臻源胶囊对免疫力低下脾虚证小鼠增强免疫力和健脾功效研究.pdf

950 2023 年 8 月第 43 卷第 8 期 Jilin Journal of Chinese Medicine Aug.2023 Vol.43 No.8 DOI:10.13463/ki.jlzyy.2023.08.020臻源胶囊对免疫力低下脾虚证小鼠增强免疫力和健脾功效研究乐 娜，姜砚馨，余淑惠，张 惠，郑 婷，王林元，李 军，张建军*（北京中医药大学，北京 100029）摘要：目的 探究臻源胶囊增强免疫力作用及健脾中医功效，阐释健脾与免疫相关性。方法 小鼠随机分为正常组，模型组，无比山药丸组，臻源胶囊高、低剂量组，除正常组外其余各组第 12 14 天腹腔注射环磷酰胺进行造模，连续 3 d。记录小鼠体质量，脾脏指数和胸腺指数，Elisa 法检测 IL-2、TNF-、IFN-、IL-6、IgG、IgM、IL-10、TGF-、IL-17、sIgA、VIP、MTL、GAS、SS 及线粒体呼吸链复合物、IV 含量，分光光度法测 Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-Mg2+-ATP 酶活性，WB 法检测 T-bet、GATA-3 蛋白表达水平。结果 与模型组比较，臻源胶囊各剂量组小鼠血清 IL-2，IFN-含量升高，TNF-含量降低，小肠 IL-17、sIgA、MTL 和 Gas 含量升高，TGF-及VIP、SS含量降低，肝脏线粒体呼吸链复合链I升高，脾脏T-bet和T-bet/GATA-3比值升高，GATA-3降低（P0.001，P 0.01，P 0.05）。臻源胶囊高剂量组小鼠体质量、脾脏指数和胸腺指数增加，血清中 IgM 及肝脏线粒体呼吸链复合链IV含量及Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性增加，小肠IL-10含量降低（P0.05，P0.01，P0.001）；臻源胶囊低剂量组血清IL-6水平升高（P0.001）。结论 臻源胶囊可以通过调节细胞因子的分泌，调节T-bet/GATA-3 和 Th17/Treg 的平衡增强机体的免疫功能，通过调节免疫，改善胃肠激素的分泌和能量代谢情况发挥健脾中医功效。关键词：臻源胶囊；免疫力低下；脾虚证；增强免疫力；健脾 中图分类号：R917 文献标志码：A 文章编号：1003-5699(2023)08-0950-07Effect of Zhenyuan capsules in enhancing immunity and strengthening the spleen in mice with a low immunity and a spleen deficiency syndromeLE Na,JIANG Yanxin,YU Shuhui,ZHANG Hui,ZHENG Ting,WANG Linyuan,LI Jun,ZHANG Jianjun*(Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China)Abstract:Objective To explore the effect of Zhenyuan capsules in enhancing immunity and invigorating the spleen,and to explain the correlation between them.Methods Male Kunming mice were randomly divided into a normal group,a model group,a Shengmai granules group and Zhenyuan capsules high-dose and low-dose groups.Except the normal group,the other groups were intraperitoneally injected with cyclophosphamide on the 12th to 14th day of the experiment for 3 consecutive days.The weight,spleen index and thymus index of the