亚洲玉米螟肽聚糖识别蛋白OfPGRP-SA的表达与功能分析.pdf

安徽科技学院学报,2 0 2 3,3 7(3):4 3-4 9 J o u r n a l o fA n h u iS c i e n c ea n dT e c h n o l o g yU n i v e r s i t y 收稿日期:2 0 2 2-0 9-2 4基金项目:安徽省自然科学基金(1 9 0 8 0 8 5 Q C 1 3 6);安徽省高校自然科学研究重点项目(2 0 2 2 AH 0 5 1 6 5 4);安徽省大学生创新创业训练计划项目(S 2 0 2 2 1 0 8 7 9 1 4 3);农业农村部农产品质量安全监管专项(1 5 2 1 7 0 2 9)。作者简介:王增霞(1 9 8 6-),女,山东泰安人,博士,讲师,主要从事昆虫生理生化及分子生物学研究。亚洲玉米螟肽聚糖识别蛋白O f P G R P-S A的表达与功能分析王增霞,周 婉,涂美英,盛龙玉,杨文俊,毛 燕,黄保宏(安徽科技学院 农学院,安徽 凤阳 2 3 3 1 0 0)摘 要:目的:明确肽聚糖识别蛋白P G R P在亚洲玉米螟先天免疫中的功能。方法:构建质粒表达载体,进行重组蛋白表达、纯化及W e s t e r nb l o t鉴定,对获得的O f P G R P-S A重组蛋白进行抗菌活性、细菌凝集、酰胺酶活性、酚氧化酶反应 和黑化反应 等体外试验。结果:通过S D S-P AG E和W e s t e r nb l o t鉴定,O f P G R P-S A蛋白纯化后条带单一,与预期大小一致。对重组蛋白体外活性分析表明,O f P G R P-S A对革兰氏阳性菌有较强的诱导作用,说明O f P G R P-S A可能参与T o l l途径的激活。结论:进一步明确O f P G R P-S A在亚洲玉米螟先天免疫应答中的作用,有助于更好地利用病原微生物对亚洲玉米螟进行生物防治。关键词:亚洲玉米螟;肽聚糖识别蛋白;原核表达;先天免疫中图分类号:S 8 5 2.3文献标志码:A文章编号:1 6 7 3-8 7 7 2(2 0 2 3)0 3-0 0 4 3-0 7开放科学(资源服务)标识码(O S I D):D O I:1 0.1 9 6 0 8/j.c n k i.1 6 7 3-8 7 7 2.2 0 2 2.0 0 5 2E x p r e s s i o na n df u n c t i o n a l a n a l y s i so fO s t r i n i af u r n a c a l i sp e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i n sO f P G R P-S AWANGZ e n g x i a,Z HOU W a n,TU M e i y i n g,S HE NGL o n g y u,YANG W e n j u n,MAOY a n,HUANGB a o h o n g(C o l l e g eo fA g r i c u l t u r e,A n h u i S c i e n c ea n dT e c h n o l o g yU n i v e r s i t y,F e n g y a n g2 3 3 1 0 0,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e:T oc l a r i f yt h ef u n c t i o no fp e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i nP G R Pi nt h ei n n a t ei mm u n i t yo fO s t r i n i af u r n a c a l i s.M e t h o d s:P l a s m i de x p r e s s i o nv e c t o r sw e r e f i r s t c o n s t r u c t e d,f o l l o w e db y r e c o m b i n a n t p r o t e i n e x p r e s s i o n,p u r i f i c a t i o n a n d W e s t e r n b l o ti d e n t i f i c a t i o n,a n di n v i t r oe x p e r i m e n t so nt h eo b t a i n e dr e c o m b i n a n tp r o t e i n sw e r ep e r f o r m e df o ra n t i b a c t e r i a la c t i v i t y,b a c t e r i a la g g l u t i n a t i o n,a m i d a s e a c t i v i t y,p h e n o l o x i d a s e r e a c t i o