3-唾液淀粉酶活性的观察优秀PPT.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,实验三 唾液淀粉酶活性的观察,动物医学院动物生化教研室,2,掌握酶的催化活性，酶的高效性和特异性,了解各种因素（如温度、,pH,及一些化学物质）对酶活性的影响,唾液淀粉酶的制备和活性观察,一、实验目的,3,二、实验原理,酶是生物体内具有催化功能的生物大分子，也叫,生物催化剂。,酶活性,:,酶的催化能力,用催化化学反应的速度表示,酶活性的测定方法：,1,）定底物,2,）定时间,影响酶活性的因素是多方面的，如,温度、,pH,激活剂和抑制剂,等都会影响酶的催化活性。,二、实验原理,pH,值的影响,:,能使酶活性达到最高时的,pH,值，称为该酶的最适,pH,。,温度的影响,:,在一定温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速度增加，直至达到最大值。在一定条件下，能使酶活性达到最高的温度即酶的最适温度,。,激活剂和抑制剂的影响,:,能增高酶活性的物质即称为酶的激活剂，能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。,4,本实验以,淀粉,为底物,淀粉酶作用下得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。用碘液检查酶促淀粉的水解程度，来说明温度、,pH,及化学物质对酶活力的影响。,淀粉酶,淀粉酶,淀粉,糊精,麦芽糖,+,少量葡萄糖,加碘后；（,兰色,）（,紫红色、暗褐色或红色,等）,（棕黄色，碘本身颜色）,5,二、实验原理,影响酶活性的因素,1,）温度,2,）,pH 3,）激活剂和抑制剂,酶的特性（专一性）,还原糖和斑氏（,Benedict,）试剂的反应原理,C,6,H,12,O,6,+2Cu(OH),2,C,5,H,11,O,5,.COOH +,Cu,2,O,+2H,2,O,OH,-,加热,实验原理,6,三、试剂及器材,1.,试剂,（,1,）,0.5%(w/v),淀粉溶液,（,2,）稀碘溶液,（,3,）不同,pH,缓冲液,(pH5.0,、,6.8,、,8.0),（,4,）,1%(w/v)NaCl,溶液,（,5,）,1%(w/v)CuSO,4,溶液,2.,器材,比色板、水浴锅、刻度吸管及滴管,7,四操作步骤,1.,温度对酶活力的影响,取,3,支试管，编号后按下表操作,:,8,试管编号,1,2,3,0.5%,淀粉,5,5,5,pH 6.8,缓冲液,0.5,0.5,0.5,反应条件,置冰水浴中,置,37,水浴中,置沸水浴中,稀释唾液,1,1,1,单位：,mL,在干净的比色板上，于各孔穴中分别滴加,2,滴碘液。,每隔,1min,从第,2,支试管中取反应液,1,滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。,待第,2,支试管中的反应液与比色板孔穴中的碘液混合后颜色呈棕色时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液,1-3,滴。,摇匀后观察并记录各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，说明温度对酶活性的影响。,9,2.pH,值对酶活力的影响,取,3,支试管，按下表编号后进行实验。,10,四、操作步骤,单位：,mL,试剂,1,2,3,0.5%,淀粉,2,2,2,pH 5.0,缓冲液,2,pH 6.8,缓冲液,2,pH 8.0,缓冲液,2,稀释唾液,1,1,1,摇匀后，将各管置于,37,水浴中处理。,（,1,）每隔,1min,从,pH6.8,的试管中取出,1,滴反应液滴于预先滴加稀碘液的白瓷板上，观察其颜色变化。,（,2,）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液,1-3,滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，,解释,pH,对酶活性的影响,。,11,3.,酶反应的特异性,取,2,支试管，按下表编号后进行实验。,12,四、操作步骤,单位：,mL,试剂,1,2,0.5%,淀粉,2,0.5%,蔗糖,2,稀释唾液,1,1,将各管摇匀后，一起放入,37,水浴中保温,10min,。,取出试管，分别加入斑氏试剂,1 mL,，混匀。,将各管置于沸水浴中煮沸,2-5 min,。观察,并解释结果,。,13,4.,激活剂与抑制剂对酶活力的影响,取,3,支试管，按下表编号后进行实验。,14,四、操作步骤,单位：,mL,试剂,1,2,3,0.5%,淀粉,3,3,3,pH 6.8,缓冲液,0.5,0.5,0.5,1%NaCl,溶液,1,1%CuSO,4,溶液,1,蒸馏水,1,稀释唾液,1,1,1,注意事项,按讲义要求操作,酶同时放，唾液、淀粉摇匀,纱布不要扔在水池,值日：,5-6,组,15,