谷氨酰胺和丙氨酰一谷氨酰胺双肽影响人回结肠粘膜增殖的离体实验.pdf

第 1 0卷第 1期 2 0 0 2年 3月 中 国 临 床 营 养 杂 志 C HI N E S E J OUR NA L OF C L I NI C A L NL T RI T I O N V0 l l O N01 Ma r c h 2 0 0 2 国外论著 谷氨酰胺和丙氨酰一 谷氨酰胺双肽影响人回结肠粘膜增殖的离体实验 E ff e c t o f Gl u t a mi n e a n d Gl u t a r a i n e D i p e p t i d e o n Mu c o s a l o f t h e Hu ma n I l e um a n d Co l o n i n v i t r o P e t e r S t e h l e P e t e r F u e r s t“D e p a dme n l o f Me d i c i n e Un iv e r s i t y W i r z b u r g W o r z b u t g；a n d h r t i t u le f o r Bio lo g ic a l C h e mi s t a n d Nu t r i l io n U n i v e i l y o f H o h e n h e i r a H o h e n h e i m，G e r m a n y)摘要 背景 目的 各氨酰胺(G i n)对危重患者小肠上皮有一定营养作用 在肠l，营养时由于其不够稳定而 限制 了它的应用，但此不足可通过使用稳定的丙氨酰一 替氨酰胺双肽(A l a G i n)而克服。本研究 目的是验 证如下 假 设，即答氨酰胺或丙氨酰一 各氨酰胺双腱不但可 刺激回肠细胞增殖，而且可 刺激结肠细胞增殖，维护肠屏障功 能 方法将正常、回肠、近段结 肠、乙状结肠及直肠活检标率 分别加 人各氨酰胺(2 r m n o l L)、丙氨酰 一 各氨酰 胺 双肽(2 n u n o l L)、生理盐水(对照)，孵育 4小时 s期 的细胞用 5溴 2脱氧尿苷标记。对被标记的腺管纵 向切 片和静止期细 胞进行记教 结果 答氨酰氨和丙氨酰一 备氨酰瞎双肽可 刺激 回肠细胞、近段结肠 乙状结肠及 直肠 腺管细胞的增殖 在回肠标率，整个腺管的细 胞均被较 好的标记，而在 结肠则 主要 对腺管 的基底部分 有营养作用 结论谷氨酰胺 或丙氨酰 各氨酰胺双肚不但对回肠细胞 而且对鲒肠细胞有 营养作用 从而可阻止肠外营养时肠粘 膜萎缩，维护肠屏障功能。关键词 各氨酰胺 丙氨酰一 答氨酰胺双肽 回结肠 中国分类号Q 5 1 7 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 8 5 8 8 2(2 0 0 2)0 1 0 0 0 1 0 5 谷氨酰胺(G i n)是人体 内游离氨基酸池和血浆 中含量最丰富的氨基酸。人体内约 8 0 的谷氨酰胺 分布在骨髂肌，其浓度是血浆 的 3 O倍l l 1 肠道细胞 消耗的能量主要来源于骨骼肌中释放的谷氨酰胺 J。尽管在正常情况下谷氨酰胺为非必需氨基酸，但对 于危重和营养不 良患者，谷氨酰胺 为条件必需氨基 酸 I。在诸如手术、创伤脓毒症 等危 重情况下，细 胞 内的谷氨酰胺浓度 降低，体内各氨酰胺将很快耗 竭】。体内谷氨酰胺池 的耗竭会导致小肠上皮细胞 的萎缩，并可能损害肠屏障功能，促进细菌移位 。尽 管给危重和营养不 良患者补充谷氨酰胺在生 理上具有必要性，但 由于谷氨酰胺在高温消毒和存 储时不稳定，故尚无可供临床应用的商品。虽然 可通过在输注商用氨基酸溶液时加入结晶氨基酸的 方式提供游离谷氨酰胺，然需每 日在药房无菌问配 液及膜滤过消毒。谷氨酰胺的不稳定性可通过使 用稳定且易溶 的丙氨酰一 谷 氨酰胺双肽。t 1,1 2 1 和甘氨 酰一 谷氨酰胺双肽 加以克服。不 同实验条件的结果表明，谷氨酰胺对小肠有 营养作用 14,1 5 1，然而其对结肠枯膜的影响却知之甚 少。R o e d i g e r t 研 究 发 现，近 段结 肠 与 回肠 主 要 以 谷胺酰胺为营养，而远段结肠主要依赖于碳水化合 物经细菌发酵后产生的丁酸盐。本研究提出了两个 问题：(1)谷氨酰胺是否不仅 刺激回肠腺管细胞增殖，并同样作用于结肠?(2)稳 定的丙氨酰一 谷氨酰胺双肽能否产生与游离谷氨酰胺 同样的效果?材料和 方法 使用 C F 1 0 L型奥林 巴斯纤微结肠镜取正常枯膜 的活检标本。活检标本分别取 自回肠末端(距 回盲 瓣 1 0 c m 以内)、升结肠 和乙状结肠(距肛 缘 1 5 2 0 e m)。这 1 0例镜检患者为腹痛待查或大便潜血试 验 阳性者，其 中男 性 6例，女 性 4例；平均 年龄(5 2 8+5 5 9)岁(2 7 04岁)。内镜所见主要为痔疮，对患有炎性肠 病或 良恶性肿瘤者以及血小板计数异 常等凝血功能障碍者予以排除。镜检前夜禁食并 I：1 服 G o l y t e l y液行肠道准备。每位患者均获知情同意。