na n db l a c k e n i n gr e a c t i o n.R e s u l t s:T h e r e s u l t so fi d e n t i f i c a t i o nb y S D S-P AG E a n d W e s t e r n b l o ts h o w e dt h a tt h e O f P G R P-S A p r o t e i n o b t a i n e d b ye x p r e s s i o nh a das i n g l eb a n da f t e rp u r i f i c a t i o na n dw a sc o n s i s t e n tw i t ht h ee x p e c t e ds i z e.T h ei nv i t r oa c t i v i t ya n a l y s i so ft h er e c o m b i n a n tp r o t e i ns h o w e dt h a tO f P G R P-S Ah a das t r o n gi n d u c t i o ne f f e c to nG r a m-p o s i t i v eb a c t e r i a,i n d i c a t i n g t h a tO f P GR P-S A m a yb e i n v o l v e d i nt h e a c t i v a t i o no fT o l l p a t h w a y.C o n c l u s i o n:T h er o l eo fO f P G R P-S Ai nt h e i n n a t e i mm u n er e s p o n s eo fO s t r i n i af u r n a c a l i sw a sf u r t h e rc l a r i f i e db yt h ee x p e r i m e n t,w h i c hh e l p s t ob e t t e ru t i l i z ep a t h o g e n i cm i c r o o r g a n i s m s f o rb i o l o g i c a l c o n t r o lo fO s t r i n i a f u r n a c a l i s.K e yw o r d s:O s t r i n i a f u r n a c a l i s;P e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i n;P r o k a r y o t i c e x p r e s s i o n;I n n a t e i mm u n i t y亚洲玉米螟(O s t r i n i af u r n a c a l i s)属鳞翅目螟蛾科,在我国,除青藏高原外,其余各地均有分布,是玉米的重要害虫。其幼虫可钻进茎秆内取食,还可取食嫩叶、穗柄等,致使植株倒伏、无法发育或产量降低。一般年份为害可造成玉米减产1 0%,严重为害可造成产量损失3 0%以上1,对我国玉米生产构成严重威胁。近年来,利用病原微生物防治亚洲玉米螟得到了越来越多的关注2-3。但关于病原微生物和其寄主免疫识别以及在先天免疫应答中的作用研究仍然有限。前期对微生物诱导后的亚洲玉米螟进行转录组测序,在数据分析中发现诱导后O f P G R P-S A基因表达显著上升,并利用q P C R进一步验证革兰氏阳性菌和阴性菌分别刺激后O f P G R P-S A基因的表达变化,由此推测O f P G R P-S A可能参与昆虫T o l l途径的激活。为进一步明确该基因在亚洲玉米螟先天免疫应答中的作用,本研究将对O f P G R P-S A进行体外表达及纯化,并通过体外活性试验明确该蛋白的功能。该研究为更好地利用微生物农药对亚洲玉米螟进行生物防治和研发更高效的环境友好型杀虫剂提供理论依据。1 材料与方法1.1 供试材料亚洲玉米螟饲养于安徽科技学院种植园养虫室人工气候箱内,饲养温度为(2 81),相对湿度为8 0%,光周期LD=1 6h8h。试验所用 试 剂T r i z o lR e a g e n t,d d H2O,G o l d v i e w核 酸 染 料(1 00 0 0),5 0T A E,大 肠 杆 菌TO P 1 0、B L 2 1感受态细胞均购自生工生物工程(上海)股份有限公司;2E sT a pS u p e r M i x试剂盒、D NAL o a d i n gb u f f e r、D NA M a r k e r均购自北京全式金生物技术有限公司;供试菌株购自北纳创联生物科技有限公司;A x y P r e pD NA凝胶回收试剂盒和p C Z N 1载体由南京钟鼎生物技术有限公司提供。1.2 重组原核质粒的表达构建通过T r i z o l说明书提取亚洲玉米螟的总R NA,并按照试剂盒说明合成c D NA。