及养鸡场各3 家，采集当天动物排泄的新鲜粪便，进行多点采样并混合，约5 0 0g 作为代表性样品。样品采集后用黑色塑料袋密封，并立即存放于冰盒中冷藏存放，然后保持冷冻状态下尽快运回实验室，并进行冷冻干燥处理。冻干后的样品避光保存，分析前用研钵研磨，并过2m m 筛后进行样品前处理。在畜禽粪便样品中加人抗生素混合标准溶液，加标浓度分别设置为l 和1 0 斗g 儋，混合均匀后放置2 4h，使药物与样品介质充分接触，以模拟实际情况。每个处理样品各提取、分析两次。在A S E 萃取池中放入滤膜铺垫，依次准确加入lg 样品、O 5g 硅藻土和0 3gE D T A，充分混匀。加入提取剂(5 0 甲醇+5 0 柠檬酸混合液)静态提取5m i n，循环两次。收集提取液，加水将提取液的甲醇含量稀释到1 0 以下(防止甲醇浓度过高，上柱时将目标物带走)用于净化。S P E 固相萃取柱使用前依次用5m L 甲醇和5m L0 2m o l L 柠檬酸溶液(p H4)活化。将以上提取液以5m L m i n 流速过柱，依次用1 0m L5 甲醇溶液和1 0m L 水冲洗H L B 小柱，用1 0m L 二氯甲烷洗脱目标抗生素，洗脱液在氮气下吹干至O 1m L 以下。加入1“g 内标物质L O M，用甲醇一水混合溶液定容至lm L，待测。2 4 色谱条件本研究采用I n e r t s i lO D S-3 色谱柱(2 5 0m m 4 6m m,5I t m，D i k m a 公司)；流动相为乙腈(A)和l 乙酸(B)，流速为0 8m L m i n；柱温3 0；梯度洗脱程序：O 1 8m i n，1 0 A；1 8 2 0m i n，3 7 A；2 0 2 2r a i n，8 0 A；2 2 2 5r a i n，8 0 A。3 结果与讨论3 1S P E 净化过程的优化畜禽粪便样品基质非常复杂，含有蛋白质、碳水化合物、脂肪和各种无机组分【9】。样品的净化对目标物的准确定量至关重要。目前，H L B 固相萃取柱是环境样品中抗生素前处理使用最多和效果最佳的柱子【l 川。研究显示，H L B 和S A X(阴离子交换柱)联用对土壤中抗生素的净化效果也非常好0 t-1 3】。但是，实验发现H L B 和S A X 联用使部分抗生素的回收率降低，可能是S A X 柱持留了部分的目标物，而且联用方法使净化步骤成本提高。本实验表明，单独使用H L B 柱即可有效净化样品。因此，净化步骤选择H L B 小柱。分别以二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、四氢呋喃和甲醇为洗脱剂，进行洗脱实验。由于甲醇的强极性和粪便基质的复杂性，纯甲醇将柱体固定的大量干扰有机物和目标抗生素一起洗脱下来，使得目标物的出峰被杂质严重掩盖。使用丙酮和甲醇进行洗脱时，柱体上的深色物质很快被洗脱下来，说明这两种溶剂的极性还是过强。选择极性略小的二氯甲烷、乙酸乙酯和四氢呋喃对部分抗生素目标物进行洗脱，四氢呋喃和乙酸乙酯的洗脱效率明显高于二氯甲烷。但比较而言，二氯甲烷对金霉素的洗脱效率均好于乙酸乙酯和四氢呋喃，并且洗脱下来的杂质最少，色谱图中目标物分离和检测基本不会受到干扰。综合考虑，选择二氯甲烷作为洗脱剂更为合适。为了将全部目标物充分洗脱下来，洗脱体积设定为1 0m L。万方数据第2 期李艳霞等：固相萃取一高效液相色谱同时检测畜禽粪便中1 4 种兽药抗生索2 1 53 2 检测波长的确定据相关研究显示，四环素类抗生素在2 6 8 和3 5 5a m 附近具有强吸收 1 5,1 6 1；磺胺类在2 7 0n m 附近有强吸收【1 5】。所以，首先选用2 7 0a m 作为检测波长。采用2 7 0a m 为检测波长对4 类抗生素进行检测时发现，氟喹诺酮类和泰乐菌素也有较好的响应值。在二级阵列检测器上，设置2 7 0a m 及附近波长进行多波长检测分析，结果显示，2 7 0a m 时1 4 种抗生素的响应较强，且分布相对均匀。因而，本研究选择2 7 0a m 作为分析方法的检测波长。3 3 流动相的确定抗生素是一类可离子化的极性有机化合物，因而流动相的p H 值对抗生素物质的分离和检测非常重要。流动相一般采用有机溶剂和缓冲液按一定比例混合。其中，最常用的有机溶剂是乙腈和甲醇，它们的紫外吸收较低由于乙腈相对于甲醇有更低的吸光度，洗脱能力更强，黏度小，所以在同样的流速下柱效更高、柱压更低。常添加的缓冲液甲酸、乙酸、磷酸和草酸被用于最佳的分离条件的优化。结果表明，乙酸和草酸作为流动相，分析物的峰形比较好，但是梯度洗脱时，草酸为流动相的色谱图的基线随流动相比例的变化出现较大的扰动，影响峰面积的确定。因此采用乙酸作为流动相。对缓冲液p H 3 时，随p H 值的增大，大部分抗生素物质的峰形变宽、峰高变小，保留时间延长。同时，过低的p H 值会降低色谱柱使用寿命。因而。缓冲液的p H 值控制在2 3 范围内。流动相采用l 乙酸(p H 一2 6)。