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1、 [文件名] 残留溶剂测定法标准操作规程 页码： 1/18 编码：SOP-02-03-45/3 起草： 日期： 审核： 日期： 批准： 日期： 执行日期： 签 字： 变更记载：执行2010年版《中国药典》。 分发部门：质量部、中心化验室 印制份数： 3 目 的：为残留溶剂测定建立一个标准操作规程，以确保正确操作。 范 围：所有需进行残留溶剂测定的实验操作。 责任人：检验员。 内 容： 1. 仪器与用具 1.1 气相色谱仪一台,带火焰离子化检测器。 1.2 积分仪或色谱数据处理机。 1.3 色谱
2、柱 1. 3.1毛细管柱 除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互相使用。 （1） 非极性色谱柱 固定液为100%的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。 （2） 极性色谱柱 固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱。 （3） 中极性色谱柱 固定液为（35%）二苯基-（65%）甲基聚硅氧烷、（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷、（35%）二苯基-（65%）二甲基聚硅氧烷、（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷、（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛细管柱等。 （4） 弱极性色谱柱 固定液为（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷、（5%）二苯基-（9
3、5%）二甲基硅氧烷共聚物的毛细管柱等。 1.3.2 填充柱 以直径为0.18~0.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料作为固定相。 2. 系统适用性试验 （1）用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数一般不低于5000；填充柱的理论板数一般不低于1000. （2）色谱图中，待测物色谱峰与相邻色谱峰的分离度应大于1.5. 编码 SOP-02-03-45/3 页码 2/18 （3）以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差（RSD）应不大于5%；若以外标法测定，所得待测峰面积
4、的RSD应不大于10%。 3.供试品溶液的制备 3.1顶空进样 除另有规定外，精密称取供试品0.1~1g；通常以水为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其他适宜溶剂；根据供试品和待测溶剂的溶解度，选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测定的需要。 3.2 溶液直接进样 精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测定的需要。 4对照品溶液的制备 精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用与制备供试品溶液相同的
5、方法和溶剂制备对照品溶液；如用水作溶剂，应先将待测有机溶剂溶解在50%二甲基亚砜或N,N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀释。若为限度检查，根据残留溶剂的限度规定确定对照品溶液的浓度；若为定量测定，为保证定量结果的准确性，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液色谱峰面积不宜超过供试品溶液中对应的残留溶剂色谱峰面积的2倍。必要时，应重新调整供试品溶液或对照品溶液的浓度。 5 测定法 5.1第一法（毛细管柱顶空进样等温法） 当需要检查有机溶剂的数量不多，且极性差异较小时，可采用此法。 色谱条件 柱温一般为40~100℃；常以氮气为载气，流速为每分钟1.0~2
6、0ml；以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为70~85℃，顶空瓶平衡时间为30~60分钟；进样口温度为200℃；如采用火焰离子化检测器（FID），温度为250℃。 测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。 对色谱图中未知有机溶剂的鉴别，可参考附表2进行初筛。 编码 SOP-02-03-45/3 页码 3/18 5.2 第二法（毛细管柱顶空进样系统程序升温法） 当需要检查的有机溶剂数量较多，且极性差异较大时，可采用此法。 色谱条件 柱温一般先在40℃维持8分钟，再以每分钟8℃的升温速率升至120℃，维持10分钟；以氮气为载气，流速为每分钟2.
