维生素D受体Bsm I基因多态性及VDR mRNA表达与系统性红斑狼疮的相关性.pdf

中 华 临 床 免 疫 和 变 态 反 应 杂 志 C HI NE S E J O URN AL OF AL L ER GY C L I NI CA L I MMUNO L O GY 基础研究 维生素 D受体 B s m I 基因多态性及 V D R mR N A表达与系统性 红斑狼疮的相关性 罗雄燕，武丽君，陈 龙，杨明辉，刘宁涛，库尔班江 ，谢传美，廖 涛，史冉庚 ，唐 中，赵 岩 ，曾小峰 ，袁国华 (川北医学院风湿免疫研究所，四川南 充 6 3 7 0 0 0)摘要：目的 检测维生素 D受体(V D R)B s m I 基因多态性与系统性红斑狼疮(S L E)的相关性，以及对 S L E 患 者 V D R m R N A表达 的影响。方 法应用 聚合酶链反 应一 限制性 片段长度 多态性 f P C R R F L P 1分 析技术检 测 V D R B s m I 多态性位点和基因型在 2 4 2例系统性红斑狼疮 患者 和 1 6 2例 健康 对照组 中的分 布情 况，并分析与 S L E发病 的 相关性及对 S L E患者临床的影响。同时应用实 时定量聚合酶链反应(R T P C R)技术检测 V D R m R N A在 4 8例 S L E患 者和 3 8例健康对照组 的表达。结果 V D R B s m I 多态性等位 基因 B和 b频 率在 S L E组和健康对照组差异无统计学 意义(尸=0 1 6 6)，但 B等位基 因阳性的 S L E患者(B B基因型和 B h基 因型患者)肾脏损害的发生率较 B等位基 因阴 性 S L E患者明显升高(b b基 因型患者，P=0 0 4 4)。V D R m R N A在 4 8例 S L E患者表达下 调，其 C t 值(C t 值越 大，表达量越小)为 9 2 6 2 3 7，高 于健 康对照组 的 7 8 2 3 0 5(P=0 0 2 6)。而在 S L E患者，B等位基因 阳性患者 的 V D R m R N A 的 C t 值 为 9 5 30 5 3，明显高 于 B等 位基 因阴性 患者 的 7 7 7+4 3 0(t=2 5 0 2，P=0 0 1 6)。结论 V D R B s m I 基 因多态性与 S L E发病易感性无关，但 B等位基 因阳性患者更容易发生 肾脏损害，此可能与 B等位基 因 下调 S L E患者的 V D R m R N A表 达有关。关键词：系统性红斑狼疮；维生素 D受体；B s m I；基 因多态性 中图分类号：R 3 9 2 1 2；R 5 9 3 2 4 1 文献标 志码：A 文章编号：1 6 7 3 8 7 0 5(2 0 1 1)0 1 0 0 1 7 0 7 As s o c i a t i o n o f Vi t a mi n D Re c e pt o r Ge n e Bs m I Po l y mo r p h i s m a n d mRNA Ex pr e s s i o n wi t h S y s t e mi c Lu pu s Er y t he ma t o s u s L U O X i o n g-y a n，WU L i-j u n ，C H E N L o n g，Y A N G Mi n g-h u i，L I U N i n g t a o ，K U E R B a n j i a n g ，X I E C h u a n g m e i，L I A O T a o，S H I R a n-g e n g ，T A N G Z h o n g，Z H A O Y a n Z E N G X i a o-f e n g Y U A N G u o h u a (I n s t i t u t e o f R h e u m a t o l o g y a n d I mm u n o l o g y，A f fi l i a t e d H o s p i t a l o f N o r t h S i c h u a n Me d i c a l C o l l e g e，N a n c h o n g 6 3 7 0 0 0，S i e h u a n，C h i n a)Ob j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e a s s o c i a t i o n o f v i t a m i n D r e c e p t o r(V D R)g e n e B s m I p o l y m o r p h i s m w i t h s y s t e m i c l u p u s e r y t h e m a t o s u s(S L E)a n d t h e i n fl u e n c e t o V D R m R N A i n S L E i n C h i n e s e H a n p a t i