外源性一氧化碳对小肠缺血再灌注大鼠多器官损伤的作用及机制探讨.pdf

中国医科大学博士学位论文外源性一氧化碳对小肠缺血再灌注大鼠多器官损伤的作用及机制探讨姓名：韩宁申请学位级别：博士专业：麻醉学指导教师：陈卫民20070301英文缩略语中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：驻日期：三竺，幽中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：兰k 窒指导教师签名：!堡兰鱼日期：兰!1 2：!：!中文论著摘要外源性一氧化碳对小肠缺血再灌注大鼠多器官损伤的作用及机制探讨-一。一刖舌小肠缺血再灌注(I I R，i n t e s t i n a li s c h e m i a-r e p e r f u s i o n)不仅见于肠部疾病，还多与严重创伤、大手术、失血性休克、烧伤和严重感染等过程的发生与发展相伴随，是临床常见的病理生理现象。肠缺血可以导致肠道屏障功能受损，而再灌注过程在补充能量和纠正氧供的同时，还能促使大量原存在于肠腔内的细菌和内毒素随血液循环移位，严重时能通过激发全身性炎症反应(s i n s，s y s t e m i ci n f l a m m a t i o nr e s p o n s es y n d r o m e)而损伤远隔器官，最终导致多器官功能障碍综合征(M O D S，m u t i p l eo r g a nd y s f u n c t i o ns y n d r o m e)形成。I I R 时M O D S 的发病机制现阶段尚未完全阐明。除肠道细菌和内毒素移位外，多形核中性粒细胞(P M N，p o l y m o r p h o n u c l e a r n e u t r o p h i l)聚集、细胞因子网络形成、细胞凋亡紊乱、氧自由基引起脂质过氧化反应、细胞内钙超载等观点也受到人们关注。如何有效地防治M O D S 的发生和发展一直是临床工作所关注的重要课题，但已经尝试性使用的方法都没有取得突破性进展。近年来研究发现，过去被认为是毒性气体分子的一氧化碳(c o)作为一种细胞信使分子在生物体内具有舒张血管和支气管平滑肌、抑制血小板聚集、抑制炎症反应、抗凋亡、抗增殖等多种生理学作用，在神经、呼吸、循环等生理过程和抑制急性肺损伤、脏器缺血再灌注损伤、器官移植排斥反应等病理过程中发挥着重要调节作用。C O 对I I R 所致多器官损伤是否具有防治作用且其作用机制如何，现阶段尚无报道。本研究通过建立大鼠I I R 模型，在确定外源性应用C O 安全性的基础上，观察I I R 不同阶段应用不同浓度C O 对组织超微结构、细胞因子形成、细胞凋亡等的影响，并从细胞和分子水平探讨其可能的作用机制，为临床防治l i P 所致M O D S 的发生和发展提供新的参考。本研究分为三个部分：一、外源性一氧化碳对小肠缺血再灌注大鼠血中碳氧血红蛋白的影响；二、外源性一氧化碳对小肠缺血再灌注大鼠多器官损伤的防治作用；三、外源性一氧化碳对小肠缺血再灌注大鼠多器官损伤防治作用的机制探讨。实验材料1、实验动物：健康雄性W i s t a r 大鼠6 4 只，体重2 2 0 2 6 0 9。2、实验试剂和药品：标准一氧化碳气体(压力：9 0 M P a，浓度：2 5 0 X1 0 1 0 01 0 4，空气平衡)；一步法T U N E L 细胞凋亡检测试剂盒；放免法T N F-a 与I L-1 0检测试剂盒；p 3 8M A P K 抗体；二抗；电泳用聚丙烯酰胺及T r i s、甘氨酸等。3、实验器材：C I B A C O R N I N G 2 3 8 型血气分析仪；D e t a x 压力监测仪；日立H 一6 0 0-4 型透射式电子显微镜，8 8 0 0 型超薄切片机，O l y m p u sM L 2 0 0 0 型显微镜，N I K O N8 0 I F L。F U W P F 型荧光显微镜，G C-9 1 1-5 放射免疫计数器；H e r a u s B i o f u g e P r i m o R 型超速低温离心机；岛津U V-2 6 0 型紫外分光光度计；U I：r 2 0 0 H 型组织超声匀浆器；B I O R A D-P A C 3 0 0 型电泳仪(美国)；B I O R A DM i n i P R O T E A NI Ic e l l 型垂直电泳槽(美国)；T a n o n 小型转印电泳槽(上海天能公司)：G I S 2 0 2 0 型凝胶扫描成像分析系统；大鼠气管插管(自制)，带单向活瓣T 型管(自制)；小动物手术器械等。实验方法一、动物模型制作大鼠实验前禁食1 2 h，自由饮水。采用肠系膜上动脉(S M A，S u p e r i o rM e s e n t e r i cA r t e r y)夹闭一开放方式复制I I R 模型。大鼠腹腔注射2 0 乌拉坦(1 0 9 k 9 1)麻醉，开放股静脉持续微泵输注乳酸钠林格氏液(1 0 m l k 一h-I)。行颈动脉置管(用于测定动脉压及采血)，气管切开插管后接带单向活瓣T 型管(活瓣能保证吸入气为所需气体，呼出气进入大气)，保留自主呼吸。常规消毒后取腹正中切口3 4 c m，游离S M A，血压平稳1 0 r a i n 后用显微手术用无损伤动脉夹关闭S M A 起始部，造成肠缺血；缝合切口，6 0 m i n 后经原切口入腹腔，去除动脉夹，恢复小肠血供1 2 0 m i n 即为I I R 模型。