7、0ml；以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为70～85℃，顶空瓶平衡时间为30～60分钟；进样口温度为200℃；如采用FID检测器，进样口温度为250℃。 具体到某个品种的残留溶剂检查时，可根据该品种项下残留溶剂的组成调整升温程序。 测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。 对色谱图中未知有机溶剂的鉴别，可参考附表3进行初筛。 5.3第三法（溶液直接进样法） 可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。 测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样2～3次,测定待测峰的峰面积. 计算法 (1)限度检查 除另有规定外,按各品种项下规定的供试品溶液浓度测
8、定。以内标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积与内标峰面积之比不得大于对照品溶液的相应比值。以外标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积不得大于对照溶液的相应峰面积。 （2）定量测定 按内标法或外标法计算各残留溶剂的量。 6 附注 6.1除另有规定外，顶空条件的选择： 6.1.1应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空平衡温度。对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的平衡温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。 6.1.2顶空平衡时间一般为30～45分钟，以保证供试品溶液的气-液两相有足够的时间达到平衡。顶空平衡时间通常不宜过长，如超过60
9、分钟，可能引起顶空瓶的气密性变差，导致定量准确性的降低。 编码 SOP-02-03-45/3 页码 4/18 6.1.3对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件。 6.2定量方法的验证 当采用顶空进样时供试品与对照品处于不完全相同的基质中，故应考虑气液平衡过程中的基质效应（供试品溶液与对照品溶液组成差异对顶空气-液平衡的影响）。由于标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性；当标准加入法与其他定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果为准。 6.3干扰峰的排除 供试品中的未知杂质或其挥发性
10、热降解物易对残留溶剂的测定产生干扰。干扰作用包括在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降解物与待测物的保留值相同（共出峰）；或热降解产物与待测物的结构相同（如甲氧基热裂解产生甲醇）。当测定的残留溶剂超出限度，但未能确定供试品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用时，应通过试验排除干扰作用的存在。对第一类干扰作用，通常采用在另一种极性不同的色谱柱系统中对相同供试品再进行测定，比较不同色谱系统中测定结果的方法。如两者结果一致，则可以排除测定中有共出峰的干扰；如两者结果不一致，则表明测定中有共出峰的干扰。对第二类干扰作用，通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判断。 6.4含氮碱
11、性化合物的测定 普通气相色谱仪中的不锈钢管路、进样器的衬管等对有机胺等含氮碱性化合物具有较强的吸附作用，致使其检出灵敏度降低，应采用惰性的硅钢采莲或镍钢材料管路；采用溶液直接进样法测定时，供试品溶液应不呈酸性，以免待测物与酸反应后不易汽化。 通常采用弱极性的色谱柱或其填料预先经碱处理过的色谱柱分析含氮碱性化合物，如果采用胺分析专用柱进行分析，效果更好。 对不宜采用气相色谱法测定的含氮碱性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等，可采用其他方法如离子色谱法等测定。 6.5检测器的选择 对含卤素元素的残留溶剂如三氯甲烷等，采用电子捕获检测器（ECD），易得到高的灵敏度。 6.6由于不同的实验室在测定
