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常见真菌的分离与鉴定

上海长征医院皮肤科真菌室 徐 红

你知道真菌具有的共同特征吗？
　　2005年6月13～19日全国各地举行了第8届中国护足周，主题是“积极治疗足病，杜绝家庭传染”。

　　在中国,每2个人中就有1人罹患足病，其中成年人发病比例高达75%；超过60%的足病为真菌感染，其中足癣发病率为45.2%，甲真菌病(俗称甲癣)占15.5%；40%的足癣患者是被家人传染的；在真菌患者中只有23.8%寻求治疗，其中50%的患者症状稍有好转就不继续治疗。

　　真菌其实很常见，真菌就生活在我们身边。
   病原真菌的一般特性
　　真菌（Fungi）是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计全世界已有记载的真菌有10万种以上。它们的子实体小者用显微镜才能见到，大者可达数十厘米，它们共同特征是具有真正的细胞核，产生孢子和不含叶绿素，以寄生或腐生等方式吸取养料，仅少数类群为单细胞，其他都有分支或不分支的丝状体，能进行有性或无性繁殖，具有纤维素（或其他葡聚糖）或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。对人类和动物致病的真菌大约100余种，属于病原真菌。
　　一、基本性状

　　（一）形态结构

　　真菌分单细胞真菌与多细胞真菌两大类，前者属于酵母菌（yeast）一般呈球形或卵圆形，后者称为霉菌（mold）或丝状真菌，呈丝状分枝，菌丝交织象绒球状，另有一些真菌可因寄生环境及培养条件（养料、温度、氧气等）的不同可交替出现两种形态，即在室温中呈霉菌型，在37℃或体内呈单细胞的酵母型，这类真菌有双相性，所以称之为双态真菌或二相真菌。

　　真菌的细胞结构与一般植物细胞相似，有定型的细胞核及完善的细胞器，但胞壁与细菌胞壁不同，不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成，也含有脂多糖蛋白质，其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖，不生长真菌丝，革兰氏染色呈阳性，丝状真菌分菌丝及孢子两部分，形态多种多样，分述如下。

甲真菌病直接镜检见关节菌丝400倍
　　1．菌丝（Hypha） 真菌在合适的环境中，由孢子生出嫩芽，称为芽管。芽管逐渐延长呈丝状，称菌丝。菌丝继续生长并生长分枝，增殖的菌丝交织组成菌丝体。其中一部分菌丝深入被寄生的物体或培养基中吸取养料，称为营养菌丝体。另一部分菌丝向空间生长，称为气生菌丝体。气生菌丝体能产生孢子者称为生殖菌丝体。菌丝中各个细胞间有明显分隔者，称为有隔菌丝。主要见于病原性真菌。很多非病原真菌的菌丝无明显分隔，称为无隔菌丝。有些菌丝可呈各种特殊形式，如球拍状、破梳状、螺旋状、结节状、关节状、鹿角状、假菌丝。

　　2．孢子 生成孢子是真菌扩大繁殖的一种方式。真菌孢子的抵抗力、形态及作用等均与细菌芽胞不同，分为无性孢子及有性孢子两大类。不经过两性细胞的结合而形成的孢子叫无性孢子，这一繁殖过程称为无性繁殖。常见的无性孢子有5种：关节孢子、厚壁孢子、孢子囊孢子、芽孢和分生孢子。病原真菌属于不完全菌纲，很少产生有性孢子，大多数是无性孢子。

　　（1）厚壁孢子：当真菌在不利环境中，由菌丝内胞浆缩浓和胞壁增厚而成，呈圆形。当环境好转时可生成芽管成长为菌丝。

　　（2）关节孢子：菌丝断裂形成长方形两端略钝圆的孢子叫关节孢子。如白地霉和粗球孢子菌。

　　（3）孢子囊孢子：为鞭毛菌和接合菌的无性生殖形式。孢子囊中所含的孢子来源于分枝菌丝或胞囊梗顶端膨大形成孢子囊，囊内原生质浓缩集聚，割裂而成，一般数目较多，孢子囊形态多样，因种而异。

