大鼠原位肾脏移植模型的显微外科技巧.pdf

动物模型 大鼠原位肾脏移植模型的显微外科技巧马毅何晓顺朱晓峰陈细桃陈规划作者单位：!#$#广州，中山大学附属第一医院器官移植中心（马毅、何晓顺、朱晓峰、陈规划）；中山大学医学实验动物中心（陈细桃）【摘要】目的探讨建立稳定、可靠的大鼠原位肾脏移植模型的显微外科手术技巧。方法供体手术经腹主动脉以%&乳酸钠林格注射液对供肾进行原位灌洗。受体手术采用将供肾的血管与受体的同名的血管作端端吻合的大鼠原位左肾移植。结果共施行大鼠原位肾脏移植手术#例，手术成功率为()!*；非干预组中，同系移植大鼠个月存活率为$)(*。结论肾动、静脉和输尿管的重建均采用端端吻合法而无须阻断腹主动脉和下腔静脉，大大减少了对受体循环系统的影响。该模型稳定性强、重复性好，适合于移植免疫的基础研究。【关键词】肾；移植；模型，动物；显微外科手术!#$%&$(#)*+,#-./,%0+-,1%2,*%0%$+-%+%3#4 2.,5+$).&3*).+)+%.$)+!#$，%&$()*+,-.，/%0$()*1 2.3，2 4(567 8 3(.9 8(.+:5(.4(4$).;2.4 2 8，9,2-.#(4*+2.0.$?2 8+$4，A-(.3 B,)-!#$#，+,-./【6 7&+$)#+】8 7 9,#+:,0 1 2 3 4 5 6 3,78-9:1 2 4:;-9/7 2 3/?-2,-.;/:7 -/?7:/38 1 5 7 1:3,1 3 1 -9A-5.7 6 3:/.2 3,7 A-5.7 6B 7:7 4 2,7 5B-3,/3 1 3/!8%&2 1 5-4 8/9 3/3 7C-.;7:2-.D 7 9 3-1.3,:1 4;,/?5 1 8-./1:3/)E 4:-.;1:3,1 3 1 -9A-5.7 6 3:/.2 F /.3/3-1.，5 1.1:2:7./:3 7:6，:7./G 7-./.5 4:7 3 7:B 7:7 D 1-.7 5 3 1:7./:7 9-F7.3 2B-3,7.5 F 3 1 F 7.5/./2 3 1 8 1 2-2:7 2 7 9 3-G 7 6);,&*+&C/3 1:3,1 3 1 -9A-5.7 6 3:/.2 1:8 7 5-.#9/2 7 2，/.5 3,7 2 4 9 9 7 2 2 4 3,78 1 5 7 B/2()!*)H.1.F-.3 7:G 7.3-1.;:1 4，3,7 2 4:FG-G/9 3 1:6，B-3,/.$)(*1 F 8 1.3,2 4:G-G/)%.#*&%.0,7 2 1 ,-2 3-9/3 7 58-9:1 2 4:F;-9/3 7 9,.-=4 7/.5 3,7 5 7 -9/3 7 2 4:;-9/8/.-4 7 2 3/?-2,-.;1:3,1 3 1 -9A-5.7 63:/.2 /.3/3-1.8 1 5 7 -.:/3)0,78 1 5 7 9 1 4 5?7:7 7/3 7 52 3/?6/.5?7 2 4-3/?1:-.G 7 2 3-;/3-1.1 3,7-8 8 4.-3 68 7 9,/.-2 81 1:;/.3:/.2%$2&】I-5.7 6；0:/.2 /.3/3-1.；J 1 5 7，/.-8/；J-9:1 2 4:;7:6由于对大鼠主要和次要组织相容性抗原了解较全面，手术过程相对简单，多年来大鼠肾移植一直被主要用于移植免疫和器官保存的研究。本实验旨在采用供肾的血管与受体的同名血管作端端吻合，施行大鼠原位肾移植#例，建立了一种稳定可靠的大鼠原位肾移植模型。材料和方法)材料：采用健康成年雄性的清洁级K-2 3/:大鼠（中山大学医学实验动物中心），体重#!L#;。饲养条件符合M N O标准。术前动物一般无需禁食、水。乙醚持续开放麻醉，在J+F J(#型单人双目手术显微镜下进行，单人操作，采用相对无菌技术。)手术方法：（）供体手术：麻醉后，动物取仰卧位，消毒术区皮肤。取腹部正中直切口，逐层进入腹腔。