e n t s Me t h o d s Ge n o mi c D NA f r o m 2 4 2 C h i n e s e S L E p a t i e n t s a n d 1 6 2 s e x a n d e t h n i c a l l y ma t c h e d c o n t r o l s w e r e t y p e d f o r V DR B s m I p o l y mo r p h i s m b y p o l y me r a s e c h a i n r e a c t i o n r e s t r i c t i o n f r a g me n t l e n g t h p o l y m o r p h i s m(P C R R F L P)C l i n i c a l c h a r a c t e r i s t i c s w e r e a n a l y z e d a mo n g d i f f e r e n t B s m I g e n o t y p e s T h e e x p r e s s i o n o f VDR mRN A fro m 4 8 C h i n e s e S L E p a t i e n t s a n d 3 8 s e x a n d e t h n i c a l l y ma t c h e d c o n t r o l s w e r e 基金项 目：卫生部重大疾病研究资助项 目(2 0 0 8 B A 1 5 9 B 0 2)，川北 医学院重点实验室开放基 金资助项 目(K F J J(0 9)一 0 3)；新疆维吾尔 自 治区人民医院风湿科，乌鲁木齐 8 3 0 0 0；四川省遂宁市 中心 医院风湿科，四川 遂宁 6 2 9 0；中国 医学科 学院北京协 和医学院北京 协和医院风湿免疫科，北京 1 0 0 7 3 0；#通信作者电话：0 8 1 7 2 2 6 2 3 2 5，电子邮件：g h u a y u a n 1 9 9 6 y a h o o 13 0 1 1 1 V0 I 5 No 1 1 7 中 华 l临 床 免 疫 和 变 态 反 应 杂 志 d e t e c t e d w i t h r e a 1 t i m e p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n(R T-P C R)R e s u l t s T h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n f r e q u e n c i e s o f al l e l i c g e n e B a n d b i n S L E a n d c o n t r o l s(P=0 1 6 6)B u t S L E p a t i e n t s c a r r y i n g a l l e l i c g e n e B(B B a n d B b g e n o t y p e s)w h i c h w e r e m o r e i n v o l v e d i n r e n a l d i s o r d e r w h e n c o m p a r e d w i t h p a t i e n t s c a r r y i n g a l l e l i c g e n e B n e g a t i v e(b b g e n o t y p e，P=0 0 4 4)T h e e x p r e s s i o n o f V D R mR N A i n 4 8 S L E w a s d o w n r e g u l a t i n g，w h i l e t h e C t v a l u e o f S L E w a s h i g h e r t h a n c o n t r o l s(9 2 6 2 3 7 Y S 7 8 2 3 0 5，P：0 0 2 6)(t h e h i g h e r o f C t v a l u e，t h e l o w e r o f e x p r e s s i o n q u a n t i t y)T h e C t v a l u e o f V D R m R N A i n S L E c a r r y i n g B a l l e l e w a s h i g h e r t h a n t h a t i n B a l l e l e n e g a t i v e S L E(9 5 3 0 5 3 U S 7 7 7 4 3 0，t=2 5 0 2，P=0 0 1 6)C o n c l u s i o n T h e r e i s n o a s s o c i a t i o n b e t w e e n t h e V D R g e n e B s m I p o l y