自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的应用和比较.pdf

环境与健康杂志!#年$月第!%卷第&期()*+,-)./01234 506!#4 7-18!%4 9-8&参考文献!关广聚8新编肾脏病学!58济南#山东科学技术出版社$!8&!:;&8何长民$张训8肾脏替代治疗学!58上海#上海科学技术文献出版社$%:8%:;!8张琳琪$李培旭$郑万善$等8肾脏病诊疗全书!58中国医药科技出版社$!8#:#;#:$8刘惠兰$李国刚$张晓洁4等8透析用水及透析液中内毒素污染状况分析!8中华内科杂志4%:4%!?=;=8朱彩凤$陈悦霞$张红梅4等8透析用水氯胺超标致不良反应&!例临床分析!8浙江医学$%:=$!?#&;#8冒祖民8反渗水异常致血液透析患者严重反应!8透析与人工器官$!%$?&!;&8%收稿日期!#A#A&!%(!(&(!#($(文章编号!%A$:%#%!#&A%#:A#自然沉降法和撞击法在空气细菌总数测定中的应用和比较钟嶷!郭重山!李小晖!李锦光!冯文如!杨惠贤摘要!目的探讨自然沉降法和撞击法进行空气采样对化妆品生产车间空气细菌总数测定结果的影响)方法测量了#只实验用玻璃平皿的直径*用自然沉降法%平皿暴露$B+)&和撞击法在化妆品生产车间同步采样*同时用撞击法以%EFB+)进行&G+!B+)+=B+)的空气采样$对不同采样方法所测定的空气细菌总数进行分析$并探讨了实验过程中的质量控制)结果#只玻璃平皿直径为=8&:H=8I JB$均小于标准直径%:8 JB&)与撞击法比较$同一环境的空气经沉降法采样所测定的空气细菌总数变异系数较大$中位数较高$合格率较低)撞击法采样=B+)时%=E&所测定的空气细菌总数下降)结论撞击法受环境因素影响小$精确度较好$一般情况下可优先采用$但采样时间较长%空气采样体积较大&时$捕获空气细菌效率下降)沉降法测定结果精确度较差$适宜在空气流速小且稳定+空气洁净度高+需要较长采样时间%=H&B+)&的环境采用)当沉降法采用的玻璃平皿直径不等于:JB时$测定结果需要校正)关键词!菌落计数$微生物*空气*采样方法*自然沉降法*撞击法中图分类号!K%!8%文献标识码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化妆品生产企业卫生规范.%!年&提出了化妆品生产车间空气细菌总数的标准值为/不大于%个FB&0$但没有提出具体的采样方法)为此$我们探讨了自然沉降法和撞击法测定化妆品生产车间的空气中细菌总数的结果差异性$研究了这两种采样方法各自的缺陷及质量控制措施$为合理选用采样方法并为制定化妆品生产车间空气细菌总数的标准采样方法提供科学依据)M材料与方法NON仪器5CDA%空气微生物采样器*直径约:JB的普通玻璃平皿)1调查研究2基金项目!广东省重点科技项目%!5#!D&作者单位!广州市疾病预防控制中心%广东 广州$%=&作者简介!钟嶷%:&;&$女$副主任医师$从事环境卫生研究)!#33环境与健康杂志!#年$月第!%卷第&期()*+,-)./01234 506!#4 7-18!%4 9-8&采样方法沉降法撞击法表!两种方法测定的空气细菌总数的合格率合格数%$%:;合格率!$=8&:!合格数%=!;&合格率!#&合格率!:;8!合计!?$:;生产前!?!%生产中!?&$:!注!与沉降法比较!经!检验!8$!8%#$实验现场选择采用空气过滤净化系统的生产车间和未采用空气过滤净化系统的生产车间#生产前!