mice were measured.The contents of IL-2,TNF-,IFN-,IL-6,IgG,IgM,IL-10,TGF-,IL-17,sIgA,VIP,MTL,GAS,SS and mitochondrial respiratory chain complex I and IV were detected by Elisa.The activities of Na+-K+-ATPase and Ca2+-Mg2+-ATPase were measured by spectrophotometry.The protein expression levels of T-BET and GATA-基金项目：国家重点研发计划中医药现代化研究重点专项课题（2018YFC1706800）作者简介：乐 娜（1994），女，博士研究生，主要从事基于中药基础理论的药效机理及物质基础研究*通信作者：张建军，电子信箱- 2023 年 8 月第 43 卷第 8 期 Jilin Journal of Chinese Medicine Aug.2023 Vol.43 No.8 9513 were detected by WB.Results Compared with the model group,in the Zhenyuan capsules groups,the contents of IL-2 and IFN-in serum were increased,while the content of TNF-was decreased;the contents of IL-17,sIgA,MTL and Gas in the intestine were increased,while the contents of TGF-,VIP and SS were decreased;the contents of mitochondrial complex chain I in the liver were increased,the T-bet and T-bet/GATA-3 ratio of the spleen was increased,while GATA-3 was decreased(P0.001,P0.01,P0.05).Compared with the model group,in the high-dose Zhenyuan capsules group,the body weight,spleen index and thymus index were increased,the content of IgM in serum,the content of mitochondrial complex chain IV in the liver,and the activities of Na+-K+-ATPase and Ca2+-Mg2+-ATPase were increased,while the content of IL-10 in the intestine was decreased(P0.05,P0.01,P0.001).In the low-dose Zhenyuan capsules group,the serum level of IL-6 was increased(P0.001).Conclusion Zhenyuan capsules can enhance the immune function by regulating the secretion of cytokines,regulating the balance of T-bet/GATA-3 and Th17/Treg,and it can strengthen the spleen by regulating the immunity,improving the secretion of gastrointestinal hormones and energy metabolism.Keywords:Zhenyuan capsules;low immunity;syndrome of spleen deficiency;enhancing immunity;invigorating the spleen 全球范围内亚健康人数占全球总人口的 75%，免疫力降低是亚健康的基本特征之一，免疫具有监视、自稳和清除的作用，是机体抵抗疾病的关键，免疫力降低是百病之源，易患多种疾病，如感冒、腹泻及各种肿瘤性疾病。