藿香的化学成分分析.pdf

第 16卷 第 4期化 学 研 究Vo.l 16 No.42005年 12月CHEM I CAL RESEARCHDec.2005收稿日期:2005-06-01.基金项目:甘肃省教育厅科研资助项目(2003039-04).作者简介:胡浩斌(1969-),男,副教授,硕士,主要研究方向为天然有机化学.EO mai:l hhb-88 .藿香的化学成分分析胡浩斌,郑旭东(陇东学院 化学系,甘肃 庆阳 745000)摘 要:从藿香茎叶的乙醇提取物中共分离鉴定出 5个化合物:异鼠李素O 3O OO BO D O 半乳糖苷(1)、金丝桃苷(2)、3,5,8,3c,4cO 五羟基 O 7O 甲氧基黄酮O 3O OO BO DO 吡喃葡萄糖苷(3)、尼泊尔鸢尾异黄酮O 7O OO AO LO吡喃鼠李糖苷(4)和正三十烷酸(5).其中化合物 3和 4为首次从该属植物中分离得到.关键词:藿香;化学成分;黄酮类;植物化学中图分类号:R 282.71;Q 949.32文献标识码:A文章编号:1008-1011(2005)04-0077-03ChemicalComposition Analysis ofPogostemon Cablin BHU H ao-bin,ZHENG Xu-dong(Depart ment of Che mistry,Longdong University,Qingyang 745000,Gansu,China)Abstract:From the ethanol extract ofpogostemon cablinB,five compoundswere isolated and identifiedas isorhamnetinO 3O OO BO DO galactoside(1),hyperoside(2),3,5,8,3c,4c O pentahydroxyO 7O m ethoxyfla-voneO 3O OO BO DO glucopyranoside(3),irisolidoneO 7O O O AO LOrha mnopyranoside(4)and nO triacontanoicacid(5),respectively.Among them,compound 3 and 4 were isolated from this species for the firstti me.Keywords:pogostemon cablin B;chem ical constituen;tflavonoid;phytochem istry 藿香(pogoste mon cablin B),又名枝香,为唇形科植物.主要分布在我国的华北和西部地区.其根可入药,是我国民间常用的一种中药,主要用来治疗伤寒头痛、喘咳、气泻霍乱、吐泻、刀伤流血、冷露疮烂等症 1.对该植物化学成分的研究虽已有报道 2-4,但由于种属、产地、气候、生长环境、采收季节和提取方法等的不同,使得藿香的化学成分也有明显的差异.为了进一步开发该植物的药用资源,为临床应用提供依据,作者对采自于陕北子午岭地区的藿香化学成分进行了研究,从其初花期茎叶的乙醇提取物中共分离得到5个化合物,鉴定其结构分别为:异鼠李素O 3O OO BO DO 半乳糖苷(1),金丝桃苷(2),3,5,8,3c,4cO 五羟基 O 7O 甲氧基黄酮O 3O OO BO DO 吡喃葡萄糖苷(3),尼泊尔鸢尾异黄酮 O 7O OO AO LO 吡喃鼠李糖苷(4)和正三十烷酸(5),它们大都具有一定的药理活性 5.1 实验部分1.1 仪器、试剂与原料熔点用 XO 4型显微熔点仪测定(温度未校正);1H NMR和13C NMR用 Bruker ACO 300P型核磁共振仪测定,TMS为内标;I R在 Bruker红外光谱仪上测定;FABO MS在 VG Autospec 300质谱仪上测定;EIO MS用 VGZ-ABO 2F质谱仪测定;紫外光谱仪为 UVO 2201型;元素分析仪为 MODO 1106型.薄层层析和柱层析用硅胶均为78 化 学 研 究2005年青岛海洋化工厂生产.所用试剂均为化学纯.