　　（4）芽生孢子：由菌细胞出芽生成见于念珠菌及隐球菌，前者（类酵母菌）出芽后孢子伸长呈丝状，但不见与母细胞分离，称为假菌丝，在假菌丝上的收缩点也可出芽成芽生孢子。

　　（5）分生孢子：是子囊菌和半知菌的无性孢子，也是半知菌分类的主要依据，单细胞的分生孢子称小分生孢子，有蒂或无蒂，侧生或游离，分散或成群，圆形、梨形、卵圆形或其它形状，表面粗糙或光滑，或有或无各种纹饰。多细胞的分生孢子称大分生孢子，有纺锤形、棒形、球棍形、镰刀形及其它形状，两端尖或圆或一端圆，厚壁或薄壁，壁光滑或粗糙，有色或无色，分隔有多有少。
　　（二）培养特性及繁殖方式

    真菌的哪些特性决定了其有极强的生存能力？

　　1．培养特性 大多数真菌对营养要求不高，只需要水、盐，简单的氮源及碳水化合物就可生长，一般常用沙堡氏琼脂基（主要成分葡萄糖4%、蛋白胨1%、琼脂2%）培养都能生长。但需要弱酸性（pH 4～6）、较低孵育温度（22～28℃），充分温度和氧气供应才能生长良好。侵害内脏的某些真菌在37℃含血的培养基中生长良好。真菌生长都比较缓慢，大多需孵育数天后才成明显菌落，菌落有下列三种类型：

　　（1）酵母型菌落：外观湿润稠软致密，类似一般细菌菌落，镜检只见有圆形或椭圆形生芽细胞（例如隐球菌的菌落）。

　　（2）类酵母型菌落：外观性状似酵母型菌落，镜检除见有出芽的细胞外，尚可见到假菌丝（例如念珠菌的菌落）。

　　（3）丝状型菌落：由多数分枝的菌丝体向上生长组成疏松的绒球状，表面有很多孢子，显示各种色泽，菌落可呈棉絮状 绒球状 粉末状或石膏样，其正面和背面可显示各种不同色素，常作为鉴定菌种的参考。镜检可见有纵横交织的菌丝及各种孢子（例如各种癣菌的菌落）。

　　2．繁殖方式 有多样性，包括出芽增殖，菌丝增长，菌丝分枝和断裂，产生无性孢子及有性孢子进行繁殖，因此它繁殖力很强，但生长速度较慢。
　　（三）变异性和抵抗力

　　真菌很容易发生变异，在人工培养基中多次移种或孵育过久，就可出现形态结构、菌落性状、色素以及各种生理性状（包括毒力）的改变，用不同的培养基和温度培养真菌其性状也有改变，真菌对干燥阳光紫外线及一般化学消毒剂耐受性却较强。但对热的抵抗力却不强。60℃以上1小时即可杀死孢子及其菌丝，在1%～3%石炭酸、2.5%碘酊、0.1%升汞及10%甲醛中可被灭活。用甲醛气体熏蒸被真菌污染的衣物用具，可杀灭真菌菌丝及其孢子。但真菌对一般抗菌素及磺胺药均不敏感。只对二性霉素、酮康唑、制霉菌素等非常敏感，治疗真菌感染常用此药。
　　（四）致病性与免疫性

　　1．致病性 病原真菌的致病机制还是一个未完全解决的问题；根据其侵害部位，主要分为下列两类：

　　（1）浅部真菌病：主要由癣菌引起，大多为外源感染，常易侵害皮肤、指（趾）甲及须发等含角质的组织，引起癣症。

　　（2）深部真菌病：可由各种真菌引起，包括类酵母菌、二相真菌及丝状菌。侵害粘膜、皮下组织、内脏及脑膜等处，有时扩散全身，主要是内源性感染，也可由外源传染；前者是因机体抵抗力降低，如患重病，长期使用免疫抑制剂，广谱抗菌素或放射治疗，患恶性病，严重烧伤等时，造成体内菌群失调，以致常居在体内的某些真菌（如白念珠菌），甚至平时不致病的环境中的真菌（如曲霉、毛霉）等也会乘机侵害，一些传染性较强的内脏真菌病是内外源感染。

