输血相容性检测室内质控操作规程.docx

输血相容性检测室内质控操作规程【目 的】规范输血科各级检验人员室内质控操作程序，确保检验结果准确、可靠。【适用范围】适用于输血相容性检测项目。【职 责】输血科全体员工均遵守执行。（一） ABO、RhD血型室内质控操作规程【检验原理】 选择已知型别的红细胞和血清，根据其与在用试剂标准血清：抗A、抗B、抗D、ABO血型反定型红细胞及ABO血型抗原检测卡（微柱凝胶）阳性及阴性检测结果，通过每天或每批与待检标本相同的试剂和方法进行检测，以监控实验室进行ABO、RhD血型检测过程中应用的试剂、设备及实验流程，并评估实验结果的有效性。【主要试剂组成】1. 质控品：样本1 A1型RhD（+）红细胞 样本2 B型RhD（+）红细胞 样本3 A血清 样本4 B血清 样本5 O型RhD（+）红细胞 样本6 RhD（-）红细胞2. 血型鉴定试剂： 标准血清：抗A，抗B，抗D ABO血型反定型红细胞：Ac，Bc，Oc ABO血型抗原检测卡（微柱凝胶）【主要仪器】 卡式专用离心机【检验方法】 首先将质控品、标准血清及ABO血型反定型红细胞从冰箱取出后平衡至室温。操作步骤按不同检验方法（平板法、试管法、微柱凝胶法）具体如下：1. 平板法：在玻片上（或纸片上）按表1加样各1滴（50ul），混匀（直径约20mm大小），前后缓慢摇晃玻片，2分钟左右肉眼判读结果，并记录。2. 试管法：取13支（95mm12mm或75mm12mm）试管做好标记，按表1加样各1滴（50ul），混匀，离心（离心速度和时间可以选择转速1000rpm时间1分钟或转速3400rpm时间15秒），判定结果，并记录。表1 平板法、试管法ABO及RhD血型室内质控加样表抗A + 样本1抗B + 样本1抗D + 样本14%Ac + 样本34%Bc + 样本34%Oc + 样本3抗A + 样本2抗B + 样本2抗D + 样本24%Ac + 样本44%Bc + 样本44%Oc + 样本4抗A + 样本5抗B + 样本5抗D + 样本5抗D + 样本63. 柱凝胶法：取4张待检ABO血型抗原检测卡（微柱凝胶）做好标记。将样本1分别加入第1张卡的1-3孔中各1滴（50ul），将样本2分别加入第2张卡的1-3孔中各1滴（50ul），将样本5分别加入第3张卡的1-3孔中各1滴（50ul），将样本6加入第4张卡的第3孔内。使用卡式专用离心机离心，取出，肉眼判定结果，并记录。【建立参考值】首次使用质控品或不连续使用时，需要连续做三天试验，结果一致，方可定为参考值；更换不同批号质控品时，需新旧质控品同时做，连续两天，旧批号质控品在控，新批号质控品质控品结果一致，可确定参考值；更换试剂时，需新旧批号试剂同时做两次质控品，两次结果一致，可确定参考值；不同仪器或不同方法学均要单独定值。质控规则：按输血相容性检测的室内质控程序执行。【失控判定】 阳性结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。失控原因分析：按输血相容性检测的室内质控程序执行。失控解决方案：按输血相容性检测的室内质控程序执行。【记录表格】输血相容性检测室内质控参考值登记表SXK-JL65输血相容性检测室内质控登记表SXK-JL66输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表SXK-JL67【注意事项】1. 室内质控品、标准血清、标准红细胞保存在28，严禁在室温长期存放。2. 用后剩余质控品不宜与新质控品混合，以防污染，不同批号质控品不得混用。3. 红细胞质控品：轻拿轻放，避免剧烈震荡；若发生凝集，出血菌落或严重溶血，不得使用；若出现轻微溶血可用生理盐水对其进行洗涤，重新悬浮后使用。4. 质控血清：出现浑浊或沉淀时，应进行适当离心，去除杂物后将上清液移至洁净容器中使用。【参考资料】1. 长春愽迅生物技术有限公司ABO、RhD血型检测质控品（微柱凝胶法）说明书2. 长春愽迅生物技术有限公司ABO、RhD血型检测卡（微柱凝胶法）说明书3. 上海血液生物医药有限责任公司抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体）说明书4. 