2二、实验分组大鼠随机分为8 组，每组8 只。A 组：假手术对照组，不阻断S M A，其余手术过程同其他组；B 组：小肠缺血再灌注组。经T 型管吸入空气。C 组分为C 1亚组与C 2 亚组，缺血前1 0 r a i n 开始经T 型管吸入浓度分别为1 0 0 p p m、2 5 0 p p m的C O；D 组：分为D 1 亚组与D 2 亚组，再灌注开始时经T 型管吸入浓度为1 0 0 p p m、2 5 0 p p m 的C O；E 组：分为E l 亚组与E 2 亚组，再灌注6 0 m i n 时开始经T 型管吸入浓度为1 0 0 p p m、2 5 0 p p m 的C O。三、观察指标和方法l、连续监测动脉压(M A P)变化；2、血气值及血中碳氧血红蛋白(c O H b)值；3、组织超微结构检查(电镜)；4、组织多形核中性粒细胞(P M N)计数(光镜)；一5、组织凋亡细胞计数(T U N E L 免疫荧光法)；6、血浆T N F a 浓度(放免法)；7、血浆m 1 0 浓度(放免法)；8、组织中p 3 8M A P K 的蛋白表达(W e s t e r nb l o t 法)。实验结果一、外源性C O 对1 1 R 大鼠血中C O H b 的影响1、与A 组比较，I I R 各组再灌注后M A P 均明显下降(P O 0 5)。2、A 组各时点、B 组I I R 前后各时点C O H b 浓度无明显差异(J P O 0 5)。3、与B 组相应时点比较，应用C O 各组C O H b 浓度升高(尸 0 0 5)，且2 5 0 p p m 组升高更显著(P o 0 1)。与应用C O 前相比，1 0 0 p p m 组C O H b 浓度升高(P 如0 5)，最高到6 8 1 2；2 5 0 p p m 组C O H b 浓度升高显著(P 0 0 1)，最高达到1 3 3 3 1。二、外源性C O 对I t 大鼠多器官损伤的防治作用3(一)组织超微结构的变化：1、肠：A 组见正常小肠结构。B 组结构受损极重，小肠上皮大量微绒毛脱落，细胞之间细胞连接松弛，细胞胞质内大部分线粒体嵴溶解：胞质有局部溶解，细胞核内异染色质边集，核胞间隙增宽。外源性应用C O 各组：C 1、C 2 两组受损较轻，虽胞质内线粒体外膜模糊不近于正常，但小肠上皮表面微绒毛部分整齐，粗面内质网仅轻度扩张；E l、E 2 两组受损相对较重。C、D、E 组内两亚组比较无明显差异。2、肺：A 组结构基本正常。B 组结构明显受损，气血屏障模糊增厚，I I 型上皮细胞表面微绒毛短小稀疏，核型不规则，胞质内多个线粒体空泡变性，板层小体排空式消失；I 型上皮细胞部分破损溶解，血管内皮细胞大面积溶解，腔内见红细胞。外源性应用C O 各组：c l、c 2 两组受损较轻，I I 型细胞表面微绒毛较完整，部分线粒体完好，多个板层小体存在；而E l、E 2 两组受损相对较重。c、D、E 组内两亚组比较无明显差异。3、肝：A 组结构基本正常。B 组结构略受损，细胞核膜模糊，异染色质边集，胞质部分溶解，部分线粒体外膜破损。外源性应用C O 各组肝组织结构均受损较轻，细胞核核型较不规则，少量线粒体外膜有破损。C、D、E 各组问及组内两亚组比较无明显差异。4、肾：A 组结构正常。B 组结构受损轻微，仅见肾小管上皮细胞核核形不规则及存在大小不等的溶酶体和大的吞饮泡增多。肾小球足突少部分融合。外源性应用C O 各组肾组织结构均接近正常，肾小管上皮微绒毛较完整、核形规则；。肾小球基膜连续，薄厚较均匀，足突有局部的融合。(二)组织中凋亡细胞计数：(个高倍视野)】、肠：B 组可见大量凋亡细胞(5 2 6)。C、D、E 各组明显少于B 组(P o 0 1)，但多于A 组(5 2)(_ P o 0 5)；且C 组 D 组 E 组，组间有差异(P 0 0 5)；各组内亚组数目有差异，1 组均多于2 组(p(o 0 5)。2、肺：B 组可见大量凋亡细胞(3 2 2)。C、D、E 各组明显少于B 组(P o 0 1)，但多于A 组(2+1)(P 0 0 5)；且C 组 D 组 E 组，组间有差异(P o 0 5)；各组内亚组数目有差异，1 组均多于2 组(P 0 0 5)。43、各组肝、肾组织中均仅见少量凋亡细胞，无明显差异。三、外源性C O 对I m 大鼠多器官损伤防治作用机制探讨(一)组织中P M N 计数：(个高倍视野)1、肠：B 组可见大量P M N 聚集(6 6 6)。C、D、E 各组明显少于B 组(P 0 0 1)，但多于A 组(2 6 2)(J P 0 0 5)；且C 组 D 组 E 组，组间有差异(P o 0 5)；各组内亚组P M N 有差异，且1 组多于2 组(P o 0 5)。2、肺：B 组可见较多P M N 聚集(5 2 5)。C、D、E 各组明显少于B 组(P o 0 1)，但多于A 组(1 8 2)(P o 0 5)；且C 组 D 组 E 组，组间有差异(P o 0 5)；各组内亚组虽l 组多于2 组，但无统计学差异 O 0 5)。3、肝：B 组可见P M N 聚集(3 5 3)。C、D、E 各组少于B 组(P 0 0 1)，但多于A 组(1 3 1)(尸 0 0 5)；且C 组 D 组 E 组，组间有差异(尸 0 0 5)；各组内亚组P M N 有差异，且1 组多子2 组(P 0 0 5)。