　　2．免疫性 浅部真菌病一般在血中不产生特异性抗体，病后无免疫保护力，只是儿童头癣等青春期后头皮皮脂增多时可以自愈，以后不再感染，其他部位癣症治愈后仍可再感染。深部真菌病虽可产生抗体，但无明显免疫保护作用。

    三种癣菌从菌种鉴定上有何共同和不同之处？

    临床常见的病原性真菌
　　一、 浅部真菌

　　（—）皮肤癣菌
　　皮肤癣菌又称皮肤丝状真菌，有下列三属（见表1），都只侵犯体表角化组织（皮肤，毛发及指甲和趾甲）。不侵害深部组织，或内脏，皆属外源性传染，由接触患癣病人、动物（狗、猫、鼠、牛、马等）或染菌物体而感染。

　1．毛癣菌属

　　＊红色毛癣菌

甲真菌病红色毛癣菌病理PAS染色400倍
　　（1）直接镜检：皮屑及甲屑，分枝分隔的菌丝有时可断裂或关节孢子状，毛发：发外型感染表现为发外孢子排列成串。少数为发内型感染孢子在发内排列成链状；毛发穿孔试验阴性。

　　（2）培养特征：在葡萄糖蛋白胨琼脂，25℃，生长比较快，菌落形态有多种表现，镜检也不完全一样，常见有下列四种：I型：羊毛状：白色羊毛状菌丝充满斜面，典型的卷成筒状，边缘贴牢管壁，呈鲜红色，背面开始在中心有一红色小点，以后形成深红色环，最后成片为葡萄酒色，色素边缘划界非常明显。少数I型菌株表现无红色色素，正面白色，背面呈淡黄色类似石膏I型，亦有正面白色而背面呈灰黑色。II型：绒毛状：粉红色绒毛状菌丝生长，占斜面3/5，菌丝稀疏，透过菌丝可见粉红色的基底，背面颜色同I型相同。III型：粉未状：菌落表面稍有凸起，呈粉末状，粉红色，约占斜面的1/2～2/3，背面同I型。IV型：沟纹状：菌落生长相对较慢，比以上三种类型为小，占斜面的1/3～1/2，菌落中央凸起，从中央向四周有排列比较整齐的放射状沟纹，边缘整齐，表面菌丝甚少。开始微带黄色，以后变粉红，背面同I型。