m o r p h i s m a n d s y s t e m i c l u p u s e r y t h e ma t o s u s i n t h e Ha n p o p u l a t i o n o f s o u t h e r n C h i n a，b u t t h e p a t i e n t s c a r r y i n g B a l l e l e a r e mo r e i n v o l v e d i n r e n a l d i s o r d e r w h i c h ma y b e d u e t o c a r r y i n g B a l l e l e d o w n-r e g u l a t i n g t h e e x p r e s s i o n o f VD R mRNA i n S L E Ke y wo r d s：s y s t e mi c l u p u s e r y t h e m a t o s u s；v i t a mi n D r e c e p t o r；Bs m I；g e n e p o l y mo r p h i s m C h n，Al l e r g y C l i n I mmu n o Z，2 0 1 1，5(1)：1 72 3 系统性红斑狼疮(s y s t e m i c l u p u s e r y t h e m a t o s u s。S L E)是一种临床表现多样 的 自身免疫性疾病，其 病因及明确的发病机制尚不明确。家系调查和免疫 遗传学研究证实。其发病与遗传易感基 因有关l 1 。已有研究证实 S L E的发病和 H L A 1 1 类(D R、D Q、D P)和类基因(C 2、C 4)密切相关，并呈现性 别倾 向。但是 H L A基因并不是 S L E易感 的惟一 因 素。近几年，国内外对 I F N 及 I L 2基 因多态性与 S L E发病的相关性都有研究。1，2 5(0 H)2 D 通过剂量 依赖方式抑制 T h 1分泌 I F N y 2】。研究表 明维生素 D受 体(v i t a m i n D r e c e p t o r，V D R)基 因与肠 道钙 吸收、骨代谢有关，被认为是研究骨和钙代谢疾病 的候 选 基 因，V D R基 因 多态 性 与疾 病 的关 系 已经 受 到研 究者 的密切关 注，但有关 V D R多态 性与 S L E关系的报道较少。为此，本研究通过多聚酶链 式 反应(P C R)检测 S L E患 者 中 B s m I 基 因 多 态性 分布及采用实时定量 P C R检测 V D R在系统性红斑 狼疮的表达，以探索 B s m I 基因多态性是否为易感 基 因标志或与 中国汉族人群 S L E的病情严重性有 关，并分析 V D R基因多态性与其表达的相关性。对象和方法 对 象 收集来 自川 I 北医学院附属医院、遂宁市人 民医 院、新疆维吾尔 自治区人 民医院 的 S L E患者 2 4 2 例，其 中男 1 6例，女 2 2 6例；年龄 1 4 7 1岁，平 均年龄(3 5 6 1 2 1)岁；中位病程 3 5个月。同时 随机抽取 1 6 2例年龄、性别匹配的健康体检者作为 对照组，其中男 1 2例，女 1 5 0例年龄 1 6 7 3岁，平均年龄(3 0 9 9 1)岁。所有患者均符合美国风湿 病学会 1 9 9 7年修订的S L E分类标准。详细记录患者 的临床资料，包括症状、体征、实验室检查及治疗情 况，S L E疾病活动性指数按照文献 3 报道进行评分。以上研究对象均为中国汉族人 其 中来 自新疆 S L E 患者 8 6例。所有受试者均签订了知情同意书。主 要仪器 M y c y c l e r TM T h e r ma l c y c l e r聚合酶链反应(P C R)扩增仪(B I O R A D，U S A)，低温高速离心机、电热 恒温水箱(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂)，凝 胶 成像仪(B I O R A S，U S A)，电泳 仪(B I O R A S，U S A)，7 9 0 0 TM实时定量 P C R仪(A B I，U S A)。试 剂 A N A马赛克间接免疫荧光法检测试剂盒(欧蒙 生 物 技 术 有 限 公 司)，人 淋 巴 细 胞 分 离 液(L T S 1 0 7 7，天津灏洋生物制品科技有限责任公司)，T R I z 0 1 试剂(T I A N G E N)，R e al t i m e P C R Ma s t e r M i x (A B I)，D N A提取 试剂盒 购 自北京 天根 生化公 司 f T I A N a m p D N A B l o o d K i t，目录号 D P 3 1 8 0 3 1。方法 外周血基 因 D N A提取：所有患者及对照人群 均采集外周 E D T A抗凝血 2 m l。