中医上免疫一词最早见于 免疫类方，认为免疫即“免除瘟疫”“免除疾病危害，保障身体健康”1。“虚则百病始生”，中医学的虚证与现代医学所说的免疫力低下具有相似之处，脾虚证作为中医虚证的重要证型之一与免疫的相关性尤为密切，“脾为之卫”“脾旺则四季不受邪”等中医理论均反映了脾与免疫功能的关系，通过健脾来提高机体免疫力也是目前常用的增强机体免疫力的重要手段。本研究通过建立免疫力低下脾虚证模型，一方面探究臻源胶囊健脾中医功效和增强免疫力作用，另一方面研究健脾与增强免疫力的相关性。1 材料与方法1.1 药品 臻源胶囊（批号：BA/21H07AAB01，规格：每粒0.35 g，由无限极有限公司提供）；无比山药丸（批号：国药准字 Z33020111，规格：每 40 丸重 3 g，杭州胡庆余堂药业有限公司）；注射用环磷酰胺（批号：H20160467，规格：每支 0.2 g）1.2 实验动物 SPF 级健康雄性昆明小鼠，体质量18 22 g，购自斯贝福（北京）生物技术有限公司，合格证编号：SCXK（京）2016-0002。饲养于北京中医药大学动物房。实验经过北京中医药大学医学与实验动物伦理委员会审查（伦理审查编号：BUCM-4-2021082004-3031）。1.3 试剂及仪器 白介素-2（IL-2）Elisa 试剂盒（货号：ml063136），白介素-6（IL-6）Elisa试剂盒（货号：ml063159），肿瘤坏死因子-（TNF-）Elisa 试剂盒（货号：ml002095），干扰素-（IFN-）Elisa 试剂盒（货号：ml058350），白介素-10（IL-10）Elisa 试剂盒（货号：ml037873），转化生长因子-（TGF-）Elisa 试剂盒（货号：ml057830），白介素-17（IL-17）Elisa 试剂盒（货号：ml037864），分泌型免疫球蛋白A（sIgA）Elisa 试剂盒（货号：ml001917），血管活性肠肽（VIP）Elisa 试剂盒（货号：ml001911），胃动素（MTL）Elisa 试剂盒（货号：ml201829），胃泌素（GAS）Elisa 试剂盒（货号：ml037432），生长抑素（SS）Elisa 试剂盒（货号：ml101826），线粒体呼吸链复合物试剂盒（货号：ml058155），线粒体呼吸链复合物试剂盒（货号：ml058158），Na+-K+-ATP 酶试剂盒（货号：ml076296），Ca2+-Mg2+-ATP 酶试剂盒（货号：ml076297），以上试剂盒均购自上海酶联有限公司。GATA 结合蛋白 3（GATA3）一抗（批号：ab282110，abcam），T盒子转录因子（T-bet）一抗（批号：ab53174，abcam），GAPDH 抗体（批号：G0100-100UL，LABLEAD），BCA 蛋白浓度测定试剂盒（批号：B5000-500T，LABLEAD）紫外分光光度计（型号：752-P，上海现科仪器有限公司）、冷冻离心机（型号：neofuge 15R，heal force）、酶标分析仪（型号：DR-200BS，无锡华卫德朗仪器有限公司）、电子天平型号：PL-203，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司、水浴锅（型号：TL-952 2023 年 8 月第 43 卷第 8 期 Jilin Journal of Chinese Medicine Aug.2023 Vol.43 No.8 420D，姜堰市天力医疗器械厂有限公司）、全自动研磨仪（型号：KH-III，武汉赛维尔生物），电泳仪、蛋白电转仪（美国 Bio-Rad 公司）。1.4 药物制备 取适量的臻源胶囊，用蒸馏水进行溶解后置于 4 冷藏，备用；取适量的无比山药丸，用蒸馏水研磨溶解，置于 4 冷藏，备用。1.5 分组与给药 雄性昆明小鼠 50 只，适应性喂养7 d 后随机分为 5 组，即空白组、模型组、无比山药丸组（3 g/kg）、臻源胶囊低剂量组（0.35 g/kg）、臻源胶囊高剂量组（0.70 g/kg），每组 10 只。