12、同一供试品时可能采用了不同的实验方法，当测定结果处于合格与不合格边缘时，以采用内标法或标准加入法为准。 6.7顶空平衡温度一般应低于溶解供试品所用溶剂的沸点10℃以下，能满足检测灵敏度即可；对于沸点过高的溶剂，如甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等，用顶空进样测定的灵敏度不如直接进样，一般不宜用 编码 SOP-02-03-45/3 页码 5/18 顶空进样方式测定。 6.8利用保留值定性是气相色谱中最常用的定性方法。色谱系统中载气的流速、载气的温度和柱温等的变化都会使保留值改变、从而影响定性结果。校正相对保留时间（RART）只受柱温和固定相性
13、质的影响，以此作为定性分析参数较可靠。应用中通常选用甲烷测定色谱系统的死体积（ t。）： 式中 tR 为组分的保留时间； t’R 为参比物的保留时间。 附表1 药品中常见的残留溶剂及限度 溶剂名称 限度/% 溶剂名称 限度/% 第一类溶剂 (应该避免使用) 苯 四氯化碳 1，2-二氯乙烷 1，1- 二氯乙烯 1，1，1-三氯乙烷 第二类溶剂 （应该限制使用） 乙腈 氯苯 三氯甲烷 环己烷 1，2- 二氯乙烯 二氯甲烷 1， 2-二甲基乙酰
14、N,N-二甲基乙酰胺 N,N-二甲基甲酰胺 0.0002 0.0004 0.0005 0.0008 0.15 0.041 0.036 0.006 0.388 0.187 0.06 0.01 0.109 0.088 第二类溶剂 （应该限制使用） 二氧六环 2-乙氧基乙醇 乙二醇 甲酰胺 正己烷 甲醇 2-甲氧基乙醇 甲基丁基酮 甲基环己烷 N-甲基吡咯烷酮 硝基甲烷 吡啶 四氢噻吩 四氢化萘 四氢呋喃 甲苯 1，1，2-三氯乙烯 二甲苯① 0.038 0.016 0.062 0.022
15、 0.029 0.3 0.005 0.005 0.118 0.053 0.005 0.02 0.016 0.01 0.072 0.089 0.008 0.217 编码 SOP-02-03-45/3 页码 6/18 溶剂名称 限度/% 溶剂名称 限度/% 第三类溶剂（药品GMP或 其他质量要求限制使用） 醋酸 丙酮 甲氧基苯 正丁醇 仲丁醇 乙酸丁酯 叔丁基甲基醚 异丙基苯 二甲基亚砜 乙醇 乙酸乙酯 乙醚 甲酸乙酯 甲酸 正庚烷 乙酸异丁酯 乙酸异丙酯 乙酸甲酯 3-甲基-1-丁醇 丁酮
16、 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 第三类溶剂（药品药品GMP或 其他质量要求限制使用） 甲基异丁基酮 异丁醇 正戊烷 正戊醇 正丙醇 异丙醇 乙酸丙酯 第四类溶剂（尚无足 够毒 理学资料）② 1，1-二乙氧基丙烷 1，1-二甲氧基甲烷 2，2-二甲氧基丙烷 异辛烷 异丙醚 甲基异丙基酮 甲基四氢呋喃 石油醚 三氯醋酸 三氟醋酸 0.5 0.5 0.5 0.5
17、 0.5 0.5 0.5 0.5 ① 通常含有60﹪间二甲苯、14﹪对二甲苯、9﹪邻二甲苯和17﹪乙苯。 ② 药品生产企业在使用时应提供该类溶剂在制剂中残留水平的合理性论证报告。 编码 SOP-02-03-45/3 页码 7/18 附表2 常见有机溶剂在等温法测定时相对于丁酮的保留值参考值 非极性色谱柱 溶剂名称 Tr/min RART 柱温40℃ 甲醇 乙醇 乙腈 丙酮 异丙醇 正戊烷 乙醚 甲酸乙酯 二甲氧基甲烷 1，1- 二氯乙烯
18、 乙酸甲酯 二氯甲烷 硝基甲烷 正丙醇 1，2-二氯乙烯 叔丁基甲基醚 丁酮 仲丁醇 1.828 2.090 2.179 2.276 2.356 2.487 2.489 2.522 2.584 2.609 2.635 2.655 2.807 2.982 3.109 3.252 3.449 3.666 0.126 0.268 0.315 0.368 0.411 0.481 0.482 0.501 0.534 0.547 0.561 0.572 0.654 0.748 0.817 0.894 1.000
19、 1.117 编码 SOP-02-03-45/3 页码 8/18 极性色谱柱 溶剂名称 Tr/min RART 柱温40℃ 正戊烷 正己烷 乙醚 异辛烷 异丙醚 叔丁基甲基醚 正庚烷 环己烷 1，1-二氯乙烯 二甲氧基甲烷 甲基环己烷 丙酮 甲酸乙酯 乙酸甲酯 1，2-二氯乙烯 四氢呋喃 甲基四氢呋喃 四氯化碳 1.682 1.787 1.842 1.926 1.943 2.005 2.021 2.159 2.209 2.243 2.405 2.876 2.967 3.000 3.347 3.4
20、03 3.481 3.635 0.032 0.075 0.097 0.131 0.138 0.163 0.169 0.225 0.245 0.259 0.324 0.515 0.551 0.564 0.705 0.727 0.758 0.821 编码 SOP-02-03-45/3 页码 9/18 非极性色谱 溶剂名称 Tr/min RART 柱温40℃ 正己烷 异丙醚 乙酸乙酯 三氯甲烷 四氢呋喃 异丁醇 1，2-二氯乙烷 1，1，1-三氯乙烷 甲基异丙基酮 1，2-二甲氧基乙烷 苯
