阶梯式包埋板在肾活检电镜标本制备中的应用.pdf

第 卷 第 期 年 月电 子 显 微 学 报 ，文章编号：（）阶梯式包埋板在肾活检电镜标本制备中的应用侯晓涛，王 伶，钟学军，朱伟城，陈观庆，陈启晴，欧洁云，李福华，谢 琳，李依晨，叶慧琳，毕振海，杨惠霏，官 阳，沈婉君（广州金域医学检验中心，广东 广州；暨南大学附属复大肿瘤医院，广东 广州；武汉大学人民医院超微病理中心，湖北 武汉；解放军总医院第一医学中心肾脏病医学部，北京）摘 要 本文介绍了一款新型的阶梯式电镜标本包埋板，此包埋板具有独特的阶梯式设计，如应用于肾活检电镜标本的制备，较传统方法能节省环氧树脂和修块刀片的消耗量，且节约了修块、定位和半薄切片所需的时间。此包埋板成本低，操作简便，是高效的电镜标本包埋工具，为肾活检病理诊断提供有力支撑。此包埋板同样适用于其它组织、器官临床穿刺类标本和科研生物电镜标本的包埋。关键词 阶梯式；包埋板；包埋板肾活检；电镜标本中图分类号：；文献标识码：收稿日期：；修订日期：基金项目：国家重点研发计划政府间重点专项（）作者简介：侯晓涛（），男（汉族），广东清远人，主管技师：通讯作者：杨惠霏（），女（汉族），广东湛江人，主管技师：官阳（），男（汉族），湖北荆门人，教授：沈婉君（）女（汉族），安徽亳州人，技师：电镜标本的制备至关重要，直接影响超微结构的质量，进而影响超微病理的诊断。包埋和修块是标本制备过程中非常重要的环节。包埋一般选用药用胶囊、塑料包埋管、橡胶包埋板等包埋模具进行。肾活检病理诊断是肾脏疾病诊断的金标准，透射电子显微镜（简称为电镜）具有较好的分辨本领，可观察到光学显微镜无法观察、鉴别的超微结构，获得更多病理变化信息。肾小球结构精细，无法在光镜下实现其超微结构的展示，因此肾活检电镜检查在肾脏病理诊断中起着不可或缺的作用。肾活检电镜标本是超微病理电镜室最主要的标本类别，所占比例可高达。为此，电镜工作者为优化标本制备流程，做了很多创新性改进工作，如制作了一种电镜生物标本批量制备的装置及方法以优化标本制备流程、提高制样效率；使用 树脂包埋，用场发射扫描电镜观察以获得清晰的、更大视野下的超微结构信息。清晰地观察到肾小球且呈现在视野中是肾活检电镜检查的必然要素。在实际工作中，电镜技术人员为了定位肾小球，经常需要在寻找肾小球的过程中反复修块，当肾穿刺组织条数多，或者组织中包含肾小球数目较少，甚至没肾小球时，则需要消耗更多的时间。当环境湿度较高时，树脂块硬度增加，修块的难度与耗时也相应增加，同时损耗大量切片机刀片。因此，在制样、切片过程中，如何快速、高效地对肾小球进行定位进而实现超薄切片，是迫切需要解决的问题之一。鉴于此，本文作者设计了一种阶梯式电镜标本包埋板，用于肾活检电镜标本的包埋。包埋板能节省树脂用量，同时利于快速修块及寻找肾小球，为肾活检电镜超微病理诊断提供了高效的辅助工具。材料和方法 阶梯式电镜标本包埋板的设计和制作 阶梯式电镜标本包埋板以现市面上 孔单头平面型包埋板为原型，结合实际工作中常见的活检标本组织的长度、直径等参数，将包埋孔两头宽度设计成相同尺寸（宽 ，区别于现市面上 孔单头平面型包埋板宽度为 ），单头一个切面可多包埋 长的穿刺组织。包埋孔距离两端 处设置为梯度式，梯度深度 ，长度 ，较穿刺组织直径（大部分肾穿刺组织直径 电子显微学报 第 卷约 ）稍大，此处为包埋标本处，最大容纳条肾穿刺组织，便于树脂渗透及组织包埋位置摆放，以满足在组织量多时降低包埋板的用量，同时可减少空白树脂量，节约成本，便于修块。包埋孔中间非梯度部分长 ，宽 ，其面积与实验号标签相适应且标签不易移位。包埋板选用质地较软、耐高温的硅胶材质按上述（图）尺寸进行开模订做。图 阶梯式电镜标本包埋板设计图（单位：）。主视图；左视图；俯视图，用此模型包埋的树脂块（箭头）。（：）；，（）方法 标本取材按实验号顺序置于样品篮中，使用组织处理仪 进行标本漂洗、后固定、漂洗、脱水及半浸透。完成后使用干燥的牙签把标本从样品篮中挑出，置于灌满纯树脂包埋剂的阶梯式电镜标本包埋板中，使组织贴于包埋孔一头阶梯上，若组织过多、过长，可根据包埋孔尺寸切断，包于另一头阶梯上，实验号标签置于包埋孔中间。