每天上午给予空白组、模型组小鼠蒸馏水，其余各组给予相应药物，灌胃剂量为 0.1 mL/10 g，根据体质量变化调整灌胃量，连续给药 14 d。1.6 造模方法 小鼠适应性喂养之后从实验第 1 天开始进行给药，给药第 12 天起，腹腔注射环磷酰胺60 mg/kg，连续 3 d，建立免疫力低下脾虚证模型。1.7 取材与检测 实验第 14 天晚上 8 点小鼠禁食不禁水，12 h 后处死并取材。摘眼球取血，迅速解剖，取小鼠肝脏组织、脾脏组织和小肠组织放入冻存管后投入液氮罐中保存待测。1.7.1 一般状态与体质量 观察各组小鼠皮毛色泽、进食量、自主活动及精神状态，在实验造模前及造模结束后分别记录小鼠的体质量。1.7.2 脏器指数 小鼠摘眼球取血后迅速解剖，分别取胸腺和脾脏，用滤纸吸干血液后称重，按公式，脏器指数=脏器重（mg）/体质量（g）分别计算胸腺指数和脾脏指数。1.7.3 Elisa 法 检 测 Elisa 法 测 血 清 IL-2、TNF-、IFN-、IL-6、IgG、IgM水平和小肠组织IL-10、TGF-、IL-17、sIgA含量；Elisa法测小肠组织VIP、MTL、GAS和SS含量和肝脏组织线粒体呼吸链复合物、IV含量。1.7.4 分光光度法 分光光度法测肝脏组织 Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-Mg2+-ATP 酶活性。1.7.5 Western Blot 法检测脾脏 T-bet、GATA-3 蛋白表达水平 从-80超低温冰箱取小鼠脾脏组织，按试剂盒法提取细胞总蛋白，BCA 法测定蛋白浓度。取蛋白样品30 g进行SDS-PAGE电泳，转膜，封闭。用T-bet一抗（1:1 000）、GATA-3 一抗（1:2 000），4孵育过夜，PBST 洗膜 3 次，二抗（1:10 000），室温孵育2 h，PBST 洗膜 3 次，HRP 化学发光底物曝光，全自动化学发光成像分析系统显影成像，拍照，保存图像。采用Image J图像分析软件，统计分析条带蛋白灰度值。1.8 数据统计 采用SPSS Statistics 20.0进行统计分析，实验数据用均数 标准差（sx）表示，数据进行正态分布及方差齐性检验。数据呈正态分布，组间数据比较用单因素方差分析（one-way ANOVA），两两比较方差齐时采用 LSD 进行统计分析；方差不齐采用Dunnetts T3 进行统计分析。各统计结果以P 0.05 认为差异具有统计学意义。2 结果2.1 各组小鼠体质量比较 见表 1。表 1 各组小鼠体质量比较（sx，n=10）g组别剂量注射环磷酰胺前 注射环磷酰胺后空白组40.161.7941.551.80模型组40.392.7437.552.05#无比山药丸组 3 g/kg40.771.5539.971.75臻源胶囊低剂量组 0.35 g/kg40.402.6338.722.03臻源胶囊高剂量组 0.7 g/kg39.892.0139.793.11 注：与空白组比较，#P 0.001；与模型组比较，P 0.052.2 各组小鼠脏器指数比较 见表 2。表 2 各组小鼠脏器指数比较（sx，n=10）mg/kg组别剂量脾脏指数胸腺指数空白组2.660.232.310.18模型组1.370.14#0.770.12#无比山药丸组 3 g/kg1.530.220.970.33臻源胶囊低剂量组 0.35 g/kg1.510.190.920.24臻源胶囊高剂量组 0.7 g/kg1.550.130.980.19 注：与空白组比较，#P 0.001；与模型组比较，P 0.052.3 各组小鼠血清细胞因子水平比较 见表 3。2.4 各组小鼠免疫蛋白水平比较 见表 4。2.5 各组小鼠小肠组织细胞因子水平比较 见表 5。2.6 各组小鼠小肠组织胃肠激素水平比较 见表 6。2.7 各组小鼠肝脏组织代谢水平比较 见表 7。2.8 各组小鼠脾脏组织 T-bet 和 GATA-3 蛋白水平比较 见表 8 和图 1。3 讨论 臻源胶囊为具有增强免疫力功能的已上市产品，主要由灵芝、党参、白术、茯苓、五味子和菟丝子六味药组成，方中灵芝味甘性平，归心、肺、肝、肾经，可补益正气，扶正固本，为君药；菟丝子甘温，主入肝、肾、脾经，可补益肝肾，五味子味酸收敛，助菟丝子补肾，二者共为臣药；茯苓健脾宁心，党参益气生津，白术健脾燥水利湿，寓有四君子汤之意，为佐药，长于健脾益气，诸药合用既可健脾又可补肾，同时补益机体的先天之本和后天之本，增强机体抗邪能力。