浮游植物采集和定量.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验四 浮游植物采集和定量,1,一、实验目的：,1.掌握浮游植物,采集、浓缩,的常用方法；,2.了解,浮游植物计数框,的结构；学习、掌握,浮游植物计数的方法,。,2,二、实验原理：,应用显微镜的成像原理，并借助,浮游植物计数框,，计算单位体积,浮游植物,的数量。,3,三、实验仪器、用品,广口瓶、乳胶管（医用输液管）、浮游生物网、量筒、鲁哥氏液（碘液）、甲醛、标签纸。,光学显微镜、100l移液枪,、浮游植物计数框,4,调查工具,1、采水器,5,2.浮游生物网,采用特种尼龙布制成，网口圆形，网底呈圆锥状开口，网底开口处扎系开关阀门。定性样品采集(针对浮游植物、原生动物和轮虫等)采用25浮游生物网(网孔0.064mm)；枝角类和挠足类等浮游动物采用13 浮游生物网(网孔0.112mm)，在表层中拖滤13min。,6,3、透明度盘,4、广口瓶（标本瓶）,7,4.浮游植物定量：,8,5.浮游动物定量：,9,四、实验内容：,1.,采样点的选择。,海洋采样点的选择应与环境监测站相一致，或根据污染、赤潮发生范围等确定采样点。,2.,采样层次、采水量及采样次数。,水深15m以内的浅海，采表（水下0.5m）、底两层；水深大于15m，采表、中、底（距底0.5m）三层。,可分层采水，也可以各层采水等量混合采得,1000 ml水样,后装入广口塑料瓶，应立即加入,10-15 ml碘液,（即鲁哥氏液）固定。每一瓶都应有,标签标明时间、地点、站号、样品号、采水量、水层、温度等,。,采样次数：可以每月一次，一般每季度采样一次，最少要春季和夏末秋初各采一次。,鲁哥氏液配置方法：将6克碘化钾溶于20 ml水中，待其完全溶解后，加入4克碘充分摇动，待碘全部溶解后定容到100 ml。固定浓度为1L水样加10-15 ml鲁哥试剂。,10,定量样的采集,采集对象,采样量（升）,藻 类,12,原生动物、轮虫,微小甲壳动物,15,成熟甲壳动物,1050,11,四、实验内容：,3.,定量样品沉淀与浓缩,所采水样摇匀后倒入沉淀器中静置使浮游植物完全沉淀。沉淀是一种圆柱形分液漏斗。如无沉淀器也可用量筒、烧杯或在,原水样瓶中静置沉淀,。,静置沉淀24-48 h后。再用乳胶管或橡皮管（医用输液管）利用虹吸原理小心地抽出上部不含藻类的清液。一般约剩下20-40 ml沉淀物转入30或50 ml的定量瓶中，用上述清液冲洗沉淀器2-3次，洗液仍倒入定量瓶中使水量恰好达到30或50 ml。然后贴上标签，标签上要记载,采集时间、地点、采水量、站号、样品号、水层和温度,。,12,四、实验内容：,3.,沉淀与浓缩,虹吸动作要十分仔细、小心。开始时虹吸管一端放在沉淀器内约三分之二处，另一端套接在已经用手挤压出空气的橡皮球上，然后轻轻松手并移开橡皮球使清液流出，为了避免漂浮水面的一些微小藻类进入虹吸管而被吸走，管口应始终低于水面。虹吸管内清液的活动不宜过快，可用手指轻捏管壁以控制流量，当吸到原水样的3/5以上时，应使清液一滴一滴地流下。吸出的清液要用一,洁净的器皿装盛,，以便在浓缩过程在出故障时，可重新倒入沉淀器中浓缩，不必新采水。,13,将样品倒入量筒中沉淀浓缩,直接在广口瓶中浓缩，但要确定体积,14,4.,浮游植物定性：,浮游植物样品采集参照文献(国家环保总局，2002)的方法。定性样品用孔径约0.064 mm的,25号浮游生物网,在水面下约0.5 m处以适当的速度作“”字形来回拖动13 min，获得的浓缩样分为两份，一份立即用适量的鲁哥氏液固定，另一份活体样品于24小时内镜检。,15,5.,计数：计数一定体积内的浮游植物种类和数量,显微镜计数方法选择：,采用,行格法,或,镜头法,，确定计数行格和镜头内的浮游植物种类和数量。行格法一般每片计数3、5、8行/列中的植物；镜头法必须确定观察镜头（即视野光圈）的直径/面积，通过随机移动镜头，计数所有镜头内的藻类。