然后进行P C R扩增获得亚洲玉米螟O f P G R P-S A基因核苷酸序列,用于原核表达系统构建,扩增反应体系如表1所示。表1 P C R反应试剂体系T a b l e1 P C Rr e a c t i o nr e a g e n t s y s t e m试剂名称T a qP C R M a s t e rM i x(2)b l u ed y e正向引物反向引物D NA模板d d H2O合计加入量/L1 011172 0 使用S E N S&U E S T的P C R仪,设置程序见表2。采用A x y P r e pD NA凝胶回收试剂盒回收P C R产物,将回收的P C R产物连接到p C Z N 1载体,获得的重组质粒p C Z N 1-O f P G R P-S A转入TO P 1 0克隆菌株,菌液P C R鉴定阳性克隆,提取重组质粒后寄送生工生物工程(上海)有限公司测序鉴定。表2 P C R仪设定程序T a b l e2 P C Ri n s t r u m e n t s e t t i n gp r o c e d u r e 步骤 温度及时间预变性9 4-3m i n循环(3 0组)9 4-3 0s 6 0-3 0s 7 2-3 0s延伸7 2-1 0m i n保存4-1.3 重组蛋白表达、纯化及W e s t e r nb l o t鉴定将鉴定正确的p C Z N 1-O f P G R P-S A重组质粒转至大肠杆菌B L 2 1感受态细胞中,挑取单克隆接种于44 安徽科技学院学报 2 0 2 3年L B培养液,振摇(3 7,2 2 0r/m i n)过夜,向培养物中加入I P T G至终浓度为0.5mm o l/L,再振摇4h,诱导融合蛋白表达。将表达蛋白置于离心机(40 0 0r/m i n)离心1 0m i n,倒掉上清,重悬沉淀菌体。并对重悬液进行破碎,分别重悬上清液与沉淀液后,进行1 2%S D S-P AG E检测分析。通过低压层析系统,利用亲和层析柱对上述表达蛋白进行纯化。将含有目的蛋白的溶液加入透析袋中,使用P B S进行透析过夜,再进行1 2%S D S-P AG E分析,将蛋白于-8 0保存备用。利用W e s t e r nb l o t鉴定纯化后的O f P G R P-S A重组蛋白。1.4 亚洲玉米螟P G R P-S A重组蛋白功能验证1.4.1 抗菌活性检测 将大肠杆菌(E s c h e r i c h i ac o l i)、苏云金芽孢杆菌(B a c i l l u s t h u r i n g i e n s i s)和金黄色葡萄球菌(S t a p h y l o c o c c u sa u r e u s)分别接种至液体培养基中,3 7、2 0 0r/m i n过夜培养至O D6 0 0n m=0.6。在1.5m L离心管中建立如下反应体系(表3)。将上述反应管置于3 7、2 0 0r/m i n摇床,孵育2h;将菌液稀释1 00 0 0倍后取2 0L进行涂板,于3 7下培养箱中倒置培养过夜,设置3个重复,最后对平板上的单菌落进行计数。表3 抗菌活性检测反应体系T a b l e3 A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t yd e t e c t i o nr e a c t i o ns y s t e m对照组试验1组试验2组试验3组供试菌5 0L供试菌5 0L供试菌5 0L供试菌5 0L液体培养基1 0 0L液体培养基1 0 0L液体培养基1 0 0L液体培养基1 0 0LP B S缓冲液1 5 0LP G R P蛋白液(0.5m g/m L)1 2 0L P G R P蛋白液(0.5m g/m L)1 2 0LB S A蛋白液(0.5m g/m L)1 2 0LP B S缓冲液3 0LP B S缓冲液(含Z n C l2)3 0LP B S缓冲液3 0L1.4.2 重组蛋白的细菌凝集试验 将活化后的细菌重新转接培养,将浓度调至O D6 0 0n m为1.0;将2 0L上述菌体、2 0LP G R P-A重组蛋白或P G R P-B重组蛋白或B S A(0.5m g/m L)和4LC a C l2(1 0 0mm o l/L)加入E P管中混匀,在2 8、1 0 0r/m i n摇床孵育1h;取1 0L反应液滴于载玻片上,并在倒置显微镜下观察菌体分布情况。1.4.3 酰胺酶活性检测 将来自大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的不溶性肽聚糖(P GN)用P B S稀释为1m g/m L。分别向9 6孔板加入1 0LP GN(lm g/m L)与4LP G R P-A(2 0 0g/m L)或4LB S A(2 0 0g/m L)混合,并用P B S(含1 5mm o l/LZ n C l2)将反应体系补足至6 0L。利用酶标仪测定反应体系在5 4 0n m的吸光度。1.4.4 酚氧化酶原级联反应 选取1 5头5龄第3天亚洲玉米螟,经7 0%乙醇清洗后放在冰上1 5m i n,剪开尾突收集血淋巴至预冷的1.5m LE P管中。