　　（3）菌种鉴定：①菌落特征及色素；②大小分生孢子的形态；③玉米粉吐温琼脂上产生红色色素；④毛发穿孔试验阴性；⑤尿素酶试验阴性。
　　＊须癣毛癣菌

　　（1）直接镜检：皮屑内见分枝分隔的菌丝，甲屑内为关节状菌丝。毛发感染为发外型，发内有时有菌丝。

　　（2）培养特性：在沙氏上生长较快，菌落形态可分为两大类：毛型和粉型；下列I、II型为毛型，III、IV、V型属粉型。自炎症明显的皮损中所分离出的菌株多属粉型。毛型菌落外观均似红毛，应注意鉴别。具体分型①羊毛状（I型），又称趾间毛癣菌，菌落生长快，白色羊毛状。气生菌丝较多且长，排列紧密，充满斜面，好象红毛，正面雪白，背面淡黄色。镜检见较细分枝，分隔的菌丝，胞浆浓。有少量球形或长形小分生孢子，无螺旋菌丝和大分生孢子。间或可见球拍菌丝及结节菌丝。②绒毛型（II型），生长快，菌落雪白。表面有紧密的细短气生菌丝，中央可有乳头状突起，边缘如刀切，背面棕黄色或棕红色。镜检见较细的分枝、分隔的菌丝，小分生孢子多，有时成葡萄串状，无螺旋菌丝或大分生孢子；③乳皮状（III型），开始为乳白色菌丝，不久一部分菌落变为粉末样，色微黄，光滑，似牛乳表面的一层薄膜，可一块块地挑取，中央有少许褶叠，边缘不整齐，背面淡黄或棕黄色。镜检见粗细不一，分枝分隔的菌丝和大量螺旋菌丝，间或可见破梳状菌丝，结节菌丝及球拍菌丝，大分生孢子少，棒状，两端圆，与分生孢子梗的连接处较窄，薄壁光滑，小分生孢子多，球形或长形，有时成葡萄串状排列。④粉末状（IV型），菌落粉末状，表面平坦、光滑。间或有少数白色气生菌丝，中央有乳头状凸起，边缘锯齿状。菌落生长快，充满斜面，色黄或奶油色，外观像石小、背面棕黄或棕红色。⑤颗粒状（V型）：生长快，菌落粉样，表面不平，呈颗粒状。有不规则的褶叠或沟纹，边缘不整齐。下面色黄带红或棕黄。背面棕红色。IV、V镜检均见大量棒状大分生孢子及无数圆形的小分生孢子，少数长型。游离或葡萄状成串，有螺旋菌丝和球拍菌丝。

须癣毛癣菌培养
　　（3）菌种鉴定：①菌落形态；②菌丝较细，是皮肤癣菌中最细的一种；③螺旋菌丝多见；④大分生孢子的形态和球形小分生孢子；⑤尿素酶阳性；⑥毛发穿孔阳性。
　　＊紫色毛癣菌

　　（1）直接镜检：皮屑、甲屑内可见分枝分隔的菌丝或成串的孢子，病发取黑点部位的断发，毛发损害为发内型大孢子，呈关节型排列，充满整个发内，故毛发出皮即断。

沙氏琼脂培养基室温培养20天
　　（2）培养特性：在沙氏琼脂培养基室温培养菌落生长慢，开始为圆形、白色、潮湿发亮的菌落，类似酵母；以后中央褶叠或突起，产生紫色色素，并逐渐扩大，或中央紫色，边缘淡红色，最外围有一圈白色的环。培养基颜色不变，边缘无放射状菌丝，整齐如刀切，下沉不明显，背面无色至深紫色，少数菌株无颜色，呈无色紫色毛癣菌，镜检见粗细不一的菌丝，分隔较密，胞浆淡，有很多不规则的突起和肿胀，但无鹿角菌丝。厚壁孢子多，多为间生，偶见小分生孢子2～5个大生分生孢子。

　　 （3）菌种鉴定：①菌落形态，紫色色素；②VitB能促进菌落生长，形成大分生孢子；③发内型感染。
　　2．小孢子菌属

　　＊羊毛状小孢子菌

　　（1） 直接镜检：皮屑内见分枝、分隔的菌丝，病发为发外型感染。

　　（2）培养特性：在沙氏琼脂培养基上室温生长快。开始为黄色绒毛样生长，2周后菌丝较多，呈羊毛状，可充满大部分斜面。中央趋向粉未化。正面桔黄，背面红棕色，平皿中培养的菌落表面中央可有少数同心园，无放射状沟纹。生长约4-5周后开始变异，菌丝增多，大分生孢子减少或消失。镜检见大量纺锤形，厚壁的大分生孢子。一端稍弯曲，末端有帽样肥大，有6-15个分隔。小分生孢子较少，长形，无柄侧生。可有球拍状菌丝，破梳状菌丝，结节菌丝及大量厚壁孢子等。

　　 （3）菌种鉴定：①菌落形态及色素，在PDA培养基上能产生黄色色素；②特征性的厚壁、顶端膨大微弯曲，如戴帽的大分生孢子；③发外孢子型感染。
　　＊石膏样小孢子菌

　　（1）直接镜检：皮屑内见菌丝或成串的孢子，病发为发外型感染，孢子较大，排列成串。

　　（2）培养特性：在沙氏琼脂培养基上室温生长快，开始为白色菌丝，后成棕黄色粉未状菌落，凝结成片，菌落中心有隆起，外围有少数极短的沟纹，边缘不整齐，背面红棕色。镜检：见多数较小，纺锤形，4～6个的大分生孢子，壁厚1～3μm，两端园，壁有刺，菌丝较少，小分生孢子棒状无柄，有时可见球拍状菌丝，螺旋，破梳状菌丝及结节菌丝。