初花期的藿香于 2003年 6月采自甘肃庆阳子午岭山区,经西北师范大学生命科学学院廉永善教授鉴定.1.2提取与分离将藿香地上部分阴干、粉碎,取 10 kg用 95%的 EtOH 渗滤提取 3次(每次 50 L渗滤 7天),滤出液减压浓缩得乙醇浸膏 535 g,再以热水混悬,依次用石油醚、CHCl3、EtOAc和 nO BuOH 进行萃取(各 3次),并浓缩得到氯仿和乙酸乙酯浸膏分别为 85 g和 68 g;氯仿浸膏经硅胶柱层析,依次用石油醚 OCHCl3(体积比 10B1 1B10)、CHCl3O MeOH(体积比 10B1 1B10)梯度洗脱得到 Fr1和 Fr2两个组分;Fr1经反复柱色谱分离、重结晶得化合物 2(13mg);Fr2经反复柱色谱分离、重结晶得化合物 1(12mg)和 5(11mg)乙酸乙酯浸膏依次用 CHCl3O MeOH(10B1 1B1)和 CHCl3O MeOH(1B5 1B10)梯度洗脱、TLC薄层纯化得到化合物 3(9.5mg)和 4(13mg).化合物 1 4的结构见图 1.图 1 化合物 1 4的结构F ig.1 Structures of compound 1 42结果与分析2.1 化合物 1的结构表征化合物 1为黄色片状晶体,HClO Mg反应呈阳性,mp.267 269 e(MeOHO CHCl3).硅胶 G薄层在紫外光照下呈现深紫色的斑点,在紫外/氨蒸气熏下呈现黄色斑点.分子式为 C22H22O12,EIO MS m/zB 479M+H+.UV Km ax(MeOH)B256,268,299,359 nm.I R Mmax(KBr)B3 438(O OH),1 628(C=O),1 614,1 558,1 522(cm-1(O Ar).1H NMR(300MH z,CDCl3)D B7.38(1H,d,J=2.2 H z,HO 2c),6.85(1H,d,J=7.5H z,HO5c),7.36(1H,dd,J=2.2,7.5 H z,H O 6c),6.28(1H,d,J=2.0 H z,H O 6),6.31(1 H,d,J=2.0H z,HO 8),5.48(1H,d,J=7.0 H z,HO 1d),3.3 3.85(eachHm,HO 2d 6d),3.95(3H,s,MeOO 3c).13C NMR(100MH z,CDCl3)D B155.8(CO 2,C),132.8(CO 3,C),179.9(CO 4,C),161.2(CO 5,C),98.9(CO 6,CH),164.8(CO 7,C),94.2(CO 8,CH),156.9(CO 9,C),104.4(CO 10,C),120.8(CO 1c,C),113.7(CO 2c,CH),148.8(CO 3c,C),147.5(CO 4c,C),115.4(CO 5c,CH),123.2(CO 6c,CH),102.1(CO 1d,CH),71.8(CO 2d,CH),73.6(CO 3d,CH),67.8(CO 4d,CH),75.4(CO 5d,CH),60.6(CO 6d,CH2).1H 和13C NMR数据与文献 6基本一致,可以确定此化合物为异鼠李素 O 3O OO BO DO 半乳糖苷.2.2 化合物 2的结构表征化合物 2为黄色粉末,HClO Mg反应显淡红色,Molish反应呈阳性,mp.235 238 e(M eOHO CHCl3).与金丝桃苷对照品共薄层层析,硅胶 G薄层板上喷 10%A l C l3O 乙醇溶液于紫外光照下都呈现黄色的斑点,其Rf和显色行为完全一致.UV Kmax(MeOH):256,299,359 n m.IR Mmax(KBr)B3 438(O OH),1 628(C=O),1 614,1 558,1 522 cm-1(O Ar).EIO MSm/zB302,247,229,153,137,69,43,29.1H NMR(300 MHz,CDCl3)D B12.36(1H,s,HOO 5),10.82(1H,s,HOO 7),9.76(1H,s,HOO 4c),9.12(1H,s,HOO 3c),7.67(1H,dd,J=2.3,7.6H z,HO 6c),7.48(1H,d,J=2.3Hz,H O 2c),6.79(1H,d,J=7.6H z,HO 5c),6.41(1H,d,J=1.8H z,HO 