修块仅需修去少量的空白树脂即可进行半薄切片及定位（图）。图 阶梯式电镜标本包埋板及包埋示意图。阶梯式电镜标本包埋板进行肾活检电镜标本包埋及单个包埋块图；修块和半薄切片后包埋块切面示意图，方框显示需要定位的组织，包含 个肾小球及周边肾小管和肾间质。；，第 期侯晓涛等：阶梯式包埋板在肾活检电镜标本制备中的应用 结果 对比传统包埋板制备的标本，阶梯式包埋板包埋的树脂块，树脂渗透效果良好、切割性能优异、超薄切片平整、超微结构清晰（见图）。比较两种包埋板修块耗时、半薄定位耗时、修块刀片耗损、树脂用量。相比于传统包埋板，阶梯式包埋板均有一定的优势（见表）。图 阶梯式电镜标本包埋板包埋肾活检电镜标本的超薄切片电镜像。轻微病变性 肾病，系膜区电子致密 物清晰、易见，超薄切片平整、无制备缺陷，；肾小管上皮细胞线粒体高倍电镜像，双层膜及嵴清晰可见，。，；，表 传统包埋板与阶梯式包埋板包埋与修块对比 修块耗时 个样修块刀片耗损 个样半薄、定位耗时 个样树脂用量 个样传统包埋板 把 阶梯式包埋板 把 注：统计 个技术员，每次 个样，共 人次，计算 个人 个样平均数；修块刀片为日本艾玛 病理一次性刀片。讨论 本文介绍了一种新型阶梯式包埋板，供肾活检电镜标本包埋使用。包埋板的阶梯尺寸应适中，阶梯太深与传统包埋板无差异，阶梯太浅容易影响渗透及树脂块切割性能。制作包埋板的硅胶硬度应适中，太硬或太软均可能会导致包埋板不耐用、包埋块切面粗糙等。作者在原设计的基础上，经多次样品包埋试验及探索，最终确定图 尺寸进行包埋板订制。该包埋板在包埋质量上与传统包埋板并无差异，在修块及定位效率上具有明显优势。它不仅适用于肾活检电镜标本的包埋，作者还使用它对肝脏穿刺、肌肉、神经、细胞和脑等样品进行了大量包埋实验，包埋样品总量已达 万例以上，且在多个电镜中心使用，均获得很好的效果。但当组织块过大时，由于阶梯处的深度不够导致适用性下降，作者也在致力于针对不同体积组织设计不同规格的阶梯式包埋板。关于肾活检病理诊断电镜检查的规范，肾脏病理学会建议对至少一个或两个肾小球进行超微结构检查，收集肾小球毛细血管、系膜区，肾小管、间质和血管的低、中、高倍图像以作超微结构分析。而部分疾病病变分布不均，缺血及硬化的肾小球不能提供有足够诊断价值的超微病理信息，所以超薄切片应包含有 个或以上肾小球以供电镜观察诊 电子显微学报 第 卷断。若穿刺后立即使用显微镜观察肾组织中肾小球的分布，依据观察结果进而分割部分肾组织供电镜检查，则分较小的组织也可较为精准地获得肾小球以供后续定位及超薄切片。但在临床穿刺操作时，由于场地等因素的限制，无法及时镜检穿刺组织并准确判断出肾小球的分布，因此，在穿刺组织足够多的情况下，为了确保电镜检查肾组织中包含肾小球，会尽可能多地分配肾组织行电镜检查，如图。而一次半薄切片能看到更多的肾组织，就会增加找到肾小球的机率，阶梯式包埋板单个孔两头均设计成相同的尺寸，有助于半薄切片切包埋块的两边均能切到同样多的肾组织，增加找到肾小球的机率。为找到目标结构肾小球（或特殊的病变部位），经常需要反复修块定位，阶梯式设计则减少了多余空白树脂的修块，进而使修块和找球变的更为便捷。本文介绍的一种新型阶梯式包埋板，具有树脂用量更少、修块和定位更便捷的特点，能节省成本，同时能提高电镜技术人员的修块和定位效率，适用于肾活检电镜标本及其它生物电镜标本的包埋。参考文献：丁明孝，等 主编 生命科学中的电子显微镜技术 北京：高等教育出版社，：邹万忠主编 肾活检病理学 第 版 北京：北京大学医学出版社，：肾活检病理规范化诊断共识专家组 肾活检病理规范化诊断的专家共识 中华肾脏病杂志，（）：王贝贝，平泽朋 一种电镜生物样品批量制备的装置及方法 电子显微学报，（）：王博，关旸，王林燕 制样方法改进下的肾组织微结构成像方法研究 电子显微学报，（）：侯晓涛，王伶，等 电镜标本包埋板 中国：钟秀容，陈莲云 组织处理仪在临床超微病理样品制备中的应用 诊断病理学杂志，：，：，（，；，；，；，），；