4、1 60 0 0g离心3 0s去除血细胞得到血淋巴。在1.5m LE P管中准备以下反应体系(表4)。孵育结束后,1 00 0 0g离心1m i n,各取5L上清液加至9 6孔板,然后同时加入1 0 0L多巴胺(2mm o l/L)溶液。利用T e c a nI n f i n i t e2 0 0P r om i c r o p l a t er e a d e r酶标仪测4 9 0n m处吸光度。表4 酚氧代酶原级联反应体系T a b l e4 P r o p h e n o l o x i d a s ec a s c a d er e a c t i o ns y s t e m对照组试验1组试验2组 试验3组血清5L血清5L血清5L血清5LP B S缓冲液1 5LP B S缓冲液1 3LP B S缓冲液1 3LP B S缓冲液1 1L-P G R P蛋白液(0.5m g/m L)2L供试菌肽聚糖2LP G R P蛋白液(0.5m g/m L)2L-供试菌肽聚糖2L1.4.5 黑化反应 用P B S清洗S e p h a d e xD E A E A-2 5凝胶珠3次,最后用P B S悬浮凝胶珠(1 0 02 0 0个/L)。取1 0L的凝胶珠悬液,分别加入1 5 0L的P G R P重组蛋白(5 0 0g/m L),吹打混匀,室温下慢摇过夜孵育(B S A、P B S作为对照组)。用P B S清洗过夜孵育后的凝胶珠6次,最后用P B S悬浮(1 0 0 1 2 0个/L)。用5L的微量进样器(P D E 0 0 0 3,英国B u r k a r d)注射亚洲玉米螟5龄幼虫腹部,每组6个重复。在恒温培养箱下培养2 4h后解剖幼虫,分别收集注射到玉米螟体内的凝胶珠,统计凝胶珠黑化率。54第3 7卷第3期王增霞,等:亚洲玉米螟肽聚糖识别蛋白O f P G R P-S A的表达与功能分析2 结果与分析2.1 玉米螟重组蛋白表达、纯化及鉴定重组载体经I P T G诱导表达,经1 2%S D S-P AG E电泳显示,重组蛋白O f P G R P-S A在诱导后(图1 A第3泳道)和诱导破碎后沉淀中(图1 A第5泳道)表达,约为2 0k D。纯化后的重组蛋白为单一条带(图1 B第34泳道),并对纯化蛋白做W e s t e r nb l o t验证,结果显示目的条带单一且清晰(图1 C第1泳道)。根据鉴定结果,表达蛋白的分子量与目的蛋白一致。图1 O f P G R P-S A重组蛋白的诱导表达F i g.1 I n d u c e de x p r e s s i o no fR e c o m b i n a n tp r o t e i nO f P G R P-S A 注:M为蛋白质分子质量标准;1为p C Z N 1诱导(空载);2为未诱导;3为诱导后;4为诱导破碎后上清;5为诱导破碎后沉淀;6为破碎后处理样品;7为流出;8为洗脱;9为洗脱;1 0为纯化后样品。2.2 抗菌活性检测通过菌落个数判断亚洲玉米螟O f P G R P-S A是否具有抗菌活性。利用金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌以及大肠杆菌作为供试菌进行抗菌活性检测。发现O f P G R P-S A对苏云金芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌有较强的抗菌活性,对大肠杆菌有微弱的抗菌活性;当试验中加入锌离子时,O f P G R P-S A的抑菌活性减弱(图2)。图2 重组蛋白O f P G R P-S A对供试菌的抗菌活性检测F i g.2 A n t i b a c t e r i a l a c t i v i t yt e s to f r e c o m b i n a n tp r o t e i nO f P G R P-S At ot h e t e s tb a c t e r i a注:不同字母表示显著性差异(P0.0 5)。下同。2.3 细菌凝集试验将稀释好的大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌分别与B A S、重组蛋白P G R P-A进行孵育,观察细菌凝集现象。结果显示(图3),与对照组B S A相比,重组蛋白P G R P-A对大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均有凝集作用。但对不同病原微生物的凝集效果存在差异,O f P G R P-S A对苏云金芽孢杆菌的凝集现象更显著。64 安徽科技学院学报 2 0 2 3年图3 重组蛋白O f P G R P-S A对供试菌的凝集反应F i g.3 T h ea g g l u t i n a t i o nr e a c t i o no f r e c o m b i n a n tp r o t e i nO f P G R P-S At ot h e t e s tb a c t e r i a2.4 酰胺酶活性检测在酰胺酶活性试验中,将来自大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的不溶性肽聚糖作为诱导因子,结果显示,O f P G R P-S A对大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的P G N均无酰胺酶活性(图4)。