8),6.19(1H,d,J=1.8H z,HO 6),5.38(1H,d,J=7.3H z,HO 1d),3.3 4.21(each H,m,HO 2d 6d).13CNMR(100MH z,CDCl3)D B162.8(CO 2,C),109.8(CO 3,C),180.9(CO 4,C),160.5(CO 5,C),97.9(CO 6,CH),第 4期胡浩斌等:藿香的化学成分分析79 163.9(CO 7,C),93.8(CO 8,CH),157.9(CO 9,C),103.8(CO 10,C),119.3(CO 1c,C),113.8(CO 2c,CH),145.7(CO 3c,C),149.1(CO 4c,C),114.9(CO 5c,CH),122.5(CO 6c,CH),101.8(CO 1d,CH),70.8(CO 2d,CH),72.9(CO 3d,CH),67.7(CO 4d,CH),74.8(CO 5d,CH),59.8(CO 6d,CH2).1H 和13C NMR数据与文献 7,8基本一致,可以确定化合物 2为金丝桃苷.2.3 化合物 3的结构表征化合物 3为黄色无定形晶体,FABO MSm/zB495M+1+(calc.for C22H22O13),332M-glucose+.硅胶G薄层板在紫外光照和紫外光照/氨蒸气熏下呈现黄色的斑点,UV Km ax(M eOH)B278,340,378 nm.I R Mm ax(KBr)B3 432(O OH),1 732,1 677,1 658,1 614,1 518,1 443,1 350,1 286,1 266,1 165,1 069,945,891 c m-1.1H NMR(300MH z,DMSOO d6)D B12.36(1 H,s,HOO 5),6.52(1H,s,H O 6),3.85(3 H,s,CH3OO 7),7.58(1H,d,J=2.2H z,HO 2c),6.85(1H,d,J=8.8H z,HO 5c),7.59(1H,dd,J=2.2,7.6Hz,H O 6c)5.46(1H,d,J=7.6H z,HO 1d),3.24(1H,d,J=7.4H z,HO 2d),3.27(1H,d,J=7.4H z,H O 3d),3.05(1H,m,HO 4d),3.30(1H,m,HO 5d),4.03 3.57(eachH,dd,J=2.4,11.8H z,HO 6d).13C NMR(100MH z,DMSOO d6)B158.2(CO2,C),133.8(CO 3,C),179.4(CO 4,C),153.1(CO 5,C),96.4(CO 6,CH),154.1(CO 7,C),125.9(CO 8,C),154.9(CO9,C),104.1(CO 10,C),55.7(M eOO 7,CH3),121.3(CO 1c,C),115.8(CO 2c,CH),145.4(CO 3c,C),148.4(CO 4c,C),115.8(CO 5c,CH),121.9(CO 6c,CH),100.8(CO 1d,CH),74.1(CO 2d,CH),76.9(CO 3d,CH),68.8(CO 4d,CH),74.8(CO 5d,CH),61.2(C O 6d,CH2).MS、1H 和13C NMR数据与文献 9基本一致,可以确定化合物 3为 3,5,8,3c,4cO 五羟基 O 7O 甲氧基黄酮O 3O OO BO DO 吡喃葡萄糖苷.2.4 化合物 4的结构表征化合物 4为黄色针状晶体,mp.221 224 e(M eOH).Shinoda和 Molish反应呈阳性;I R显示有羰基(1 620 cm-1)、酚羟基(3 445 c m-1)及苷键(1 065 c m-1,宽峰)的吸收峰;UV Kmax(M eOH)B258,325 nm呈典型的异黄酮紫外吸收;1H O NMR中 D7.67(1H,s,HO 2)和13C NMR D154.1(CO 2,CH)和 126.3(CO 3,C),都表明化合物 4是一个异黄酮苷 10,11.FABO MSm/zB461M+H+和 314(M+H)O 147+,表明分子中有一糖单元,结合元素分析确定分子式为 C23H24O10,不饱和度为 12.13C