将取 白 3个不同部位的活检标本立 即浸入含有 维普资讯 http:/ 2 中 国 临 床 营 养 杂 志 1 O卷 E We液、胎牛血清(1 0 v o l v o 1)、抗生素混合液(c i b c o，P 丑 i s l 掣，S c o t l a n d)的塑料瓶内。胎牛血清 内 含有少量的醋酸盐(约 2 0 p m o l L)，不会影响细胞 的增殖。3个不同部位的标本均在 1 5分钟内送 到实 验室开始孵育，并分别置于含有 3 上述溶液的细 胞培养皿的滤纸上，然后在底物中分别加入 2 m m o l L G i n(S i g m a C h e m i c a l C o，S t L o u i s，MO：由于其不稳 定 颓 临 时 配用)，2 m m o l L A l a G l n I I，2 m mo l L N a C I(对照组)。此研究设计可使取 自不同部位 的标本 在不同干预条件下具有可 比性。孵 育持续 4小时，足以观察到结肠细胞的增殖变化-2 o 。培养箱(B i l l-u p s R o t h e n b u r g I n c，D e l M a r，C A)内温 度为 3 7，并 以 1 L mi n的 流 量 持 续 灌 人 C O 2气 体(9 5 0 5 C O 2)，同时将 3 x 3培养皿置于摇床以 1 O ra i n 轻 轻转 动。增殖细胞采用 5溴 一 2脱氧尿苷(B r d U r d)免疫 组化方法标记m ”。经过 5小时的孵育，加入 2 0 0 m o l L B I d u r d(S i g m a 1和 2 0 m o l L氟 脱 氧 尿 嘧 啶 核 苷(S i g m a)再孵育 2小时，然后在 9 5 的乙醇中固定 1 2 小时，此步骤 可促进标本包埋人 P a r a p l a s t(M o n o j e c t S c i e n t i fi c，A t h y，I r e l a n d)时 的定位：用 L e i t z 切 片机(L e i t z，We t z l a r，G e r m a n y)将 标本切成 2 Ix m厚 的切 片，用 2 m o l L H C I 作 用 3 0 rai n使 D N A变性。鼠 抗 一 B I d r d f n o 7 5 舯，B e c t o n Di c k i n s o n，S a n J o s e，C A)抗体作为第一抗体(1：1 0 0稀释，1小时孵育)，第二 抗体为生物素标记的鼠抗一 免疫球蛋白抗体(1：1 0 0 稀 释，3 0分钟孵育，R P N1 0 0 1；A m e r s h a m B u c k i n g-h a m s h i r e，E n g l and)经生物素标记 的链 亲和素(1：1 0 0稀释，R P N1 0 5 1；A m e r s h an)孵 育 3 O分钟用 二 氨基 联 苯胺 溶 液(0 5 g L；S e r v a，H e i d e l b e r g，G e rma n y)显影，用 O 1 5 N i C 1 2 和 0 1 5 C o C 1 2 作 为增感剂。除非特殊需要所有操作均在室温下进行。最后，切片用核固红染色。组织 切片用 6 2 5倍 L a b o d u x S显 微镜(Loi t z)镜检。采用 L i p k i n等 描述的方法，在 4 0个格 内 行纵切腺管 B I d u I d 标记细胞和总细胞计数：每个 腺管的平均标记指数u)为标记的细胞 除以细胞 总数。并计算总 u 和区间 L I(第 1区，基底部；第 5区，腺管表面)，以了解标记细胞的分布情况。另 外，第 4区和第 5区被标记的细胞数除以被标记的 细胞总数的 q b h值 是反映过量增殖的重要参数，常 见 于癌前病变区I I。在 回肠标本，还观察绒毛数、绒毛高度和绒毛 隐窝比。数据 以i i 表示。G l n、A l a-G l n、N a C 1 3组的 比较 采用 F r i e d m an s b l o c k检 验。据 Wi l c o x o n和 Wi l c o x法非参数检验 比较不 同组间的差异。近段和 远段结肠的数据处理采用 Wi l c o x o n r a n k fl n ll l 非参数 检验。P 0 0 5表示差异有显著性，统计软件采用 N C S S(U n i s o f t，A u g s b u r g，G e r m a n y)软件包。结 果 谷氨酰胺和稳定的丙氨酰一 谷氨酰胺双肽不但可 以刺激 回肠细胞 增殖，而且还可 以刺激结肠 细胞(包括近段及乙状结肠)增殖。回肠腺管长度(等于 每个腺管的细胞总数)短于结肠腺管长度，腺管长 度不受谷氨酰胺和丙氨酰一 谷氨酰胺双肽的影响。然 而，被 B r d U r d标记细胞的细胞数在 3个不同部位谷 氨酰胺和丙氨酰一 谷氨酰胺双肽组均高于对照组。在 回肠标本，G l n和 A l a G l n可明显增加整个腺 管及所有 5个 区的标记指 数(I J1)。