3 4 线性范围、检出限、定量限及回收率配制浓度范围在O 1 5 0m g L 的系列混合标准溶液进行测定，分别以1 4 种抗生素与内标物的峰面积之比对浓度作图，得到各种抗生素目标物的内标曲线。结果显示，在O 1 5 0m g L 浓度范围内标准曲线具有良好的线性，相关系数r 均大于0 9 9。仪器的检出限为3 倍信噪比时的浓度，仪器定量限为l O 倍信噪比时的浓度，方法定量限通过仪器定量限和方法回收率计算得到，具体结果见表l。除四环素类的3 种抗生素的定量限高于1 0 0k t g k g 外，其余抗生素的定量限都满足1 0 01 t g k g 的测定水平。在l 及l Op g 僧两个添加浓度下的回收率，除了C T C 略偏低(分别为5 8 和6 6)，绝大多数目标物的回收率都在7 0 1 0 0 之间。从方法的日内与日间稳定性来看，R S D 基本都小于1 5，重现性良好。表l目标抗生素检出限、定量限及回收率T a b l e1L i m i t so fd e t e c t i o n,l i m i t so fq u a n t i f i c a t i o na n dr e c o v e r i e so f1 4a n t i b i o t i c sL O D*l 仪器检出限(L i m i t so f d e t e c t i o nf o ri n s t r u m e n t)l L O Q*I 为仪器定量限(L i m i t so f q u a n t i f i c a t i o nf o ri n s t r u m e n t)M Q L+I 方法定量限(M e t h o dq u a n t i f i c a t i o n l i m i t s)I R S D 1 日内重复性(R e p e a t a b i l i t y w i t l l i no n ed a y)，n f f i 4 万方数据2 1 6分析化学第4 0 卷在优化的条件下，获得的目标抗生素标准溶液的色谱图如图1。3E蚤；2三2 55 07 5l O O1 2 51 5 01 7 52 0 02 2 5f m i n图1目标抗生素标准溶液的色谱图F i g 1C h r o m a t o g r mo f1 4s t u d i e da n t i b i o t i c s为内标物质洛美沙星(I n t e r n a ls t a n d a r dL o m e f l o x a c i n)。3 5 实际粪便样品的测定将实际采集的猪粪、鸡粪和奶牛粪便等动物粪样冷冻干燥，过2m m 筛后按照上述预处理方法和色谱条件进行提取并检测，4 类抗生素在3 种畜禽粪便中均有不同程度检出。四环素，磺胺，氟喹诺酮和大环内酯类四类抗生素的浓度范围分别为0 7 5 2 2 3 4m g k g，0 1 0 b1 7 1m g&g，O 3 8 4 4 6m g k g 和0 2 3 0 3 5m g&g。比较而言，C T C 的检出率高于O T C 和T C，但是O T C 的残留量最高。磺胺类抗生素检出率相对较低，在猪粪、鸡粪和奶牛粪便中的最高浓度分别为1 7 1(S M Z)，0 8 9(S M R)和0 4 3(S M z)m g&g。氟喹诺酮类抗生素的检出率也较高，所有样品中至少有1 种氟喹诺酮类药物的检出，E N R，N O R，C I P 及D I F 在所有粪便中的平均浓度分别为1 7 7，2 2 8，0 7 8 和0 7 1m g 瓜g。大环内酯类的T Y L 在猪粪、牛粪和鸡粪样品中的检出率和残留量均低于以上3 类兽药抗生素，仅3 个样品中有检出，浓度分别为0 2 3，0 3 5 和O 2 6m g&g。实验结果表明，本方法用于畜禽粪便中抗生素残留的测定可行。方法灵敏度高、检出限低，并且具有较好的稳定性。R e f e r e n e e s1K e m p e rN E c o l o g i c a lI n d i c a t o r s，2 0 0 8，8(1)：1 1 32A d d i s o nJB R e s i d u eR e v i e T v s，1 9 8 4。9 2：1 2 83L e w i sKA，N e w b o l dMJ。T z i l i v a k i sJ J o u r n a lo fE n v i r o n m e n t a lM a n a g e m e n t 1 9 9 9，5 5(3)：1 8 3-1 9 74A l c o c kRE，S w e e t m a nA，J o n e sKC C h e m o s p h e r e，1 9 9 9，3 8(1 0)：2 2 4 7 2 2 6 25E l m u n dGK，M o r r i s o nSM，G r a n tDW B u l l e t i no fE n v i r o n m e n t a lC o n t a m i n a t i o na n dT o x i c o l o g y，1 9 7 1，6(2)：1 2 9 1 3 26F e i n m a nSE。