　　（3）菌种鉴定：①菌落形态；②大分生孢子的形态；③毛发穿孔试验阳性。
　　3．表皮癣菌属

　　＊絮状表皮癣菌

　　（1）直接镜检：皮屑及甲屑内见分枝分隔的菌丝。

　　（2）培养特性：在沙氏培养基室温生长快。菌落开始蜡状，高出斜面，表面有不规则的褶叠，上覆粉未样菌丝,黄绿色。较大的菌落中央有褶叠，外围可见放射状沟纹，最外围有不整齐的平滑圈。菌落下沉明显，培养基常为之开裂。背面黄至棕色。镜检：见典型的杵状大分生孢子，2～4个分隔。游离端圆形，薄壁光滑，基部平截。常2～4个成群，无小分生孢子，老龄菌落厚壁孢子多，菌丝较细，分枝，分隔，间或可见球拍，结节和螺旋菌丝。

　　（3）菌种鉴定：①菌落特征；②典型杵状大分生孢子；③无小分生孢子。
　　二、深部真菌

　　（一）白念珠菌：（Candida albicans）

    各种深部真菌在快速鉴定上有何不同之处？

　　1．标本来源 痰、大便、口腔或阴道分泌物、尿、脑脊液、胸水、脓液、皮屑及痂皮等。

　　2．直接镜检 氢氧化钾涂片，可见卵圆形、圆形芽孢，薄壁，直径约2～4μm芽孢，椭圆形芽孢的芽管延长形成假菌丝，有时在菌丝旁附着芽孢，PAS染色为红色。

　　3．培养及镜检

　　（1）葡萄糖蛋白胨琼脂：30℃划线培养一天即有光滑小菌落生长，菌落为奶油色，闪光或呈蜡状，柔软光滑，老的菌落渐变硬，表面有皱褶或有毛发状突起。镜检，在菌丝交接处有群集的卵圆形孢子或在菌丝旁侧有少许芽孢，3.0～6.5×3.5～12.5μm。

　　（2）玉米培养基：菌落外观同上，镜检：菌丝很少分枝，有少量芽生孢子，在菌丝的顶端或侧缘有厚壁孢子，直径7～17μm。

白色念珠菌厚膜孢子米粉吐温80培养基400倍
　　（3）快速鉴定与鉴定程序：①将标本直接接种在科玛嘉上，24小时出现翠绿色菌落，②将初代分离的酵母样菌接种在含1%吐温80米粉中，25℃室温中24～48小时，镜检可见顶端产生圆形厚壁孢子或接种于0.5ml，正常人血清或羊血清中，置37℃温箱中，经1～2小时镜检有芽生孢子及芽管形成，可初步鉴定为白念珠菌。③API酵母快速鉴定：同化试验结果：葡萄糖＋，麦芽糖＋，乳糖－，半乳糖＋。
　　（二）热带念珠菌（Candida Tropicalis）

　　1．标本来源：同白念珠菌。

　　2．直接镜检：同白念珠菌。

　　3．培养及镜检：

　　（1）葡萄糖蛋白胨琼脂，在25℃中培养，菌落平滑有光泽，白色，时间较久表面有皱纹，粘稠，甚至有毛样外观，镜检可见卵圆形细胞或球形细胞（约5～9μm×6～12μm）。

