突触相关蛋白25在成年期甲状腺功能减退症大鼠额叶内表达变化及甲状腺素治疗效应.pdf

基础研究基金项目：国家自然科学基金（）；安徽省自然科学基金（）作者简介：刘俊霞，硕士在读，：通讯作者：马维青，教授，硕士生导师，：突触相关蛋白 在成年期甲状腺功能减退症大鼠额叶内表达变化及甲状腺素治疗效应刘俊霞，贾雪梅，桂丽，朱德发，马维青（安徽合肥市第一人民医院内分泌科，；安徽医科大学综合实验室；安徽医科大学第一附属医院老年内分泌科）摘要 目的研究成年期甲状腺功能减退症（甲减）大鼠额叶内突触相关蛋白 （）的表达及甲状腺素替代治疗后的恢复状况，探讨甲减脑损伤及恢复的分子基础。方法用丙基硫氧嘧啶（）建立成年期大鼠甲减模型，采用放射免疫法测定甲减组、常规剂量甲状腺素替代治疗组、大剂量甲状腺素替代治疗组、健康对照组大鼠的血清甲状腺素水平，免疫组织化学方法分析四组大鼠额叶内 蛋白的表达情况。结果与健康对照组相比，甲减组大鼠血清、水平显著减低（）；常规剂量（）替代治疗后，血清、恢复至正常水平。甲减组额叶 、层 蛋白的表达水平显著高于健康对照组（）；常规剂量替代治疗组 表达水平与健康对照组比较未见明显差异；与甲减组相比，大剂量（）替代治疗组 表达水平在额叶各层显著减低（）。结论成年期甲减大鼠额叶 蛋白表达增多，常规及大剂量甲状腺素替代治疗后均可降低该蛋白表达，大剂量替代治疗后 表达水平更接近正常。关键词 甲状腺功能减退症；突触体相关蛋白质 ；额叶；激素替代疗法中图分类号：文献标识码：，（，）：突触是神经元与神经元之间，或神经元与非神经细胞（肌细胞、腺细胞等）之间的一种特化的细胞连接，化学突触由突触前膜、突触间隙和突触后膜三部分组成。突触通过神经递质来进行细胞间的信号传递，突触在形态和传递效能上的改变称为突触的可塑性。是突触前胞膜蛋白，作为神经中枢的可溶性甲基马来酰胺敏感融合蛋白附着蛋白受体（）核心复合体构成元素之一，直接参与中国临床保健杂志 年 月第 卷第 期 ，神经递质释放和神经元细胞可塑性的调节 。额叶是与学习记忆有关的关键脑区，本研究采用腹腔注射丙基硫氧嘧啶（，）诱导建立成年期甲状腺功能减退（甲减）模型，将成年期大鼠分为甲减组常规剂量替代治疗组、大剂量替代治疗组、健康对照组 组，以 为指标，采用免疫组织化学方法观察 在各组大鼠额叶的表达情况，探讨甲减对额叶内 表达的影响及不同剂量替代治疗后 的恢复程度。材料与方法 实验动物普通级健康成年 雄性大鼠 只，体质量 ，购自南京实验动物中心。标准实验条件下喂养，自然采光，所有大鼠自由进食、饮水。主要仪器及试剂 、（公司）；、采用放射免疫试剂盒（北方生物技术研究所），检测仪器为 型 管放射免疫 计数器；抗 蛋白多克隆抗体（，）；生物素标记羊抗兔 超敏试剂盒（，福州迈新）；显微镜（，），形态学图像分析系统（）。动物模型建立和标本制备适应性喂养 周后，将大鼠随机分为 组：甲减组常规剂量替代治疗组、大剂量替代治疗组、健康对照组。所有大鼠均喂养 周，甲 减 组 大 鼠 每 日 腹 腔 注 射 体质量 周；常规剂量替代治疗组、大剂量替代治疗组大鼠每日腹腔注射 体质量 周，第周起分别开始腹腔注射左旋 （，）和 ；对照组大鼠 周均每日腹腔注射同体积 氯化钠注射溶液。每周测体质量 次，根据体质量调整给药剂量。实验研究遵循“实验用动物管理和使用指南”。标本制备待测、的血清来源于腹主动脉血，脑标本来源于取血后在冰上迅速分离的脑组织，置于 多聚甲醛溶液中固定，修块，常规石蜡包埋，连续冠状切片，片厚 。甲状腺素水平测定血清、水平采用放射免疫法测定。免疫组织化学染色超敏 法行免疫组织化学检测。采用光学显微镜拍摄额叶 层（分子层）、层（外颗粒层）、层（外锥体细胞层）、层（内颗粒层）、层（内椎体细胞层），生物图像分析系统对额叶 、层 的免疫反应产物进行光密度值分析，以平均光密度（）作为分析指标。统计学处理数据以 表示，采用单因数方差分析，检验进行两组间比较，所有数据由 软件统计分析。结果 大鼠血清、水平与健康对照组相比，甲减组大鼠血清、水平显著减低，差异有统计学意义；常规剂量甲状腺素替代治疗后，血清、恢复至正常水平，差异无统计学意义；而大剂量替代治疗后血清、高于健康对照组，差异有统计学意义，见表 。表 各组大鼠血清、水平（）组别例数（）（）健康对照组 甲减组 常规剂量替代治疗组 大剂量替代治疗组 注：与对照组比较，大鼠额叶各层 蛋白表达的变化大鼠脑切片，肉眼可见额叶结构清晰，染色较强，呈棕黄色。光镜下观察健康对照组：在额叶 、层中广泛表达；层呈广泛棕黄色，细胞结构少，水平纤维较多；层主要见颗粒状致密排列的神经细胞，大部分为棕黄色；层范围较大，分为深、浅两个亚层，可见松散排列大小不等的锥体状细胞，少量星形细胞；层可见星形细胞和少量小锥体状细胞；层由三个亚层组成，由大锥体细胞和少量小星形细胞组成。