姜黄素调控JAK2_STAT3通路参与重症急性胰腺炎动物模型肾脏细胞凋亡的研究.pdf

CorrMilMed JntLogNo.6,June28,2023联勤军事医学2 0 2 3年6 月2 8 日第37 卷第6 期465姜黄素调控JAK2/STAT3通路参与重症急性胰腺炎动物模型肾脏细胞凋亡的研究阿尔帕提买买提，地力木热提艾买提，郭飞【摘要】目的探究姜黄素调控Janus 激酶2(Januskinase2，JA K 2）/信号转导和转录激活因子3（signal transduc-er and activatorof transcription3，ST A T 3)通路参与重症急性胰腺炎（severe acutepancreatitis，SA P)肾脏细胞调亡。方法将58 只SPF级别大鼠适应性饲养后，分成假手术组（n=10)、模型组（n=10）、姜黄素低剂量组（n=9)、姜黄素高剂量组（n=10)、阳性对照组（n=10)及JAK2/STAT3抑制组（n=9)。各组相应药物干预后，测量不同组别大鼠胰腺组织湿质量比和腹水量。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，H E)染色法测定不同组别大鼠肾脏组织病理变化；全自动生化分析仪测定血清淀粉酶（amylase，A M Y)、肌酐（creatinine，Cr）和血尿素氮（blood urea nitrogen，BU N)；酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)测定白细胞介素6(interleukin-6，IL-6）、白细胞介素1(interleukin-1beta,IL-1)和肿瘤坏死因子(tumornecrosis factoralpha,TNF-)水平；末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口及末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling，T U NEL)技术测定肾脏细胞调亡情况；反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)测定肾脏B淋巴细胞白血病-2(B-cell lymphoma 2，Bc l-2）、Bc l-2 相关X蛋白(Bcl-2-associatedXprotein，Ba x)、半胱氨酸天门冬酰胺蛋白酶3(cysteine-asparticprotease3，Ca s p a s e-3)的mRNA表达；Westernblot法测定肾脏细胞磷酸化磷酸化酪氨酸激酶2(phosphoryla-ted Janus kinase2，p-JA K 2）、磷酸化信号转导与转录激活因子3(phosphorylated signal transducer and activator of tran-scription3，p-ST A T 3)蛋白表达。结果不同组大鼠胰腺组织湿质量比和腹水量比较差异具有统计学意义（P均0.001）。假手术组大鼠胰腺组织结构清晰、形态正常，且无水肿、炎症细胞浸润；模型组大鼠胰腺组织水肿、空泡化样变，存在炎症细胞浸润或腺泡细胞坏死；姜黄素不同剂量组、阳性对照组及JAK2/STAT3抑制剂组均可改善胰腺组织病理学变化。不同组大鼠血清AMY、Cr 和BUN水平比较差异具有统计学意义（P均 0.0 0 1)。不同组大鼠血清IL-6、IL-1和TNF-水平比较差异具有统计学意义（P均 0.0 0 1)。不同组大鼠肾脏细胞凋亡指数比较差异具有统计学意义（P0.001）。不同组大鼠肾脏组织Bcl-2、Ba x 和Caspase-3的mRNA表达比较差异具有统计学意义（P均 0.0 0 1)。不同组大鼠JAK2、ST A T 3、p-JA K 2 和p-STAT3蛋白水平比较差异具有统计学意义（P均 0.0 0 1）。结论姜黄素可通过抑制JAK2/STAT3信号通路表达，消除SAP的炎性反应，减轻肾脏细胞调亡，控制病情的发展和恶化。【关键词】姜黄素；重症急性胰腺炎；细胞调亡;Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3【中图分类号】R 657.5+1【文献标识码】Adoi:10.13730/j.issn.2097-2148.2023.06.003Regulation of JAK2/STAT3 Pathway by Curcumin in Renal Cell Apoptosis in Animal Model with Severe Acute PancreatitisAERPATI Maimaiti,DILIMURETI Aimaiti,GUO Fei.Department of Emergency Trauma,the First AffiliateHospital of Xinjiang Medical University,Urumchi Xinjiang 830001,Chinaom【A b s t r a c t Objective To investigate the regulation of Janus kinase 2(JAK2)/signal transducer