密理博（上海）贸易有限公司康D（IgM+IgG）血型定型试剂（单克隆抗体）说明书（二）不规则抗体筛检室内质控操作规程【检验原理】 选择已知血清，标本其与在用试剂抗人球蛋白检测卡（微柱凝胶）中的阳性及阴性结果，通过每天或每批与待检标本相同的试剂和方法进行检测，以监控实验室进行不规则抗体筛检过程中应用的试剂、设备及实验流程，并评估实验结果的有效性。【主要试剂组成】1. 质控品：样本1 O型血清 样本2 IgG型抗D（+）AB血清 2. 不规则抗体筛检试剂： 抗人球蛋白不规则抗体筛检卡（微柱凝胶） 、抗体筛检红细胞【主要仪器】 卡式专用离心机【检验方法】 微柱凝胶法，具体操作步骤如下：1. 将质控品、抗体筛检红细胞从冰箱取出后平衡至室温。2. 取1张抗人球蛋白不规则抗体筛检卡做好标记。3. 将、抗体筛检细胞用低离子强度盐溶液稀释至0.8%，对应加入上述检测卡16管中，50ul/管。4. 分别在前3管加入样本1，后3管加入样本2，50ul/管。5. 将检测卡置37 孵育器中15分钟。 6. 即刻使用卡式专用离心机离心，取出，肉眼判定结果，并记录。【建立参考值】首次使用质控品或不连续使用时，需要连续做三天试验，结果一致，方可定为参考值；更换不同批号质控品时，需新旧质控品同时做，连续两天，旧批号质控品在控，新批号质控品质控品结果一致，可确定参考值；更换试剂时，需新旧批号试剂同时做两次质控品，两次结果一致，可确定参考值；不同仪器或不同方法学均要单独定值。质控规则：按输血相容性检测的室内质控程序执行。【失控判定】 阳性结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。失控原因分析：按输血相容性检测的室内质控程序执行。失控解决方案：按输血相容性检测的室内质控程序执行。【记录表格】输血相容性检测室内质控参考值登记表SXK-JL65输血相容性检测室内质控登记表SXK-JL66输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表SXK-JL67注意事项1. 室内质控品、抗筛细胞、保存在28，严禁在室温长期存放。2. 用后剩余质控品不宜与新质控品混合，以防污染，不同批号质控品不得混用。3. 质控血清：出现浑浊或沉淀时，应进行适当离心，去除杂物后将上清液移至洁净容器中使用。参考资料1. 长春愽迅生物技术有限公司不规则抗体筛检质控品说明书2. 长春愽迅生物技术有限公司抗人球蛋白检测卡不规则抗体筛检操作说明书3. 长春愽徳生物技术有限责任公司不规则抗体检测试剂（人红细胞）使用说明书（三）交叉配血室内质控操作规程【检验原理】 凝聚胺介质法：红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，其悬浮在电解质中形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。而凝聚胺介质法则是首先利用低离子溶液降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合，其后加入凝聚胺溶液（Polybrene，为高价阳离子多聚物、肝素中和剂），以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚，最后加入悬浮液（Resuspending），中和凝聚胺（Polybrene）阳离子作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性，但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，试验结果为阳性。 微柱凝胶法：选择已知的血清和相应的细胞，标本其与在用试剂抗人球蛋白检测卡（微柱凝胶）中的阳性及阴性结果，通过每天或每批与待检标本相同的试剂和方法进行检测，以监控实验室进行交叉配血过程中应用的试剂、设备及实验流程，并评估实验结果的有效性。【主要试剂组成】1. 