即 G l n和 A l a G l n 对腺管底部和顶部 的营养作用是相同的，G l n和 A l a G l n的作用大小是等同的(表 1)。表 1 回肠细胞的增殖 G 】a _ Gi n NC l 数据 以is i表示；标 记指 数(L I)为标记的细咆除以细胞总数；*G i n或 A l a an与对照组 比较 P0 O I；G i n或 G ln与对照 组比较 P0 0 5 在 回肠，不同组间纵向切片绒毛 的数量和高度(以线状排列的细胞数表示)差异无显著性。隐窝 绒 毛 的比值 分别 是 2 7(G i n)、2 5(A l a G i n)、2 4 (对 照)(p=N S)。在近段结肠，G i n和 A l 丑 G l n明显增加 了整个腺 维普资讯 http:/ 1 期 答氨酰胺和丙氨酰一 各氨酰胺驳肚影响人回结肠牯膜增殖 的离体实验 3 管的总 L I；G l n和 A l a G l n间效果无明显差异。与回 肠标本 不同，G l n和 A l a-G l n的营养作用主要局限在 结肠的基底部位。与 N a C 1 相 比，A l a-G l n主要增高 l 3区的 u值，G i n增高 1 区的 u 值。反映腺管 内增殖区上移 的 d P h值 不受 an和 A l a G l n的影响(表 2)。表 2近段结肠细胞的增殖 数据 iR I 表示；标记 指数(L I)为标记 的细胞踪 细胞 邑数；h 值 为第 4区 和第 5区被标 记的细胞数 际 被 标记的细胞总数；*G l n 或 J a c l n与对照组比较 P0 0 1 与 N a C 1 相 比，G i n和 A l a G l n增加 了直肠、乙 状结 肠整 个腺 管 的总 L I，G l n和 A l a-G l n问效果无 明 显差异；A l a G l n和 G l n仅增高 l 3区腺管的 u 值。各组问的 dP h值差异无显著性(表 3)。表 3 直肠、乙状结肠 细胞的增殖 敷据以 i s，表示 标记指数(L I)为标记 的细胞睬以细咆总数：h值 为第 4匠和第 5区被标记 的细胞 敖除以被标记 的细胞总数；G l n或 l G i n与对照组比较 P0 (】1 I G i n或 l G i n与对照组 比较 P 0 0 5 结肠不同部位在相同的干预下(如 an对近段 和远段的作用)差异无显著性，谷氨酰胺和丙氨酰一 谷氨酰胺 双胩均可相等地刺激结肠近段及远段结肠 细胞增殖。讨 论 本实验研究了谷氨酰胺和丙氨酰一 谷氨酰胺双胩 对人回肠及结肠活检细胞增殖的影响。U s u g a z l e等I 对结肠、B r o w n i n g和 T e 圳对小肠的研究发现，活检 细胞 的复制至 少需 2 4小时的体外培养。而我们实 验室研究发现，4小时的孵育足可观察到短链脂肪 酸I I和脱 氧胆 酸 2 0 1诱导 的结肠 细胞增殖 的改变。因而，可认为本实验条件能较好地显示游离谷氨 酰 胺和含谷氨酰胺的双肽对人 回肠及结肠粘膜细胞 复 制的影响。所用谷氨酰胺和丙氨酰一 谷氨酰胺双胩的 浓 度 为 2 m m o l L。血 浆中 G l n的生 理浓度 为 5 0 0 7 0 0 I z m o l L，静 脉 输 注 G l n和 A l a-G l n时 可达 到 1 7 re to o l -9 1；细胞 内浓度高于血浆(在肌肉干燥 的 固体 中约 1 2 r n mo l L，肝脏 约 为 6 mm o l L)。Wi n d m u e n e r和 S p a e t h 2 9 1的研究 发现，小肠上 皮细胞主要以 G l n为能量来源行氧化代谢。这些有 益的营养 可能会促进 细胞进入 s期，因而可能促进 细胞增殖。然而，氧化代谢与 D N A台成的关系尚 未明确。本研究试图在体外通过 an可增加 B r d U r d 结台 到腺管 细胞的数量，而显示 G l n的营养作用。回肠粘膜的形态学参数(隐窝的长度、绒毛的高度、隐窝 绒毛的比值)的变化与 w矗 g h t 3 1 1 的研究类似，并不受 an的影 响。而经 G l n孵育后可明显增加整 个腺管及所有 5个区的 u，腺管内被标记细胞 的分 布并无改变。与结肠不同 u 分布类似典型的短 回 肠腺管。总之，G l n可增加 B r d U r d结台到回肠腺 管细胞的数量，显示的 an的营养作用与其他研究 者的结果相符，l。本研究重点在 于观察 给予游离谷氨酰胺是 否不 仅刺激 回肠细胞增殖，而且还可刺激近段及远 段结 肠细胞增殖 R o e d i g e r t 曾发现，谷氨酰胺对近段结 肠细胞有刺激作用；研究中还发现近段结肠细胞与 小肠细胞的代谢特点相似，而远段结肠细胞主要依 赖于丁酸盐 为有氧代谢的原料 我们的研究发现，谷氨酰氨可以等同地刺激近段结肠、乙状结肠及直 肠腺管细胞的增殖，其主要对腺管的底部 1 3区(即 生理性增殖区)有营养作用1 3 2,3 3 l。an可明显增高近 维普资讯 http:/ 4 中 国 临 床 营 养 杂 志 1 0卷 段结肠腺管上部 4区的 u值。