and activator oftranscription 3(STAT3)pathway by curcumin in renal cell apoptosis in animal model with severe acute pancreatitis(SAP).MethodsIs After adaptive feeding 58 SPF grade rats,they were divided into sham surgery group(n=10),modelgroup(n=10),curcumin low-dose group(n=9),curcumin high-dose group(n=10),positive control group(n=10)and JAK2/STAT3 inhibition group(n=9).After drug intervention,wet mass ratio and abdominal water volume of pan-creatic tissue were measured in each group.The pathological changes of renal tissues of rats in different groups was deter-mined by hematoxylin-eosin(HE)staining;determination of serum amylase(AMY),creatinine(Cr)and blood urea ni-【基金项目】新疆维吾尔自治区自然科学基金（2 0 19D01C304）【作者单位】8 30 0 0 1新疆乌鲁木齐，新疆医科大学第一附属医院急诊创伤外科（阿尔帕提买买提、郭飞）；新疆医科大学附属中医医院普外一科（地力木热提艾买提）【通信作者】郭飞，E-mail：46 946 2 351 q q.c o mtrogen(BUN)were measured by fullyautomaticbiochemical analyzer;the levels of interleukin-6(IL-6),interleukin-beta(IL-1p)and tumor necrosis factor alpha(TNF-)were measured by enzyme-linked immunosor-bent assay(ELISA);the apoptosis of renal cells was de-termined by terminal deoxynucleotidyl transferase-media-466Mil Med JntLog0.6,June28,2023联勤军事医学2 0 2 3年6 月2 8 日第37 卷第6 期ted dUTP-biotin nick end labeling(TUNEL);the mRNA expressions of renal B-cell lymphoma 2(Bcl-2),Bcl-2-associat-ed X protein(Bax)and cystaine-aspartic protease 3(Caspase-3)were measured by reverse transcription-polymerase chainreaction(RT-PCR);the expressions of phosphorylated Janus kinase 2(p-JAK2)in renal cells and phosphorylated signaltransducer and activator of transcription 3(p-STAT3)protein were measured by Western blot.Results There were sig-nificant differences in wet mass ratio and abdominal water volume of pancreatic tissue of rats among different groups(allP0.001).In the sham surgery group,the pancreatic tissue was clear and normal,and there was no edema and inflam-matory cell infiltration;in model group,pancreatic tissue edema,vacuolation,inflammatory cellinfiltration or acinar cellnecrosis existed;the histopathological changes of pancreas could be improved in different curcumin dose group,positivecontrol group and JAK2/STAT3 inhibition group.There were significant differences in serum AMY,Cr and BUN levelsamong different groups(all