M a t h e s o nI l lJC F o o da n dD r u gA d m i n i s t r a t i o nD e p a r t m e n to fH e a l t h，E d u c a t i o n a n dW e l f a r eR e p o r t，F o o da n dD r u gA d m i n i s t r a t i o n，W a s h i n g t o n，D C 1 9 7 8：3 7 27C h e e-S a n f o r dJC，A m i n o vRI，K r a p a cIJ A p p l i e da n dE n v i r o n m e n t a lM i c r o b i o l o g y，2 0 0 1，6 7(4)：1 4 9 4 1 5 0 28Z H O UQ i X i n g，L U OY i，W A N GM e i E A s i a nJ o u r n a lo fE c o t o x i c o l o g y，2 0 0 7，2(3)：2 4 3 2 51周启星。罗义，王美娥生态毒理学报，2 0 0 7，2(3)：2 4 32 5 19L o f t i nKA，H e n n yC A d a m s CD E n v i r o n m e n t a lT o x i c o l o g ya n dC h e m i s t r y，2 0 0 5，2 4(4)：7 8 2 7 8 81 0L e eHB，P e a r tTE，S v o b o d aML。J C h r o m a t o g r A，2 0 0 7，1 1 3 9(I)：4 5 5 21 lA g aDS，O C o n n o rS，E n s l e y&J o u r n a lo fA g r i c u l t u r a la n dF o o dC h e m i s t r y，2 0 0 5，5 3(1 8)：7 1 6 5 7 1 7 11 2J a c o b s e nAM，H a i l i n g S o r e n s e nB，I n g e r s l e vF J C h r o m a t o g r a A，2 0 0 4。1 0 3 8(卜2)：1 5 7 1 7 01 3B l a c k w e l lPA。H o h e nL 0 t z h o f tHC，M aHP T a l a n t a 2 0，6 4(4)：1 0 5 8 1 0 6 41 4T I A ND a n-B i I n s t r u m e n t a lA n a l y s i s C h e m i s c a lI n d u s t r yP r e s s，2 0 0 4：1 2 2田丹碧仪器分析化学工业出版杜，2 0 0 4：1 2 2万方数据第2 期李艳霞等：固相萃取一高效液相色谱同时检测畜禽粪便中1 4 种兽药抗生素2 1 71 51 6Z H A ON a n PS t u d yo fA n t i b i o t i c si nt h eS o i lo fT y p i c a lV e g e t a b l eF i e l d si nP e a r lR i v e rD e l t a J i n a nU n i v e r s i t y 2 0 0 7赵娜珠三角地区典型菜地土壤抗生素污染特征研究，暨南大学，2 0 0 7S U NG a n g，Y U A NS h o u J u n，P E N GS h u C h u a n。C H E NF e n g Q i n，H UZ h e n-H u E n v i r o n m e n t a lC h e m i s t r y，2 0 1 0，2 9(4)：7 3 9 7 4 3孙刚，袁守军彭书传陈凤琴，胡真虎环境化学2 0 1 0，2 9(4)：7 3 97 4 3S i m u l t a n e o u sD e t e r m i n a t i o no fF o u r t e e nV e r t e r i n a r yA n t i b i o t i c si nA n i m a lM a n u r eU s i n gS o l i dP h a s eE x t r a c t i o na n dL i q u i dC h r o m a t o g r a p h yL IY a n-X i a，L IW e i 2，Z H A N GX u e-L i a n l，Y A N GM i n 9 11(S t a t eK e yL a b o r a t o r yo fW a t e rE n v i r o n m e n tS i m u l a t i o n，S c h o o lo fE n v i r o n m e n t。