家禽血液样品采集.doc

辽东学院 家畜生理学 课实验指导书

目录-----------------------------------------1
实验一--------------------------------------2
实验二--------------------------------------5
实验三--------------------------------------9
实验四--------------------------------------12
实验五--------------------------------------16
实验六------20
实验七--------------------------------------23
实验八--------------------------------------26
实验九--------------------------------------29
参考文献-----------------------------------33

实验一 家禽血液样品采集

1. 实验目的及要求：

1.1 实验目的：了解家畜血样采集的方法
1.2 实验要求：
①学会采血针和注射器的使用方法
②学会鸡冠采血法
③学会翼下静脉采血法
1.3 实验规定学时：（ 1.5学时）
1.4 实验性质：综合

2. 实验原理：
静脉又称容量血管，其内含血量较多且流速较慢，位于腋窝部的翼下静脉具此特点，此静脉易找到，在此可采血10~20ml。

3. 实验仪器、装置、工具及主要材料
鸡、脱脂棉、酒精、采血针、注射器、抗凝剂

4. 实验方法与步骤
鸡的采血方法
（1）鸡冠采血法
用于需要少量血液的采血，用采血针或针头刺破鸡冠吸取血液，然后消毒伤口。
（2）翼下静脉采血法
①先将鸡侧卧保定，露出腋窝部，拔去该部羽毛，可见翼下静脉。
②压迫翼下静脉的近心端，使血管怒张，消毒后，实验者手持有针头的注射器，由翼根向翅膀方向沿静脉平行刺入，见回血后抽出血液。
一般，一只成年鸡可采血10~20ml血，且注意抽血时一定要缓慢。采完后要压迫止血。

5. 注意事项
采血的顺序一定要从翼尖端逐渐向翼根处，否则开始就从翼根处采血，易造成淤血，没法继续采血。

6. 预习要求
复习血液及血管的结构与功能的知识。

7.问题讨论
翼下静脉采血时抽血为什么要缓慢？

实验二 红细胞渗透性实验

1. 实验目的及要求：
1.1 实验目的：了解红细胞的特性之一—渗透脆性
1.2 实验要求：
①学会不同浓度溶液的配制

②学会测定红细胞的渗透脆性的方法
1.3 实验规定学时：（ 1.5学时）
1.4 实验性质：综合
2. 实验原理：
正常的红细胞系混悬于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞失去内部液体而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水分进入红细胞，使红细胞膨大，继续进入红细胞发生破裂溶解，形成溶血。
此实验即是测定红细胞对低于0.9%NaCl溶液（等渗溶液）的耐受性。耐受力高者，红细胞不易破裂，即脆性低；反之，耐受力低者，红细胞易于破裂，即脆性高。
3. 实验仪器、装置、工具及主要材料
试管、试管架、吸管、鸡或兔新鲜血（或去蛋白血）、1%NaCl溶液、蒸馏水等

4. 实验方法与步骤

（1）先将试管分别排列在试管架上，按下表把1%NaCl稀释成不同浓度的低渗溶液，每管溶液均为2ml。
试管号
稀释度
1
2
3
4
5
1%NaCl(ml)

1．40
1．30
1．20
1．10
1．00
蒸馏水（ml）

0．60
0．70
0．80
0．90
1．00
NaCl浓度(%)
0．70
0．65
0．60
。055
0．50

6
7
8
9
10
0．90
0．80
0．70
0．60
0．50
1．10
1．20
1．30
1．40
1．50
0．45
0．40
0．35
0．30
0．25

（2）每支试管中加入大小等量的血样1滴，轻轻混匀静止1小时。
（3）观察结果：
①上层清液无色，管底为混浊红色，表示红细胞下沉，没有溶血。
②上层呈淡红色，管底为混浊红色，表示部分红细胞破裂溶解，为不完全溶解。
③管内溶液完全呈透明红色，管底无红细胞沉积，为完全溶血。
依上述说明，判定出开始溶血及开始完全溶血的NaCl浓度百分率，并记录。

5. 注意事项
（1）配制NaCl的各种溶液的浓度必须准确。
（2）各管中所加入的血滴大小应尽量相等并充分摇匀，且勿用力振荡。

6. 预习要求
复习有关红细胞的生理特性的有关知识

7.问题讨论
红细胞溶血的原因是什么？

实验三 血红蛋白的测定

1. 实验目的及要求：
1.1 实验目的：熟悉用比色法测定血红蛋白的方法
1.2 实验要求：
①学会正确使用血红蛋白计。
②学会测定血红蛋白含量的方法
1.3 实验规定学时：（ 1学时）
1.4 实验性质：验证