P0.001).The serum levels of IL-6,IL-1 and TNF-were statistically significant in differ-ent groups(all P0.001).The difference of renal cell apoptosis index in different groups was statistically significant(P0.001).The mRNA expressions of Bcl-2,Bax and Caspase-3 in renal tissues of rats in different groups were signifi-cantly difference(all P0.001).The protein levels of JAK2,STAT3,p-JAK2 and p-STAT3 were significantly differ-ence among different groups(all P0.001).Conclusion Curcumin can inhibit the expression of JAK2/STAT3 signalingpathway,eliminate the inflammatory response of SAP,reduce the apoptosis of renal cells,and control the developmentand deterioration of the disease.【K e y w o r d s I Curcumin;Severe acute pancreatitis;Apoptosis;Janus kinases 2/signal transducer and activator oftranscription 3重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SA P)是消化科危重症疾病,具有病情险恶、治疗困难及病死率高等特征，占急性胰腺炎的10%2 0%1-2 1。现阶段临床针对SAP尚无治疗金标准，治疗方法有限，预后差3。姜黄素是从姜黄或术中提取，在抗炎、抗氧化及阻止癌细胞增长等方面发挥生理功能，已被证实能减轻胰腺炎胰腺组织损害，但作用机制尚不明确45。Janus激酶2（Januskinase2，JA K 2）/信号转导和转录激活因子 3(signal transducer and activator of transcrip-tion3，ST A T 3)信号通路参与细胞增殖、分化、凋亡及免疫调节等多种生理过程，尤其是JAK2/STAT3信号通路在胰腺炎的保护作用。本文假设姜黄素能有效调控JAK2/STAT3通路，从而改善SAP动物模型肾脏细胞凋亡状况6-7 。为此，本研究建立SAP动物模型，给予不同浓度姜黄素，比较其对肾脏细胞凋亡和JAK2/STAT3信号通路的影响，为临床提供依据。1材料与方法1.1试剂和仪器SPF级别SD大鼠，常州卡文斯实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证SCXK（苏)2 0 16-0 0 10 ，体质量18 0 2 2 0 g，10 周龄。姜黄素，试剂级，纯度98%，北京康瑞纳生物科技有限公司生产；牛磺胆酸钠盐水合物，试剂级，北京伊塔生物科技有限公司生产；地塞米松（10 mM/1ml)，翌圣生物科技（上海）股份有限公司生产；丙泊酚注射液（规格：2 0 ml:200mg），西安力邦制药有限公司；JAK2/STAT3抑制剂AG490，北京康瑞纳生物科技有限公司生产。Thermo全波长酶标仪1510（美国Thermo公司CR22N高速冷冻离心机（Eppendorf)；A BI7 50 0 荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)仪。淀粉酶(amylase，A M Y)、肌酐(creatinine，Cr)和血尿素氮(blood urea nitrogen，BU N)的试剂盒购自上海酶研生物科技有限公司；白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)、白细胞介素1(interleukin-1beta,IL-1)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-)试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司；JAK2、ST A T 3、磷酸化酪氨酸激酶 2(phosphorylated Janus kinase 2，p-JA K 2)、磷酸化信号转导与转录激活因子3（phosphorylated signaltransducer and activator of transcription 3,p-STAT 3)购自武汉益普生物科技有限公司。