现代研究显示，灵芝的活性成分有多糖类、三萜类、甾 2023 年 8 月第 43 卷第 8 期 Jilin Journal of Chinese Medicine Aug.2023 Vol.43 No.8 953表 3 各组小鼠血清细胞因子水平比较（sx，n=10）pg/mL组别剂量IL-2IL-6TNF-IFN-空白组332.3033.44122.117.96521.5070.341 101.7141.75模型组328.4814.78112.113.73#682.3651.72#1 104.5495.07无比山药丸组 3 g/kg339.5138.15119.537.82626.9721.051 191.0062.02臻源胶囊低剂量组0.35 g/kg361.2625.40153.5312.26547.6727.611 258.8791.63臻源胶囊高剂量组 0.7 g/kg367.0932.50116.449.50616.1467.751 192.0197.02 注：与空白组比较，#P 0.05，#P 0.001；与模型组比较，P 0.05，P 0.01，P 0.001表 4 各组小鼠免疫蛋白水平比较（sx，n=10）组别剂量IgG/（mg/mL）IgM/（mg/mL）sIgA/（ug/g）空白组11.601.703.770.32242.8238.31模型组11.650.933.350.39#180.4535.10#无比山药丸组 3 g/kg12.522.034.020.73231.1628.33臻源胶囊低剂量组0.35 g/kg10.451.833.040.31212.3121.21臻源胶囊高剂量组 0.7 g/kg11.591.374.050.40224.4126.31 注：与空白组比较，#P 0.05，#P 0.001；与模型组比较，P 0.05，P 0.01，P 0.001表 5 各组小鼠小肠组织细胞因子水平比较（sx，n=10）组别剂量IL-10/（pg/g）IL-17/（pg/g）TGF-/（ng/g）空白组1 074.7586.06118.627.775.020.58模型组1 185.5793.99#105.629.69#7.360.51#无比山药丸组 3 g/kg 921.69100.90133.526.255.170.68臻源胶囊低剂量组0.35 g/kg1 142.2579.86138.069.376.170.70臻源胶囊高剂量组 0.7 g/kg 940.5561.69127.007.425.260.85 注：与空白组比较，#P 0.01，#P 0.001；与模型组比较，P 0.001表 6 各组小鼠小肠组织胃肠激素水平比较（sx，n=10）pg/g组别剂量VIPMTLGasSS空白组1 056.60132.213 622.42283.54411.6588.921 290.35218.92模型组1 505.84201.48#2 712.98283.79#262.9287.28#1 952.23193.32#无比山药丸组 3 g/kg 950.00198.273 733.27273.56393.2357.081 297.90244.26臻源胶囊低剂量组0.35 g/kg1 200.20244.253 195.01465.05348.3081.861 631.05210.53臻源胶囊高剂量组 0.7 g/kg1 067.71138.703 519.56337.27403.8565.951 484.23196.09 注：与空白组比较，#P 0.001；与模型组比较，P 0.05，P 0.01，P 0.001表 7 各组小鼠肝脏组织代谢水平比较（sx，n=10）组别剂量线粒体呼吸链复合链 I/（ng/g）线粒体呼吸链复合链 IV/（ng/g）Na+-K+-ATP酶/（U/g）Ca2+-Mg2+-ATP酶/（U/g）空白组87.737.1738.493.211.940.211.390.09模型组65.216.23#25.794.40#1.420.18#0.920.15#无比山药丸组 3 g/kg84.699.3533.164.261.810.091.360.12臻源胶囊低剂量组0.35 g/kg80.496.0326.203.541.550.131.010.10臻源胶囊高剂量组 