用自制的小拉钩将腹壁向两侧牵开固定和辅助暴露。（）供肾（左肾）获取：游离左肾动、静脉：首先游离左肾静脉。用*利多卡因!8 行左肾静脉被膜下注射，使肾血管周围的疏松组织和血管分支易于辨认及游离。结扎、切断左肾上腺静脉和左精索静脉，其他较小的静脉分支可用电灼器直接离断。向上推开左肾上腺及周围脂肪和淋巴结，电灼器离断这些组织与肾动脉（左肾动脉一般位于左肾静脉后上方）的连接，分别游离左肾静脉至下腔静脉，左肾动脉至腹主动脉。钝性分离肾动、静脉之间的结缔组织直至肾门附近其相互紧贴处。#游离左输尿管：在肾下极紧贴肾表面剪开后腹膜，用棉签将后腹膜及肾下极附近的脂肪组织推向左输尿管的右侧，暴露出左输尿管，在距其起始处#8 8（肾下极平面）将其斜行剪断。注意不可游离肾门脂肪组织，以免损伤供养输尿管的血管。$灌注：于腹主动脉插管后，在左肾动脉平面以上夹闭腹主动脉，然后靠近下腔静脉剪断左肾静脉后，即可行肾脏灌注。一般!8 灌注液已足够完全灌注供肾。见肾脏颜色变白以后，紧贴腹主动脉离断左肾动脉，移出肾脏，置于%&保存液中（图）。如在灌注中发现L体积的肾脏不变颜色，说明其存在动脉变异，应弃之不用。（L）受体手术：受体准备：受体术前肌注阿托品#)#L8;和所选的抗生素。麻醉方法、体位与供体手!中华实验外科杂志#!年(月第 卷第(期+,-.PQ R M 4:;，M 7 3 7 8?7:#!，S 1 ，T 1)(万方数据术相同。游离受体左肾动、静脉的方法与供肾手术大致相同。输尿管需在距其起始处约!处斜行剪断（斜口方向必须与供肾输尿管保持一致）。用小血管夹在紧靠腹主动脉和下腔静脉处分别先后阻断左肾动脉和左肾静脉。在左肾静脉的外#$处将其剪开离断，剥离附着于左肾动脉表面的左肾静脉起点段和结缔组织，在肾动脉分叉处横断，利用二个分支残端作一整形（将分叉间血管壁剪开），使其口径大小与供肾动脉的起始端匹配。!供肾植入（图%&）：肾动脉吻合：我们采用缝合法行肾动脉端端吻合。用#(尼龙缝线，相距#)*处作二针支持缝线，用持线器夹住，间断全层缝合前壁。为看清血管腔，一端支持线可留待前壁缝合完毕以后再打结。对调支持线位置，使后壁朝向前，完成后壁缝合（视血管腔大小缝合+)针）。注意在完成缝合前要冲洗动脉腔。肾静脉吻合：仍用#(尼龙缝线，相距#)*处作二针支持缝线，先连续缝合后壁，缝至对侧支持线处将缝针转向前壁，作一锁边吻合，随后连续缝合前壁至缝合起始点打结。注意不能将缝线收得过紧，以免造成吻合口缩窄。肾血管吻合完成后，先松开肾静脉血管夹，再松开肾动脉血管夹。如动脉吻合口有渗血，用可吸收止血纱布或明胶海绵环绕吻合口，棉签压迫片刻，通常可以达到止血目的。输尿管吻合：用#(缝线全层间断缝合供、受体输尿管。一般相距,*即等距缝合&针即可。右肾切除：受体的右肾可在术后$-由原切口进腹，将其切除。结果实验模型稳定后，行#%例大鼠肾移植术。供体手术时间为（%./$）0 1，热缺血时间%$2，冷缺血（包括低温灌洗、供肾修整和冷保存）时间（&/)）0 1，受体手术为（&!/+）0 1，总手术时间为（.)/+）0 1。非干预组中，对同系移植)%例观察术后存活情况。手术成功率为,3!4（因手术失败所致死亡绝大多数发生于术后#周内，且术后$-即仅有供肾存留，故此处手术成功率指#周存活率），#周内死亡.例，其中麻醉意外死亡#例，吻合口出血死亡#例，动脉栓塞死亡%例，静脉血栓形成死亡#例，输尿管狭窄死亡#例，泌尿系感染致肾功能衰竭死亡#例。)%例中，#个月存活率为)%3,4。讨论建立稳定的实验动物模型是进行动物实验的基础。目前，大鼠肾移植的方法较多，原位肾移植可将供肾的血管与受体的同名血管作端端吻合，也可将供肾的肾动脉和肾静脉与受体的腹主动脉和腔静脉在肾血管平面行端侧吻合#，%。我们采用供肾的血管与受体的同名血管作端端吻合以及全层间断缝合供、受体输尿管的方法，成功率,4以上，为肾移植基础研究和免疫药物筛选提供了稳定、可靠的动物模型。在游离供体肾脏时宜尽可能避免翻动肾脏，可节省时间和规范操作步骤，减少潜在的热缺血损伤。