2. 实验原理：
血红蛋白的颜色随结合氧量多少而改变，不利于比色，但血红蛋白与作用稀盐酸生成棕色的高铁血红蛋白较稳定，可与标准比色板比色，从而测得血红蛋白的含量。通常以每100ml血液中含血红蛋白的克数表示。

3. 实验仪器、装置、工具及主要材料
血红蛋白计、采血针、酒精、脱脂棉0.1mol/L盐酸、蒸馏水等
4. 实验方法与步骤
（1）加盐酸
将0.1mol/L盐酸加入测定管中至刻度“2”处。
（2）采血并加入测定管
用酒精棉球消毒动物的采血部位后，用采血针刺破皮肤，用干棉球擦去第一滴血，待第二滴血流出一大滴时，用吸血管插入流出的血滴深处，吸血至刻度20mm3处，用干棉球擦净吸血管周围的血液，将血液吹入测定管的0.1mol/L盐酸中。用玻璃棒将盐酸和血液混匀，放置10min.
（3）稀释、比色
向测定管中加蒸馏水，逐滴加，每次加蒸馏水后，都要摇匀，再插入比色箱中进行比色。这样，测定管中的颜色逐渐变淡，直至与比色箱中的标准比色板相同为止。
（4）读数
从比色箱中取出测定管，读出液体表面的刻度。两面均有刻度。一边的刻度表示克数，如液体表面刻度为15处，表示100ml血液中含有15g血红蛋白；另一边的刻度表示百分率。（可参照使用说明书进行克数与百分率的换算）。
（5）清洗
实验完毕应立即清洗洗涤干净使用过的仪器。

5. 注意事项
(1)血液和盐酸作用的时间不可少于10min，否则反应不彻底，结果不准确。
(2)加蒸馏水时要逐滴，以防稀释过头。
(3)比色最好在自然光下，并避免至射的阳光。

6. 预习要求
复习有关血红蛋白的有关知识

7.问题讨论
血红蛋白的生理功能

实验四 血液凝固

1. 实验目的及要求：
1.1 实验目的：了解血液凝固的基本过程及影响血凝的一些因素
1.2 实验要求：
①了解血液凝固的基本过程
②了解影响血凝的一些因素
1.3 实验规定学时：（ 1学时）
1.4 实验性质：验证

2. 实验原理：
血液流出血管后，迅速发生凝固。血液凝固是一系列复杂的生化过程，大致可分为三个主要步骤，即①凝血酶原激活物的形成；②凝血酶原激活物催化凝血酶原转变为凝血酶③凝血酶催化纤维蛋白原转变为纤维蛋白，从而形成血块。在这三个主要步骤中都需要Ca2+的参与。
3. 实验仪器、装置、工具及主要材料

鸡新鲜血、试管、试管架、吸管、烧杯、恒温水浴箱、秒表、3.8%柠檬酸钠溶液、5%草酸钾溶液、肝素、液体石蜡、1%氯化钙溶液、干棉球

4. 实验方法与步骤
（1）影响血凝的物理因素：
①取试管3支，一支管内加少量棉花，一支管内涂少许液体石蜡，一支空白管作对照。
②将以上三管分别加入新鲜血2ml，每30s轻轻地倾斜试管一次，分别纪录三管的凝血时间，分析凝血时间不同的原因。
（2）温度对血凝的影响：取试管2支，分别加入新鲜血2ml。一管置于37℃水浴中，一管放在盛有冰块的水杯中，比较两管凝血时间。为什么不同？
（3）钙离子对血凝的影响：
①取试管3支，一支放入3.8%柠檬酸钠溶液6滴，一支加入5%草酸钾溶液6滴，一支空白对照。然后，再向各管分别加入新鲜血液2ml，混合后观察血凝情况，纪录之。
②加入柠檬酸钠和草酸钾的试管分别再加入1%氯化钙溶液2-4滴，结果如何？为什么？
（4）肝素的作用：取1支试管放肝素16单位，再加入新鲜血液2ml，摇匀后观察其结 果。
（5）割断动物的血管，将血液放入烧杯中，同时，用试管刷迅速搅动，以除去血中的纤维蛋白；将除去纤维蛋白的血液静置后，观察其能否凝固。

5. 注意事项
加柠檬酸钠和草酸钾的量要等同，否则现象不明显。
6. 预习要求
复习有关血液凝固的相关知识

7.问题讨论
血液凝固的三个过程

实验五 血型鉴定

1. 实验目的及要求：
1.1 实验目的：掌握ABO血型的鉴定方法
1.2 实验要求：
①掌握ABO血型的鉴定方法
②正确检查自己的血型
1.3 实验规定学时：（ 1学时）
1.4 实验性质：验证