图4 重组蛋白O f P G R P-S A酰胺酶活性检测F i g.4 Am i d a s ea c t i v i t ya s s a yo f r e c o m b i n a n tp r o t e i nO f P G R P-S A2.5 酚氧化酶原级联反应为了检测重组蛋白O f P G R P-S A对酚氧化酶原级联反应的激活,本试验选取3种细菌作为激活剂进行酚氧化酶活力测试。结果显示,当O f P G R P-S A单独存在时,对酚氧化酶原有明显的激活作用;向血淋巴中分别加入O f P G R P-S A与大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的P GN时,并没有表现出协同激活酚氧化酶原的活性(图5)。图5 酚氧化酶原级联反应F i g.5 P h e n o l o x i d a t i o nz y m o g e nc a s c a d er e a c t i o n注:1为血清;2为血清+P G R P-A;3为血清+供试菌肽聚糖;4为血清+供试菌肽聚糖+P G R P-A。74第3 7卷第3期王增霞,等:亚洲玉米螟肽聚糖识别蛋白O f P G R P-S A的表达与功能分析2.6 黑化反应将与P B S、B S A、P G R P-A孵育后的凝胶珠注射到亚洲玉米螟体腔内,2 4h后解剖取出凝胶珠,统计凝胶珠的黑化率。如图6所示,注射O f P G R P-S A后幼虫体内凝胶珠的黑化率(8 7%)显著高于对照组(P B S:8%;B S A:1 1%)。图6 体内凝胶珠黑化分析F i g.6 M e l a n i z a t i o no f c h r o m a t o g r a p h yb e a d si nv i v o3 结论与讨论昆虫靠自身先天免疫抵抗外来物的入侵,当病原微生物入侵昆虫时,对病原体相关分子模式的识别是昆虫先天免疫的第一步,该识别过程主要依靠昆虫自身的模式识别受体来进行4。在昆虫先天免疫系统中,模式识别受体P G R P s发挥着重要作用。P G R P s最早发现于家蚕B o m b y xm o r i血淋巴中,随后在脊椎动物、棘皮动物和哺乳动物中相继被发现5-7。前期对微生物诱导亚洲玉米螟进行转录组测序和三代测序的数据分析中,鉴定到1个P G R P基因,并对其进行特征序列和生物信息学分析,通过革兰氏阳性菌和阴性菌刺激后O f P G R P-S A的表达被明显激活,推测O f P G R P-S A在免疫过程中可能参与T o l l途径的激活8。P G R P中含有一段1 6 5个氨基酸组成的能与肽聚糖结合的结构域,其与细菌表面肽聚糖结合后,可以抑制或激活下游免疫信号通路如T o l l、I MD或J NK信号通路9-1 0,从而减少或诱导抗菌肽等效应因子的产生。一些P G R P也表现出显著的酰胺酶活性1 1,如黑腹果蝇(D r o s o p h i l am e l a n o g a s t e r)P G R P-S B 1和-S C 1 b具有酰胺酶活性1 2-1 3。家蚕B mP G R P-S 1和P G R P-S 2分别对L y s型和D A P型肽聚糖具有酰胺酶活性1 4。此外,P G R P可根据是否具有酰胺酶活性分为两种类型:一种是不具有催化活性的P G R P,可以作为受体识别并结合肽聚糖1 5-1 6;另一类是具有催化活性的P G R P,能够识别并水解碳链上的酰胺键,从而降低或消除肽聚糖的免疫活性1 7-1 8。目前对P G R P在宿主应对细菌、真菌、病毒等病原物侵染时所发挥的免疫功能已有深入研究1 9-2 0。例如,在细菌感染条件下,B mP G R P参与家蚕的快速免疫应答反应;且不同B mP G R P对细菌的血细胞吞噬作用有不同的影响2 1。沉默小菜蛾P xP G R P-S 1后,被金黄色葡萄球菌(S e r r a t i am a r c e s c e n s)和苏云金芽孢杆菌(B a c i l l u s t h u r i n g i e n s i s)感染的小菜蛾死亡率显著提高4。在不同昆虫中P G R P相对比较保守,对家蚕、果蝇等模式昆虫P G R P的研究较集中,但在亚洲玉米螟P G R P的研究相对较少。为了进一步明确前期文章中发现的O f P G R P-S A基因的功能,本研究成功构建O f P G R P-S A重组质粒,获得纯化的目的蛋白,并利用获得的O f P G R P-S A重组蛋白,在体外进行一系列活性试验,结果表明,O f P G R P-S A对革兰氏阳性菌有较强的诱导作用,说明O f P G R P-S A参与T o l l途径的激活,该研究结果与前面发表文章中预测结果一致,该结果加深了对P G R P蛋白在亚洲玉米螟先天免疫应答中的功能的认识,为更好地利用微生物农药对亚洲玉米螟进行生物防治和研发更高效的环境友好型杀虫剂提供理论依据。