B e i j i n gN o r m a lU n i v e r s i t y，B e i j i n g1 0 0 8 7 5)2(N u c l e a ra n dR a d i a t i o nS a f e t yC e n t r e，M i n i s t r yo fE n v i r o n m e n t a lP r o t e c t i o n，B e i j i n g1 0 0 0 8 2)A b s t r a c tAm e t h o df o rt h es i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no ff o u r t e e na n t i b i o t i c si na n i m a lm a n u r ew a ss t u d i e da n dt h ep a r a m e t e r so fa c c e l e r a t e ds o l v e n te x t r a c t i o n(A C E)，p r o g r a m so fs o l i dp h a s ee x t r a c t i o n(S P E)a n dH P L Cd e t e c t i o nc o n d i t i o n sw e r eo p t i m i z e d F o u r t e e na n t i b i o t i c sh a db e e ns e p a r a t e da tt h eb a s e l i n eo naC 1 8c o l u m na tt h ew a v e l e n g t ho f2 7 0a ma f t e re l u t e db y1 a c e t a t es o l u t i o n(p H=2 6)a n da c e t o n i t r i l e T h el i m i t s o fd e t e c t i o nf o rt e t r a c y c l i n e s(T C s)，s u l f o n a m i d e s(S A s)，f l u o r o q u i n o l o n e s(F Q s)a n dt y l o s i n(T Y L)w e r e3 5 9 0p g k g，1 2 2 8l a g k g，9 1 7t t t g k ga n d1 9l a g k g，r e s p e c t i v e l y A f t e re x t r a c t e db yb u f f e rs o l u t i o no f5 0 m e t h a n o l，t h e ne n r i c h e da n dc l e a n e d u pb yH L B，t h er e c o v e r i e so fa n t i b i o t i c s(a tt h ec o n c e n t r a t i o no f1I 上g ga n d1 0 t g g)i nm a n u r ew e r e5 8 一7 50 Aa n d6 6 一8 3o A，4 一9 3 a n d9 1 一1 0 1，7 4 一8 0 a n d8 0 一8 8，8 5 a n d6 8 f o rT C s，S A s，F Q sa n dT Y L，r e s p e c t i v e l y T h em e t h o dw a sa p p l i e dt od e t e r m i n ef o u r t e e na n t i-b i o t i c si na n i m a lm a n u r es a m p l e sc o l l e c t e df r o mL i a o n i n gP r o v i n c e T C s，S A s，F Q sa n dT Y Lw e r ea l ld e t e c t e di nt h e s em a n u r es a m p l e sa n dt h ec o n c e n t r a t i o n sw e r ei nt h er a n g eo f0 7 5 2 2 3 4m g k g，O 1 0 一1 7 1m g k g 0 3 8 4 4 6m g k ga n d0 2 3-0 3 5m g k g，r e s p e c t i v e l y K e y w o r d sA n i m a lm a n u r e；A