一般来说，过度的增 殖可能增高癌变的风险。然而，反映过度增殖的 另一个标志 q b h值却无改变。因而，可以将谷氨酰 胺 看作近 段 及远 段结 肠 上 皮细 胞 的营 养 因子，尚无 可诱导肿瘤样过度增生的证据。R o e d i g e r t 的研究 数据表明，谷氨酰胺在远段结肠细胞是比丁酸盐更 为重 要的有 氧代谢 的原 料，与我们 的结果 不符。G l n在高温消毒和存储时不稳定 O l，尚无可供 临床应用 的商品。给予稳定且易溶的丙氨 酰一 谷氨 酰胺双肽不仅可刺激回肠细胞增殖、而且还可刺激 近段及远段结肠细胞增殖，并且双胩能产生与游离 谷 氨 酰胺 同样 的效 果。丙 氨 酰一谷 氨 酰 胺 双 肽(A l a G l n)可被 有效 吸收 其释放的游 离 G l n町刺 激D N A的合成。双肽水解的机制和部位(细胞 内 或外)尚不明确。H 梯 度可促进双肽在肠 管 内的 转运，而游离 G l n的转运依赖于 N a 梯度 I。在我 们的实验 条件下并没有提供 H 梯度，似乎完整的双 肽不能转运到肠细胞的胞质内：因而，双肽需在细 胞外水解释放出G l n并在 介导下起作用。在细胞 外膜双肽酶可迅速水解双肽 这 酶见 于肝脏、血 浆t 删 肌 细 胞 膜t 圳 内，以 及 人空 肠 囊 泡 的刷 状 缘 町 趣及基底膜 4 3 ，并存于鼠及兔的肠粘膜。正 如 A r d a wi I 在 鼠结肠细胞发现，游离谷氨酰胺 的有效 吸收需经载体介导的转运系统。A l a G i n可迅速水解 产生游离谷氨酰胺，这或 许可 解 释双胩能产生与 游离谷氨酰胺同样的效果。A l a-G l n及游离 G l n可刺激 回结肠细胞增殖是否 代表了其真实的生理作用和 或临床益处，动物实 验的结 果是肯定的。在禁食 同时输注不含 G l n的肠 外营养时在正常t 4 和脓毒血症鼠”，以及给予腹部照 射 氨甲蝶呤”或 5-F U I i 化疗情况下，均可导致肠粘 膜萎缩并可能损害肠 屏障功能。有 实验 已证实 G i n 可逆转肠牯膜萎缩并 阻止细菌移位。最近有临床 研 究发现，A l a G l n 可避 免创伤 时因输入 不含 G l n 的肠外营养时 的肠牯膜萎缩 圳。园大肠 比十二指 肠、空肠、回肠含有更多的细菌，故维护结肠的屏 障功能至关重要。总之，A l a G l n及游离 G l n 对结肠 细胞的营养作用可能具有重要临床意义。参 考文献 1 1 B e r g s t r o e m L F u e m t P，N o me L O，I n t r a c e l l u l a r f r e e a mi n 0 a c i d c o n c e n t r a t i o n i n h u ma n mu s c l e t i s s u e 【J 1 J A p p l P h y s o l，1 9 7 4，3 6：6 9 3 6 9 7 2】Wi n d m u e l l e r H G S p a e t h A E R e s p i r a t o r y f u e l s and n i t r o g e n me t a bo l i s m i n z li 3 o i n s ma l l i n t e s t i n e o f f e d r a t s：q u a n t i t a t i v e i mp o r t an c e o f g l u t a r n i n e，g l u ta ma t e an d a s p a r l a t e J l J B i d C h e m，1 9 8 0 2 2 5：1 0 7 1 1 2 3 S o u b a ww，S mit h R J Wi l mo r e D W G l u t a mi n e me t a b o l i s m b y t h e i n t e s t i n e t r a c t J 1 J P a x e n t e r E n t e r al 1 9 85、9：60 8 61 7 【4】S o u h a ww G l u lam i n e：a k e y s u h s t r a t e f o r t h e s p l a n c h n i e b e d l J _ A n n u R e v N u t r 1 9 9 1 1 1：2 8 3 3 0 8 l 5 15 L a c e y J M、Wi l r n o r e D W I s G l u t a mi n e a(n d it i o n al l y e s s e n t i a l a m i n o a c i d?N u t r R e v，1 9 9 0 4 8：2 9 7 3 0 q 6 1 V i n t m r s E、B e r g s t r o e m J F u e r s t P h d l u e n c e o f t h e p o s I o p e