1.22方法1.2.1SAP模型和分组将6 0 只SPF级别SD大鼠（体质量18 0 2 2 0 g，10 周龄）适应性饲养后，将大鼠编号，按照抽签完全随机分组法，分成假手术组、模型组、姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组及JAK2/STAT3抑制组，每组10 只，假手术组禁饮、禁食12 h后，静脉注射10 mg/ml丙泊酚行麻醉操作，充分暴露十二指肠，仅翻转十二指肠和胰腺等组织，不进行穿刺、注射药物，逐层缝合大鼠腹壁。其余大鼠建立SAP模型，注射麻醉后，将大鼠固定在手术台上，常规消毒，从腹部正中间切开，暴露十二指肠，并辨识胰胆管，在十二指肠系膜乳头下沿肠壁胆管区域，使用注射器穿刺，并放置硬膜外导管，缓慢推进5cm后，将胰胆管和硬膜外导管结扎，在导管末端接上输液转换器，匀速泵入5%浓度牛磺胆酸钠，剂量1ml/kg，流速0.2 ml/min，12 0 s 后胰腺组织出现出血、水肿，去除结扎丝线，并复位十二指肠，逐MilMedJntLog,Vol,37,No.6,June28,2023联勤军事医学2 0 2 3年6 月2 8 日第37 卷第6 期467层缝合腹壁，造模完成8 1.2.2给药方案最终姜黄素低剂量组（n=9)大鼠模型制备完成后，腹腔注射姜黄素，剂量为50 mg/kg；姜黄素高剂量组（n=10），腹腔注射姜黄素，剂量为100mg/kg9；阳性对照组（n=10)，腹腔注射地塞米松，剂量为2 mg/kgl10；JA K 2/ST A T 3抑制组（n=9），腹腔注射50 mg/kg姜黄素，并注射5mg/kg剂量的AG490(JAK2/STAT3抑制剂)11)。假手术组（n=10)和模型组(n=10)均腹腔注射等量的生理盐水。1.3观察指标1.3.1胰腺组织湿质量比和腹水量各组大鼠药物干预结束后，静脉注射丙泊酚，消毒麻醉，开腹后使用干棉球吸附腹水，并应用量筒测定腹水体积；使用生理盐水冲洗胰腺组织，胰腺湿质量比的公式为胰腺质量和大鼠体质量的比值。1.3.2苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察胰腺组织病理学变化取各组大鼠胰腺组织，使用10%甲醛缓冲液固定后，应用石蜡包埋过夜，连续切片（片厚6 m）后采用HE染色，最后使用中性树胶封片，并行组织形态学检查。两名病理科室医师双盲发观察胰腺组织学变化12 。1.3.3血清AMY、C r 和BUN取腹主动脉血，离心后获得血清，液氮一8 0 保存备用。全自动生化仪测定血清AMY、Cr 和BUN,每组数据测定3次，取平均值，相对标准差不超过5%。1.3.4酉酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immu-nosorbent assay,ELISA)法测定 IL-6,IL-1 和 TNF-取腹主动脉血，离心后获得血清，酶标仪测定血清IL-6、IL-1和TNF-，每组数据测定3次，取平均值，相对标准差不超过5%。1.3.5末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口及末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-me-diated dUTP-biotin nick end labeling，T U NEL)测定肾脏调亡指数文肾脏组织切片固定在载玻片上后，使用TUNEL技术标记肾脏凋亡细胞，二氨基联苯胺（d i a m i n o b e n z i d i n e，D A B）法显色后再光镜下分析调亡结果，每张切片分别观察5个高倍视野，计数10 0 个细胞,计数10 0 个肾脏细胞中阳性细胞数。1.3.6反转录聚合酶链式反应（reversetranscrip-tion-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测肾脏B淋巴细胞白血病-2(B-cell lymphoma2，Bc l-2)、Bc l-2相关X蛋白(Bcl-2-associated Xprotein，Ba x)、半胱氨酸天门冬酰胺蛋白酶3（cysteine-asparticprotease3,Caspase-3)mRNA水平取0.1g大鼠肾脏组织放人液氮的研钵中，搅拌磨成粉末后加入1mlTrizol试剂，提取肾组织RNA，并通过紫外分光光度计计算260nm/280nm波长处吸光度比值，测定其浓度。浓度合格后，取样品5g，逆转成cDNA，配制RT-PCR反应体系2 0 l,具体反应体系为：绿色荧光染料（SYBRGreen，SYBR）10 l,互补 DNA（c o mp l e me n t a r yDNA，c D NA)2 l,二乙基碳酸酯（diethyl pyrocar-bonate，D EPC)水6 l,前引物0.4mol,后引物0.4mol,荧光染料Carboxy-X-rhodamine4l。反应条件如下：95预变性3min；95变性10 s，6 0 延伸30 s,共40 个循环。选以糖酵解过程中的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogen-ase，G A PD H)作为内参。Bcl-2引物序列，上游：5-ATTGTGGCCTTC-TTTGAGTTCY-3;下游:5-ACT-GAGCAGAGT-CTTCAGAG-3。