输血技能操作规程.doc

ABO血型鉴定操作规程

1 方法：试管法。
2 原理：根据红细胞上有或无A抗原和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。正定型就是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞A抗原或/和B抗原；反定型就是用已知A红细胞和B红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。
3 标本种类：EDTA抗凝全血。
4 试剂及器材：抗-A、抗-B标准血清；2-5%A、B、O试剂标准红细胞盐水悬液；受检者血清；受检者2-5%红细胞盐水悬液；生理盐水。试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；离心机（或血库专用离心机）。
5 操作步骤：
5.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。……（20分）
5.2 检查标本的状态。……( 5分)
5.3 标本离心：1000×g 离心 3分钟。……( 5分)
5.4 加样： ……( 20分)
正定型：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B。分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3-5%红细胞悬液 1滴，混和。
反定型：另取洁净小试管3支，分别标明A、B、O细胞。用滴管分别加入受检者血浆2滴于试管底部，再分别加入3-5%A、B、O试剂红细胞1滴。
5.5 离心：立即以1000×g离心15秒。……( 15分)
5.6 观察结果：检查是否有溶血，再将试管轻轻摇动，使沉于试管底的红细胞浮
起，先以肉眼观察有无凝集。如肉眼未见凝集或溶血，应再以低倍镜观察有无凝集。……( 15分)
5.7 ABO血型结果判读。 ……（结果错误一票否决）
ABO血型正反定型结果
正定型 反定型
分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+试剂红细胞
抗-A 抗-B A细胞 B细胞 O细胞

＋ — A — ＋ —
— ＋ B ＋ — —
— 　 — O ＋ ＋ —
＋ ＋ AB — — —
注：　＋＝凝集；　　－＝不凝集　
6 注意事项：
6.1 要求标本离心速度1000×g离心 3分钟，保证标本的质量。
6.2 试管、滴管保持干燥，以免溶血。
6.3 离心时间不宜过长或过短、速度不宜过快过慢，以防假阳性和假阴性。

RH（D）血型鉴定操作规程
1 方法：试管法。
2 原理：根据D抗体与对应红细胞上的抗原凝集反应，区分Rh(D)阳性、阴性。
3 标本种类：EDTA抗凝全血。
4 试剂及器材：IgM单克隆抗D血清，效价≥1：64（ccDee）型；生理盐水。试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；离心机（或血库专用离心机）。
5 操作步骤：
5.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。
5.2 检查标本的状态。
5.3 标本离心：1000×g 离心 3分钟。
5.4 加样：标记试管1支，加抗D血清１滴，再加受检者3-5％红细胞悬液１滴，混匀。……（10分）
5.5 1000×g离心15秒,轻轻摇动试管，观察结果。……（10分）
5.6 检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃使红细胞再悬浮起来， 观察凝集的状况，并立即记录结果，必要时可借助显微镜。
5.7 若是阴性结果，需37℃孵育15-30分钟，然后再离心观察结果。结果若呈
阴性需进一步确认是否是弱D。（本次考试不作要求）
6 结果判定：……（结果错误一票否决）
6.1 阳性反应：出现红细胞凝集，为Rh(D)阳性。
6.2 阴性反应：红细胞不出现凝集，为Rh(D)阴性。
7 备注：凝集强度判断标准
4+：红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3+：红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2+：红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞。
1+：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。
±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。
-：镜下未见红细胞凝集，红细胞均匀分布。
MF：即混合凝集外观，是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍
呈分散分布。