n t i b i o t i c slS o l i dp h a s ee x t r a c t i o n；Hi g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y(R e c e i v e d1 3J u n e2 0 1 1la c c e p t e d9O c t o b e r2 0 1 1)量_ 量+_ 量+-圣+_ 量扣量-I+_ 量+量+_ 圣+-量卜量+-量+_ 圣-圣-壬-圣_ 圣-圣-圣_ 圣_ 量_ 量_ 圣_ 圣-圣-圣+_ 量+-圣-量-量-圣+_ 圣-量+_ 量-圣-重-圣-圣-圣-一量-圣-圣-圣+-圣_ 圣色谱在材料分析中的应用(I S B N9 7 8-7-1 2 2-1 0 5 6 7-7)该书为色谱技术丛书之一，系统介绍了各种色谱方法与技术，包括气相色谱、高效液相色谱、离子色谱、凝胶渗透色谱、毛细管电泳等方法以及一些联用技术在无机材料中的金属元素和非金属元素的分析、无机材料和高分子材料结构分析、聚合物中可挥发物质的分析、高分子材料定性定量分析以及高分子材料分子量分布分析中的应用。并综述了色谱法在材料分析中的应用进展。书中列举了大量的应用实例，便于读者在实际工作中参考。该书可供材料、冶金、高分子科学与工程、环境保护等领域中从事材料分析的技术人员参考。该书由化学工业出版社。胡净宇、梅一飞、刘杰民等编著定价4 2 0 万方数据固相萃取-高效液相色谱法同时检测畜禽粪便中14种兽药抗生素固相萃取-高效液相色谱法同时检测畜禽粪便中14种兽药抗生素作者：李艳霞，李帷，张雪莲，杨明，LI Yan-Xia，LI Wei，ZHANG Xue-Lian，YANG Ming作者单位：李艳霞,张雪莲,杨明,LI Yan-Xia,ZHANG Xue-Lian,YANG Ming(北京师范大学环境学院水环境模拟国家重点实验室,北京,100875)，李帷,LI Wei(环境保护部核与辐射安全中心,北京,100082)刊名：分析化学英文刊名：Chinese Journal of Analytical Chemistry年，卷(期)：2012,40(2)参考文献(15条)参考文献(15条)1.Kemper N 查看详情外文期刊 2008(01)2.Addison J B 查看详情 19843.Lewis K A;Newbold M J;Tzilivakis J 查看详情 1999(03)4.Alcock R E;Sweetman A;Jones K C 查看详情外文期刊 1999(10)5.Elmund G K;Morrison S M;Grant D W 查看详情外文期刊 1971(02)6.Feinman S E;Matheson J C Food and Drug Administration Department of Health,Education,and Welfare Report 19787.Chee-Sanford J C;Aminov R I;Krapac I J Occurrence and diversity of tetracycline resistance genes in lagoons andgroundwaterunderlying two swine production facilities外文期刊 2001(04)8.周启星;罗义;王美娥 查看详情 2007(03)9.Loftin K A;Henny C;Adams C D 查看详情外文期刊 2005(04)10.Lee H B;Peart T E;Svoboda M L Determination of ofloxacin,norfloxacin,and ciprofloxacin in sewage by selective solid-phase extraction,liquid chromatography with fluorescence detection,and liquid chromatography-tandem mass spectrometry外文期刊 2007(01)11.Aga D S;OConnor S;Ensley S Determination of the persistence of tetracycline antibiotics and their degradates in manure-amended soil using enzyme-linked immunosorbent assay and liquid chromatography-mass spectrometry外文期刊 2005(18)12.Jacobsen A M;Halling-Srensen B;Ingerslev F Simultaneous extraction of 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