保存供肾的容器应保持保存液的温度处于&5。因大鼠肾静脉血管壁甚薄、肾动脉口径极小，取下肾脏后再修整不易辨认，故应尽可能在供体手术过程中将血管游离干净，且应记清其上下端的标记，以防止吻合时血管扭曲。修整供肾血管时即将肾动静脉两端各穿一针作牵引，可缩短血管吻合时间，也缩短了供肾移出冷保存液的时间。受体大鼠随后的左肾动、静脉和输尿管的重建均采用端端吻合法，仅用小血管夹在紧靠腹主动脉和下腔静脉处分别先后阻断左肾动脉和左肾静脉，无须阻断腹主动脉和下腔静脉，从而较以往报道的端侧吻合法相比，大大减少了对受体循环系统的影响，明显提高了手术成功率。另外，作者认为，供、受体肾动静脉口径大小的匹配非常重要，受体肾脏切除时可作斜面或大小的相应修整。其长径一定要与供肾血管断端保持一致，否则术后易致吻合口狭窄或动静脉主干狭窄。术中尽可能避免用力钳夹、拉扯供肾动脉内膜，动脉吻合时尽可能使吻合口内膜化，从而降低动脉血栓形成机率。在行肾动、静脉吻合时，由于其壁极薄，缝合时尤应注意轻柔细致，力争一次成功。注意在完成缝合前要冲洗动、静脉腔。吻合口小的渗血，用棉签压迫片刻，通常可以达到止血目的。在游离输尿管时，注意保留输尿管周围少许的脂肪组织，保护输尿管的血供。吻合时，一般输尿管吻合口针距相距,度，即等距缝合&针即可。我们采用供肾的血管与受体的同名血管作端端吻合以及全层间断缝合供、受体输尿管的方法，成功率,4以上，为肾移植基础研究和免疫药物筛选提供了稳定、可靠的动物模型。（本文图#&见封三）参考文献#6 7 189，:;?7 A B，:C D D -D G H 1 0 I;F C =D 3:0 G C 2;=，#,，#,：%.%(%.&3%:C 0 2L B，E 0 1 D -(G C 1 D 0 1;C;2 0 G C 2;?0 G 7 2;D;D G H 1 0 I;3:0 G C 2;=，#,%，#$：#$(#%!3（收稿日期：%!(&(#）+%#中华实验外科杂志%!年,月第%卷第,期P H 0 1BQ R KS;K D M%!，T C%，U C 3,万方数据万方数据大鼠原位肾脏移植模型的显微外科技巧大鼠原位肾脏移植模型的显微外科技巧作者：马毅，何晓顺，朱晓峰，陈细桃，陈规划作者单位：马毅,何晓顺,朱晓峰,陈规划(510080,广州,中山大学附属第一医院器官移植中心)，陈细桃(中山大学医学实验动物中心)刊名：中华实验外科杂志英文刊名：CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY年，卷(期)：2005,22(9)被引用次数：5次 参考文献(2条)参考文献(2条)1.Han WR;Murray-segal LJ;Mottram PL Modified technique for kidney transplantation in mice外文期刊 19992.Morris DJ;Pribaz JJ The interrupted-continuous microsurgical suture technique外文期刊 1992 本文读者也读过(10条)本文读者也读过(10条)1.张晓丽.马志中.胡运韬 视网膜静脉阻塞显微手术治疗的实验研究期刊论文-中华显微外科杂志2002,25(2)2.李德萍.王康.戴勇.吕天羽.Li-Deping.Wang Kang.Dai Yong.Lv-tianyu 供体存在副肾动脉时大鼠肾移植模型的建立期刊论文-国际泌尿系统杂志2008,28(3)3.赵彦宗.杜维成.郭喜桃.岳中瑾.ZHAO Yan-zong.DU Wei-cheng.GUO Xi-tao.YUE Zhong-Jin 一种新的大鼠原位肾移植模型的建立期刊论文-实验动物与比较医学2007,27(1)4.姜隽.姜睿 常用大鼠异位心脏移植模型的建立及应用期刊论文-泸州医学院学报2008,31(5)5.农绍军.温端改.樊彩斌.张志刚.NONG 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