NMR及 DEPT实验表明有 23个 C信号(CH3 3,CH 11,C 9),其中有 6个糖 C(D100.6,70.8,71.2,72.8,68.9,18.2),另有 17个 C为苷元;化合物 4在 10%H2SO4溶液中水解,除得到苷元外,TLC检查与标准样品对照确定有 LO 鼠李糖存在,并与甲基 OBO 鼠李糖苷和甲基 O AO 鼠李糖苷有关的13C NMR文献数据进行比较,可以确定 LO 鼠李糖为 AO 型 12,鼠李糖的端基质子为单一峰也表明为 AO 型;化合物 4的全甲基化产物水解后,得到 2,3,4O 三 O OO 甲基鼠李糖,表明鼠李糖以吡喃型存在.从1H NMR谱重水交换后 D12.75信号消失,可知分子中有酚 O OH;在 A lCl3和 A lCl3/HCl溶液中,UV数据向红移动 15 nm,表明在 CO 5位有一游离的 O OH;在 NaOAc溶液中;通过比较苷元和苷的 UV数据变化可以确定糖在苷元上的连接位置:苷元显示 48 nm的红移,表明 CO 7上有游离的O OH,但苷无红移,表明糖连在 CO 7上;从 HMBC谱也可确定异黄酮骨架上取代基的位置:LO 鼠李糖的异头质子 D5.58(1 H,s,HO 1)和苷元 D165.0(CO 7)有远程相关关系,CH3OO 6和 CH3OO 4c 质子分别与 CO 6和 CO 4c 间有相关关系等.还可通过13C NMR中的 D165.0(CO 7)和 D161.7(CO 4c)处于较低场,说明 CO 7和 CO 4c 分别与氧相连.通过以上分析可以确定化合物 4为尼泊尔鸢尾异黄酮O 7O OO AO LO 吡喃鼠李糖苷.其有关的波谱数据为:I R Mmax(KBr)B3 445(O OH),2 915,1 620(C=O),1 614,1 558,1 522(O Ar),1 370,1 065 c m-1(brs,苷键).1H NMR(300MH z,CDCl3)D B4.12(3H,s,CH3OO 6),3.76(3H,s,CH3OO 4c),12.75(1H,s,HOO 5),7.12(2 H,d,J=8.4H z,HO 2c,6c),7.52(2H,d,J=8.5 H z,H O 3c,5c),7.67(1H,s,H O 2),6.98(1H,s,H O8),4.79(3 H,s,H O6d),3.12 5.41(4H,m,糖质子),5.58(1H,s,HO 1d),3.33(1H,m,H O 2d),3.77(1 H,m,HO3d),3.18(1H,m,HO4d),3.79(1H,m,HO 5d),1.09(3H,d,J=6.0H z,HO 6d).13C NMR(100MH z,CDCl3)D B154.1(CO2,CH),126.3(CO 3,C),181.4(CO 4,C),163.9(CO 5,C),146.9(CO 6,C),165.0(CO 7,C),94.5(CO 8,CH),159.0(CO 9,C),116.2(CO 10,C),123.8(CO 1c,C),131.0(CO 2c,CH),114.7(CO 3c,CH),161.7(CO 4c,C),114.5(CO 5c,CH),131.0(CO 6c,CH),55.8(CH3OO 4c,CH3),60.6(CH3OO 6,CH3),101.4(CO 1d,CH),70.8(CO 2d,CH),71.2(CO 3d,CH),72.8CO 4d,CH),68.9(CO 5d,CH),18.2(CO 6d,CH3).(下转第 82页)82 化 学 研 究2005年表 1 样品测定结果Table 1 Quantitative analysis results of the sa mplesmg/kg样品辛夷丸小青龙丸八正散丸汉防己马兜铃酸 A22未检出30980 小结:(1)马兜铃酸 A质谱有较强的分子离子峰,最低检测限为 5 ng(信噪比等于 10),可以满足对中成药中马兜铃酸 A测定之要求.(2)中成药中的天然化学物质远比中药材中的天然化学物质丰富的多,很多针对中药材中马兜铃酸 A的测定方法应用于中成药中极有可能出现误判即使是针对某个中成药中马兜铃酸 A的测定方法也不能广泛的应用,对于中成药中马兜铃酸 A的测定首先应采用 LC/MS方法确证,然后再用 HPLC法定量是一种好的方法.