21、乙酸异丙酯 正丁醇 四氯化碳 环己烷 甲基四氢呋喃 三氯乙烯 二氧六环 异辛烷 正庚烷 乙酸丙酯 甲基环己烷 甲基异丁基酮 3-甲基-1-丁醇 吡啶 甲苯 正戊醇 甲烷 3.898 3.908 3.913 3.954 4.264 4.264 4.517 4.808 4.976 4.985 5.281 5.311 5.340 5.470 5.583 5.676 6.760 6.823 6.957 7.434 7.478 8.628 8.738 8.870 9.283 11.180 11.382 1.594
22、 1.242 1.247 1.250 1.272 1.439 1.440 1.576 1.733 1.823 1.828 1.988 2.004 2.019 2.089 2.150 2.201 2.785 2.819 2.891 3.148 3.172 3.792 3.851 3.922 4.145 5.168 5.276 编码 SOP-02-03-45/3 页码 10/18 非极性色谱柱 溶剂名称 Tr/min RART 柱温80℃ 乙酸异丁酯 甲基丁基酮 乙酸丁酯 氯苯 甲氧基
23、苯 异丙基苯 丁酮 甲烷 柱温120℃ 四氢化萘 丁酮 甲烷 3.611 3.859 4.299 5.253 7.436 8.148 2.502 1.493 8.067 1.630 1.405 2.099 2.345 2.778 3.726 5.890 6.589 1.000 29.609 1.000 编码 SOP-02-03-45/3 页码 11/18 极性色谱柱 溶剂名称 Tr/min RART 柱温40℃ 1，1，1-三氯乙烷 乙酸乙酯 乙酸异丙酯 甲醇 丁酮 1，2-
24、二甲氧基乙烷 甲基异丙基酮 二氯甲烷 异丙醇 乙醇 苯 乙酸丙酯 三氯乙烯 甲基异丁基酮 乙腈 乙酸异丁酯 三氯甲烷 仲丁醇 甲苯 正丙醇 二氧六环 1，2-二氯乙烷 乙酸丁酯 甲基丁基酮 甲烷 3.653 3.810 3.980 4.062 4.079 4.604 4.716 4.758 4.822 4.975 4.977 6.020 6.643 7.202 7.368 7.497 7.985 8.390 8.746 9.238 10.335 10.827 11.012 11.486 1.602
25、 0.828 0.891 0.960 0.993 1.000 1.212 1.257 1.274 1.300 1.362 1.362 1.784 2.035 2.261 2.328 2.380 2.577 2.740 2.884 3.083 3.256 3.724 3.799 3.990 编码 SOP-02-03-45/3 页码 12/18 极性色谱柱 溶剂名称 Tr/min RART 柱温80℃ 异丁醇 正丁醇 硝基甲烷 异丙基苯 吡啶 3-甲基-1-丁醇 氯苯 正戊醇 丁酮 甲烷 柱温
26、120℃ 甲氧基苯 四氢化萘 丁酮 甲烷 3.577 4.460 4.885 5.288 5.625 5.934 6.439 7.332 2.176 1.491 3.837 7.472 1.650 1.404 3.045 4.334 4.948 5.543 6.035 6.486 7.223 8.527 1.000 9.890 24.484 1.000 编码 SOP-02-03-45/3 页码 13/18 附表3 常见有机溶剂在程序升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值 非极性色谱柱
27、溶剂名称 Tr/min RART 甲醇 乙醇 乙腈 丙酮 异丙醇 正戊烷 乙醚 甲酸乙酯 二甲氧基甲烷 1，1- 二氯乙烯 乙酸甲酯 二氯甲烷 硝基甲烷 正丙醇 1，2- 二氯乙烯 叔丁基甲基醚 丁酮 仲丁醇 正己烷 异丙醚 乙酸乙酯 三氯甲烷 1.846 2.121 2.201 2.303 2.401 2.512 2.519 2.544 2.611 2.623 2.665 2.674 2.839 3.051 3.128 3.302 3.507 3.756 3.966 3.971 3.981 4.0
28、05 0.127 0.272 0.314 0.367 0.419 0.477 0.481 0.494 0.529 0.535 0.558 0.562 0.649 0.760 0.801 0.892 1.000 1.131 1.241 1.244 1.249 1.262 编码 SOP-02-03-45/3 页码 14/18 附表3 常见有机溶剂在程序升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值 非极性色谱柱 溶剂名称 Tr/min RART 四氢呋喃 异丁醇 1，2-二氯乙烷 1，1，1-三氯乙烷 甲基异丙