取混匀全血 7 5 0 l 按照外周血基因组 D N A提取试剂盒说 明书提取基 因组 D N A，提取 D N A样本分装后置一 2 0 保存备用。维生素 D受 体 B s m I 基 因多态性及 V D R m R N A表达与系统性红斑狼疮 的相关性 V D R基 因的 多聚 酶链 式 反应f P C R 1：B s m I f r s 1 5 4 4 4 1 0)P C R反应引物 由北京博 迈德生物有 限 公 司合 成，序 列 如 下：上 游 引 物 5 C A A C C A A G A C T A C A A G T A C C G C G T C A G T G A 3 下 游 引 物 5 A A C C A G C G G G A A G A G G T C A A G G G 一3，P C R反应 条件：变性 9 5 4 m i n：循环反应：9 5 3 0 s，6 2 6 C 5 0 S，7 2 o C 1 ra i n，3 5个循环；延 伸反应：7 2 7 m i n。P C R反应试剂购 自北京天根 生 化公 司(T I A N G E N，目录 号：K T 2 0 1)。P C R 反 应完成后取 5 l 产物进行 1 琼脂糖凝胶电泳(含 0 5 g L溴化乙啶)，凝胶成像仪下观察结果并照相 保存。限制 性 内切 酶 B s m I 酶切检 测 V D R基 因型：取 P C R扩增产物 l 0 l，加人 5 U B s m I 酶(M v a 1 2 6 9 I，F e r m e n t a s)，1 0 B u f f e r T a n g o TM：2 tx l，加 d d H 2 O 至 2 0 l，3 7 水浴过夜(约 1 5 h)，8 0 2 0 rai n终止 酶切反应。取酶切产物在 1 5 琼脂糖凝胶 中进行 电泳，凝胶成像仪下观察结果并照相保存。其中缺 乏内切酶 B s m I 酶切位点用 B表示，存在酶切位点 用 b表 示。其他实验室指标检测：抗核抗体(A N A)检测 采用 间接 免疫荧光法；抗 d s D N A抗体检 测采用放 射 免疫沉 淀法：E N A检测采用免疫 印迹 法，试剂 盒购 自德国 E U R O I MMU N公司。V D R基 因 m R N A表达的实时定量分析：(1)外周血单个核细胞(P B MC)的分离：抽取 外周静脉血 3 肝素抗凝，应用淋巴细胞分离液 分离 P B MC，按说明书进行操作。(2)R N A抽取 和反转录反应：按 T R I z o l 法 抽 取 总 R N A 然 后 用 B i o B R K R T P C R K i t R e v e r T r a A c e反转 录试剂盒反转 录为 c D N A按说明书进行 操作。(3)扩增引物设计：在 N C B I数据库检索人类 V D R(G e n B a n k：B C 0 6 0 8 3 2 1)基因的 c D N A 全长序 列，以 B a c t i n作为内参照基 因。以 p r i m e r p r i m e r 5 软件设计扩增模板的以下引物：5 T G A C C C T I 1C T G T G A C C C T A G 3(正 义 链)。5 A G C A G T A C G A T C T G G T C C T C 3 (反义链)，以 13-a c t i n作为内参照基因 5 T C C C T G G A G A A G A G C T A C G A 3 f 正 义 链)，5 A G C A C T G T G rI T I G G C C A G 3 (反义链)。引物设计 后 通过 B L A s T分 析(W W W n c b i n l m n i h g o v B L A S T)避免扩增的序列存在非特异性，用 o l i g o d e m o软件 测试序列无引物二聚体形成。各引物均由上海生工 公司合成。(4)S Y B R g r e e n实时定量 P C R：总体积为 2 0 l：d d H 2 O 8 Ix l，S Y B R混 合 物 9 Ix l，正 向引 物(1 0 m o l L)0 5 l，反 向引物(1 0 p,m o l L)0 5 s x l，c D N A 2 Ix l。P C R循环条件：9 5 3 0 S，9 5 5 S，5 2 5 S，7 2 3 0 S，共 4 0个循环。荧光定量 P C R 的结果 以 每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历 的循环数 C t值表示。C t 值越大，参与反应的起始 模板量就越少，反之则越多。检测 S L E患者和健康 对照组 V D R m R N A表达，以 B a c t i n mR N A作为 内 对照。V D R m R N A表达根据参考文献 4 的方法计 算 V D R m R N A表达量 C t 值 C t值为基因的 C t 值减去管家基因 B a c t i n的 C t 值。