　　（2）玉米琼脂：产生丰富的假菌丝及发育良好芽生孢子，但无厚壁孢子生长。

　　（3）快速鉴定：①科玛嘉培养基上，24小时出现蓝灰色。②同化试验。
　　（三）克柔氏念珠菌（Candida Krusei）

　　⒈标本来源：同白念珠菌。

　　⒉直接镜检：同白念珠菌。

　　⒊培养及镜检：

　　⑴葡萄糖蛋白胨琼脂：菌落扁平，平滑、干燥，有时表面有皱折，通常是乳白色到淡黄，镜检所见：大多数孢子是较大的柱状，2.5～5.5μm×7.5～21.5μm，亦有少数短卵圆形孢子。假菌丝丰富，芽生孢子在菌丝上轮生。

　　⑵玉米琼脂：对称分枝的菌丝，芽生孢子较少，无厚壁孢子。

　　⑶葡萄糖蛋白胨液培养基：在培养基表面生长，与试管壁粘连。

　　⑷快速鉴定：①科玛嘉培养基上24小时出现淡粉红色菌落。②同化试验。
　　（四）近平滑念珠菌（Candida parapsilosis）

　　⒈标本来源：同白念珠菌。

　　⒉直接镜检：同白念珠菌

　　⒊培养及镜检：

　　⑴葡萄糖蛋白胨琼脂：乳酪样菌落，通常表面光滑，亦有菌落表面粗糙及皱折。镜检所见：卵圆形芽生孢子2.5～5.0×4～8μm，假菌丝形成丰富。

　　⑵玉米琼脂：交叉分枝菌丝，侧生芽生孢子较多，无厚壁孢子。

　　⑶葡萄糖蛋白胨液基：无表面生长，在管底生长。

　　⑷快速鉴定： ①科玛嘉培养上24小时出现粉色光滑菌落。②同化试验：API。
　　（五）光滑念珠菌（Candida glabrata）

　　⒈标本来源：痰、尿、血、皮肤、阴道、伤口、腹水、胸水、胆汁等。

　　⒉直接镜检：卵圆形芽生孢子，直径2～7μm或更大，单芽，位于孢子的细端，无荚膜，无子囊或菌丝。

　　⒊培养及镜检：

　　⑴葡萄糖蛋白胨琼：白色或奶油色乳酪样菌落，日久变棕灰色，表面平滑，稍有光泽，本菌只在酸性条件下生长，pH>6.5即不生长，镜检：同直接涂片。

　　⑵快速鉴定： ①科玛嘉培养基上24小时出现紫色菌落。 ②同化：API试验。
　　（六）胶红酵母（Rhodotorula mucilaginosa）

　　⒈标本来源：痰、尿、血、大便、皮肤、CSF、咽喉、体液等。

　　⒉直接镜检：圆形或卵圆形，3～5μm直径，有荚膜的芽生孢子，单芽生，孢子内有少数颗粒，无菌丝，不着色。

　　⒊培养及镜检：

　　⑴葡萄糖蛋白胨琼脂：25℃或37℃时，生长迅速，菌落10天内可达2～2.5cm直径，为乳酪样生长，边缘整齐，表面光滑，但无光泽，桔红，日久颜色逐渐消退，呈淡黄色或桔黄色，培养基不变色，镜检同涂片所见，有时可见假菌丝，无子囊。

　　⑵快速鉴定： ①菌落产生红色色素； ②使尿素琼脂由黄变红。
　　（七）新生隐球菌（Cryptococcus neoformans）

　　⒈标本来源：脑脊液、痰、脓、尿、粪、血、活体组织及尸体解剖材料等。

　　⒉直接镜检：墨汁染色，可见圆形厚壁孢子，菌体直径约4～20μm，外围有一透光的厚荚膜，厚度约5～7μm，荚膜内的菌体可出芽或不出芽，孢内有一较大的反光颗粒脂质颗粒，不是孢核）和许多小颗粒，可与白细胞或淋巴细胞相鉴别。

新生隐球菌革兰染色1000倍
　　⒊培养及镜检：

　　⑴在葡萄蛋白胨琼脂，25℃或37℃培养时，2～5天即生长出乳白色细菌粘液性菌落，呈不规则圆形，表面有蜡样光泽，以后菌落增厚，颜色由乳白、奶油转桔黄色。非致病性隐球菌37℃不生长。镜检类似直接镜检，可见圆形孢子，直径2.5～8μm，多数有芽，孢子外围有荚膜，但荚膜开始甚狭，日久渐增厚，无真菌丝及子囊孢子，但可有芽管。