r a t l v e s t a l e o n t h e i n l r a c e l l u l a r f r e e a m i n o a c i d s i n h u m a n m u s c l e t i s s u e J 1 A n n s u ，1 9 7 5，1 8 2：6 6 5 6 7 1 【7 F u r s t P 1 n t r a c e l l u l a r a m i n o a c i d s t h e i r m e a s u r e m e n t and f u n c t i o n J】?r o c N u t r S ，1 9 9 1，1 0：1 8 6 1 9 2 【8 K h a n K，E l l a M F a c t o r s a f f e c t i n g t h e s t a b i l i t y-o f L-一 m a r i n e i n s o l u t i o n J l C l i n N u t r，1 9 9 1，1 0：1 8 6 1 9 2 _ 9 19 K h an K，H a r d G，M e E l r W B，T h e s t a b i l i t y o f L G l u l a mi n e i n I o l al p a r e n l e r al n u t f t i o n s o l u t i o n s【J l _ C l i n Nu l r 1 9 9 1，1 0：1 9 3 1 9 8 【1 0 F u m t P A l bor s S，S t e h l e P G lu t a m i n e c o n t a i n i n g d i p e p t i d e s i n p a r e n t e r a l n u t fi l i o n【J l J P a t e n t e r E n t e r al N u t r，1 99 0 1 4：l 1 8 s 1 2 4s r 1 1 1 S t e Me P Me t r e s N，P u c h s l e i n Ce t E f f e c t o f p a r l e r a l g l u l a,i n e p e p l i d e s u p p l e me n t s o n mu s c l e g l u l a mi n e l o s s a n d n i t r o g e n b al a n c ea f t e r n j o T s u r g e ry【J l L a n c e t，1 9 8 9，1：2 3 1 2 3 3 1 2 H a m m a r q v i s t F，We me r t n a n J，V o n d e r D e c k e n A，e t M an y -g u m mi n e c o u n t e -a c l s the d e p l e d o n o f fl e e u t a m i n e an d the p t o p e r a t i v e d e c l i n e in p r o t e i n s y n th e s i s i n s k e l e t a l m u s e d l J _ A n n S u r g 1 9 9 0，2 1 2：6 3 7 6 4 4 1 3 1 V a n d e r H u k l R RWJ，V an K r e d B K，V o n Me y e n f e l d t MF，e t Gl ut a mi n e a nd t h e p r e s e r v at i o n o f g ut n t e t y c e t，1 9 9 3，3 4 1：1 3 6 3 1 3 6 5 1 4 F o x A D，K r l p k e S A，D e p a u l a J，e t E ff e c t o f a S fu a mi n e s u p p l e me n t e d e n t e r al d l e l o n me t h e l r e x a t e i n d u c e d e n t e r o c o l i t i s J 1 J P a i n t e r E n t e r a l N u t r 1 9 8 8，1 2：3 2 5 33 1 【1 5】h r d a w i M S ME ff e c t o f g l u t a m i n e s u p p l e m e n t e d t o ta l p a r e n t e r al n u t r i t i o n o n t h e s m al l b o w e l o f s e p t i c r a t s【J _ C l i n N u t r，1 9 9 2，1 1：2 0 7 2 1 5 1 6 R