,16,行格法按照计数玻片上的格子确定技术范围，,玻片样品池长x宽=20mmx20mm，即每列长x宽=20mmx2mm,计数水样体积=0.001mlx计数格数,17,镜头法需量测量镜头的直径d，实验室目前常用的镜头的视野直径：,d1=2000um（10 x），1000um（20 x），500um（40 x）,d2=1800um（10 x），900um（20 x），450um（40 x）,镜头面积=r,2,。,18,使用的工具有：,100l移液枪,（带有0.1毫升刻度的小吸管），,容量为0.1毫升的计数框,（面积2020毫米,2,）和具有移动台的,显微镜,。,用前可浸入70%的酒精中，用时取出，用细绢拭净，计数框用前以薄绸布拭净，用毕以水弄湿后轻拭或用水冲净。,19,取样计数时应注意以下方面：,将浓缩沉淀后水样充分摇匀（倒转摇）后，立即用,0.1ml,吸量管吸出,0.1ml,样品，注入,0.1ml,计数框内，小心盖上盖玻片（,2020,2,），在盖盖玻片时，要求计数框内没有气泡，样品不溢出计数框。然后在显微镜下计数。,在,400-600,倍的显微镜下观察计数，每个水样标本计数两次（二片），取其平均值，一每片计数,100,个视野，但具体观察的视野数以样品中浮游植物多少而酌情增减，如果平均每个视野有十几个时，数,50,个视野就够了，如果平均每个视野有,5-6,个时，就需数,100,个视野；如果平均每个视野不超过,1-2,个时，要数,200,个视野以上。,20,取样计数时应注意以下方面：,每瓶标本计数两片取其平均值。同一样品的两片计算结果和平均数之差应不大于其均数的,15,时，其均数视为有效结果，否则还必须测第三片，直至三片平均数与相近两数之差不超过均数的,15,为止。,在计数过程中，常碰到某些个体一部分在视野中，另一部分在视野外，这时可规定出在视野上半圈者计数，出现在下半圈者不计数。数量最好用细胞表示，对不宜用细胞数表示的群体或丝状体，应分细胞大小分类计数。,计数时记录保持整洁清晰，便于整理计算。应明确记录采样时间、地点、原水样体积、浓缩体积、计数片数和视野数。,21,数横条，最少不少于3条具体可自行掌握。,总之不论数视野还是数横条，每片计数到的浮游植物总数应达到200个（低浓度时）-500个（高浓度时）以上。,22,同一样品的二片计数结果与其均数之差距如果不大于其均数的,15%，这两个相近的值的均数即可视为计数结果。,例：计数第一个片为250个，计数第二片为246个,则两片的均数为（250+246）/2=248,均数与第一片之差：248-250=-2,均数与第二片之差：248-246=2,则：-2/248=-0.0081即-0.81%,2/248=+0.0081 即 0.81%,因为0.81%10%，所以上述相近值的均数应视为计数结果。,23,计算细胞密度的公式：,N=(A/A,c,）,(V,s,/V)n,式中，N为每升（L）原水样中浮游植物数量；,A为计数框的面积（mm,2,）（1 mm,2,）；,A,c,为计数面积（mm,2,）；,V,s,为1L原水样浓缩后的样品体积（ml）；,V为计数框的体积（ml）（0.1 ml）；n为计数所得浮游植物数目。,24,选择采样水体,及采样点,用采水器,采水1L,加15 ml,鲁哥氏液固定,沉淀24或48 h,浓缩至3050 ml,根据公式计算出采样水体中浮游植物的密度,取0.1 ml浓缩水样于体积为0.1 ml的浮游植物计数框内计数定量,图3 浮游植物采样、定量流程,25,作业：1.列表表示各种类浮游植物的数量及数量占总量的百分比。,表1 浮游植物细胞数量计数记录表,标本编号 站号 层次（m）采水量（L）,浓缩体积（ml）计数体积（ml）调查时间：年 月 日,种属名,计数（个）,平均（个）,数量（个/L）,第一片,第二片,硅藻种数（个）数量（个,）,甲藻种数（个）数量（个,）,其他种数（个）数量（个,）,26,思考题,：,1.在浮游植物定量过程中应注意哪些事项？,27,