　　⑵快速鉴定：①37℃生长；②尿素酶变红；③咖啡酸变棕色；④同化试验，不发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖等。
　　三、其它实验室常见的丝状真菌

　　（一）曲霉属：

　　⒈标本来源：皮屑，甲屑，耵聍，痰，粪，尿，脓液，活检与尸检组织标本。

　　⒉直接镜检：涂片见分枝，分隔的菌丝及足细胞，与外界相通腔道内标本中有时可见分生孢子头，为曲霉的特征结构。

　　⒊培养：初代用沙氏培养基，次代用察氏PDA培养基，接种后室温培养2周。少数能产生闭囊壳的曲霉需培养3周或更长时间。

黄曲霉肺曲霉病见曲霉头PAS染色400倍
　　⒋菌种鉴定：（1）菌落，菌落生长速度，表面质地，颜色，形态和气味等，其中颜色的特征较稳定，是曲霉分类的主要依据之一；（2）分生孢子头：分生孢子头的形态，颜色和大小。分生孢子头由顶囊、瓶梗、梗基和分生孢子链组成，是曲霉的特征性结构。（3）分生孢子梗或分生孢子柄，注意它的长短，颜色，表面粗糙或光滑，是否有隔等。（4）分生孢子梗上的顶囊，注意顶囊的大小，形态，颜色，梗占据顶囊表面积的大小等。（5）瓶梗及梗基：统称小梗，注意单层还是双层，有些既有单层又有双层，甚至同一顶囊上也两者兼有。（6）分生孢子：形态，大小，颜色，表面是否光滑及有无纹饰。（7）具有性生殖的曲霉能产生闭囊壳。（8）部分曲霉能产生壳细胞，足细胞。（9）有些能产生菌核。致病的曲霉有烟曲霉，黄曲霉，黑曲霉，土曲霉，构巢曲霉，棒曲霉，杂色曲霉，米曲霉等等。

　　（二）青霉属：

　　⒈标本来源：皮屑，甲屑，耵聍，痰，粪，尿，脓液，活检与尸检组织标本。

　　⒉直接镜检：可见分枝、分隔的菌丝，无顶囊，偶可发现帚状枝。

　　⒊培养：初代培养用沙氏培养基，次代培养用察氏或麦芽汁培养基。

　　⒋菌种鉴定：

　　（1）菌落特征：菌落形态包括生长速度、菌丝高度、颜色、渗出物、气味和质地。质地包括①绒状②絮状③束状。

　　（2）菌丝的粗细、颜色、埋伏型，部分埋伏型或部分气生型。

　　（3）分生孢子梗分枝或不分枝，是自气生菌丝亦成从埋伏菌丝上长出。单根或成束，壁光滑或粗糙。

　　（4）帚状枝：为青霉属的特征性结构，指分生孢子梗分枝处毛瓶梗的整个扫帚状结构。不包括分生孢子。

　　帚状枝的形状有4种：①单轮青霉组；②对称双轮青霉组；③不对称组；④对称多轮组。

　　（5）瓶梗：帚状枝的最后一级分枝即产孢细胞，大致分3种类型：① 柱形；②披针形；③瓶形。

　　（6）副枝：支持梗基的细胞称副枝，可有一个或一个以上。

　　（7）分生孢子：大小、颜色、形状、表面是否光滑或粗糙。

　　（8）菌核：闭囊壳。

　　⒌致病青霉有：产黄青霉、桔青霉、淡紫青霉、灰绿青霉、马尔尼菲青霉等。
小结
真菌特征是具有真正的细胞核，产生孢子和不含叶绿素，以寄生或腐生等方式吸取养料；
不同病原菌可通过培养、镜检、菌种鉴定上各有不同特征，可以进行分离和鉴定。