大型猪场猪疫病监控.doc

大型猪场猪疫病监控系统的建立与评价
美国辉瑞动物保健（中国）有限公司技术部

随养猪事业的前进，猪疫病监控在养猪生产中的地位和作用愈来愈重要。一个良好的疫病监控系统能够快速准确地检测和预报猪群的健康动态，尤其是对养猪业危害重大的疫病，如猪瘟、猪繁殖和呼吸综合症和猪伪狂犬病等疫病的及时确诊和/或抗体水平的检测，便于及时采取有效措施，确保养猪生产健康发展。该系统由美国动物保健公司和美国IDEXX公司联合研制、开发，并已成功推广。全套采用ELISA方法，即可做抗体（抗原）水平测定又可诊断疫病，并配有软件用于数据处理（统计、作图、列表、建立正常抗体消长曲线和打印等），帮助猪场确定免疫程序和评价免疫效果，该系统具有操作简便、检测快速准确，投资少效益高等优点，是猪疫病监测、诊断和防制的有力武器。
猪瘟是猪的一种最重要的传染病，其感染后往往给养猪业造成严重损失。近年来，猪瘟仍旧频繁发生，而且多以非典型、温和型和亚急型出现，以及猪瘟病毒的持续性感染、胎盘垂直感染、初生仔猪免疫耐受和妊娠母猪带毒综合症等，给诊断和防制带来很大的困难。猪瘟抗原检测试剂盒用于检测全血、外周血液白细胞和组织样品中的病毒抗原，操作简便，可及时诊断出病毒感染，尤其是对慢性持续性猪瘟病毒感染的诊断具有快速准确、特异性强、便于及时发现带毒猪和隐性感染猪，尽早采取措施防止其蔓延扩散利于猪有效防制。猪瘟抗体检测试剂盒可用来测定抗体水平，指导猪瘟的免疫和评价免疫效果。二者结合使用控制和消灭猪瘟指日可待。
猪伪狂犬病作为一种灾难性疫病，象一团吹不散的乌云笼罩欧美养猪业长达数十年之久。近几年来，我国许多地区的集约化猪场也常有发生，其流行呈不断上升趋势。因而及时诊断和监测以及根除本病已十分必要。猪伪狂犬病的诊断试剂盒由三套检测血清抗体的试剂盒构成。第一套用于抗体的初步测定；第二套用于对第一套检出的阳性样品的确认，第三套是专门测定伪狂犬病毒gpE（gpI）抗体的试剂盒，用于在使用gpE基因缺失疫苗的猪场区分自然感染和免疫抗体。使用gpE基因缺失疫苗的猪血清中应无针对gpE的抗体，若检出了gpE抗体，说明被检猪已被野毒感染。这三套试剂盒的配合使用，将使检猪结果十分准确、可靠。因此，猪伪狂犬病的ELISA诊断试剂盒不仅可以用于阳性猪场的检测，便于猪场，尤其是种猪场的净化，也可结合使用gpE基因缺失疫苗，防止猪伪狂犬病的传入和扩散。因此，gpE基因缺失苗和 gpE抗体试剂盒的配合应用将是根除伪狂犬病的必由之路。
猪繁殖和呼吸综合症，又称为蓝耳病，是近年来国际上最引人注目的新猪病。该病不仅因呼吸道感染、生殖障碍等引起直接损失，还会导致免疫抑制而继发多种其它疾病。目前世界上许多养猪国家已证实有本病存在，但阳性率高低不一。我国自1995年冬爆发流行之后，虽再未出现大的发生，但许多地区的猪场都检出本病抗体，因此及时发现并设法阻断本病的传播和扩散已变得十分迫切。猪繁殖和呼吸综合症ELISA抗体检测试剂盒比其它诊断方法（本病）简便，而且可测出不同毒株感染产生的抗体，并已成功用于本病的诊断、流行病学调查和疫情监测，是防制本病的有力武器。本试剂盒不仅敏感性高、特异性强、重复性好而且使用十分方便，提供的抗原包被板可根据需要折散使用，配套的所有试剂均可直接应用，在1.5~2 小时内便可得到检测结果。
猪疫病监控系统除具上述功能之外，还可用于其它猪疫病的ELISA诊断、抗体监测和流行病学调查。该系统不仅是猪场兽医卫生防疫体系的重要组成,而且还可提供相应技术服务，有利于将国内诊断与国际诊断水平接轨，对猪产品进出口和取得国际认证将起积极的推动作用。
辉瑞动物保健（中国） 公司服务项目
A：免费帮助猪场筹建实验室及技术培训
B：免费提供诊断软件与数据传输装置及安装服务
C：免费为猪场提供技术资料与疫病防制服务
猪伪狂犬病病毒gE抗体检验试剂盒
本中文说明书仅供参考，请以试剂盒中英文说明书为准 ！！！
原理：猪伪狂犬病病毒gE抗体检验试剂盒由美国生产，是一种用于测定猪血清中针对猪伪狂犬病毒表面糖蛋白抗原gE的抗体的免疫酶试验，酶标板用PRV抗原包被，待检血清加入并孵育后，如血清中含有PRV抗体，便与抗原结合至酶标板上。清洗后，加入酶标gE单克隆抗体与抗原竞争结合，如果待检血清中含有gE抗体，其量越多，则酶标gE抗体与抗原结合就越少。清洗除去未结合的酶标gE抗体后，加入底物和显色剂，在酶的作用下，底物使色素变成蓝色，反应孔颜色越浅，说明待检血清中gE抗体的量越多。加入终止液后，用酶标仪在650nm处进行吸光度测定。将待检样品的吸光度除以阴性对照组的平均吸光度得到S/N值，待检血清样品gE抗体量自然也与S/N值或反比。
试剂中所包括的试剂：
A．PRV包被的酶标板
B．辣根过氧化物酶标记的gE单克隆抗体
C．10倍浓缩的清洗液
D．样品稀释液（含迭氮钠作为防腐剂）
E．TMB
G．对照用的阴性猪血清
H．阳性对照用的gE抗体（用迭氮钠防腐）
I．终止液（0.125%氢氟酸）
检测方法：
1．待检样品的准备
用样品稀释液将待检血清稀释2倍（如用200ml样品稀释液稀释200ul的待检样品），必须将样品混匀后才能加入包被好的酶标板中。
2．清洗液的准备
使用前应使浓缩的清洗液达到室温，并通过搅拌使沉淀的盐类充分溶解，用去离子水使浓缩的清洗液稀释10倍（即30ml浓缩液加270ml水）。
3．检测步骤： 所有试剂必须在达到室温才能使用，用前应轻轻转动或振荡混匀。
⑴取出抗原包被的酶标板，在提供的工作表上记录各待检样品欲加在的位置。
⑵在A1、A2、A3孔中加入100ml稀释的阴性对照(。