29、基酮 1，2-二甲氧基乙烷 苯 乙酸异丙酯 正丁醇 四氯化碳 环己烷 甲基四氢呋喃 三氯乙烯 异辛烷 二氧六环 正庚烷 乙酸丙酯 甲基环己烷 甲基异丁基酮 3-甲基-1-丁醇 吡啶 甲苯 4.387 4.397 4.6124 4.843 5.087 5.099 5.380 5.398 5.402 5.501 5.649 5.739 6.815 6.928 6.928 7.563 7.583 8.581 8.830 8.968 9.178 10.259 1.462 1.468 1.581 1.702
30、 1.830 1.837 1.984 1.994 1.996 2.048 2.126 2.173 2.738 2.798 2.798 3.131 3.142 3.666 3.797 3.870 3.980 4.548 编码 SOP-02-03-45/3 页码 15/18 附表3 常见有机溶剂在程序升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值 非极性色谱柱 溶剂名称 Tr/min RART 正戊醇 乙酸异丁酯 甲基丁基酮 乙酸丁酯 氯苯 甲氧基苯 异丙基苯 四氢化萘 甲烷 10.448 10.638 11
31、025 12.175 13.166 15.270 15.724 22.409 1.604 4.647 4.747 4.951 5.555 6.076 7.181 7.420 10.933 编码 SOP-02-03-45/3 页码 16/18 附表3 常见有机溶剂在程序升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值 极性色谱柱 溶剂名称 Tr/min RART 正戊烷 正己烷 乙醚 异辛烷 异丙醚 叔丁基甲基醚 正庚烷 环己烷 1，1- 二氯乙烯 二甲氧基甲烷 甲基环己烷 丙酮 甲酸乙酯 乙酸甲酯 1，2-
32、 二氯乙烯 四氢呋喃 甲基四氢呋喃 四氯化碳 1，1，1-三氯乙烷 乙酸乙酯 乙酸异丙酯 甲醇 丁酮 1.691 1.807 1.856 1.957 1.966 2.053 2.063 2.217 2.267 2.303 2.488 2.988 3.094 3.126 3.511 3.561 3.653 3.821 3.833 4.017 4.207 4.295 4.303 0.033 0.076 0.094 0.131 0.135 0.167 0.171 0.228 0.246 0.260 0.328 0.
33、513 0.552 0.564 0.707 0.725 0.759 0.822 0.826 0.894 0.964 0.997 1.000 编码 SOP-02-03-45/3 页码 17/18 附表3 常见有机溶剂在程序升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值 极性色谱柱 溶剂名称 Tr/min RART 1，2-二甲氧基乙烷 甲基异丙基酮 二氯甲烷 异丙醇 乙醇 苯 乙酸丙酯 三氯乙烯 甲基异丁基酮 乙腈 乙酸异丁酯 三氯甲烷 仲丁醇 甲苯 正丙醇 二氧六环 1，2-二氯乙烷 乙酸丁酯 甲基丁基酮
34、异丙醇 正丁醇 异丙基苯 硝基甲烷 4.875 5.005 5.041 5.069 5.275 5.275 6.437 7.108 7.735 7.892 8.068 8.533 8.848 9.156 9.461 10.183 10.446 10.543 10.801 11.606 13.046 13.258 13.396 1.212 1.260 1.273 1.284 1.360 1.360 1.790 2.039 2.271 2.329 2.394 2.566 2.683 2.79
35、7 2.910 3.177 3.274 3.310 3.406 3.704 4.237 4.315 4.367 编码 SOP-02-03-45/3 页码 18/18 附表3 常见有机溶剂在程序升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值 极性色谱柱 溶剂名称 Tr/min RART 吡啶 3-甲基-1-丁醇 氯苯 正戊醇 甲氧基苯 四氢化萘 甲烷 13.949 14.519 14.562 15.516 17.447 21.708 1.602 4.571 4.782 4.798 5.151 5.866 7.444 -注：附表2、3中数据为非极性的SPB-1柱（30m×0.32mm，1.0μm）和 极性的HP-INNOWAX柱（30m×0.32mm，0.5μm）测定的结果。
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