0.7 g/kg86.825.9634.944.441.770.151.280.11 注：与空白组比较，#P 0.001；与模型组比较，P 0.01，P 0.001表 8 各组小鼠脾脏组织 T-bet 和 GATA-3 蛋白水平比较（sx，n=3）组别剂量T-betGATA-3T-bet/GATA-3空白组0.500.160.590.331.170.84模型组0.400.161.200.09#0.330.13#无比山药丸组 3 g/kg0.670.060.490.101.400.23臻源胶囊低剂量组0.35 g/kg0.590.100.680.140.890.22臻源胶囊高剂量组 0.7 g/kg0.880.130.550.201.710.41 注：与空白组比较，#P 0.05，#P 0.01；与模型组比较，P 0.05，P 0.01，P 0.001954 2023 年 8 月第 43 卷第 8 期 Jilin Journal of Chinese Medicine Aug.2023 Vol.43 No.8 图 1 各组小鼠脾脏组织 T-bet 和 GATA-3 蛋白水平比较醇类、核苷类、微量元素等，具有广泛的药理作用，在免疫系统的调节方面有显著独特的效果，被广泛用于保健品、免疫调节剂等2-3。党参及其多糖类成分是一种天然的免疫调节剂，能够提高免疫器官、免疫细胞、免疫分子功能，对体内外免疫调节均具有良好的作用4-5。白术及其多糖类、黄酮类、苷类等对机体的免疫功能具有调节作用，可通过增强机体的免疫功能达到健脾益气的功效。五味子能促进胸腺发育，提高吞噬细胞吞噬能力，提升机体内免疫球蛋白和细胞因子水平，诱导RAW 264.7分泌细胞因子，改善免疫功能6。茯苓水提物及三萜类、水溶性多糖和酸性多糖等可以改善免疫抑制小鼠的脏器指数水平，调节细胞因子的分泌，提升细胞免疫水平来增强免疫力7-8。菟丝子水提液和酸性多糖可以调节 T 淋巴细胞和 B 淋巴细胞增殖，改善免疫系统和淋巴细胞的功能受损情况，具有显著的免疫增强作用9。脾为“后天之本”，在护卫机体方面扮演重要角色，主要体现在脾为“气血生化之源”，可化生卫气，防御外邪，脾主运化水谷精微，长养肌肉，抵御外邪和脾为五脏六腑之源，可以灌溉四傍，脏安难伤。“脾”伤则百病由生，脾虚证是中医临床常见的病证之一，脾虚失运，则机体无以充养，各器官的功能活动减退。中医“脾”对机体的护卫作用与“免疫力”具有异曲同工之处，且大量免疫学相关的动物实验和临床研究证实，脾虚证的发生涉及免疫学多方面10-11，表现为免疫器官的萎缩和损伤，免疫细胞数量减少，免疫细胞分化成熟及免疫因子分泌紊乱等，表明脾虚与免疫息息相关。环磷酰胺是最常用的免疫抑制剂，会造成白细胞减少及食欲不振、恶心、呕吐、全身乏力等不良反应，与中医“脾虚证”的症状类似，环磷酰胺诱导的免疫抑制-脾虚证模型为疾证结合模型，适合用于免疫与脾虚相关性的研究。造模后，模型小鼠出现质量减轻、毛色枯萎、食量减少、倦怠、懒动、蜷缩聚堆、眯眼、弓背等症状，与临床脾虚症状相符，给药臻源胶囊的小鼠上述症状明显改善，体质量增加。脾脏和胸腺萎缩会使免疫功能发生紊乱，造模后，模型小鼠的脾脏指数和胸腺指数明显降低，提示免疫力低下脾虚证时免疫器官会出现萎缩，而较高剂量的臻源胶囊对脾脏和胸腺的萎缩有明显保护作用。细胞因子由淋巴细胞、巨噬细胞等免疫细胞分泌而来，具有调节免疫功能，参与炎症发生、创伤愈合，并刺激细胞活化、增殖和分化等作用12，细胞因子分泌水平反映着机体免疫功能是否正常。IL-2 对 T 细胞功能具有促进作用，可间接反映 T 淋巴细胞活化程度和自身清除衰老细胞的能力；IL-6 可以诱导 B 细胞和T 细胞的增殖分化，对机体免疫功能具有正向调节作用13；TNF-可调节机体的免疫功能，维持机体内部的稳定，目前有较多研究显示脾虚时，TNF-水平的升高14，IFN-主要由 Th1 细胞分泌，能激活巨噬细胞和 B 淋巴细胞，增强抗原递呈作用，促进多种细胞因子的分泌，可增强机体免疫调节功能15，本研究对血清中细胞因子水平进行检测发现，造模后小鼠血清中 IL-2，IL-6 水平明显降低，TNF-含量显著升高，预防性给药臻源胶囊的各组小鼠血清中 IL-2，IL-6 和IFN-含量升高，TNF-含量降低，提示免疫力低下脾虚证小鼠免疫功能发生紊乱，臻源胶囊可通过调节细胞因子的分泌对这种免疫紊乱状态起到调节作用，从而发挥健脾和增强免疫力的作用功效。