胃癌组织中miR-135a.者临床病理特征及预后的关系_杨姮.pdf

目的探讨胃癌组织中微小RNA-135a-5p（miR-135a-5p）、细胞分裂周期相关基因8（CDCA8）的表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法收集胃癌组织、正常胃组织各82份。实时荧光定量PCR法检测组织中miR-135a-5p、CDCA8 mRNA表达，免疫组化法检测组织中CDCA8蛋白表达。术后随访，统计患者3年的生存情况。Pearson 相关法分析胃癌组织中 miR-135a-5p 与 CDCA8 mRNA 表达的关系；用 Kaplan-Meier 法分析 miR-135a-5p、CDCA8蛋白表达与患者生存期、3年总生存率的关系；Cox回归分析胃癌患者预后的影响因素。结果胃癌组织中miR-135a-5p 表达低于正常胃组织（P0.05），CDCA8 mRNA 表达及蛋白阳性表达率均高于正常胃组织（P 均0.05）。基于ENCORI数据库预测miR-135a-5p与CDCA8的关系，结果显示，miR-135a-5p与CDCA8存在结合位点；胃癌组织中miR-135a-5p与CDCA8 mRNA表达呈负相关（r=-0.580，P0.05），与肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关（P均0.05）。随访3年，生存59例。miR-135a-5p低表达者生存时间及3年总生存率低于miR-135a-5p高表达者（P均0.05）；CDCA8蛋白阳性表达者生存时间及3年总生存率低于CDCA8蛋白阴性表达者（P均0.05）。淋巴结转移、miR-135a-5p低表达及 CDCA8蛋白阳性表达是胃癌患者预后的独立危险因素（P均0.05）。本研究经医院伦理委员会批准。1.2组织中 miR-135a-5p、CDCA8 mRNA 表达检测采用实时荧光定量PCR法。采用TRIzol、氯仿及异丙醇提取总RNA，逆转录为cDNA，反应体系为20 L，反应条件：95 5 min；95 30 s、60 45 s、72 30 s 共 40 个循环。用 2-Ct法计算 miR-135a-5p、CDCA8 mRNA 相对表达量。miR-135a-5p以 U6为内参，CDCA8以GAPDH为内参。miR-135a-5p上游引物序列 5-ACAGCCTCCATGGGAATG-3，下游引物序列 5-TGGAGTGTGGCGTTCG-3；U6 上游引物序列 5-CTCGCGCAGCCTTGACA-3，下游引物序列 5-AACTTCGGAATTGCACTCGT-3；CDCA8 上游引物序列 5-GCAGGAGAGCGGATTTACAAC-3，反向 5-CTGGGCAATACTGTGCCTCTG-3；GAPDH 上游引物序列 5-TGACTTCAACAGCGACACCCA-3，下 游 引 物 序 列 5-CACCCTGTTGCTGTAGCCAAA-3。总RNA提取试剂盒、cDNA合成试剂盒购自艾美捷科技有限公司。1.3组织中CDCA8蛋白表达检测采用免疫组化法。将组织样本常规脱水、石蜡包埋、连续切片，进行免疫组化染色，显色后在镜下观察。随机选取10个有代表意义的高倍视野（200），计数200个细胞，按着色强度和着色细胞数比例计分。着色强度计分：不着色、淡黄色、黄色、棕色分别计为0、1、2、3分；着色细胞数比例计分：5%、5%25%、25%50%、50%75%、75%分别计为0、1、2、3、4分。两项得分相乘，3为阴性，3为阳性 8。CDCA8单克隆抗体购自艾美捷科技有限公司，GAPDH抗体购自汉益普生物科技有限公司，SP免疫组化试剂盒购自上海瑞楚生物科技有限公司，酶标仪购自赛默飞世尔科技公司。1.4预后随访术后每个月通过打电话的方式随访1次，另胃癌患者术后定期复查，术后1年内每3个月复查1次，第2年和第3年每6个月复查1次，患者死亡或至2021年12月31日随访结束，统计患者3年的生存情况。1.5统计学方法采用SPSS25.0统计软件。符合正态分布的计量资料以-x s表示，两组比较采用t检验；计数资料比较采用2检验。Pearson相关法分析胃癌组织中miR-135a-5p与CDCA8 mRNA表达的关 系；采 用 Kaplan-Meier 法 分 析 miR-135a-5p、CDCA8蛋白表达与患者生存期、3年总生存率的关系；Cox 回归分析胃癌患者预后的影响因素。P0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1 胃 癌 组 织 及 正 常 胃 组 织 中 miR-135a-5p、CDCA8 mRNA表达比较见表1。2.2胃癌组织及正常胃组织中CDCA8蛋白表达比较CDCA8染色主要位于细胞核，呈棕色颗粒状。胃癌组织及正常胃组织中CDCA8蛋白阳性表达率分别为70.73%（58/82）、23.17%（19/82）。胃癌组织中CDCA8蛋白阳性表达率高于正常胃组织（P0.05）。2.3胃癌组织中 miR-135a-5p 与 CDCA8 mRNA 表达的相关性用 ENCORI 数据库预测 miR-135a-5p与CDCA8的关系，结果显示，miR-135a-5p与CDCA8存在结合位点；Pearson相关性结果显示，胃癌组织中 miR-135a-5p 与 CDCA8 mRNA 表 达 呈 负 相 关（r=-0.580，P0.05）。表1胃癌及正常胃组织中miR-135a-5p、CDCA8 mRNA表达比较（-x s）组别正常胃组织胃癌组织Pn8282miR-135a-5p1.00 0.150.54 0.170.05CDCA8 mRNA1.01 0.122.47 0.800.54，42例）。