紫外线消毒&A+)后$生产中!生产后%3在各生产车间!更衣室$卫生通道$配料间$制作间$分装间及室外对照点分别采集空气样品%同时选择%间洁净度为十万级的实验室采集空气样品%#!实验方法#!#沉降法与撞击法空气细菌采样结果的比较按车间面积采用斜线或梅花布点方式布点#采用自然沉降法!暴露$A+)和撞击法B%C同步采样%撞击法采用5DEF%空气微生物采样器#以%GHA+)采集空气$G%采样后的平皿同时置于同一台温箱内&:I培养#=3%沉降法计数平皿的平均菌落数#并将其用奥梅尔良斯基公式换算#以JKLHA&表示计算结果#按照&化妆品生产企业卫生规范的标准值!不大于%个HA&进行评价%撞击法根据空气采样体积计数菌落数#以JKLHA&表示计算结果%采样同时记录每个采样点的温度$湿度$风速%#!#$撞击法不同采样时间的集菌效果在十万级洁净实验室内的中央设置采样点#每次用&台5DEF%空气微生物采样器采样#采样时间分别为&M$!A+)$=A+)#即空气采样体积分别为$!$=G%#%质量控制#%#采样条件相同自然沉降法和撞击法的采样是在车间面积相同$消毒时间相同$采样高度相同!距离地面=JA$采样点相同的条件下进行的%#%#$玻璃平皿实际面积的测量随机抽取供实验使用的#只普通玻璃平皿#用内卡尺测量每个平皿的内直径#计算其实际面积及平均面积%#%#!沉降法测定数据的校正沉降法测定的数据以玻璃平皿的平均面积与标准面积!;&8$JA!#即直径8 JA的玻璃平皿面积的误差比例进行校正%#%#%仪器系统误差的消除撞击法采样过程中&台5DEF%空气微生物采样器在同一采样高度!离地面=JA$同一采样平面同时采样#并交替采样不同时间%$结果$#玻璃平皿直径测量结果所测量的#只平皿的直径大小不一#均未达到8 JA#直径和面积的极差分别为8&%JA和#8%JA!%以直径8 JA平皿为标准#最小的平皿的直径和面积分别低于标准8;%JA和=8!=JA!#仅为标准平皿面积的=:个样本#空气细菌总数为%N%=JKLH皿(在生产过程中采集&$:个样本O空气细菌总数为%N!%!JKLH皿%用奥梅尔良斯基公式换算后所得的结果见表!%可见#沉降法合计的中位数和生产中的中位数分别是;$=:!JKLHA&%生产中沉降法和撞击法测得的空气细菌总数的中位数$JKLHA&和;$N=:JKLHA&%自然沉降法所测得的空气细菌总数中位数大于撞击法所测得的空气细菌总数中位数#差异有非常显著性!#?$8=:#8%表!还可见#自然沉降法所测得的空气细菌总数的变异系数!$%大于撞击法所测得的空气细菌总数的$%将两种采样方法同时测得的结果按照&化妆品生产企业卫生规范的卫生标准进行评价#计算合格率#表&可见#自然沉降法所测得的空气细菌总数合格率低于撞击法所测得的空气细菌总数合格率#差异有显著性!?!8$%表玻璃平皿直径和面积规格直径!JA面积!JA!范围=8&N=8:$8&%N$8#%&(=8$:P8$:8;#P%8!#标准8;&8$表$两种采样方法测定的空气细菌总数的比较采样方法沉降法撞击法范围!JKLHA&!N&$!N:中位数!JKLHA&$%#!$%!中位数!JKLHA&=:!$!$%!=%8%#范围!JKLHA&!NN:中位数!JKLHA&;#;!$%!#!N:;合计!?$:;室外对照!?#生产前!?!%生产中!?&$:生产车间$#!撞击法不同采样时间的集菌效果表#可见#采样时间延长至=A+)!采样空气体积=G时#空气细菌总数的均值下降#分别仅为采样&M和!A+)结果的$=8#和;#8%#;#差异有显著性!)