T-bet 和 GATA-3 在 Th1/Th2 分化中起决定作用。T-bet可激活IFN-基因的表达，促进Th1细胞分化16；GATA-3 可正性调节 Th2 细胞因子分泌，调控 Th0 细胞向 Th2 分化，二者彼此抑制，其比值能客观反映Th1/Th2 细胞分化情况17，本研究结果显示，模型组小鼠脾脏T-bet蛋白表达降低，GATA-3蛋白表达升高，导致 T-bet/GATA-3 比值下降，提示免疫力低下脾虚证过程中存在 Th1/Th2 细胞分化失衡；臻源胶囊可以升高小鼠脾脏 T-bet 蛋白的表达，降低 GATA-3 的表达，使 T-bet/GATA-3 比值升高，提示臻源胶囊具有恢复Th1/Th2 分化平衡的作用。肠道是机体最大的免疫器官，能分泌多种因子，其中 IL-10、IL-17 及 TGF-在肠道有比较高的表达，IL-10 有很强的抗炎和免疫抑制活性，是免疫过程中重要的负调节因子18；IL-17 是 Th17 细胞分泌的主要细胞因子，对机体的免疫反应具有促进作用，TGF-由Treg 细胞分泌，同时又能诱导初始细胞分化为 Treg细胞，IL-17 和 TGF-的分泌水平在一定程度上反映着 Th17 和 Treg 之间的平衡，实验结果显示，免疫力 2023 年 8 月第 43 卷第 8 期 Jilin Journal of Chinese Medicine Aug.2023 Vol.43 No.8 955低下脾虚证小鼠小肠组织中 IL-10 水平升高，IL-17 含量降低，TGF-水平升高，臻源胶囊可以降低小肠组织 IL-10 的分泌，通过调节 IL-17 和 TGF-水平来调节Th17/Treg 平衡。“卫气者，为言护卫周身，温分肉，肥腠理，不使外邪侵犯也”，现代医学的免疫力与中医所说的“卫气”相似，IgG、IgM 和 sIgA 等免疫球蛋白作为免疫活性物质，是“卫气”功能活动的重要物质之一19。IgG 和 IgM 是体液免疫应答中的关键因子，可作为评价机体免疫力的指标20。sIgA 是机体肠道免疫屏障的重要组成部分21，支配肠黏膜的体液免疫22，实验结果显示，模型小鼠血清中 IgM 含量和小肠组织 sIgA 水平显著降低，臻源胶囊可以升高小鼠的 IgM 和 sIgA 的表达，结果提示，臻源胶囊可通过调节小鼠免疫蛋白的表达发挥健脾作用，从而提高机体免疫力。“脾主运化”，涉及食物的消化吸收、精微物质的转运输布等23。食物的消化吸收主要由胃肠激素的分泌来调节，其中VIP 和SS 对胃肠运动起抑制作用，二者含量升高会造成胃肠运动障碍，影响消化吸收24-25；GAS 和 MTL 能促进胃肠运动、加速胃排空26-27。临床及实验研究表明，脾虚证VIP和SS水平均升高22，28，GAS和MTL表达水平会降低14，29。本研究结果显示，造模后，模型组小鼠小肠组织VIP和SS水平明显升高，GAS 和 MTL 含量显著降低，与既往研究结果一致，臻源胶囊可以改善胃肠激素分泌紊乱的情况，通过改善免疫力低下脾虚证小鼠消化系统的功能发挥健脾功效。“脾主肌肉四肢”反映“脾”与能量的产生和消耗相关，线粒体的三羧酸循环是糖、脂、氨基酸三大营养物质的代谢枢纽和最终通路，而其氧化磷酸化过程是机体产生能量的主要方式，其中线粒体呼吸链复合物、通过呼吸链参与线粒体氧化磷酸化的过程，Na+-K+-ATP 酶和 Ca2+-Mg2+-ATP 酶通过氧化磷酸化生成 ATP，与能量转换过程相关30，因此，当线粒体呼吸链复合物、及 Na+-K+-ATP 酶和 Ca2+-Mg2+-ATP 酶改变时，能直接影响线粒体氧化磷酸化进程，进而影响机体能量代谢。实验结果显示，免疫力低下脾虚证模型小鼠肝脏组织中线粒体呼吸链复合物、含量及Na+-K+-ATP 酶和 Ca2+-Mg2+-ATP 酶活性均下降，臻源胶囊可以逆转模型小鼠的能量代谢状态，提示臻源胶囊可以通过提高相关酶的活性，加快线粒体氧化磷酸化速率，能量代谢得以恢复，产能增加，改善脾虚状态。综上所述，免疫力低下脾虚证不仅表现出免疫功能的降低，在消化系统和能量代谢方面也会受到显著影响，臻源胶囊不但可以通过调节免疫功能来发挥健脾功效，同时可以调节胃肠激素的分泌，改善机体能量代谢水平起到健脾作用，体现出中药复方在调节机体方面有多靶点、多效应的优势，符合中医整体性观念，但对于其主要作用途径和通路目前尚不明确，后续将采用多组学技术联合应用的方法探究其主要作用靶点，构建作用功效网络。