高等教育动物细胞培养和核移植技术讲课.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,动物细胞培养,动物细胞融合,单克隆抗体制备,动物细胞,核移植,常用,技术,手段,（基础）,一、动物细胞培养,动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。,1,、概念：,原理：,细胞增殖,动物胚胎或幼龄,动物的组织、器官,细胞悬液,10,代细胞,50,代细胞,传代培养,无限传代,单个细胞,加培养液,原代培养,胰蛋白酶或胶原蛋白酶,剪碎,2,、过程,动物细胞培养,3,、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？,1,、动物细胞培养取材时，一般是取,胚胎组织或幼龄动物的组织或器官,，请解释原因？,不能,，因为动物细胞培养适宜的,PH,为,7.2,7.4,，此环境下胃蛋白酶没有活性。,胚胎组织或幼龄动物的组织或器官,生命力旺盛，分裂能力强,探究,2,、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？,先用剪刀,剪碎,后用,胰蛋白酶,或胶,原蛋白酶,处理,4.,什么叫,细胞贴壁,？,5.,什么叫,接触抑制,？,悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。,探究,6,、如何理解原代培养和传代培养？,8,、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？,9,、有些为何能一直传下去？,上述过程中，在第一培养瓶中培养就是,原代培养,，之后转移到其它培养瓶中培养就是,传代培养,遗传物质发生改变，朝着癌细胞方向发展,不都能,单个细胞传至十代左右,（分装前的细胞培养）,将原代细胞从培养瓶中取出，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养。,10,到,50,代的细胞，遗传物质没发生改变。,超过,50,代的细胞，遗传物质发生改变，可无限增殖。,有关概念,细胞贴壁,:,接触抑制,:,悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，,称为细胞贴壁。,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，就会停止分裂增殖，称为接触抑制。,原代培养：,传代培养：,细胞株：,细胞系：,补充,细胞悬浮液,10,代细胞,50,代细胞,无限传代,原代培养,传代培养,细胞株,细胞系,如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬液,10,代细胞,50,代细胞,无限传代,原代培养,传代培养,细胞株,细胞系,剪碎,胰蛋白酶处理,胰蛋白酶除了可消化细胞间的蛋白质外，,长时间作用也会消化细胞膜蛋白,，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。,细胞贴壁、接触抑制,培养液培养,2,、过程,1,、无菌、无毒,2,、营养（培养基成分）,3,、适宜的温度和,PH,值,4,、必要的气体条件,（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、,血清、血浆,等。,）,O,2,和,CO,2,3,、条件：,添加一定量的抗生素,定期更换培养液,培养液和培养器具无菌处理,培养基的不同是,动物细胞培养和植物组织培养最重要的区别,36.5,+,0.5,度,PH,为,7.2-7.4,CO,2,的主要作用是维持培养液的,PH,4,、应用,大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）,基因工程的受体细胞,培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性,用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据,细胞的全能性,细胞株、细胞系,植株,培养结果,获得细胞,或细胞产物,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,动物血清,植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物细胞和动物细胞培养的比较,二、动物细胞核移植技术和克隆动物,1.,动物细胞核移植的概念、种类：,2.,体细胞核移植的过程：,3.,体细胞核移植技术的应用前景：,4.,体细胞核移植技术存在的问题：,将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）,分,类,胚胎细胞核移植：,体细胞核移植：,细胞分化程度低，恢复全能性容易,细胞分化程度高，恢复全能性不容易,概念：,1.,动物细胞核移植的概念、种类：,例：克隆羊,黑面绵羊去核卵细胞,白面绵羊乳腺细胞核,细胞核移植,重组细胞,电脉冲刺激,早期胚胎,胚胎移植,另一头绵羊的子宫,妊娠、出生,克隆羊多利,2.,体细胞核移植的过程：,卵细胞,母绵羊,母绵羊,乳腺细胞,细胞质,细胞核,早期胚胎,卵裂,C,母绵羊子宫,多莉羊,分娩,妊娠,多莉羊的培育过程,融合后的卵细胞,核移植技术,体细胞核移植的过程,加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育,保护濒危物种，增加存活数量,克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白,可以作为异种移植的供体,可以用于组织器官的移植,3.,体细胞核移植技术的应用前景：,4.,体细胞核移植技术存在的问题：,成功率低,克隆动物存在健康问题,克隆动物食品的安全性问题存有争议,思考题,、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？,为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。,、用于核移植的供体细胞一般都选用传代,10,代以内的细胞，为什么？,10,代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，,未突变,3,、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了,100%,的复制吗？为什么？,不是，克隆动物绝大部分,DNA,来自供体细胞核，但核外还有,少部分,DNA,（如线粒体,DNA,）来自受体卵母细胞,