甲减组 免疫反应的阳性颗粒在额叶各层的分布与健康对照组是相似的，阳性颗粒的密度不同，与对照组相比明显增多，层表现明显。常规剂量替代治疗组与大剂量替代治疗组 阳性颗粒各区域表达与健康对照组类似。见图 。量化分析各组大鼠额叶 、层 免疫反应产物的 值（见表 ）：甲减组大鼠额叶各层 免疫反应产物 值与健康对照组比较均增多，差异具有统计学意义（，）；常规剂量替代治疗组 值与健康对照组比较差异无统计学意义；大剂中国临床保健杂志 年 月第 卷第 期 ，表 各组大鼠额叶内 的表达情况（）组别例数分子层外颗粒层外锥体细胞层内颗粒层内椎体细胞层健康对照组 甲减组 常规剂量替代治疗组 大剂量替代治疗组 注：与健康对照组比较，与甲减组比较，量替代治疗组 的免疫反应产物在所有区域层次的 值与甲减组比较差异有统计学意义（，）。讨论 复合体是突触囊泡胞吐过程中的核心成分，是突触囊泡与突触前膜融合不可或缺的，其由三种蛋白质组成：位于突触前膜的 和突触小体相关蛋白 ；位于突触囊泡膜上的 。其中 是一种突触前胞膜蛋白，在大脑神经细胞中高度表达，与高突触可塑性的区域有关，其介导突触囊泡的锚定和融合，参与神经递质的组装、转运、停靠等过程，对神经递质的释放起重要作用 。主要调节神经元可塑性的胞吐作用。我们实验结果表明 在额叶 、层中广泛表达，提示其在突触囊泡含量丰富。表达的影响以 层最为显著，其原因可能是额叶 层中大部分区域为锥体细胞，锥体细胞有特征性的顶树突和树状骨针，其胞体局限在额叶 层细胞 。研究证实 能增加大脑皮质椎体神经元中树状骨针的数量及分布 。在本试验中，研究结果显示甲减组大鼠额叶突触小体内 表达较健康对照组明显增多。另有研究发现成年期甲减大鼠的腺垂体内和肾上腺神经内分泌细胞 表达显著增高 。在成年期甲状腺功能减退大鼠海马内也发现同样的结果 。提示在成年期甲状腺激素缺乏可引起额叶内 的表达增多，原因不清，报道显示甲状腺素减少时，表达可代偿性增多。另外，甲减时在神经元内能分解 的 依赖的细胞内蛋白水解酶类减少 。我们之前的研究发现甲状腺素缺乏所致脑损伤可以通过 替代治疗得到改善，提示 调节突触蛋白的表达，本试验给予甲减大鼠常规剂量替代治疗 周后，能使甲减大鼠血清甲状腺素恢复至正常水平，此时额叶内 的表达水平与健康对照组相比无统计学意义的差别，大剂量激素替代治疗后，表达水平更接近于健康对照组；另外与甲减组相比，大剂量替代治疗组有统计学意义上的恢复，常规剂量替代治疗后 表达水平的恢复无统计学意义，提示大剂量替代治疗较常规剂量替代治疗能够更好的恢复额叶内 的表达水平，原因可能是甲状腺激素主要是通过与其高亲和力的核受体结合发挥生理活性作用有关 ，大剂量甲状腺素替代治疗可使甲状腺激素更充分的占据核受体，从而充分发挥其生理活性。本实验提示成年期大鼠在甲状腺功能不足时额叶突触蛋白 表达出现变化，在左旋甲状腺素替代治疗 周血清甲状腺激素水平至正常时，的改变能够得到改善，与对照组相比差异无统计学意义。在激素替代治疗到甲状腺激素超过正常时，突触蛋白 的表达仍有进一步恢复的趋势，与对照组该蛋白的表达水平更接近。（本文图 见封 ）参考文献 ，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，中国临床保健杂志 年 月第 卷第 期 ，（）：，（）：詹圆，徐永霞，杨会云 成年期甲状腺功能减退症对大鼠海马突触小体相关蛋白表达的影响 中国临床保健杂志，（）：，：，（）：（收稿日期：）基础研究基金项目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目（）作者简介：金丽霞，博士，主治医师，：虫草肾茶胶囊对人肾小球系膜细胞分泌转化生长因子 及细胞外基质的影响金丽霞，宋立群，宋业旭（黑龙江中医药大学附属第一医院肾病科，哈尔滨 ）摘要 目的研究虫草肾茶胶囊对培养在高糖条件下系膜细胞（）分泌转化生长因子 （）及细胞外基质（）的影响，探讨其在糖尿病肾病（）防治中的意义。方法 应用血清药理学方法，制备虫草肾茶胶囊及福辛普利药物血清，利用酶联免疫吸附试验（）测定经体外培养的 在各种处理因素的作用下上清液中 、纤维连接蛋白和层粘连蛋白的表达情况，并以福辛普利为对照。结果高糖能明显促进 分泌 、纤维连接蛋白和层粘连蛋白（或 ）。而虫草肾茶胶囊能抑制 分泌 、纤维连接蛋白和层粘连蛋白，并呈一定量效关系（或 ），且某些方面明显优于福辛普利。结论高糖可促进 及 分泌，虫草肾茶胶囊能明显抑制高糖条件下 分泌 及 ，有助于预防糖尿病肾小球硬化的发生和发展。关键词 糖尿病肾病；肾小球系膜细胞；转化生长因子 ；细胞外基质；中草药中图分类号：文献标识码：，（，）（）（），（）；，（），；中国临床保健杂志 年 月第 卷第 期 ，