C t 值越大，基 因表达 量就越 小。统计学 方法 组 间基 因型及 等位 基 因 比较均 采 用 x 检验(P e a r s o n C h i S q u a r e)；两组计量资料采用 t 检验，多 组计量资料采用方差分析(o n e w a y A N O V A)。所有 数 据采 用 S P S S 1 1 5软 件包 处理，P0 0 5)，B等 位基 因 阳性 和阴性之 间疾病活动 积分(S L E D A I)比较差异无统计学意义(P=0 4 1 5)(表 2)。对 S L E患者基因多态性检测前 4周的治疗情况 进行了分析，包括糖皮质激素 E t 平均用量(泼尼松 等效剂量)和免疫抑制剂(环磷酰胺、甲氨蝶呤、苯丁酸氮芥、硫嘌嘌呤、羟基氯喹等)的应用，结 果显示，糖皮质激素 E l 平均用量在 B B、B b、b b基因 型患者分别为(3 7 7+2 9 8)、(3 6 2 2 2 4)和(3 4 1 2 3 7)m g d =0 3 7 4，P=0 6 3 8)；并用免疫抑制剂 者 在 3组 分 别 有 1 0 0 、9 4 5 和 8 7 5 (x =1 8 4 1，P=0 3 9 8)。V D R B s m I 基 因 多态 性对 V DR mR N A 表 达 的 影 响 S L E患者 总体 的 V D R m R N A C t 值 为 9 2 6-1-2 3 7。显著大于健康对照组的7 8 2 3 0 5(t=2 2 6 7，P=0 0 2 6)。V D R m R N A表达在不同基因型正常人组和 S L E 患者组 中的表达结果见图 2。由图 2可见 各基因 型 S L E患 者 V D R m l t N A表 达 与 相应 正 常 人 无 差 异(P0 0 5)。未发 现 V D R mR N A表 达 在不 同基 因型 S L E患者之间(F=0 6 5 1，P=0 5 2 6 1，以及不同基 因型正常人之间(F=2 7 0 8，P=0 0 8 1)有显著性 差异(图 2)。但 V D R mR N A在 8例 B等位基因 阳 性 S L E患者(B B和 B b基因型患者)的表达明显低 于 4 O例 B等位基 因阴性 S L E患者(b b基 因型患 者1，其 C t 值在前者为 9 5 3 0 5 3，后者为 7 7 7 4 3 0(t=2 5 0 2，P=0 0 1 6)。表 1 S L E患者及正常对 照人群 B s m I 等位基因及基 因型 Ta b l e l F r e q u e n c i e s o f B s m I a l l e l e s a n d g e n o t y p e s i n S L E p a t i e n t s a n d c o n t r o l s 维生素 D受体 B s m I 基 因多态性 及 V D R m R N A表达与系统性红斑狼疮 的相关性 表 2 不 同 V D R B s m I 基因型在 S L E临床表现 及实验 室检查 Ta b l e 2 Bs m I a l l e l e s a n d d i s e a s e f e a t u r e s i n S L E p a t i e n t s A N A：抗核抗体；S L E：系统性红斑狼疮；S m：S m i t h；VD R：维生素 D受体；C N S：中枢神经系统；S L E D A I：S L E疾病 活动积分 1 4 1 2 1 0 8 6 4 2 o S I NC BB B b b b B十 B-图 2 S L E组 及 健 康 对 照 组 B s m I各基 因 型及 基 因 V D R mR N A 表 达 F i g 2 T h e V DR mRN A e x p r e s s i o n i n d i ff e r e n t g e n o t y p e s a n d a l l e l e s o f B s mI b e t we e n p a t i e n t s w i t h S L E a n d h e a l t h c o n t r o l s N C：健康对照；s ：P=0 0 1 6 不 同基 因型 V D R m R N A表达在 S L E和健康对 照 组 中无 统计 学 意 义 但 S L E中不 同等 位基 因 V D R m R N A表达有统计学差异(P=0 0 1 6)。讨 论 S L E是一种具有广谱临床和免疫学异常的 自身 免疫性疾病，其病因学尚不明确，可能与遗传、环 境及性别等因素有关。大样本的流行病学调查发现 S L E的同胞 患病率是一般人群的 2 0倍 同卵双生 子发病一致率为 2 4 6 5 明显高于异卵双生子 发病一致率(2 一 9)。提示遗传因素在 S L E发病 中有着重要作用 I 1 。许多研究显示 了人类疾病与免 疫相关基因的等位基因的联系包括主要组织相容 性复合物(MH C)的位点，F c 7受体和细胞因子。维生素 D是一种脂溶性维生素 也是一种类固 醇激素。