?8%:(采样=A+)的结果与!A+)的结果比较#空气细菌总数减少&$8=;!?8#$%!注!与沉降法比较!经*检验!)8%!?#中位数!JKLHA&!=$%!%8$:%8!=!#)环境与健康杂志!#年$月第!%卷第&期()*+,-)./01234 506!#4 7-18!%4 9-8&采样时间&:!;+)?;&!A?;&DEC&$EC!&E#$值C8#%值8%F表!撞击法不同采样时间所测定的空气细菌总数!&G%讨论#$经奥梅尔良斯基公式转换的沉降法测定结果与撞击法的差异沉降法是依靠地心吸引力使悬浮在空气中的微生物粒子沉降到采样平皿的琼脂培养基表面上#以5HIJ%空气微生物采样器为例$撞击法是根据裂隙式的撞击法原理$利用抽取泵的吸引$将一定量的空气强迫通过喷嘴$在出口处形成高速喷射气流$将悬浮在空气中的含微生物的颗粒依靠高速喷射气流产生的惯性而撞击并粘附于平皿的湿润琼脂表面上K!L#一般认为$撞击法能采集悬浮在空气中的微生物的颗粒$并不受环境气流影响$采样量准确$是已为各国公认的空气采样的首选方法K!M$L#本次研究结果显示$无论静态环境!生产前还是动态环境!生产中$自然沉降法测定的菌落数经奥梅尔良斯基公式转换后所得的单位空气体积内的细菌总数结果$其中位数!均值大于撞击法同步采样所得空气细菌总数%撞击法测定的空气细菌总数合格率高于沉降法所测定的空气细菌总数的合格率#也就是说$在同一环境的空气细菌总数在同一时间用撞击法测定可能是合格的4而用沉降法测定则可能不合格#&公共场所卫生标准 中规定了空气细菌总数测定的两种方法及相应标准值KCL$&室内空气质量标准也规定了室内空气细菌总数用撞击法测定KFL$两种测定方法的标准值和表达方式是不同的#本研究结果显示$&化妆品生产企业卫生规范 没有明确化妆品生产车间空气细菌的采样标准方法$存在明显的技术缺陷#%&两种方法测定数据的变异程度和精确性近年来$国内外学者的理论研究和现场实验认为$自然沉降法误差较大$特别是在动态的空间内$虽然操作简单$但无法正确反映空气中微生物的真实状况$不是理想的采样方法K&4$L#本研究采用自然沉降法测定的数据经奥梅尔良斯基公式转换后变异系数大于撞击法$也说明自然沉降法测定的结果变异程度较大$精确程度较差$实验结果易受环境因素影响#但本研究显示$两种采样方法各有优缺点#撞击法测定结果精确度高$一般情况下可优先考虑使用#就化妆品生产车间的空气细菌监测而言$由于化妆品生产车间不属于高度洁净的环境!只有个别厂家的生产车间能达到万级洁净度$用撞击法采样&:!$N即可$可以发挥撞击法测定空气细菌总数精确度高的优点$修订&化妆品生产企业卫生规范时可考虑指定采用撞击法#%目前使用沉降法的系统误差导致沉降法结果存在误差的一个重要因素是集菌平皿的面积#以往将平皿琼脂表面因空气粒子沉降产生的菌落形成数用奥梅尔良斯基公式换算成单位空气体积内的细菌数的方式表达$现&公共场所卫生标准及&室内空气质量卫生标准中沉降法的数值表达是直接以每皿!D=;菌落形成单位!=?表示$即=?