质控品：样本1 AB型RhD（+）红细胞 样本2 O型RhD（+）红细胞 样本3 RhD（-）红细胞 样本4 O血清 样本5 IgG抗DAB血清 2. 交叉配血检测试剂： 凝聚胺介质试剂：低离子溶液（LIM）、凝聚胺（Polybrene）、悬浮液（Resuspending） 抗人球蛋白交叉配血检测卡（微柱凝胶）【主要仪器】 卡式专用离心机【检验方法】首先将质控品、凝聚胺介质从冰箱取出后平衡至室温。操作步骤按不同检验方法（试管法、微柱凝胶法）进行。1. 凝聚胺介质法 为试管法，操作步骤如下：1.1 取4支（95mm12mm或75mm12mm）试管做好标记.1.2 按照组合1（样本4+样本1）、组合2（样本4+样本2）、组合3（样本5+样本1）、组合4（样本5+样本3）分别加入各管，各1滴（50ul）。1.3 各管加入低离子溶液（LIM）0.65ml，混合均匀后，各管加入凝聚胺（Polybrene）溶液2滴（100ul），并混合均匀。1.4 用离心机3400rpm时间10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。1.5 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝聚，如无凝聚，则必须重做。1.6 最后加入悬浮液（Resuspending）2滴（100ul），轻轻摇动试管混合并同时观察结果。如凝聚散开，表示由Polybrene引起的非特异性凝集，抗体筛检结果为阴性。如果凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结果的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。2、微柱凝胶法 操作步骤如下：2.1 取1张待检抗人球蛋白交叉配血检测卡（微柱凝胶）做好标记。2.2 交叉配血实验按照组合1（样本4+样本1）、组合2（样本4+样本2）、组合3（样本5+样本1）、组合4（样本5+样本3）加样，各50ul。2.3 将检测卡置37 孵育器中15分钟。2.4即刻使用卡式专用离心机离心，取出，肉眼判定结果，并记录。【结果解释】 交叉配血室内质控根据其检测作用可分为IgG组和IgM组如表2。表2 交叉配血室内质控IgG、IgM分组表组合质控品组合检测结果检测作用组合1样本4 + 样本1+检测IgM类抗原抗体反应组合2样本4 + 样本2-检测IgM类抗原抗体反应组合3样本5 + 样本1+检测IgG类抗原抗体反应组合4样本5 + 样本3-检测IgG类抗原抗体反应【建立参考值】首次使用质控品或不连续使用时，需要连续做三天试验，结果一致，方可定为参考值；更换不同批号质控品时，需新旧质控品同时做，连续两天，旧批号质控品在控，新批号质控品质控品结果一致，可确定参考值；更换试剂时，需新旧批号试剂同时做两次质控品，两次结果一致，可确定参考值；不同仪器或不同方法学均要单独定值。质控规则：按输血相容性检测的室内质控程序执行。【失控判定】 阳性结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。失控原因分析：按输血相容性检测的室内质控程序执行。失控解决方案：按输血相容性检测的室内质控程序执行。【记录表格】输血相容性检测室内质控参考值登记表SXK-JL65输血相容性检测室内质控登记表SXK-JL66输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表SXK-JL67【注意事项】1. 室内质控品保存在28，严禁在室温长期存放。2. 用后剩余质控品不宜与新质控品混合，以防污染，不同批号质控品不得混用。3. 红细胞质控品：轻拿轻放，避免剧烈震荡；若发生凝集，出血菌落或严重溶血，不得使用；若出现轻微溶血可用生理盐水对其进行洗涤，重新悬浮后使用。4. 质控血清：出现浑浊或沉淀时，应进行适当离心，去除杂物后将上清液移至洁净容器中使用。【参考资料】1. 长春愽迅生物技术有限公司交叉配血质控品（微柱凝胶法）说明书2. 珠海贝索生物技术有限公司凝聚胺介质试剂说明书3. 长春愽迅生物技术有限公司抗人球蛋白检测卡交叉配血操作说明7