(二)血浆T N F o r 浓度的变化：(n g m 1)l、与对照组A 组(1 1 5 O，0 4)比较，单纯I I R 的B 组T N F a0 1 5 4-0 0 5)明显升高(P 0 0 5)。2、外源性应用C O 的C、D、E 组T N F a 浓度均明显低于单纯I I R 的B 组(尸 O 0 5)，且C 组 D 组 E 组(P O 0 5)。3、c、D、E 各组内亚组比较，2 组均低于1 组(尸 0 0 5)。(三)血浆I L 1 0 浓度的变化：(n g m 1)l、与对照组A 组(1 5 3 6 4-2 3 7)比较，单纯I R 的B 组1 0(2 3 5 5 4 9 4)升高(P 0 0 5)。2、外源性应用C O 的C、D、E 组I L 1 0 浓度均明显高于单纯I I R 的B 组(尸 D 组 E 组(J P 0 0 5)。3、C、D、E 各组内亚组比较，2 组均高于1 组(P 0 0 5)。(四)各组织中p 3 8M A P K 蛋白的表达：1、与对照组A 组比较，单纯I I R 的B 组p 3 8M A P K 蛋白表达升高(P O 0 5)；52、外源性应用C O 的C、D、E 组p 3 8M A P K 蛋白表达均明显高于单纯I I R的B 组(P D 组 E 组(尸 0 0 5)。3、C、D、E 各组内亚组比较，2 组均高于1 组(P 0 0 5)。结论1、大鼠在I I R 过程中吸入浓度为l O o p p m 2 5 0 p p m 的C O 是安全的。2、外源性C O 对大鼠1 1 R 所致多器官损伤具有防治作用，且浓度为2 5 0 p p m的C O 比1 0 0 p p m 的C O 作用更明显；缺血前应用比缺血及再灌注后应用作用更明显。3、外源性C O 对I I R 所致多器官损伤的防治作用可能是通过调控细胞凋亡、抑制P M N 聚集、抑制T N F 旺产生和促进I L-1 0 释放实现的。4、调节细胞内p 3 8M A P K 表达是外源性C O 防治I I R 所致多器官损伤作用的分子生物学基础之一。关键词一氧化碳：小肠；缺血再灌注；多器官损伤；超微结构；多形核中性粒细胞；凋亡；肿瘤坏死因子旺；白细胞介素1 0；丝裂原活化蛋白激酶。6英文论著摘要T h eE f f e c t sa n dM e c h a n i s m so fE x o g e n o u sC a r b o nM o n o x i d eo nM u l t i p l eO r g a nI n j u r yI n d u c e db yI n t e s t i n a lI s e h e m i a-R e p e r f u s i o ni nR a t sA B S T R A C TI n t r o d u c t i o nT h ei n t e s t i n a li s c b e m i a-r e p e r f u s i o n O l R)c a r lt a k ep l a c en o to n l yi nas e r i e so fi n t e s t i n a ld i s e a s e s，s u c ha st h em e s e n t e r i ea r t e r i a le m b o l i s m，v o l v u l u sa n db o w e lo b s t r u c t i o n，b u ta l s oi nt h ec o u r s eo fh e m o r r h a g i cs h o c k,s e r i o u st r a u m aa n di n f e c t i o n,a b d o m i n a la o r t i ca n e u r y s ms u r g i c a lo p e r a t i o ne t c T h ei n t e s t i n a li s c h e m i ac a nd e s t r o yt h ei n t e s t i n a lf u n c t i o na sab a r r i e r，w h i l et h er e p e r f u s i o nc a l lc a u s et h es e r i o u sd a m a g eo fl o c a lt i s s u e，a n dd oh a r mt ot h er e i n o r eo r g a n sw h e ns u p p l y i n ge n e r g ya n dc l e a r i n gt o x i cm e t a b o l i t e s I ft h ed a m a g ef o l l o w i n gI I Ri ss os e v e r et h a tS I R Sc o m e si n t ob e i n g,m u l t i p l eo r g a nd y s f u n c t i o nw i l lh a p p e n T h em e c h a n i s mo fM O D Si sn o te n t i r e l yc l e a rn o w，a n di