o e d i g e r WE WR o l e o f ana e m b i e b a c t e ri a i n t h e m e t a bol i e w e l f a r e o f t h e c o l o n i c m u e a J 1 l G u t，1 9 8 0，2 1：7 93 7 98 1 7 1 S t e h l e P 1 B a h s i t t a HP，Mo n t e r B，e t P a p a i n-c a t aly s e d s mt h e s i s o f d e p e p t i d e s：a n o v e l a p p r o a c h u s i n g f r e e am i n o aci d s a s n u e l e o p h il e s E n z y me Mi e rob i o l T e almal，1 9 9 0,1 2：维普资讯 http:/ 1 期 备氨酰胺和丙氨酰一 谷氨酰胺双脑影 响 回结肠粘膜增殖的离俸实验 5 6 60 1 8 U s u g a n e M，F u j i t a M，L i p k i n M，e f C e l l p r o l i f e r a t i o n i n e x p l a n t e u t u r e s o f h u m a n c o l o n f J _D i g e s t i o n，1 9 8 2，2 4：2 25 23 3 1 9 S e h e p p a c h W，B a r a m P，R i c h t e r A，e t E ff e e t o f s h o r t c h a i n f a t t y a c i d s o f t h e h u m a n c o l o n i c m u e o s a i n 女 m 33 J P a r e n tar E n t e r s 1 N u t r，1 9 9 2，1 6：4 3-4 8 2 0】B a r t r a m H P，S c h e p p a c h W，S c h r a i d t l，e t P r o l i f e r a t i o n o f 1 u ma r t e alo n i e mu c 0 s a a s a i n t e r me d i a te b io ma r k e r o f c a r c i n o g e n e s i s：e f f e c t s o f b u t y a-a t e d e o x y ab o l a to，c a l c i u m,a m m o n i a，a n d P H 33 C a n c e r R e s，1 9 9 3，5 3：3 2 8 3-3 2 8 8 2 1 we l b e r g J WM，D e V fi e s E G E，H a r d o n k MJ，e t P r o l i f e r a t i o n r a t e o f c o l o n i c m u c osa i n n o mu a l s u b j e c t s a n d p a t i e n t s,i t h c o l o n i c n e o p l a s ms：a r e fi n e d i mmu n o h i s to c h e m i c a l m e t h o d33 J C li n P a t h o l，1 9 9 0，4 3：4 5 3-45 6 【2 2】L i p k i n M，E n k e r WE，Wi n a w e r S T ri t i a t e d h v m i d i n e l abe l i n g o f r e c t a l e p i the l i a l c e l l s i n n o n-p r e p h i o p s i e s o f i n d i v i d u a l s i n a t i n c r e a s e d ri s k f o r c o l o n i c n e o p l a s i a_ J _ C a n n e r L e t t，1 9 8 7，3 7：1 5 3 1 6 1 2 3】Hp kln M，B l a t t n e r M E，F r a u m m e n i J F，e t T r i t i a t e d t h y m i d i n e(p，h)l abe l i n g d i s tri b u t i o n a 8 a m a r k e r for h e r e d i t a r y p re d i s p,s i t i o n t o c o l o n C O I I C e T 33 C anc e r R e s，1 9 8 3 4 3：1 8 9 9 1 9 0 