Ba x 引物序列，上游：5-ACCA-GCTCTGAGCAGATCATG-3;下游:5-ATC-ATCCTCTGCAGCTCCATG-3。Ca s p a s e-3 引物序列,上游：5-ATGGAGAACACTGAAAACTCAG-3；下游：5-GACCGAGATGTCATTCCAGTG-3。G A P-DH引物：上游：5-ACGGATTTGGTCGTATTGGG-3;下游:5-TGGAAGATGGTGATGGGATT-3。每个样本浓度与GAPDH浓度比值即为Bcl-2、Ba x、Caspase-3mRNA相对表达量。1.3.7Westernblot法检测肾脏组织JAK2和STAT3蛋白信号通路各给药结束后，解剖出各组小鼠肾脏组织，采用Westernblot法检测JAK2和STAT3蛋白及p-JAK2、p-ST A T 3蛋白表达水平的影响，在总蛋白的提取、上样、电泳及转膜、5%脱脂奶粉封闭2 h、然后分别加人JAK2、ST A T 3、P-JA K 2 和p-STAT3一抗，并以GAPDH为内参（1:10 0 0 稀释），次日加入辣根过氧化物酶标记山羊抗兔二抗（1：50 0 0 稀释），室温孵化2 h后，行显色、显影等流程后，根据蛋白条带的灰度值计算蛋白相对表达量1.4统计学处理采用SPSS25.0统计软件对数据进行统计分析，计量资料以均数土标准差（工土s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1胰腺组织湿质量比和腹水量不同组胰腺组织湿质量比和腹水量组间比较差异具有统计学意义（P0.001），模型组、姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组及JAK2/STAT3抑MilMedJntLo6,June28,2023联勤军事医学2 0 2 3年6 月2 8 日第37 卷第6 期468制组大鼠胰腺组织湿质量比和腹水量明显高于假手术组，模型组大鼠胰腺组织湿质量比和腹水量明显高于姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组及JAK2/STAT3抑制组，组间比较差异均具有统计学意义(P均 0.0 5),见表1。表1不不同组别大鼠胰腺组织湿质量比和腹水量比较（土s）Table 1 Comparison of wet mass ratio and abdominal watervolume of pancreatic tissue among different groups(s)胰腺组织湿质量比腹水量项目(103)(ml)假手术组(n=10)1.29 0.170.39 0.10模型组(n=10)4.67 0.30#4.72 0.43#姜黄素低剂量组（n=9)3.25 0.23#*3.88 0.44#*姜黄素高剂量组(n=10)2.61 0.27#*2.03 0.19#*阳性对照组（n=10）1.75 0.14#*1.06 0.12#*JAK2/STAT3抑制组(n=9)1.60 0.15#*0.77 0.13#*F/P值379.759/0.001395.545/0.001注：与假手术组相比，#P0.05与模型组相比，*P0.052.2HE染色观察胰腺组织病理学变化假手术组大鼠胰腺组织结构清晰、形态正常，并且无水肿、炎症细胞浸润；模型组大鼠胰腺组织水肿、空泡化样变，存在炎症细胞浸润或腺泡细胞坏死。姜黄素不同剂量组、阳性对照组及JAK2/STAT3抑制剂组均可改善胰腺组织病理学变化，恢复正常的胰腺组织结构，消除炎症细胞浸润，见图1。2.3大鼠血清AMY、C r 和BUN不同组大鼠血清AMY、C r 和BUN组间比较差异具有统计学意义（P0.001)，模型组、姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组及JAK2/STAT3抑制组大鼠AMY、C r 和BUN水平明显高于假手术组，模型组大鼠AMY、C r 和BUN水平明显高于姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组和JAK2/STAT3抑制组，组间比较差异均具有统计学意义（P均 0.0 5),见表 2。假手术组模型组姜黄素低剂量组姜黄素高剂量组阳性对照组JAK2/STAT3抑制组图1不不同组别大鼠胰腺组织病理学比较Figure 1 Comparison of pancreas histopathology of rats among different groups表2 不同组别大鼠血清AMY、Cr 和BUN比较（s）Table2Comparison of serum AMY,Cr and BUN of rats among the different groups(s)项目AMY(U/L)Cr(mol/L)BUN(mmol/L)假手术组（n=10)900.2150.0245.10 7.625.07 1.87模型组(n=10)3728.45 195.43#150.02 12.28#16.78 3.01#姜黄素低剂量组（n=9)3411.76 185.58#*127.16 14.55#*14.00 2.87#*姜黄素高剂量组(n=10)3208.34192.00#*109.81 10.72#*12.50 