盐水+凝聚胺介质法筛选不规则抗体操作规程
1 方法：试管法。
2 原理：由于输血或妊娠等外源性抗原的同种免疫作用，使机体对外源性抗原产生同种免疫抗体，当再次输入相应抗原时就会产生抗原抗体反应。
应用特定的筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号），与待检者血清（或EDTA抗凝血浆）在二种介质（盐水、凝聚胺）中反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别(IgM、IgG)。对筛选试验阳性的待检者应检查其抗体特异性即不规则抗体鉴定（本次考试不作要求）。
3 标本种类：EDTA抗凝全血或不抗凝血。
4 试剂及器材: 特定的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号2-5%筛选红细胞；低离子强度溶液（LIM）、凝聚胺溶液、悬浮液；生理盐水。试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；血库专用离心机。
5 操作步骤:
5.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。
5.2 检查标本的状态。
5.3 标本离心：1000×g 离心 3分钟。
5.4 取洁净试管3支，分别标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，用滴管分别加入待检者血清（或EDTA抗凝血浆）4滴。……(15分)
5.5 再对应加入2-5%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选谱红细胞2滴，混匀。……(10分)
5.6 1000×g离心15秒，察看上清液有无溶血，轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集结果，记录盐水介质反应情况。肉眼观察无凝集，用滴管吸取管内悬液少许于玻片上，在显微镜下察看有无凝集现象。……(10分)
5.7 若盐水介质无溶血或凝集结果，各管续加低离子溶液（LIM）0.65ml，混匀，再各加凝聚胺溶液2滴，混匀。……(15分)
5.8 1000×g离心15秒,倒掉上清液，让管底残留约0.1ml液体，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，必须重做。……(15分)
5.9 最后各加2滴悬浮液，轻轻摇动试管混合，同时肉眼观察结果。……(15分)
5.10 如果60秒内凝集散开，再进一步用显微镜观察有无凝集，镜下无凝集红细
胞则为凝聚胺引起的非特异性凝集，不规则抗体筛选结果阴性；60秒内凝集
不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，不规则抗体筛选结果阳
性。……(10分)
6 结果判读： ......（判错结果，一票否决）
6.1 阴性：3管均无凝集无溶血；
6.2 阳性：一管或多管出现凝集或溶血。
7 注意事项：引起结果错误的操作缺陷均一票否决，由监考老师掌握。