皿#本研究检测的#只平皿直径差异较大$均小于D=;$平均为8$F=;$所以集菌面积较小$其中最小的平皿面积只是标准面积的FO#只玻璃平皿均为西安和江苏玻璃仪器厂生产$该两厂生产的玻璃平皿供应全国各地众多城市疾病预防控制机构$长期以来普遍被用作空气细菌集菌器#据轻工部有关规定$该类用于空气细菌采样的平皿的直径允许误差范围是E!;#由于在许多的微生物检验中$平皿是作为一个供细菌繁殖的工具$检验结果主要与检验物的标准量有关$与平皿的面积无关$而沉降法的结果不论平皿直径是否在允许误差范围内均与平皿面积相关#而撞击法所使用的仪器喷嘴直径约F=;$不影响这次结果$除非平皿的直径小于F=;$就可能会造成有部分气流落在平皿外而影响结果#以往也无人对使用的平皿直径发生质疑并进行校正$因而造成采用沉降法采样的结果误差较大#现各地不少疾病预防控制机构或卫生检验中心按照PQR%$#%M!&检测和校准实验室能力的通用要求和&全国疾病预防控制机构工作规范的要求和其他规定$建立了质量管理规定$并按&质量手册(&程序文件和&作业指导书要求确保体系的有效运行$但实际中一些细节会严重影响结果的准确性$容易被忽视#采样工具的质量控制应引起进一步的重视#%!撞击法的缺陷有研究表明采用撞击法在!(#;+)的采样时间内!采样空气体积在 N以内不影响结果S监测室内空气微生物稳定性好K$L#本研究发现$撞击法采样超过一定时间4采样空气体积增大时$会引起平皿琼脂表面干燥$可能不易粘附全部细菌$影响了集菌效果#本研究用撞击法分别采集细菌总数&:(!;+)(;+)!采样空气体积分别为$(!(N$当采样;+)时$每立方米空气细菌总数均值明显降低$说明撞击法采样超过一定时间!即采集空气超过一定体积$对空气细菌的捕获效率降低#高洁净度的环境因为需要较长的采样时间!增大空气采样体积$不适宜选用撞击法监测空气细菌总数#5HIJ%空气微生物采样器使用说明书上标明可以采样%;+)的说法值得质疑#实验中也发现$采样时间较长时$平皿的琼脂表面被气流冲击成凹陷$其形状与采样器的喷嘴形状一致$说明采进的气流并非均匀分布在平皿琼脂表面$只是以气束形式分布在平皿琼脂表面#我们认为即使撞击!)环境与健康杂志!#年$月第!%卷第&期()*+,-)./01234 506!#4 7-18!4 9-8&作者单位!清远市疾病预防控制中心!广东 清远$%$法采样空气体积准确#所采集的空气全部撞击平皿表面#也不能证实所有撞击平皿表面的空气细菌及微粒全部被吸附#也就是说#经过平皿的气流不等于已完全过滤的气流$只有当撞击平皿的空气经收集后再次撞击平皿#经培养后无菌落生长时#才可以证明撞击法采样能全部捕获撞击平皿空气中的细菌$但在现阶段#仍没有实验报告证实这一点$我们注意到目前所有空气净化技术多采用过滤技术#尚未采用技术简单%运行经济的撞击吸附技术进行空气净化$所以说#撞击法在捕获细菌的技术上仍存在不确定因素#更为科学的空气细菌采样技术和仪器有待进一步研发$!#沉降法使用的可行性及表达方式的改进有报道证实采用沉降法采样$:&;+)所测定的空气菌落总数!?;&结果的差异在统计学上无显著意义&$结合本研究结果#我们认为对于洁净度高%气流小且稳定%采样时间较长!A:&;+)且需要采集空气体积较大的环境#可考虑选用沉降法作为空气细菌采样方法$如果平皿的制造精度高#每个平皿直径均是8;#误差不大#沉降法的结果表达可以?皿来表示$如果平皿的直径与8;差异较大#需要以8;标准直径校正测定结果#以确保结果的准确性$直径校正系数为!8!$?!B!为平皿具体的直径#!8!$CD?!E!F$以单位暴露面积!#单位暴露时间!#捕获多少菌落数!来计算和表达监测结果B?!#F较为科学#具体方式可为?D;!G;+)H4为便于测定结果的相互比较建议以?!;G$;+)表示$该方法也适用于采用沉降法测定其他场所空气细菌结果的表达$!本研究得到黄荣副主任医师的悉心指导#谨此致谢$参考文献!IJ?K%A!