2. 实验原理：
红细胞膜上含有凝聚原，血浆内含有凝聚素。当相应的凝聚原与凝聚素相互作用时，就产生红细胞的凝聚反应。

3. 实验仪器、装置、工具及主要材料
载玻片、采血针、酒精、棉球、牙签、标准血清

4. 实验方法与步骤
（1）准备标准血清
取一双凹载玻片，用玻璃铅笔分别在左上角和右上角写上“A”和“B”进行标记，然后分别向内各加一滴标准血清A凝聚素和标准血清抗B凝聚素。
（2 ）消毒
先将耳垂轻柔几下，使其充血，并用酒精棉球消毒，待酒精挥发后。

（3）采血
用采血针刺入耳垂皮肤，出血后用牙签的两端分别取一滴血，各自分别与标准血清A凝聚素、标准血清B凝聚素相混合，进行观察。

（4） 观察现象
标准血清
血型
抗A凝聚素
抗B凝聚素
A型
B型
AB型
O型
＋
－
＋
－
－
＋
＋
－
注：“＋”表示发生凝聚反应；“－”表示不发生凝聚反应。
（5）确定结果
请记录个人的血型。

5. 注意事项
一定要用牙签的两端分别取血与标准血A、B凝集素相混。

6. 预习要求
复习血型的相关知识。

7.问题讨论
ABO血型在临床上的生理意义。

实验六 心音听诊

1. 实验目的及要求：
1.1 实验目的：听取各种家畜的正常的心音及初步掌握听诊的方法
1.2 实验要求：
①了解各种家畜（马、牛、羊）的听诊部位
②学会测家畜的心率方法，并能区别第一心音和第二心音
1.3 实验规定学时：（1学时）
1.4 实验性质：验证

2. 实验原理：
在一个心动周期中可产生两个心音。当心室收缩时，迫使房室瓣关闭，产生第一心音；心室舒张时则半月瓣关闭，而产生第二心音。
3. 实验仪器、装置、工具及主要材料
试验家畜、听诊器
4. 实验方法与步骤
（1）听诊部位 各种家畜心脏的位置一般都在第3~6肋之间，稍偏左侧。因此听取心音时应站在动物的左侧。
（2）牛、马心音的听诊： 使物处于自然站立的姿势，并作适当的保定，以免动物走动和踢咬。将动物左前肢向前移半步，实验者以右，手放在动物的肩部做支点，左手持听诊器，将听诊器听筒紧贴在心区，然后听诊，注意第一心音和第二心音的特征，并区别它们。同时记心率。
（3）羊和猪的心音听诊 ：方法与牛、马相似。可使动物站立或取右侧卧是姿势。

5 注意事项
在实验之前要将动物适当保定，注意检查者的安全。

6. 预习要求
复习心动周期及心音的有关的知识。

7.问题讨论
（1）动物的第一心音和第二心音是如何产生的？有什么区别/
（2）心音的听诊在临床上的意义？

实验七 脉搏检查

1. 实验目的及要求：
1.1 实验目的：掌握各种家畜的脉搏检查方法，并测定其频率
1.2 实验要求：
①了解各种家畜（牛、马、羊）检查脉搏的部位
②学会各种家畜（牛、马、羊）检查脉搏的方法，并测其频率
1.3 实验规定学时：（1学时）
1.4 实验性质：验证

2. 实验原理：
随着心脏的收缩和舒张，血液间断地被射入动脉，动脉管壁表现出周期性的起伏，即为脉搏。用手指在较大的浅层动脉处能触摸到，也可用仪器记录脉搏曲线。

3. 实验仪器、装置、工具及主要材料
常见家畜（牛、马、羊）

4. 实验方法与步骤
（1）马的脉搏检查 检查部位以颌外动脉为最好。检查时，人站在马的左侧，以左手紧握马笼头，右手以食指、 中指和拇指沿下颌骨的下缘，前后触摸。在血管切迹附近，可摸到颌外动脉似一条橡皮管在手指下滑动，并可感到它的跳动，即为脉搏。记录其频率。
（2）牛的脉搏检查 检查部位以尾动脉为佳。检查者站在牛的正后方，左手将牛尾略为提起。在尾的上半部，用右手的食指和中指伸入尾的腹部，拇指放在尾的背部，轻压腹面正中的尾动脉，记录其频率。
（3）羊的脉搏检查 检查部位以股动脉为最好。检查者蹲在动物的后方，一手握住其后肢，另一手伸入股内侧，可摸到股动脉，记录其频率。