其活性形式是1，2 5 (O H)r V i t D，其通过与 存 在 于细 胞 内的 特异 性 维 生 素 D受体f s p e c i f i c V i t a m i n D r e c e p t o r，S V D R 1结 合 发 挥 生 物 效 应。V D R是核受体超家族 的成员，人 V D R基 因位 于 1 2 号染色体长臂(1 2 c e n q 1 2)，由 1 4个外显子及多个 内含子组成，转录产物 翻译 的蛋 白质(V D R)由 4 2 7个氨基酸组成。细胞内 V D R与1，2 5(O H)r D 3 激 素信号分子结合成激素 受体复合物，该复合物与 靶 基 因 特 定 D N A 序 列 上 的激 素反 应 元 件 结 合(v i t a m i n D r e s p o n s e e l e me n t，V D R E)，从 而对结构基 因的表达产生调节。已发现 V D R基因存在多个单 核苷酸多态性位点(S N P)，其中研究较多的有 I (r s 1 0 7 3 5 8 1 0)、B s m I(r s 1 5 4 4 4 1 0)、A p a I(r s 7 9 7 5 2 3 2)和 r a q I(r s 7 3 1 2 3 6)4个位点，分 别位于转录起始 位点、第 内含子和第外显 子。近年来，V D R 基因多态性与临床疾病的相关性研究较多，已经证 实 V D R基 因多态性与某些恶性肿瘤及 自身免疫性 疾病，如多发性硬化、类风湿关节炎、乳腺癌、糖 尿病、恶性 黑色素 瘤和银 屑病 等有关 _ 5 。目前，V D R基因多态性与 S L E相关性研究中 I、A p a I 和 r a q I 位点报道较多，但 B s m I 仅有为数不多的 少数病例研究 。H u a n g等 同时对中国台湾人群中 4 7例 S L E患 者及 9 0例健康对照者进行 V D R B s m I 遗传易感性 分析，结果发现 V D R等位基 因变异和 S L E患者 临 床表现、实验室指标及狼疮 肾炎无相关性。O z a k i 等 对 日本人群 中 5 8例 S E E患者进行 B s m I 基 因 VO I 5 No 1 2 1 中 华 临 床 免 疫 和 变 态 反 应 杂 志 型分析。并 与相应人群 中 8 7例健康人对照，结果 发 现 13本 S L E患 者 V D R 内 含 子 8(B s m I)B B 基 因型可能触发 S L E的发展 而 b b基因型则与狼疮 肾炎发生有关。S a k u l p i p a t s i n等_ 9 对泰 国人群 中 1 0 1 例 S L E患者 和 1 9 4例健康对 照者进行 V D R B s m I 基因型分析，发现 V D R等位基因变异和 S L E患者 临床表现、实验室指标等均无相关性。本研究对 2 4 2例汉族 S L E患者进行 B s m I 基 因多态性检测，并与 1 6 2名健康人对照，同样未发现 V D R B s m I 基 因 多态 性位 点 与 S L E的发 病有 相 关性 联 系。对 V D R B s m I 位点不同基因型 S L E患者的临床和实验 室指标进行对照分析，显示皮疹、光敏感、关节 炎、浆膜炎、血液系统及中枢神经系统等器官受累 的发生 以及 A N A、抗 d s D N A抗体、抗 S m抗体、抗 H i s t o n e抗体和抗 U1 s n R N P等 自身抗体阳性率在 既m I 不同基因型患者之 间均无显著性差异，但 肾 脏 损 害在 B等位基 因阳性 患者更 容 易 发生 与 O z a k i 等的报道有差异，这可能与 O z a k i 等研究中病 例数相对较少有关；另外，某种基因位点与疾病发 生 的相关性及对病情的影响，随人种不同而存在一 定的差异。本研究同时对 S L E患者不同基因型的治 疗情况进行 了分析，发现无显著性差异，提示不同 基 因型对 S L E的临床影响与药物因素无关。O h t e r a等 发 现 V D R基 因 多 态 性 与 成 骨 细 胞 V D R m R N A 表 达 密 切 相 关，为 此 本 研 究 分 析 了 V D R B s m I 基因多态性位点对 S L E患者外周血单个 核细胞 中 V D R m R N A表达的影 响。结果未发现在 B B、B b、b b基 因型 S L E患者间 V D R mR N A表达有 差别，这与 M o c h a r l a等 1 1 观察到的结果一致。但进 一步 比较 V D R m R N A在 B等位基因 阳性患者 f B B 和 B b基 因 型患 者)与 B 位 基 因 阴 性 患者(b b基 因型患者1的表达发现，V D R m R N A表达在 B等位 基因阳性患者明显低于在 B等位基因阴性患者，提 示 B等位基因可能在 V D R基因转录 中发挥负调节 作用。临床免疫学研究证实，复杂的细胞 因子网络参 与 S L E的病 变 过程，有研 究 表 明 T h 1细 胞 因子 I L 一 2、I F N y 的高表达与狼疮肾炎的发生及损害程度 相关N 2 。