#8%L!8公共场所卫生标准检验方法4公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定(M)8许桂华4龙德环4高国强4等8卫生监督培训教材 公共场所卫生分册(5)8北京*工商出版社4%8NLN&8尹先人#高文新#尚翠娥#等8公共场所空气细菌的评价方法研究()8卫生研究O%#!&P%H*!L!8陈丽华O付亚书O范会弟O等8撞击法和沉降法监测室内空气微生物结果比较()8中国公共卫生O%O%$!&*!李燕8撞击法和沉降法监测室内空气微生物结果比较()8广西预防医学O!O$!N*!AL&8IJ NN&L%N8公共场所卫生标准(M)8IJ?K%AAA&L!8室内空气质量标准(M)8李燕8撞击法监测室内空气微生物稳定性研究()8环境与健康杂志O!O%Q!N*&$A8王玉寅#赵琴#孙宝珍O等8空气细菌总数测定自然沉降法采样时间对结果的影响()8中国公共卫生检验杂志O!%O%!%*#8!收稿日期!&R%!R%!&%&!&#&$&N&Q&A&文章编号!%R$%#!#&R%$!R%一起福氏志贺菌 S 变种引起细菌性痢疾暴发流行的调查钟金群!潘明亮关键词!志贺菌#福氏+痢疾#杆菌性+卫生调查中图分类号!T%A%8A文献标识码!(!年广东省清远市某收容所发生一起由福氏志贺菌S变种!痢疾杆菌引起的细菌性痢疾暴发流行$经调查#收容区里%排共有A个房间$每个房间约!;!#通风较差$房间的一角用砖围起约%;高的矮墙作卫生间用$每个房间住的人数视收容人员多少而定#一般%:%$人左右$房子前面有%条水泥筑小水沟#沟水是从山上引流下来的长流山水#沟水主要用于清洗收容人员的餐具等$餐具清洗完#没有经过任何消毒就放一起$食用水为自来水$两名厨房工作人员均有体检合格证$#月份#中间%个房间首先出现%例病人后#接着各房间收容人员中陆续出现腹痛%腹泻%发热等症状的病人#且病例数急剧上升#临床初步诊断为痢疾$我们对&例患者和$名密切接触者取肛拭进行细菌培养#对门前水沟水%餐具等取样进行检验$生化试验及血清学分型鉴定的结果显示&例病人肛拭中%A例分离培养检出痢疾杆菌阳性菌株#其中直接分离及增菌分离同时检出痢疾杆菌阳性的%$例#直接分离阴性而增菌培养分离阳性的&例$例密切接触者肛拭中仅%例分离检出痢疾杆菌阳性菌株$所培养检出的%株痢疾杆菌阳性菌株的生化试验及血清学特征完全一致#与福氏志贺菌S变种特点相符O可以认定引起本次肠道传染病暴发流行的病原菌是福氏志贺菌S变种$水沟水是长流水#!份水样未检出肠道致病菌+#份餐具的棉拭涂抹样品经增菌分离未检出肠道致病菌$引起这次痢疾暴发流行的主要原因是卫生状况差O通风不良#住吃%排便都在同一个房间内$人群集中拥挤#潮湿$易感人群中营养条件差$首例病人没有及时隔离治疗#病人的粪便和物品没有及时进行消毒#使痢疾杆菌在人与人之间#人与物体之间#并通过粪便相互迅速传播而引起的暴发流行$病人的主要症状是*腹痛%腹泻%发热#发热一般是&A8$:&U$将病人实行隔离并实施规范治疗后全部治愈$我们同时对整个收容区进行全面环境清整和消毒$可见#预防和控制痢疾流行必须从控制传染源%切断传播途径和加强卫生防病知识宣传教育%增强人群体质着手*!%及早发现病人和带菌者#对病人及时隔离和彻底治疗#对从业人员应暂时调离工作岗位#对病人的粪便及所用物品应进行消毒$!严格管理好饮食%水%粪便等$!&加强卫生防病知识的宣传教育#养成良好的公共和个人卫生习惯$!收稿日期!&R%R!&,监督监测-!#.