交叉配血操作规程
交叉配血试验是输血检验中最重要的试验之一，其目的是证实受血者和供血者是否存在血型不合的抗原抗体反应，以保证受血者的输血安全。交叉配血试验有两类，一类是“主侧”交叉配血试验，即受血者血清（血浆）与供血者红细胞的相容试验；另一类是“次侧”交叉配血试验，即供血者血清（血浆与受血者红细胞的相容试验。交叉配血试验方法有两种，一种是检测完全抗体，另一种是检测不完全抗体，输血相容性检测必须进行两种方法的交叉配血试验。
一、盐水介质配血试验
1 方法：试管法。
2 实验原理：盐水介质交叉配血试验是用生理盐水作为红细胞抗原和血清抗体
之间的反应介质，红细胞抗原与相应的完全抗体起凝集反应，通过离心来观察抗原抗体反应情况，其试验本质是凝集反应。
3 标本种类：EDTA抗凝全血或无促凝剂的不抗凝血。
4 试剂及器材：生理盐水。试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；离心机（或血库专用离心机）。
5 操作步骤：
5.1 受血者血清（血浆）和红细胞悬液：离心受血者标本（1000×g离心3分钟），
上清液为受血者血清（血浆）；取受血者压积红细胞1-2滴加生理盐水2ml，
配成2-5％红细胞盐水悬液，在试管上标明PC（或受血者姓名）待用。……
（20分）
5.2 供血者血清（血浆）和红细胞悬液：离心供血者标本（1000×g离心3分钟），
上清液为供血者血清（血浆）；取供血者压积红细胞1-2滴加生理盐水2ml，
配成2-5％红细胞盐水悬液，在试管上标明DC（或血袋号）待用。
5.3 将受血者标本和2-5％红细胞盐水悬液（PC）放置在试管架左侧，供血者标
本和2-5％红细胞盐水悬液（DC）放置在试管架右侧。取洁净试管2支，分
别标明“主”、“次”，放在试管架中间，“主”管放在受血者标本一侧，“次”
管放在供血者标本一侧。标本和试管标识应面对操作者（见图1）。…（20分）
5.4 在主侧管加受血者血清（血浆）2滴和供血者红细胞悬液1滴，混匀；在次
侧管加供血者血清（血浆）2滴和受血者红细胞悬液1滴，混匀。……（加
错试管一票否决）
5.5 将2支试管放入离心机，1000×g离心15秒。……（20分）
5.6 取出试管，先观察上清液有否溶血现象，然后轻轻摇动试管，肉眼观察有无
凝集现象。肉眼观察无凝集，用滴管吸取管内悬液涂布于玻片上，在低倍显
微镜下察看有无凝集现象。……（20分）
6 结果判定：……（结果错误一票否决）
6.1 主、次管均无溶血、无凝集现象，盐水配血试验相合。
6.2 主、次管任一管有溶血、凝集现象，盐水配血试验不相合。
二、凝聚胺介质配血试验
1 方法：试管法。
2 实验原理：红细胞表面带有大量负电荷，以避免其产生自发性凝集，当红细
胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞表面的负电荷所引，此时红细胞则被
扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。凝聚胺技术首先利用低离子强度溶液，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和抗体结合。其后，加入凝聚胺溶液，凝聚胺是带有高价阳离子的多聚季铵盐，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异的凝集。最后，加入悬浮液（枸椽酸盐溶液），悬浮液具有中和凝聚胺阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；如果红细胞被相应抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。
3 试剂及器材：低离子强度溶液（LIM）、凝聚胺溶液、悬浮液；生理盐水。
4 操作步骤：
4.1 受血者血清（血浆）和红细胞悬液：同上5.1。……（20分）
4.2 供血者血清（血浆）和红细胞悬液：同上5.2。
4.3 将受血者标本和2-5％红细胞盐水悬液（PC）放置在试管架左侧，供血者标
本和2-5 ％红细胞盐水悬液（DC）放置在试管架右侧。取洁净试管2支，
分别标明“主”、“次”，放在试管架中间，“主”管放在受血者标本一侧，“次”
管放在供血者标本一侧。……（20分）
4.4 在主侧管加受血者血清（血浆）2滴和供血者红细胞悬液1滴，混匀；在次
侧管加供血者血清（血浆）2滴和受血者红细胞悬液1滴，混匀。……（加
错试管一票否决）
4.5 各管加0.65mlLIM液，混匀，再各加凝聚胺溶液2滴混匀。……（10分）
4.6 1000×g离心15秒钟，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml
液体。……（10分）
4.7 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。……（操作
不符合规范一票否决）
4.8 最后加入再悬浮液2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。如在60秒内
凝集散开，代表是由凝聚胺引起的非特异性凝集；如凝集不散开，则为红细
胞抗原抗体结合的特异性反应；肉眼观察不凝集的，应进一步倒在玻片上用
显微镜观察。……（30分，如果显微镜未观察扣10分）
5 结果判定：……（结果判断错误一票否决）
5.1 主、次管均无溶血、无凝集现象，凝聚胺配血试验相合。
5.2 主、次管任一管有溶血、凝集现象，凝聚胺配血试验不相合。
三、注意事项
1 每日开始工作前，须查验试剂效期并进行室内质控。
2 在交叉配血试验前必须复检受血者和供血者ABO、Rh(D)血型。
3 建议盐水介质和凝聚胺介质配血试验同时进行。
4 在盐水配血试验试管续做凝聚胺介质配血，因盐水配血试验需取一定量的反
应液进行显微镜观察，在进行盐水配血时需调整血清（血浆）量为4滴，红
细胞悬液为2滴。
5 盐水配血出现溶血或凝集现象，不得续做，凝聚胺介质配血应单独试验。
6 凝聚胺介质配血试验在具体工作中，请参考试剂说明书。
7 无血库专用离心机实验室，根据相对离心力计算公式调整离心速度和时间。
8 相对离心力计算公式：RCF＝1.118×10-5×n2×r（×g）
RCF ——相对离心力 n ——离心机转速（r/min）
r ——离心半径（cm） g ——重力加速度单位（9.8牛顿/千克）
图1 配血试验标本和试管安放位置