2.99#*阳性对照组（n=10）2301.66188.42#*87.547.03#*11.43 3.09#*JAK2/STAT3抑制组(n=9)1643.05 200.34#*63.048.00#*7.56 2.03#*F/P值399.374/0.001139.729/0.00124.879/0.001注：与假手术组相比，#P0.05；与模型组相比，*P0.05469联勤军事医学2 0 2 3年6 月2 8 日第37 卷第6 期Mil Med JntLog,Vol.37,No.6,June28,20232.4大鼠血清IL-6、I L-1和TNF-表达不同组大鼠血清IL-6、I L-1和TNF-水平组间比较差异具有统计学意义（P0.001)，模型组、姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组及JAK2/STAT3抑制组大鼠IL-6、I L-1和TNF-水平明显高于假手术组，模型组大鼠IL-6、IL-1和TNF-水平明显高于姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组和JAK2/STAT3抑制组，组间比较差异均具有统计学意义（P均 0.0 5)，见表3。表3大不同组别大鼠血清IL-6、I L-1和TNF-表达水平比较（s)Table 3Comparison of serum IL-6,IL-1 and TNF-expressions of rats among the different groups(s)项目TNF-(ng/L)IL-6(pg/ml)IL-1(pg/ml)假手术组（n=10）163.02 24.0110.332.30143.0910.34模型组(n=10)469.79 30.32#49.986.38#399.87 28.45#姜黄素低剂量组（n=9)377.65 21.65#*37.14 5.59#*358.02 29.00#*姜黄素高剂量组（n=10)292.15 19.02#*29.60 5.03#*322.55 25.49#*阳性对照组（n=10)243.00 25.03#*23.87 6.04#*297.01 30.33#*JAK2/STAT3抑制组(n=9)200.19 22.42#*15.93 3.00#*189.32 20.98#*F/P值226.663/0.00183.077/0.001154.775/0.001注：与假手术组相比，#P0.05；与模型组相比，*P0.052.5大鼠肾脏细胞凋亡指数不同组大鼠肾脏细胞调亡指数组间比较差异具有统计学意义（P0.001），模型组、姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组及JAK2/STAT3抑制组大鼠肾脏细胞凋亡指数明显高于假手术组，模型组大鼠调亡指数明显高于姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组和JAK2/STAT3抑制组，组间比较差异均具有统计学意义（P均 0.0 5），见表4。表4不同组别大鼠肾脏细胞凋亡指数比较（土s）Table 4Comparison of renal cell apoptosis indexof rats among the different groups(s)项目调亡指数假手术组(（n=10)10.55 2.78模型组(n=10)42.09 7.04#姜黄素低剂量组(n=9)35.01 6.66#*姜黄素高剂量组（n=10）29.59 7.52#*阳性对照组（n=10)21.00 5.03#*JAK2/STAT3抑制组(n=9)17.19 5.61#*F/P值38.322/0.001注：与假手术组相比，#P0.05；与模型组相比，*P0.052.6Bcl-2、Ba x 和 Caspase-3 mRNA 表达水平不同组大鼠肾脏组织Bcl-2、Ba x 和Caspase-3mRNA表达水平组间比较差异具有统计学意义（P0.001）,模型组、姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组及JAK2/STAT3抑制组大鼠Bcl-2的mR-NA表达水平明显低于假手术组，Bax和Caspase-3mRNA表达水平明显高于假手术组，模型组大鼠Bax和Caspase-3mRNA表达水平明显高于姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组和JAK2/STAT3抑制组,Bcl-2mRNA表达水平明显低于姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组和JAK2/STAT3抑制组，组间比较差异均具有统计学意义（P均 0.0 5），见表5。