胃癌组织中miR-135a-5p、CDCA8蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤最大径及分化程度无关（P均0.05），与肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关（P均0.05），见表2。2.5胃癌组织中miR-135a-5p、CDCA8蛋白表达与患者预后的关系随访3年，无失访患者，总生存59例。Kaplan-Meier生存曲线显示，miR-135a-5p低表达者平均生存时间为 30.43 个月（95%CI：27.7533.10），3年总生存率为57.50%（23/40）；miR-135a-5p 高表达者平均生存时间为 33.19 个月（95%CI：31.0735.31），3 年总生存率为 85.71%（36/42）。miR-135a-5p低表达者平均生存时间及 3年总生存率低于miR-135a-5p高表达者（P均0.05）。CDCA8蛋白阳性表达者平均生存时间为30.67个月（95%CI：28.4232.93），3 年总生存率为 63.79%（37/58）；CDCA8 蛋白阴性者平均生存时间为 34.67 个月（95%CI：32.8836.45），3 年总生存率为 91.67%（22/24）。CDCA8蛋白阳性表达者平均生存时间及3年总生存率低于CDCA8蛋白阴性者（P均0.05）。2.6胃癌患者预后的影响因素多因素分析显示，淋巴结转移、miR-135a-5p低表达及 CDCA8蛋白阳性表达是胃癌患者预后的独立危险因素（P 均51岁性别 男 女肿瘤最大径 0.050.050.050.050.050.050.050.050.050.050.05表3影响胃癌患者预后的多因素分析影响因素浸润深度（T3、T4/T1、T2）淋巴结转移（有/无）miR-135a-5p（低表达/高表达）CDCA8蛋白（阳性/阴性）0.2380.7440.9191.000SE0.1350.1960.2290.257Wald23.11414.40316.09415.148P0.0780.0000.0000.000HR1.2692.1042.5062.71995%CI0.9741.6531.4333.0891.6003.9261.6434.50062山东医药2023 年第 63 卷第 19 期显子及10个内含子，全长17 kb，与内着丝粒蛋白、极光激酶B和生存素共同构成了CPC15。CDCA8不仅是促进肿瘤发生发展的癌基因，也是癌细胞增殖和恶性发展的必需因子16。BI等17利用GSE 13507数据集分析CDCA8在膀胱癌中的表达，发现膀胱癌中CDCA8呈高表达，且与患者预后不良显著相关。已有研究证实，CDCA8与肿瘤的发生关系密切18-19，但CDCA8与胃癌的关系研究较少。本研究结果显示，胃癌组织中CDCA8 mRNA表达较正常胃组织中高，提示CDCA8可能参与胃癌的发病。免疫组化结果显示，胃癌组织中CDCA8蛋白阳性表达率高于正常胃组织，提示CDCA8可能是胃癌多阶段演变过程中的重要细胞因子。本研究结果还显示，CDCA8蛋白阳性表达与患者的肿瘤深度浸润及淋巴结转移有关，提示CDCA8蛋白阳性表达可能与胃癌的恶性演变有关，但有待进一步验证。另生存曲线分析结果显示，CDCA8蛋白阳性表达患者生存时间及3年总生存率低，且CDCA8蛋白阳性表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素，提示CDCA8可作为胃癌患者预后预测的指标之一。综上所述，胃癌组织中miR-135a-5p呈低表达、CDCA8呈高表达，二者与胃癌患者肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关，参与了胃癌的发生发展过程，可预测胃癌患者预后。本研究探究了 miR-135a-5p、CDCA8在胃癌组织中的表达，但未对分子层作用方式进行探讨，关于其作用机制及调控通路有待进一步探究。参考文献：1高秀娟.胃癌的免疫治疗研究进展 J.中国肿瘤临床，2018，45（3）：152-156.2CHENG X，LU Y.A review of capecitabine-based adjuvant therapy for gastric cancer in the Chinese population J.Future Oncology，2018，14（8）：771-779.3饶慕圣，曹胜华，徐兴东，等.肿瘤细胞主导的血管生成拟态与肿瘤侵袭转移 J.国际外科学杂志，2019，46（1）：60-63.4DIAO H，XU X，ZHAO B，et al.miR135a5p inhibits tumor invasion by targeting ANGPT2 in gallbladder cancer J.Mol Med Rep，2021，24（1）：528.5ZHANG Z，REN L，ZHAO Q，et al.TRPC1 exacerbate metastasis in gastric cancer via ciRS-7/miR-135a-5p/TRPC1 axisJ.Biochem Biophys Res Commun，2020，529（1）：85-90.6毕娅琼，陈松，蒋佳志，等.CDCA8基因表达与膀胱癌患者临床病理和预后的相关性 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