⑶在A4、A5、A6孔中加入100ml稀释的阳性对照。
⑷在适当的孔中加入100ml稀释的待检样品。
⑸在室温下作用1小时。
⑹用清洗液将酶标板洗3～5次。每次均应将孔内的清洗液吸去，但应避免变干，最后一次清洗后，将酶标板在吸水纸或吸水纱布上拍打，除去孔中残留的清洗液。
⑺在每个孔中加入100ml过氧化物酶标记的gE抗体。
⑻在室温下作用20分钟。
⑼重复⑹。
⑽在每孔中加入底物溶液(TMB)。
⑾在室温下作用15分钟。
⑿每孔中加入50ul0.0125%氢氟酸(终止液)终止反应。
⒀用A650nm波长测定每个样品和对照的光度并记录结果。
⒁结果计算。
5．测定结果的处理
只有在阴性对照孔所得值的均值减去阳性对照孔所得的均值等于或大于0.3时，测定结果才有效。如测定结果无效，首先应怀疑是操作技术不当所致，应在仔细阅读产品说明后重新检测。
结果测定：
样品值
S/N值=¾¾¾¾¾¾¾¾¾
阴性对照平均值
1．S/N£0.6，表明血清中含伪狂犬病毒gE抗体，猪感染了PRV或进行过常规 免疫
2．S/N£0.7，重新测试
3．S/N³0.7，表明血清中不含PRV gE抗体，如对全病毒抗体的检测为阳性， 说明这些抗体是gE基因缺损疫苗免疫产生的。
伪狂犬病毒gE抗体测定ELISA试验的主要特点：
1．高度特异性：用gE缺损疫苗接种5次的猪群试验呈阴性
2．高度敏感性：感染两周可检测出gE抗体，感染后至少一年以内可检测出gE抗体
3．如下取样均适用于该试验：血清，血液，初乳和初乳清，用滤纸吸附的血液
4．操作简单迅速：每样只需一个滴定孔，每个检测过程只需3小时15分钟

下表为猪场监测实验室所需物品及估价（参考）

所 需 设 备
数 量
价 格
所 需 设 备
数 量
价 格
电 脑
1台
9000．00
高压消毒锅
1 个
1500．00
打印机
1 台
2500．00
酶 标 仪
1 台
50000.00
恒温培养箱
1 台
4500．00
多头加样器
50-300UL
3000．00
单头加样器
50-300UL
5-20UL
3800．00
单头加样器
200-1000UL
1200．00
广 口 瓶
1000ML´5
500ML´5
200．00
酒 精 灯
4 个
100．00
平 皿
大20对
中20对
小20对
300．00
玻 璃 棒
10 个
50．00
玻璃吸管
10ML´20
5ML´20 2ML´10
500．00
吸 球
5 个
50．00
三 角 瓶
2000ML´2
1000ML´2
150．00
水 浴 锅
1 台
2000．00
烧 杯
1000ML´5
500ML´5
250．00
离 心 机
1 台
4000．00
备 注
另需购买：剪刀，镊子，胶布，棉花，纱布，吸水纸，饭盒等需300。00元。

以上仅供参考

猪用诊断试剂盒( Swine kit )
伪狂犬病毒GI基因缺失抗体检测试剂盒( Pseudorabies virus gI (gE) Ab )
伪狂犬病毒抗体筛选试剂盒( Pseudorabies sreening Ab kit)
伪狂犬病毒抗体鉴定试剂盒( Pseudorabies vertification Ab kit)
猪支原体肺炎诊断试剂盒 ( Mycoplasma hyopneumonia Ab kit )
猪呼吸繁殖综合症抗体诊断试剂盒( PRRS Ab kit )
猪瘟病毒抗原诊断试剂盒( Swine Fever Ag kit )
猪瘟病毒抗体诊断试剂盒( Swine Fever Ab kit )
猪流感诊断试剂盒( Swine Influenza Ab kit)
猪用诊断试剂盒

伪狂犬病毒GI基因缺失抗体检测试剂盒
99-08356
546
4,545.00
伪狂犬病毒抗体筛选试剂盒
99-06685
440
2,925.00
伪狂犬病毒抗体鉴定试剂盒
99-06682
84
1,437.00
猪支原体肺炎诊断试剂盒

猪呼吸繁殖综合症抗体诊断试剂盒
99-09635
220
6,795.00
猪瘟病毒抗原诊断试剂盒
12-134-10
92
1,950.00
猪瘟病毒抗体诊断试剂盒
12-135-50
460
7,480.00
猪五号病的免疫监测有国产的试剂盒，此外我们也能够帮助客户提供其它疫病的诊断试剂，如细小病毒，乙型脑炎，猪萎缩性鼻炎等。

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