机体内多种组织包括活化 的 T、B淋巴细 胞均有 V D R的表达。活性维生素 D 1，2 5(0 H)2 D，除了本质上的钙磷调节平衡外，还有多种生物学作 用包 括 免 疫调 节、刺 激 细 胞增 殖 和 分 化 等。1，2 5(O H)2 D 与靶细胞 V D R结合后可直接抑制 T h l 细胞 因子 I L 2 t 川、I F N 的合成和分泌 以及免 疫球蛋白的生成 。本研究观察到，B等位基 因阳 性患者更容易发生肾脏损害，这可能与 B等位基因 导致 V D R m R N A表达下调，致使1，2 5(O H)2 D 抑制 T h l 细胞因子产生的作用减弱有关。总之本研究通过对维生素 D受体 B s m I 基因 多态性及 V D R m R N A表达与系统性红斑狼疮相关 性 的研究 发现 V D R B s m I 多态性 与 S L E发病易 感性无关 但 B等位基因阳性患者则通过下调 S L E 的 V D R m R N A表达增加发生 肾脏损害的风险。参 考 文 献 1 H a r l e y J B，K e l l y J A，K a u f m a n K M U n r a v e l i n g t h e g e n e-t i c s o f s y s t e m i c l u p u s e r y t h e m a t o s u s J S p ri n g e r S e m i n I mmu no p a t ho l，2 0 0 6，2 8：1 1 9 1 3 0 2 H o r w i t z D A，G r a y J D，B e h r e n d s e n S C，e t a 1 D e c r e a s e d p r o d u c t i o n o f i n t e r l e u k i n-1 2 a n d o t h e r T h l-t y p e c y t o k i n e s i n p a t i e n t s w i t h r e c e n t o n s e t s y s t e mi c l u p u s e r y t h e ma t o s u s J A r t h r i t i s R h e u m，1 9 9 8，4 1：8 3 8 8 4 4 3 B o m b a r d i e r C，G l a d m a n D D，U r o w i t z MB，e t a 1 D e ri v a t i o n o f t h e S LEDAI A d i s e a s e a c t i v i t y i n d e x f o r l u p u s p a t i e n t s T h e C o mmi t t e e o n P r o g n o s i s S t u d i e s i n S L E J A rt h ri t i s R h e u m，1 9 9 2，3 5：6 3 0-6 4 0 4 L i v a k K J，S c h m i t t g e n T D A n a l y s i s o f r e l a t i v e g e n e e x-p r e s s i o n d a t a u s i n g r e a l-t i me q u a n t i t a t i v e P C R a n d t h e 2 (一 D e l t a D e l t a C(T)J Me t h o d s，2 0 0 1，2 5：4 0 2-4 0 8 5 R u c e v i 6 I，B a r i s i 6-D r u s k o V，G l a v a s-O b r o v a c L，e t a1 Vi t a mi n D e n d o c ri n e s y s t e m a n d p s o ria s i s v u l g a r i s r e v i e w o f t h e l i t e r a t u re J A c t a D e r m a t o v e n e r o l C r o a t，2 0 0 9，1 7：1 8 7 1 9 2 6 H u a n g C M，Wu MC，Wu J Y，e t a1 A s s o c i a t i o n o f v i t a m i n D r e c e pt o r g e n e Bs m I p o l y mo r ph i s ms i n Ch i ne s e p a t i e n t s w i t h s y s t e m i c l u p u s e r y t h e m a t o s u s J L u p u s，2 0 0 2，l l：31 3 4 7 O z a k i Y，N o m u r a S，N a g a h a m