th a sb e e naf o c u st of i n daw a yt oc o n t r o lM O D Sd u r i n gI I R C a r b o nm o n o x i d e(C O)，d e s p i t ee x t r e m et o x i c i t ya th i g hc o n c e n t r a t i o n s，c a nc o n f e rs y t o p r o t e c t i o nd u r i n gi s c h e m i a r e p e r f u s i o no ri n f l a m m a t i o n i n d u c e dt i s s u ei n j u r y C Oh a sb e e ns h o w nt oa f f e c ts e v e r a li n t r a c e l l u l a rs i g n a l i n gp a t h w a y s，a n ds u c hp a t h w a y sm e d i a t e，i np a r t，t h ek n o w nv a s o r e g u l a t o r y，a n t i-i n f l a m m a t o r y，a n t i a p o p t o t i ea n da n t i p r o l i f e r a t i v ee 疗b c 乜o ft h i sg a s E x o g e n o u sC Od e l i v e r e da tl o wc o n c e n t r a t i o n si ss h o w i n gt h e r a p e u t i cp o t e n t i a la sa na n t i i n f l a m m a t o r ya g e n ta n da ss u c hc a nm o d u l a t en u m e r o u sp a t h o p h y s i o l o g i c a ls t a t e s T h i sr e s e a r c hf o c u so nt h a tw h e t h e rC Oc a np r o v i d ep r o t e c t i o na g a i n s tm u l t i p l eo r g a n7i n j u r i e sd u r i n gI I Ra n dw h a ti t sm e c h a n i s mi s I tc o n s i s t so ft h ef o l l o w i n gt h r e ep a r t s：f i r s t，t h ee f f e c t so fe x o g e n o u sC Oo nc a r b o x y h e m o g l o b i nb l o o dc o n c e n t r a t i o nd u r i n gI I Ri nr a t s；s e c o n d，t h ee f f e c t so fe x o g e n o u sC O0 1 1m u l t i p l eo r g a ni n j u r i e sd u r i n g1 1 Ri nm t s；t 1 1 硼t h em e c h a n i s m so f t h ep r o t e c t i o no f e x o g e n o u sC Oa g a i n s tm u l t i p l eo r g a ni n j u r i e sd u r i n gf I Ri nr a t s M a t e r i a l s1 A n i m a l s：6 4m a l eW i s t a rr a t s，w e i g h i n g2 2 0 2 6 0 9，w e r ep r o v i d e db ye x p e r i m e n t a la n i m a lc e n t e ro f C h i n aM e d i c a lU n i v e r s i t y 2 M a i nR e a g e n t sa n dk i t s：s t a n d a r dC O，o n es t e pT U N E La p o p t o s i sa s s a yk i t s，k i t so f T N F aa n dI L-1 0，p 3 8M A P Ka n t i b o d y，p o l y a c r y l a m i d ea n dS Oo n 3 M a i nA p p a r a t u s：C I B A C O R N I N G 2 3 8b l o o dg a sa n a l y z e r，D e t a xp r e s s u r em o n i t o r,H i t a c h iH 一6 0 0-4t r a n s m i s s i o ne l e c t o nm i c r o s c o p e N I K O N8 0 1 F L 兀m，一P Ff l u o r e s c e n c