参考文献:1 王振营,鲁新,何康来,等.我国研究亚洲玉米螟历史、现状与展望J.沈阳农业大学学报,2 0 0 0,3 1(5):4 0 2-4 1 2.2 段小莉,何康来,王振营,等.亚洲玉米螟越冬幼虫主要寄生性天敌及病原菌致死率的考察J.中国生物防治学报,84 安徽科技学院学报 2 0 2 3年2 0 1 4(6):8 2 3-8 2 7.3 冯树丹,李晓慧,汪洋洲,等.二种交配型球孢白僵菌对亚洲玉米螟的生态控制作用J.生态学报,2 0 1 7,3 7(2):6 5 0-6 5 8.4 Z HAN GZT,KON GJR,D E-MAN D A LS,e ta l.A ni mm u n e-r e s p o n s i v eP G R P-S 1r e g u l a t e st h ee x p r e s s i o no fa n t i b a c t e r i a lp e p t i d eg e n e si nd i a m o n d b a c km o t h,P l u t e l l ax y l o s t e l l a(L.)J.I n tJB i o lM a c r o m o l,2 0 2 0,1 4 2:1 1 4-1 2 4.5 YO S H I D A H,K I NO S H I TAK,A S H I D A M.P u r i f i c a t i o no fap e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i nf r o mh e m o l y m p ho f t h es i l k w o r m,B o m b y xm o r iJ.JB i o lC h e m,1 9 9 6,2 7 1(2 3):1 3 8 5 4-1 3 8 6 0.6 KANGD,L I UG,L UN D S T R M A,e t a l.Ap e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i n i n i n n a t e i mm u n i t yc o n s e r v e d f r o mi n s e c t s t oh u m a n sJ.P r o cN a t lA c a dS c iU S A,1 9 9 8,9 5(1 7):1 0 0 7 8-1 0 0 8 2.7 D Z I A R S K IR,G U P T A D.T h ep e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i n s(P G R P s)J.G e n o m eB i o l,2 0 0 6,7(8):2 3 2.8 WAN GZX,Z HOU W,HUAN GBH,e t a l.M o l e c u l a r a n d f u n c t i o n a l c h a r a c t e r i z a t i o no f p e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i n sO f P G R P-Aa n dO f P G R P-Bi nO s t r i n i af u r n a c a l i s(L e p i d o p t e r a:C r a m b i d a e)J.D e vC o m pI mm u n o l,2 0 2 2,1 3(5):4 1 7.9 CHO EK M,WE R N E R T,S TV E NS,e ta l.R e q u i r e m e n tf o rap e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i n(P G R P)i nr e l i s ha c t i v a t i o na n da n t i b a c t e r i a l i mm u n er e s p o n s e s i nD r o s o p h i l aJ.S c i e n c e,2 0 0 2,2 9 6(5 5 6 6):3 5 9-3 6 2.1 0 MA I L L E TF,B I S CHO F F V,V I G NA L C,e ta l.T h eD r o s o p h i l ap e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i nP G R P-L Fb l o c k sP G R P-L Ca n dI MD/J NKp a t h w a ya c t i v a t i o nJ.C e l lH o s tM i c r o b e,2 0 0 8,3(5):2 9 