参考文献:1 徐任生.天然产物化学 M.北京:科学出版社,1997:701.2 姜 旭,王智民,由丽双,等.RP-HPLC测定不同产地青木香和细辛中马兜铃酸 A的含量 J.中国中药杂志,2004,(5):28-30.3 耿鲁骏,李保国.高效液相色谱法测定细辛及其制剂中马兜铃酸 A的含量 J.化学分析计量,2005,(2):25-27.4 由丽双,王智民,姜 旭,等.反相 HPLC法测定不同产地青关木通中马兜铃酸 A的含量 J.中国中药杂志,2003,(5):85-87.5 陈浩桉,徐国钧,金蓉鸾,等.汉防己类药材中马兜铃酸和总生物碱的含量测定 J.中国中药杂志,1994,19(6):323-324.6 付桂香,赵世萍,陈 文,等.薄层扫描法测定龙胆泻肝丸中马兜铃酸 A 的含量 J.药物分析杂志,2002,22(3):171-173.(上接第 79页)2.5 化合物 5的结构表征化合物 5为白色粉末(CHCl3),mp.68 70 e;EIO MSm/zB452,396,382,368,73,57,43,29.1H NMR(300MH z,CDCl3)D B0.88(3H,t HO 30),1.19 1.65(多个 H,br,多个 O CH2),2.13(2H,t HO 2),12.57(1H,s,O OH);13C NMR(100MH z,CDCl3)D B180.2(CO 1,C),32.5(CO 2,CH2),25.4(CO 3,CH2),14.1(CO 30,CH3).根据以上数据,确定 5为正三十烷酸.致谢:感谢郑尚珍教授(西北师范大学化学化工学院)在本实验过程中给予了很大的帮助,同时也感谢廉永善教授(西北师范大学生命科学学院)为我们鉴定了该植物.我们还感谢应用有机国家重点实验室的朱启秀老师和分析测试中心的赵凡智老师帮助我们做了核磁和质谱.参考文献:1 江苏新医学院.中药大辞典(下册)M.上海:上海科技出版社,1985.2710-2711.2 张光文,马祥全,苏镜娱,等.广藿香中的黄酮类化合物 J.中草药,2001,32(10):871-874.3 苏镜娱,张光文,李 核,等.广藿香精油化学成分分析与抗菌活性研究 J.中草药,2001,32(3):204-205.4 关 玲,权丽辉,徐丽珍,等.广藿香化学成分的研究 J.中国中药杂志,1994,19(6):356-358.5 孙文基,绳金房.天然活性成分简明手册 M.北京:中国医药科技出版社,1998.226-429.6 于德全,杨峻山.分析化学手册(第五分册)M.北京:化学工业出版社,1999.839.7 申风玉,林可勤,朱大元,等.卫矛有效成分的研究 J.中草药,1982,13(10):439-442.8 M unehisa A,M asako H,M iya S.Flavonoids from Salvia tomentosa J.Shoyakugaku Zasshi.1984,38(3):215-219.9 Nasi m S,Ja mesA A,PeterG W.Benzopyran derivatives from the aerial parts ofEriostemon rhomboideus J.Phytochemistry,1999,52(5):895-900.10 KrishnaveniK S,Srinivasa R JV.An isoflavone fro m pterocarpus santalinus J.Phytochemistry,2000,53(5):605-606.11 JhaH C,Zilliken F,Breit maier E.An isoflavone glycoside fro m the seeds oftrichosanthes anguina J.Can J Chem,1980,58(8):1211-1219.12 Agra walP K.NMR spectroscopy in the structural elucidation of oligosaccharides and glycosides J.Phytochemistry,1992,31(10):3307-3330.