em i c r o s c o p e，G C-9 11 吖-c o u n t e r，O l y m p u sM L 2 0 0 0m i c r o s c o p e，B I O R A D P A C 3 0 0e l e c t r o p h o r e s i sa p p a r a t u s，G I S-2 0 2 0g e li m a g i n ga n a l y t i c a ls y s t e m，H e r a u s-B i o f u g e-P r i m o Rh y p o t h e r m i ch i g hs p e e dc e n t r i f u g e M e t h o d s1 A n i m a lm o d e IT h ea n i m a l sw e r eh o u s e di nal i c e n s e d,c l i m a t e-c o n t r o l l e da n i m a l-c a r ef a c i l i t y,w i t h1 2-h o a rl i g h t d a r kc y c l ea n df r e ea c c e s st os t a n d a r dc h o wa n dw a t e r B e f o r et h ee x p e r i m e n tt h ea n i m a lw e r ed e p r i v e do f f o o df o r1 2h o u r sb u th a df r e ea c c e s st ow a t e r R a t sw e r ea n e s t h e s i z e dw i t h2 0 u r e t h a n e(1 9 k 9 1i n t r a p e r i t o n e a l l y)R i g h tc a r o t i da r t e r ya n dr i g h tf e m o r a lv e i nw g r ec a n n u l a t e df o rB Pa n df l u i da n db l o o ds a m p l e sb e i n gt a k e n T h ea n i m a l sw e r et r a c h e o t o m i z e da n db r e a t h e dt h r o u g haT-t u b e Am i d l i n el a p a r o t o m yw a sp e r f o r m e d,a n dt h es u p e r i o rm e s e u t e r i ca r t e r y(S M A)W a sd a m p e dw i t ham i c r o v a s c u l a rc l i p T h ei n c i s i o nw a sc l o s e d,a n d6 0m i n u t e sl a t e ri tw a sr e o p e n e dw i t ht h ec l i pr e m o v e d R e p e r f u s i o nW a sc o n f i r m e db yt h er e t u r no fp u l s a t i o nt ot h em e s e n t e r i ca r c a d e 1 2 0m i n u t e sa l t e rr e p e r f u s i o n，t h ea n i m a l sw e r ek i l l e da n d8s a m p l e sw e r et a k e nf o ra d v a n c e de x a m i n a t i o n 2 A n i m a lg r o u p i n g6 4r a t sw e r er a n d o m l ya l l o c a t e di n t o8g r o u p sw i t h8a n i m a l si ne a c h G r o u pA：s h a mo p e r a t i o n，n oS M Ac l a m p e d；G r o u pB：S M Ac l a m p e d6 0m i n u t e sa n dr e p e r f u s i o n1 2 0m i n u t e s；G r o u pC I：i n h a l e d1 0 0 p p mC Oa tt h et i m e1 0m i n u t e sb e f o r eS M Ac l a m p e dG r o u pC 2：i n h a l e d2 5 0 p p mC Oa tt h et i m e1 0m i n u t e sb e f o r eS M Ac l a m p e dG r o u pD I：i n h a l e d1 0 0 p p mC Oa tt h et i m e6 0m i n u t e sa f t e rS M Ac l a m p e dG r o u pD 2：i n h a l e d2 5 0 p p mC Oa tt h et i m