3-3 0 3.1 1 ME L L R O THP,KA R L S S ONJ,S T E I N E R H.As c a v e n g e rf u n c t i o nf o raD r o s o p h i l ap e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i nJ.JB i o lC h e m,2 0 0 3,2 7 8(9):7 0 5 9-7 0 6 4.1 2 ME L L R O THP,S T E I N E R H.P G R P-S B 1:A nN-a c e t y l m u r a m o y lL-a l a n i n ea m i d a s ew i t ha n t i b a c t e r i a l a c t i v i t yJ.B i o c h e mB i o p h y sR e sC o mm u n,2 0 0 6,3 5 0(4):9 9 4-9 9 9.1 3 L UYZ,S U F H,L IQL,e ta l.P a t t e r nr e c o g n i t i o nr e c e p t o r si nD r o s o p h i l ai mm u n er e s p o n s e sJ.D e vC o m pI mm u n o,2 0 2 0,1 0 2:1 0 3 4 6 8.1 4 WAN GQ,R E N MJ,L I U X Y,e ta l.P e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i n s i ni n s e c t i mm u n i t yJ.M o l I mm u n o l,2 0 1 9,1 0 6:6 9-7 6.1 5 K E S HAVA R ZM,J OYH,E D D S ATT,e t a l.T e n e b r i om o l i t o rP G R P-L Ep l a y sac r i t i c a l r o l e i ng u t a n t i m i c r o b i a lp e p t i d ep r o d u c t i o n i nr e s p o n s e t oE s c h e r i c h i ac o l iJ.F r o n tP h y s i o l,2 0 2 0,1 1:3 2 0.1 6 K L E I NOA,S I L V E RMANN.T h eD r o s o p h i l aI MDp a t h w a y i n t h ea c t i v a t i o no f t h eh u m o r a l i mm u n e r e s p o n s eJ.D e vC o m pI mm u n o l,2 0 1 4,4 2(1):2 5-3 5.1 7 P A R E D E SJC,WE L CHMAN D P,P O I D E V I N M,e ta l.N e g a t i v er e g u l a t i o nb ya m i d a s eP G R P ss h a p e st h eD r o s o p h i l aa n t i b a c t e r i a lr e s p o n s ea n dp r o t e c t st h ef l yf r o mi n n o c u o u si n f e c t i o nJ.I mm u n i t y,2 0 1 1,3 5(5):7 7 0-7 7 9.1 8 WE ID,WANGZ,X U H Q,e t a l.C l o n i n ga n df u n c t i o n a l c h a r a c t e r i z a t i o no f t w op e p t i d o g l y c a nr e c o g n i t i o np r o t e i ni s o f o r m s(P G R P-L C)i nB a c t r o c e r aD o r s a l i s(D i p t e r a:T e p h r i t i d a e)J.J I n t e g rA g r i c,2 0 2 0,1 9(1 2):3 0 2 5-3 0 3 4.1 9 L AUGHT ON A M,G A R C I A JR,G E R A R D O N M.C o n d i t i o n-d e p e n d e n ta l t e r a t i o no fc e l l u l a ri mm u n i t yb ys e c o n d a r ys y m b i o n t s i nt h ep e aa p h i d,A c y r t h o s i p h o np i s u mJ.J I n s e c tP h y s i o l,2 0 1