5. 注意事项
在检查脉搏之前要将动物适当保定，注意检查者的安全。
6. 预习要求
复习有关脉搏的产生及生理意义的相关知识。

7.问题讨论
脉搏是如何产生的？在临床诊断上有何意义？

实验八 家畜体温的测定

1. 实验目的及要求：
1.1 实验目的：熟悉家畜体温的测定方法，了解健康家畜的体温状况
1.2 实验要求：
①了解各种家畜（牛、马、羊）测定体温的部位
②学会各种家畜（牛、马、羊）测定体温的方法，并测其体温
1.3 实验规定学时：（1学时）
1.4 实验性质：验证

2. 实验原理：
动物种别、年龄、生理状况和生活环境不同，体温可在一定范围内变动。测定家畜体温有助于了解其健康状况，家畜属于恒温动物，具有相对恒定的体温。家畜体温通常指直肠温度。

3. 实验仪器、装置、工具及主要材料
家畜（马、牛、羊等）、水银体温计

4. 实验方法与步骤
家畜体温的测定部位是直肠
（1）对家畜进行保定，防止走动或伤人。
（2）将体温计中的水银柱甩至35℃以下，并在外面涂以少量的润滑油。
（3）实验者站在动物的后肢左侧（马）或动物的正后方（牛），用左手提起尾根，右手持体温计旋转插入直肠中，并用铁夹固定体温计，3~5min后取出。
（4）读数，记录该动物的体温。

5. 注意事项
（1）在实验之前要将动物适当保定，注意检查者的安全。
（2）注意区分动物的肛门与阴道。
6. 预习要求
复习体温一章的有关知识。

7.问题讨论
在读出体温计的数字时应注意什么？

实验九 尿的分泌
1. 实验目的及要求：
1.1 实验目的：了解一些生理因素对尿分泌的影响及调节
1.2 实验要求：
①学会用耳缘静脉注射麻醉家兔的方法
②学会辨认和游离迷走神经
③学会膀胱套管法的手术操作
④了解一些生理因素对尿分泌的影响及调节
1.3 实验规定学时：（3学时）
1.4 实验性质：验证

2. 实验原理：
尿是血液流过肾脏时，经肾小球的滤过、肾小管和集合管的重吸收和分泌而形成的。影响滤过作用的是有效滤过压[毛细血管血压－（血浆胶体渗透压＋囊内压）]；影响重吸收作用主要是管内液||影响滤过作用的是有效滤过压[毛细血管血压－（血浆胶体渗透压＋囊内压）]；影响重吸收作用主要是管内液渗透压的高低和肾小管上皮的重吸收能力，后者又受多种激素的影响。
3. 实验仪器、装置、工具及主要材料
兔、注射器、手术台、手术器械、膀胱套管、计滴器、0.1%肾上腺素、20%戊巴比妥钠溶液、20%葡萄糖溶液、生理盐水、烧杯

4. 实验方法与步骤
（1）实验准备及操作
①动物在实验前应给予足够的饮水。以20%戊巴比妥钠溶液静脉注射（20mg/Kg体重）麻醉后，再固定于手术台上。尿液的收集可选用膀胱套管法或输尿管插管法。
②膀胱套管法：在耻骨联合前方找到膀胱，在其腹面正中作一荷包缝合，再在中心剪一小口，插入膀胱套管，收紧缝线，固定膀胱套管，并在膀胱套管及所连接的橡皮管和直套管内充满生理盐水，将直套管下端连手记滴装置（对雌性动物为防止尿液经尿道流出，影响实验结果，可在膀胱颈部接扎）。
③输尿管插管法：找到膀胱并将其移出体外，再在膀胱底部找出两侧输尿管，在输尿管靠近膀胱处，分离输尿管，用细线在其下扣一松结，在结下方的输尿管上剪一小口，向肾脏方向插入一条适当大小的塑料管，并将松结抽紧以固定插管，另一端连在计滴器上，以便计滴。
（2）实验项目
①记录对照情况下每分钟尿分泌的滴数。可连续计数5~10min，求其平均数。
②静脉注射38℃的0.9%NaCl溶液20ml，记录每分钟尿分泌的滴数。
③静脉注射38℃的20%葡萄糖溶液10ml，记录每分钟尿分泌的滴数。
④静脉注射0.1%肾上腺素0.5~1ml后，记录每分钟尿分泌的滴数。
5. 注意事项
在进行每一实验步骤时必须待尿量基本恢复或者相对稳定后，才开始，而且在每项实验前后，要有对照记录。
6. 预习要求
复习尿的生成有关的知识.
7.问题讨论
实验项目2和3对尿液分泌有什么影响？为什么？

参 考 文 献
[1] 范作良. 家畜生理. 中国农业出版社
[2] 南京农业大学. 家畜生理学实验指导. 中国农业出版社
[3] 栾新红等. 家畜生理学实验. 沈阳农业大学
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