2.7JAK2、ST A T 3、p-JA K 2 和p-STAT3蛋白水平不同组大鼠JAK2、ST A T 3、P-JA K 2 和p-STAT3蛋白水平组间比较差异具有统计学意义（P0.001），模型组、姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组大鼠JAK2、ST A T 3、P-JA K 2 和p-STAT3蛋白水平表5不同组别大鼠Bcl-2、Ba x 和Caspase-3mRNA比较（s）Table 5Comparison of Bcl-2,Bax and Caspase-3 mRNA of rats among the different groups(s)项目Bcl-2BaxCaspase-3假手术组(n=10)0.69 0.020.19 0.030.280.06模型组(n=10)0.12 0.04#0.92 0.05#0.99 0.05#姜黄素低剂量组（n=9）0.23 0.05#*0.78 0.03#*0.83 0.07#*姜黄素高剂量组（n=10）0.37 0.03#*0.56 0.05#*0.68 0.08#*阳性对照组（n=10）0.43 0.08#*0.45 0.04#*0.52 0.05#*JAK2/STAT3抑制组(n=9)0.55 0.09#*0.33 0.09#*0.35 0.06#*F/P值134.723/0.001278.590/0.001229.992/0.001注：与假手术组相比，#P0.05；与模型组相比，*P0.05MilMedJntLog.6,June28,2023联勤军事医学2 0 2 3年6 月2 8 日第37 卷第6 期470明显高于假手术组，JAK2/STAT3抑制组上述指标低于假手术组；模型组大鼠JAK2、ST A T 3、P-JA K 2 和p-STAT3蛋白水平明显高于姜黄素低剂量组、姜黄素高剂量组、阳性对照组和JAK2/STAT3抑制组，组间比较差异均具有统计学意义（P均 0.0 5）,见图2、表6。3讨论SAP是一种临床危重急症，患者可能出现重要脏器如肝、肺和肾脏的损伤，具有极高的死亡率。研究发现，肾脏功能损伤的情况与SAP的严重程度和预后恢复密切相关13。病理研究显示，SAP发生后，胰蛋白酶释放，受缺氧、氧自由基过剩、细菌感染及免疫失衡P-STAT3STAT3JAK2P-JAK2GAPDH模型组假手术组阳性对照组姜黄素高剂量组姜黄素低剂量组JAK2/STAT3抑制组图2Westernblot法检测JAK2/STAT3信号通路Figure 2JAK2/STAT3 signaling pathwaydetected byWesternblot表6 天不同组别大鼠JAK2/STAT3信号通路比较（土s）Table 6 Comparison of JAK2/STAT3 signaling pathway of rats among the different groups(s)项目JAK2STAT3P-JAK2P-STAT3假手术组（n=10)0.77 0.090.47 0.050.33 0.020.28 0.03模型组(n=10)1.41 0.15#0.79 0.09#0.96 0.08#0.89 0.04#姜黄素低剂量组（n=9)1.29 0.11#*0.62 0.05#*0.79 0.11#*0.70 0.05#*姜黄素高剂量组(n=10)1.14 0.12#*0.52 0.07#*0.67 0.09#*0.58 0.03#*阳性对照组（n=10）1.01 0.09#*0.43 0.06#*0.55 0.10#*0.33 0.02#*JAK2/STAT3抑制组(n=9)0.65 0.08#*0.32 0.09#*0.19 0.03#*0.17 0.04#*F/P值257.303/0.00183.519/0.001293.163/0.001274.365/0.001注：与假手术组相比，#P0.05；与模型组相比，*P0.05等多重因素影响，导致显著的肾损伤，加重病情青14-15目前尚无SAP的有效治疗手段，仅能通过对症治疗，预后较差。姜黄是中国传统中药，具有悠久的使用历史和高安全性，可应用于抗菌、抗氧化和增强机体免疫功能。姜黄素，其主要活性成分，已被临床应用于治疗胰腺炎，但其作用机制尚未完全阐明16 炎性因子聚集和细胞亡是SAP及其肾损伤的主要病理特征。SAP发生后，机体会产生和释放内毒素，诱发促炎因子TNF-，I L-6 和IL-1的分泌，刺激和活化粒细胞，并与内皮细胞粘附，激活吞噬细胞功能,进而释放自由基、蛋白酶和水解酶,最终损伤肾血管内皮组织17 。Jia等18 证实，胰蛋白酶在SAP中大量产生、分泌，其可在降解血浆蛋白的过程中释放多肽，增加肾小球通透性，促进细胞调亡，加重肾功能损伤。本研究发现,不同剂量的姜黄素可降低大鼠胰腺组织湿质量比和腹水量，改善胰腺组织病理学变化，恢复正常的胰腺组织结构，消除炎症细胞浸润，同时降低炎性因子 TNF-,IL-6 和IL-1的表达,减少细胞凋亡指数，纠正Bcl-2、Ba x、Ca s p a s e-3细胞凋亡因子mR-NA的表达。当肾脏功能受损后，机体内可出现水钠潴留，AMY、Cr 和BUN等有害物质无法通过尿液排出，可以通过上述指标判断肾功能。姜黄素可降低AMY、Cr 水平，证实其对肾脏功能的保护作用19，且韩晓瑜等2 0 证实，姜黄素可消除机体炎症反应，保护肾功能。为进一步分析姜黄素对肾脏的保护作用，本研究在既往文献和预实验的基础上引人了JAK2/STAT3信号通路。JAK2/STAT3信号通路作为高度进化保守的信号通路，是细胞内氧化应激和细胞凋亡调控的重要途径。STAT3蛋白的激活可应用于调控下游基因的表达，并发挥促进细胞增殖和抗凋亡的作用，是神经细