4 f 2 4】D mw n i a g T H，T ri e r J S O r g a n e u l ta r e o f 0 s a l b i o p s i e s o f h u m a n s in a i l i n t e s t i n e f 33 J C l i n I n v e s t，1 9 6 9，4 8：l 4 2 3-l 4 2 7 【2 5 A l bor s S，We me r m a n L，S t abl e P e t n f A v a i l a b i l i t y o f a mi n o a c i d s s u p p l i e d i n t l a v e n o u s l y i t r h e a l t h y ma n a s s y n t h e t i c d i p e p l i d e s：k i n e t i c e v alt J a t foJ o f L dh GI s a n d gl y e l y-L-t y r o s i n e 33 C l i n S c i，1 9 8 8，7 5：4 6 3-46 8 2 6 A l b e r s S，We me r m a n J S t abl e P，e t A v a i l a b i l i t y o f a mi n o-a c i d s s u p p l i e d h y 4,o n s t a n t i n t r a v e n o u s i n f u s i n g o f s y n t h e t i c d i p e p t i d e s i n h e al t h y m a n C l i n S c i，1 9 8 9，7 6：6 4 3 6 4 8 2 7】K a 3 1 e r J，R u t h E S t e h l e P，e t I n fl u e n c e o f G l u t a m i n e c o n t a i n i n g d i p e p t i d e s o n mu s c l e am i n o a c i d m etab o l is mI n：Ha r li g D ie l z e，We i n e r F u e t s t，e d s N u t r i t i o n i n c l i n i c al p r a c t i c e f M _B a s e l：K a 1 9 8 9 5 6-7 0 I 2 8 F u e r s t P R e g u l a t i o n o f i n t r a c e l fu l a t m e t a b o l i s m o f a m i n o a c i d s I n：B o z z e t t i Di o n i g i e d s N u t r i t i o n i n c a n c e r a n d t r a u ma s e p s i s M _ B a s e l：K a l g e r 1 9 8 4 2 1-5 3 2 9】Wi n d m u all e r H G，S p a e t h A E I d e n t i fi c a t i o n o f K e t o n e b o d i e s a n d g l u t a m i n e a s t h e m a j o r r e s p i r a t o r yf u e l s i n 0 f o r p o s t a b s o i v e r a t s m a l l i n t e s ti n e【J B i d C h e m，1 9 7 8，2 5 3：6 9-7 6 3 0 M c k e e h a n wL G l y c o l y s i s gl u t a m i n o l y s i s a n d c e l l p r o l i f-e r a t i o n 33 C e l l B in l l n t R e p o r t s，i 9 8 2，6：6 3 5-6 5 0 I 3 1 Wr i s h t N e b i o l o o f e p i t h e l i al l p o a t i o n s 咖 V o l 2 O x f o r d，E n g l a n d：C l a r e d o n，1 9 8 4 3 2 1 kp k i n M B i o m a r k e r s o f i n c r e a s e d s u s c e p li b i l i t y t o g a s t m i n-tas t i n al c s tfl e e r：I l e w a p p l i c a t io n t o 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