参考文献：1 陈永亮.补肺化积汤改善晚期非小细胞肺癌、(正虚毒结型)患者免疫状态的临床研究 D.长春:长春中医药大学,2020.2LI Q Z,CHEN X,MAO P W,et al.N-Glycosylated Ganoderma lucidum immunomodulatory protein improved anti-inflammatory activity via inhibition of the p38 MAPK pathwayJ.Food&Function,2021,12(8):3393-3404.3WU M,SHEN C E,LIN Q F,et al.Sterols and triterpenoids from Ganoderma lucidum and their reversal activities of tumor multidrug resistanceJ.Natural Product Research,2022,36(5):1396-1399.4ZOU Y F,ZHANG Y Y,FU Y P,et al.A polysaccharide isolated from Codonopsis pilosula with immunomodulation effects both in vitro and in vivoJ.Molecules,2019,24(20).5DENG X,FU Y,LUO S,et al.Polysaccharide from Radix Codonopsis has beneficial effects on the maintenance of T-cell balance in miceJ.Biomedicine&Pharmacotherapy,2019,112:108682.6 李兵.北五味子化学成分的研究 J.中国医药指南,2018,16(21):20-21.7 邓鹏,徐驲,刘言薇,等.茯苓水提物对环磷酰胺荷瘤小鼠免疫微环境的影响 J.中国全科医学,2021,24(S2):28-30.8TU Y,LUO X,LIU D,et al.Extracts of Poria cocos improve functional dyspepsia via regulating brain-gut peptides,immunity and repairing of gastrointestinal mucosaJ.Phytomedicine,2022,95:153875.9WANG Z,FANG J N,GE D L,et al.Chemical characterization and immunological activities of an acidic polysaccharide isolated from the seeds of Cuscuta chinensis LamJ.Acta Pharmacologica Sinica,2000,21(12):1136-1140.10 蒋雨琪,王林.参苓白术散加减对-内酰胺类抗菌药物性腹泻患儿免疫功能及肠道菌群的分析 J.中国处方药,2020,18(1):122-124.11 毕殿勇,贾育新,成映霞,等.参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎模型大鼠 IL-1、IL-4 及 p38MAPK 基因蛋白表达的影响 J.中药药理与临床,2017,33(1):7-11.12 孙瑜嬬,孙理军,王梓安,等.肾虚质、脾虚质大鼠唾液腺 TNF-、IFN-、IL-10 表达差异性研究 J.中医学报,956 2023 年 8 月第 43 卷第 8 期 Jilin Journal of Chinese Medicine Aug.2023 Vol.43 No.8 2022,37(7):1491-1495.13 肖爱波.太子参及其多糖对脾虚大鼠免疫功能的影响 J.现代畜牧兽医,2021(10):50-53.14 黄甫静,张金娟,董莉,等.芪斛楂颗粒对脾虚模型大鼠胃肠功能及免疫系统的影响 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