e6 0m i n u t e sa f t e rS M Ac l a m p e dG r o u pE l：i n h a l e d1 0 0 p p mC Oa tt h et i m e6 0m i n u t e sa f t e rr e p e r f u s i o nG r o u pE 2：i n h a l e d2 5 0 p p mC Oa tt h et 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u r i n gI I Ri nr a t s1 1T h eC O H bb l o o dc o n c e n t r a t i o n sW e r en o td i f f e r e n ta te a c ht i m ep o i n ti nG r o u pAa n d B 1 2T h eC O H bb l o o dc o n c e n t r a t i o n si n c r e a s e dm o r gs i g n i f i c a n t l ya tT 3a n dT 4p o i n t si nG r o u pC Ia n dC 2t h a nt h o s ei nG r o u pB(尸 l u n g l i v e r，a n dn os i g n i f i c a n tc h a n g ei nk i d n e y(2)i nd i f f e r e n tg r o u p s，G r o u pC G r o u pD G-r o u pE G r o u pB(P O 0 5)；(3)n os i g n i f i c a n td i f f e r e n tc h a n g e sb e t w e e nt h e2 5 0 p p mg r o u pa n dt h e1 0 0 p p mg r o u p 2 2n u m b e ro f a p o p t o t i cc e l l si nd i f f e r e n tt i s s u e sf 1)f e wa p o p t o t i cc e l l sc a l lb es e i nl i v e ra n dk i d n e y,b u tl o t so fi ni n t e s t i n a la n dl u n g；(2)i nd i f f e r e n tg r o u p s，G r o u pC G r o u pD G r o u pE G r o u pB(P O 0 5)；(3)m o r ei nt h e1 0 0 p p mg r o u pt h a ni nt h e2 5 0 p p mg r o u p 3 T h em e c h a n i s m so ft h ep r o t e c t i o no fe x o g e n o u sC Oa g a i n s tm u l t i p l eo r g a ni n j u r yi n d u c e db yI I Ri nr a t s3，1n u m b e ro f P M Ni nd i f f e r e n tt i s s u e s(1)c o m p a r e dw i t hi nG r o u pA，n om o r eP M Ni nk i d n e yi no t h e rg r o u p s；(2)i nd i f f e r e n tg r o u p s，G r o u pC 2 G r o u pC I G r o u pD 2 G r o u pD 1 G r o u pE 2 G r o u pE 1 G r o u pB(P O 0 5)：(3)m o r ei nt h e10 0 p p mg r o u pt h a ni nt h e2 5 0 p p mg r o u p(J P 0 0 5)3 2p l a s m aT N F i f,c o n c e n t r a t i o n s(1)c o m p a r e dw i t hi nG r o u pA，i ti n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l yi nG r o u pB(P 0 0 5)(2)i nd i f f e r e n tg r o u p s，G r o u pC 2 G r o u pC 1 G r o u pD 2 G r o u pD 1 G r o u pE 2 G r o u pE l G r o u pB(尹 O 0 5)：(3)m o r ei nt h e1 0 0 p p mg r o u pt h a ni nt h e2 5 0 p p mg r o u p(尸 O 0 5)3 3p l a s m aI L-1 0c o n c e n t r a t i o n s(1)c o m p a r e dw i t hi nG r o u pA，i ti n c r e a s e di nG r o u pB(P G r o u pC I G r o u pD 2 G r o u p